والكتاب أود أن أشكر برايان Muntean، لو شاو، تاكاهاشي ماكي ويمزج بلير للحصول على المساعدة التقنية. وأيد هذا العمل من قبل جوائز من المعاهد الوطنية للصحة (DK080640) وجامعة توليدو بالحركة وProMedica بحوث جائزة تحفيز للدكتور SURYA Nauli.

1. خلية المعالجة وإعداد الطورية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وتزرع هذه الخلايا في تعديل Dulbecco للمتوسط ​​النسر (DMEM) التي تحتوي على 10-15٪ الجنين مصل بقري (FBS) و 1٪ البنسلين / الستربتومايسين على 37 درجة مئوية مع 5٪ CO 2 الحاضنة، حتى تصل إلى 70-80٪ confluency. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> علاج الخلايا مع حل colcemid على 0.05 ميكروغرام / مل لمدة 30-60 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع المتوسطة التي تحتوي على أي خلايا العائمة في 50 مل من أنابيب معقمة للطرد المركزي من طراز فالكون. شطف الخلايا على لوحة مع sterile1X-PBS. بعد تفرخ مع التربسين معقم لمدة 1-2 دقيقة، والحصاد وجمع الخلايا المتبقية في الأنبوب نفسه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تدور الأنابيب في 1000 دورة في الدقيقة لمدة 5 دقائق، نضح طاف مغادرة 0.5 مل وتخفيف بيليه بواسطة عبها مع الإصبع فقط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اعتمادا على حجم بيليه، إضافة مل 5-10 من حل ناقص التوتر من بوكل 0.56٪ في DH 2 O، واحتضان للتعليق على 37 درجة مئوية عن 30-45 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة قطرة واحدة من مادة الميثانول / حامض الخليك(3:1 المجلد / المجلد) لكل مل من تعليق خلية ناقص التوتر وعكس الأنبوب برفق لخلط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الطرد المركزي في 1200 دورة في الدقيقة لمدة 5 دقائق، وجمع بيليه كخطوة 1.4، ثم يضاف 5 مل من الميثانول الطازجة / حامض الخليك (3:1 المجلد / المجلد) مثبت نقطه نقطه في حين حل لعبها بيليه باستمرار. هذا الإجراء ضروري حتى لا ينتشر الطورية أن المحاصرين في كتل من الخلايا التي من شأنها أن تعرض للخطر التجربة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> منبذة مرة أخرى في 1200 دورة في الدقيقة لمدة 5 دقائق ويضاف 5-10 مل من الجليد الباردة الميثانول / حامض الخليك مثبت على طول الجدار من الأنبوب. في هذه المرحلة، إذا لزم الأمر، يمكن تخزين هذه الخلايا في حل مثبت في أنبوب شددت ومختومة عند درجة حرارة -20 درجة مئوية لمدة قصيرة أو -80 درجة مئوية لمدة طويلة (سنوات) لاستخدامها في المستقبل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الشرائح نظيفة في الايثانول المطلقة، ثم تراجع الشريحة في DH 2 O للapproximately10X من أجل تشكيل غمد من المياه على سطح الشريحة. وضع شريحة على طبق من الزجاج وانخفاض 15-20μl من تعليق خلية (من الخطوة 1.8) في الفترة من 10 &quot;فوق الشرائح. ضع الشريحة في حمام مائي وضعت في 65-70 درجة مئوية لمدة 1-2 دقيقة والسماح ليجف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحقق من الانزلاق تحت المجهر ضوء الأهداف باستخدام جاف 10X 40X والتأكد من عدم ومتباعدة بالتساوي الكروموسومات الطورية وينتشر. التحقق من وجود السيتوبلازم المحيطة الكروموسومات. إذا تم المضي قدما الحالي السيتوبلازم مع المعالجة الشريحة (الببسين الهضم)، إذا لم يكن هناك وجود السيتوبلازم والكروموسومات يكون التشكل جيد، ثم ليست هناك حاجة لمعالجة مسبقة الشريحة. </li></ol> 2. المعالجة الشريحة (البيبسين العلاج) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق 120 ميكرولتر من حل ريبونوكلياز 1:200 (20 ملغ / مل) الذائب في 2X-SSC الصعود إلى 24 ملم × 60 ملم ساترة المجهر وعكس الوجه الشريحة الطورية أسفل على ساترة بلطف ثم عكس الوجه الشريحة الطورية صعودا واحتضان في 37 درجة مئوية لمدة 45 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة بعناية ساترة دون خدش الشريحة، وأغسلها في 2X-SSC العازلة في جرة coplin كل 5 دقائق لمدة 15 دقيقةمع اهتزاز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 5-15 ميكرولتر من محلول المخزون البيبسين (100 ملغ / مل في DH 2 O) في كوب نظيف ثم قم بإضافة 100 مل من prewarmed (37 درجة مئوية) 0.01M حمض الهيدروكلوريك. ومن المهم أن يتم إضافة إلى البيبسين نظيفة الكأس الأولى، وليس مباشرة في محلول HCl، وإلا فإنه لن تذوب في المحلول. احتضان الشريحة في جرة coplin التي تحتوي على محلول HCl / البيبسين على 37 درجة مئوية لمدة 3-5 دقيقة. هذه الخطوة الهامة جدا وهضم الكثير سيؤدي إلى overdigested الصبغيات (الكروموسومات)، وأيضا الهضم قليل سيغادر السيتوبلازم عسر الهضم التي قد تؤدي إلى عدم محددة وملزمة من لجنة التحقيق، وتتداخل مع إشارة التهجين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل الشريحة في وعاء يحتوي على 100 مل coplin 1X-برنامج تلفزيوني لمدة 5 دقائق مرتين في درجة حرارة الغرفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل الشريحة في وعاء يحتوي على 100 ​​مل coplin 1X-PBS/MgCl 2 لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة (50 مل من MgCl 1M 2 في 950 مل من 1X-PBS). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع الشريحة في containin جرة coplinز الفورمالديهايد 100 مل 1٪ لمدة 10 دقيقة في درجة حرارة الغرفة (1.7 مل من الفورمالدهيد 37٪ في 100 مل من 1X-PBS/MgCl 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل الشريحة في وعاء يحتوي على 100 مل coplin 1X-برنامج تلفزيوني لمدة 5 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مراقبة الشريحة تحت المجهر ضوء باستخدام عدسة جاف 40X لضمان أن يتم هضمها الشرائح بشكل صحيح وعدم وجود السيتوبلازم، ويتم الحفاظ على التشكل كروموسوم. تحديد منطقة للتهجين باستخدام قلم الماس. </li></ol> 3. كروموسوم وتحقيق تمسخ وتهجين <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الطازجة حل تبديل طبيعة (70٪ formamide/2X محكمة أمن الدولة، ودرجة الحموضة 7.0) وprewarm إلى 70-80 درجة مئوية في جرة coplin وضعت في مكان ماء حمام الشريحة في جرة coplin التي تحتوي على حل تبديل طبيعة في حمام مائي على 70 درجة مئوية لمدة الكروموسومات الماوس و 80 درجة مئوية لمدة الكروموسومات البشرية ل30S-1.5 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تضع فورا الشريحة في الجليد الباردة الايثانول 70٪ لمدة 3 دقائق ثم بنسبة 80٪ و 100٪ من الإيثانول لمدة 3 دقائق لكل والهواء الجاف. فحص الشريحةلمورفولوجيا كروموسوم. راشي جيد مورفولوجيا كروموسوم بواسطة الكروموسومات الظلام وليس &quot;مرحلة الضوء&quot; أو هالة الكروموسومات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحارة التحقيق SkyPaint (SKY عدة الطلاء؛ قارورة رقم 1) في 37 درجة مئوية مع الهز لمدة 20 دوامة، دقيقة، وأجهزة الطرد المركزي لفترة وجيزة في 1000 دورة في الدقيقة لبضع ثوان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تفسد لجنة التحقيق في thermocycler المبرمجة لدورة على مرحلتين في 85 درجة مئوية للدورة 5 دقائق تليها 37 درجة مئوية لمدة 60 دقيقة للسماح المسمى مسبار الحمض النووي لpreannealing. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبق 10μl من التحقيق التشويه والتحريف على مجال تهجين والغطاء مع 22 ملم X 40 ملم ساترة التأكد من عدم اعتراض فقاعات الهواء. ختم حواف ساترة مع الاسمنت والمطاط واحتضانها في غرفة مرطب على 37 درجة مئوية ل48-72 ساعة. </li></ol> 4. فلوري كشف التحقيق <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة ساترة بعناية ووضع الشرائح في وعاء يحتوي على coplin prewarmed (45 درجة مئوية) غسل الحل الأول (الطازجة formamide 50٪ في محكمة أمن الدولة 2X). يغسل لمدة 5 دقائقثلاث مرات في 45 درجة مئوية في حمام ماء اهتزاز في 45 دورة في الدقيقة </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل الشريحة في غسل حل ثانيا (1X SSC) على 45 درجة مئوية لمدة 5 دقائق مرتين مع اهتزاز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل الشريحة في غسل حل ثالثا (4X SSC/0.1٪ توين 20) لمدة 5 دقائق عند 45 درجة مئوية مع الهز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق 80 ميكرولتر من كاشف حظر (SKY عدة الطلاء؛ قارورة رقم 2)، وضع ساترة واحتضانها في 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الشريحة والسماح لاستنزاف السائل. تطبيق 80 ميكرولتر من كاشف تلطيخ Cy5 (المركزة جسم الكشف CAD عدة؛ قارورة # 3)، وتطبيق ساترة واحتضانها في 37 درجة مئوية لمدة 40 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل الشريحة مع غسل حل ثالثا في 45 درجة مئوية لمدة 5 دقائق ثلاث مرات مع اهتزاز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق 80 ميكرولتر من كاشف تلطيخ Cy5.5 (المركزة جسم الكشف CAD عدة؛ قارورة رقم 4)، وضع ساترة واحتضانها في 37 درجة مئوية لمدة 40 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> غسل الشريحة مع غسل حل ثالثا في 45 درجة مئوية لمدة 5 دقائق ثلاث مرات مع اهتزاز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إمالة الشريحة، والسماح للالسائل إلى<html> استنزاف. تطبيق 20 ميكرولتر من كاشف دابي مكافحة تتلاشى (SKY عدة الطلاء؛ قارورة # 5) ووضع 24 ملم × 60 ملم ساترة المجهر. إزالة بعناية فقاعات الهواء التي يمكن أن تشكل. ولا يمكن تصوير الشرائح مباشرة أو تخزينها في 4 درجات مئوية في الظلام لمدة لا تزيد عن 1 في الاسبوع. </li></ol> 5. الحصول على الصور والتحليل <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويتم إنجاز الحصول على الصور من خلال عرض الشرائح الطورية باستخدام مجهر أوليمبوس مجهزة عدسة النفط غمر 60X، مكعب الطيفي (مصممة خصيصا تمريرة فرقة ثلاثي فلتر)، وهو مرشح دابي ووحدة تداخل سانياك مع كاميرا CCD. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ونفذت الأطياف بعضها، خارج باستخدام SKY مشاهدة البرامج التطبيقية (النسخة التصوير الطيفي 1.62) بعد دليل المستخدم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد تحليل الصور، ويمكن أن ينظر إلى الكروموسومات مثل الصور الملونة (مع الألوان الفلورية محددة)، الصور الملونة الزائفة (مع الألوان للتصنيف)، والمقلوب الصور دابي (نمط معين النطاقات). </li></ol>e_title &quot;&gt; النتائج الممثل 6. إجراء SKY كاملة تستغرق عادة حوالي مرة واحدة في الأسبوع (الشكل 1). وهذا يشمل الحصول على الصور والتحليل شريطة أن الخلايا الطورية في إمدادات كافية. تحليل Karyotyping يكشف النمط النووي العادي الماوس (40، XY) من الخلايا من نوع الفئران البرية (الشكل 2A). في المقابل، الخلايا من Pkd1 - / - الماوس (PKD نموذج الفأر) يظهر زيادة كبيرة في عدد الصبغيات والتشوهات الهيكلية، مثل الحذف الصبغي (الكروموزوم رقم 8) وtranslocations (الكروموسومات رقم 11 و 19) (الشكل 2B). نحن أيضا تحليل الأنسجة الوعائية من المرضى ADPKD. وأشارت دراسة بسيطة عن طريق عد الأرقام أن الكروموسومات غير ADPKD وبعض العينات ADPKD الأوعية الدموية وكانت أعداد الكروموسومات عادي من 23 زوجا (الشكل 2C). بشكل عام، ومع ذلك، لاحظنا عدم فصل الكروموسومات، مما أدى في 46 زوجا من الكروموسومات في ADPKD عينات بدلا من 23 زوجا (الشكل 2D). <img alt="الشكل 1" src="/files/ftp_upload/3887/3887fig1.jpg" /> الشكل 1. SKY انسيابي بروتوكول. الرسم البياني للبروتوكول SKY يوضح الخطوات لإكمال تجربة بدءا من خلية المعالجة والتحضير الطورية إلى الحصول على الصور وتحليلها. ويرد تقريبي لمدة أسبوع جدول زمني على اليسار مع خطوة بخطوة إجراءات كل يوم. <img alt="الشكل 2" src="/files/ftp_upload/3887/3887fig2.jpg" /> الشكل 2. karyotyping الطيفية في خلد خطوط الخلايا الماوس وعزل الخلايا الأولية طازجة الإنسان تظهر. اللون والصور دابي المقلوب من الكروموسومات فردي قبل الفرز الكروموسومات. بعد الفرز، وتعرض الصبغيات (الكروموسومات) في الجدول &quot;تصنيف&quot;. صورة السماء) من انتشار الطورية من الماوس النوع البري يحتوي على النمط النووي العادي (40، XY). ب) </stرونغ صورة SKY&gt; من انتشار الطورية من Pkd1 - / -. ماوس يظهر الشاذ عدد الكروموزوم (68 بدلا من 40) وشذوذ الكروموسومات مثل الحذف الصبغي (الكروموزوم رقم 8) وtranslocations الصبغي (الكروموسومات رقم 11 و 19) ج) SKY صورة من انتشار الطورية من الأنسجة الوعائية للمريض غير عادي ADPKD لديه النمط النووي (46، XX). د) صورة السماء انتشار الطورية من الأنسجة الوعائية من مريض ADPKD يحتوي على النمط النووي غير طبيعي (92، XXXX). وقد أجزاء من بيانات أبلغ عنها سابقا وإعادة استخدامها بإذن 14.

<ol>
	<li>Caspersson, T., Farber, S., Foley, G. E., Kudynowski, J., Modest, E. J., Simonsson, E., Wagh, U., Zech, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+differentiation+along+metaphase+chromosomes.">Chemical differentiation along metaphase chromosomes.</a> Experimental Cell Research. 49, 219-222 (1968).</li><li>Seabright, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rapid+banding+technique+for+human+chromosomes.">A rapid banding technique for human chromosomes.</a> Lancet. 2, 971-972 (1971).</li><li>Padilla-Nash, H. M., Barenboim-Stapleton, L., Difilippantonio, M. J., Ried, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectral+karyotyping+analysis+of+human+and+mouse+chromosomes.">Spectral karyotyping analysis of human and mouse chromosomes.</a> Nature Protocols. 1, 3129-3142 (2006).</li><li>Schrock, E., Zschieschang, P., O'Brien, P., Helmrich, A., Hardt, T., Matthaei, A., Stout-Weider, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectral+karyotyping+of+human,+mouse,+rat+and+ape+chromosomes--applications+for+genetic+diagnostics+and+research.">Spectral karyotyping of human, mouse, rat and ape chromosomes--applications for genetic diagnostics and research.</a> Cytogenetic and Genome Research. 114, 199-221 (2006).</li><li>Padilla-Nash, H. M., Heselmeyer-Haddad, K., Wangsa, D., Zhang, H., Ghadimi, B. M., Macville, M., Augustus, M., Schrock, E., Hilgenfeld, E., Ried, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Jumping+translocations+are+common+in+solid+tumor+cell+lines+and+result+in+recurrent+fusions+of+whole+chromosome+arms.">Jumping translocations are common in solid tumor cell lines and result in recurrent fusions of whole chromosome arms.</a> Genes, Chromosomes &#38; Cancer. 30, 349-363 (2001).</li><li>Veldman, T., Vignon, C., Schrock, E., Rowley, J. D., Ried, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hidden+chromosome+abnormalities+in+haematological+malignancies+detected+by+multicolour+spectral+karyotyping.">Hidden chromosome abnormalities in haematological malignancies detected by multicolour spectral karyotyping.</a> Nature Genetics. 15, 406-410 (1997).</li><li>Karpf, A. R., Matsui, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+disruption+of+cytosine+DNA+methyltransferase+enzymes+induces+chromosomal+instability+in+human+cancer+cells.">Genetic disruption of cytosine DNA methyltransferase enzymes induces chromosomal instability in human cancer cells.</a> Cancer Research. 65, 8635-8639 (2005).</li><li>Matsui, S., Faitar, S. L., Rossi, M. R., Cowell, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+spectral+karyotyping+to+the+analysis+of+the+human+chromosome+complement+of+interspecies+somatic+cell+hybrids.">Application of spectral karyotyping to the analysis of the human chromosome complement of interspecies somatic cell hybrids.</a> Cancer Genetics and Cytogenetics. 142, 30-35 (2003).</li><li>Nestor, A. L., Hollopeter, S. L., Matsui, S. I., Allison, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+for+genetic+complementation+controlling+the+chromosomal+abnormalities+and+loss+of+heterozygosity+formation+in+cancer.">A model for genetic complementation controlling the chromosomal abnormalities and loss of heterozygosity formation in cancer.</a> Cytogenetic and Genome Research. 116, 235-247 (2007).</li><li>Ried, T., Liyanage, M., du Manoir, S., Heselmeyer, K., Auer, K., Macville, M., Schrock, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+cytogenetics+revisited:+comparative+genomic+hybridization+and+spectral+karyotyping.">Tumor cytogenetics revisited: comparative genomic hybridization and spectral karyotyping.</a> Journal of Molecular Medicine (Berlin, Germany). 75, 801-814 (1997).</li><li>AbouAlaiwi, W. A., Takahashi, M., Mell, B. R., Jones, T. J., Ratnam, S., Kolb, R. J., Nauli, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ciliary+polycystin-2+is+a+mechanosensitive+calcium+channel+involved+in+nitric+oxide+signaling+cascades.">Ciliary polycystin-2 is a mechanosensitive calcium channel involved in nitric oxide signaling cascades.</a> Circulation Research. 104, 860-869 (2009).</li><li>Nauli, S. M., Alenghat, F. J., Luo, Y., Williams, E., Vassilev, P., Li, X., Elia, A. E., Lu, W., Brown, E. M., Quinn, S. J., Ingber, D. E., Zhou, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polycystins+1+and+2+mediate+mechanosensation+in+the+primary+cilium+of+kidney+cells.">Polycystins 1 and 2 mediate mechanosensation in the primary cilium of kidney cells.</a> Nature Genetics. 33, 129-137 (2003).</li><li>Nauli, S. M., Kawanabe, Y., Kaminski, J. J., Pearce, W. J., Ingber, D. E., Zhou, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+cilia+are+fluid+shear+sensors+that+regulate+calcium+signaling+and+nitric+oxide+production+through+polycystin-1.">Endothelial cilia are fluid shear sensors that regulate calcium signaling and nitric oxide production through polycystin-1.</a> Circulation. 117, 1161-1171 (2008).</li><li>AbouAlaiwi, W. A., Ratnam, S., Booth, R. L., Shah, J. V., Nauli, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+cells+from+humans+and+mice+with+polycystic+kidney+disease+are+characterized+by+polyploidy+and+chromosome+segregation+defects+through+survivin+down-regulation.">Endothelial cells from humans and mice with polycystic kidney disease are characterized by polyploidy and chromosome segregation defects through survivin down-regulation.</a> Human Molecular Genetics. 20, 354-367 (2011).</li><li>Padilla-Nash, H. M., Nash, W. G., Padilla, G. M., Roberson, K. M., Robertson, C. N., Macville, M., Schrock, E., Ried, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+cytogenetic+analysis+of+the+bladder+carcinoma+cell+line+BK-10+by+spectral+karyotyping.">Molecular cytogenetic analysis of the bladder carcinoma cell line BK-10 by spectral karyotyping.</a> Genes, Chromosomes &#38; Cancer. 25, 53-59 (1999).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Karyotyping الطيفية (السماء) هو تقنية علم الوراثة الخلوية المستخدمة في دراسة التراكيب الجينية والكروموسومات. هذه التقنية يستفيد من تحقيقات اللوحة كروموسوم، ويتم الحصول على الكشف عن هذه التحقيقات من خلال تداخل سانياك. عملية SKY كاملة تستغرق عادة حوالي أسبوع واحد، وأنها تنط...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Cellgro Mediatech المؤتمر الوطني العراقي. </td><td> 10-013-CV </td><td></td></tr><tr><td> الجنين مصل بقري (FBS) </td><td> Hyclone </td><td> SH30088-03 </td><td></td></tr><tr><td> Penecillin / الستربتوميسين </td><td> الحرارية العلمية </td><td> SV30010 </td><td></td></tr><tr><td> Colcemid </td><td> روش تشخيص </td><td> 10 295 892 001 </td><td> 10 ميكروغرام / مل </td></tr><tr><td> حمض الهيدروكلوريك </td><td> فيشر العلمية </td><td> A144-500 </td><td></td></tr><tr><td> بوكل </td><td> فيشر العلمية </td><td> S77375-1 </td><td></td></tr><tr><td> الفوسفات مخزنة المالحة </td><td> الحرارية العلمية </td><td> SH30256-01 </td><td></td></tr> &lt;TR&gt; <td> SKY الطلاء تحقيق مجموعة (الإنسان) </td><td> التصوير الطيفي التطبيقية </td><td> SKY000028 </td><td></td></tr><tr><td> SKY الطلاء تحقيق عدة (الماوس) </td><td> التصوير الطيفي التطبيقية </td><td> SKY000030 </td><td></td></tr><tr><td> تتركز عدة الضد كشف </td><td> التصوير الطيفي التطبيقية </td><td> SKY000033 </td><td></td></tr><tr><td> التربسين </td><td> الحرارية العلمية </td><td> SH30236.01 </td><td></td></tr><tr><td> الميثانول </td><td> فيشر العلمية </td><td> A433P-4 </td><td></td></tr><tr><td> حمض الخليك </td><td> فيشر العلمية </td><td> A38-212 </td><td></td></tr><tr><td> ريبونوكلياز A </td><td> روش تشخيص </td><td> 10 109 169 001 </td><td></td></tr><tr><td> البيبسين </td><td> سيغما الدريخ </td><td> P6887-5G </td><td></td></tr><tr><td> MgCl 2 </td><td> Fluka </td><td> 63069-500ML </td><td></td></tr><tr><td> 37٪ فورمالديهايد </td><td> مالينكرودت بيكر </td><td> 2106-02 </td><td></td></tr><tr><td> 20X SSC </td><td> Promega </td><td> V4261 </td><td></td></tr><tr><td> Formamide </td><td> Fluka </td><td> 47671 </td><td> إعداد قبل استخدامها </td></tr><tr><td> توين-20 </td><td> فيشر العلمية </td><td> BP337-500 </td><td></td></tr><tr><td> شرائح ميكروسكوب </td><td> فيشر العلمية </td><td> 12-549 </td><td></td></tr><tr><td> مجهر الغطاء الزجاجي 24x60mm </td><td> VWR فيستا الرؤية </td><td> 16004-312 </td><td></td></tr><tr><td> المطاط الاسمنت </td><td> إلمر في (متجر بيع بالتجزئة المحلية) </td><td></td><td></td></tr><tr><td> تهجين / humidifiedchamber / صينية </td><td> Simport </td><td> M920-2 </td><td> وضع المناشف الورقية الرطبة في الجزء السفلي </td></tr><tr><td> الحراريةcycler </td><td> إيبندورف </td><td> Epgradient S </td><td></td></tr><tr><td> تهتز منصة / المداري شاكر </td><td> Bellco التكنولوجيا الحيوية </td><td></td><td></td></tr><tr><td> يهز حمام / المياه </td><td> الدقة العلمية </td><td></td><td></td></tr><tr><td> دابي مرشح مكعب </td><td> صفاء التكنولوجيا </td><td></td><td></td></tr><tr><td> SKY مرشح مكعب </td><td> صفاء التكنولوجيا </td><td></td><td></td></tr><tr><td> SpectraCube </td><td> التصوير الطيفي التطبيقية </td><td></td><td></td></tr><tr><td> مجهر مقلوب خلية ثقافة </td><td> نيكون </td><td> نيكون الكسوف TS100 </td><td></td></tr><tr><td> مضان المجهر </td><td> أوليمبوس </td><td> IX70 </td><td> 60X النفط </td></tr></tbody></table>

spectral karyotyping to study chromosome abnormalities in humans and mice with polycystic kidney disease

الطريقة التقليدية لتحديد وتصنيف الكروموسومات الفردية يعتمد على نمط فريد من ربط كل كروموسوم في فصيلة محددة يجري تحليلها 1 و 2. هذا الأسلوب الكلاسيكي النطاقات، ولكن، لا يمكن الاعتماد عليها في تحديد التشوهات الكروموسومية معقدة مثل تلك التي ترتبط مع مرض السرطان. للتغلب على القيود المفروضة على تقنية النطاقات، هو عرض Karyotyping الطيفي (السماء) لتوفير معلومات موثوق بها كثيرا عن شذوذ صبغي. SKY هو مضان متعدد الألوان في الموقع التهجين (FISH) تقنية للكشف عن الصبغيات (الكروموسومات) الطورية مع مجهر طيفي 3 و 4. وقد ثبت السماء ليكون أداة قيمة لتحليل خلوي من مجموعة واسعة من الشذوذ الصبغي المرتبط مع عدد كبير من الأمراض الوراثية والأورام الخبيثة 5 و 6. SKY ينطوي على استخدام مجسات DNA fluorescently متعدد الألوان ذات العلامات أعد من oligonucle المنحطةotide الاشعال بواسطة PCR. وبالتالي، كل كروموسوم لها لون فريد من نوعه بعد الطيفية في الموقع التهجين مع تحقيقات، التي وصفت بشكل مختلف مع خليط من الأصباغ الفلورية (رودامين، تكساس الأحمر، Cy5، FITC وCy5.5). تحقيقات المستخدمة في السماء تتكون من ما يصل الى 55 كروموسوم تحقيقات محددة 7-10. إجراءات SKY ينطوي على عدة خطوات (الشكل 1). SKY يتطلب توافر الخلايا مع ارتفاع مؤشر الإنقسامية من الأنسجة الطبيعية أو مريضة أو الدم. وتنتشر في الصبغيات (الكروموسومات) من خلية واحدة من الخلايا الأولية إما طازجة أو عزل خط الخلية على شريحة زجاجية. يسمى هذا انتشار كروموسوم مع مجموعة مختلفة من الأصباغ الفلورية معينة لكل كروموسوم. الكشف عن التحقيق والحصول على الصور، ونظام التصوير الطيفي يتكون من تداخل سانياك وكاميرا CCD. وهذا يسمح قياس طيف الضوء المرئي المنبعث من العينة والحصول على صورة طيفية جيئة وذهاباالكروموسومات متر فردي. HiSKY، والبرمجيات المستخدمة لتحليل نتائج الصور التي تم التقاطها، ويوفر سهولة تحديد الشذوذ الصبغي. والنتيجة النهائية هي الطورية وصورة تصنيف النمط النووي، والذي كل زوج من الصبغيات (الكروموسومات) لها لون مميز (الشكل 2). وهذا يسمح سهولة تحديد هويات كروموسوم وtranslocations. لمزيد من المعلومات، يرجى زيارة موقع التصوير الطيفي التطبيقية ( <a href="http://www.spectral-imaging.com/" target="_blank">http://www.spectral-imaging.com/</a> ). وقد استخدم مؤخرا SKY لتحديد العيوب والتشوهات فصل كروموسوم كروموسوم في البشر والفئران مع مرض وراثي جسمي الكلى المتعدد الكيسات (ADPKD)، وهو مرض وراثي يتميز اختلال وظيفي في أهداب الأولية 11-13. باستخدام هذه التقنية، أثبتنا وجود فصل كروموسوم غير طبيعي وتشوهات صبغية في المرضى الذين يعانون ADPKD ونماذج الماوس 14. المزيد من التحليلات باستخدام SKY ليس فقط سمح لنا لتحديد عدد الكروموسومات والهوية، ولكن أيضا للكشف عن التشوهات الكروموسومية بدقة شديدة التعقيد مثل الحذف كروموسوم وtranslocations (الشكل 2).

Watch this Scientific Journal Video about Spectral Karyotyping to Study Chromosome Abnormalities in Humans and Mice with Polycystic Kidney Disease at JoVE.com

Spectral Karyotyping to Study Chromosome Abnormalities in Humans and Mice with Polycystic Kidney Disease

Karyotyping الطيفية (السماء) هو تقنية علم الوراثة الخلوية المتقدمة لتحديد الانحرافات الجينية والكروموسومات. هذه التقنية يستفيد من تحقيقات اللوحة كروموسوم، والتي تسمح بتصنيف جميع الكروموسومات. ويمكن أيضا تحديد الانحرافات SKY كروموسوم معقدة وعيوب فصل في الفئران والبشر يعانون من أمراض مختلفة، بما في ذلك مرض الكلى المتعدد الكيسات.

الطيفية Karyotyping إلى دراسة حالة شذوذ الكروموسومات في البشر والفئران مع مرض الكلى المتعدد الكيسات

Conventional method to identify and classify individual chromosomes depends on the unique banding pattern of each chromosome in a specific species being ...

spectral-karyotyping-to-study-chromosome-abnormalities-humans-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

38.2K Views.  University of Toledo, College of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences. Karyotyping الطيفية (السماء) هو تقنية علم الوراثة الخلوية المتقدمة لتحديد الانحرافات الجينية والكروموسومات. هذه التقنية يستفيد من تحقيقات اللوحة كروموسوم، والتي تسمح بتصنيف جميع الكروموسومات. ويمكن أيضا تحديد الانحرافات SKY كروموسوم معقدة وعيوب فصل في الفئران والبش...

Video: Spectral Karyotyping to Study Chromosome Abnormalities in Humans and Mice with Polycystic Kidney Disease

Orthotopic Aortic Transplantation in Mice for the Study of Vascular Disease

Vascular procedures involving anastomoses in the mouse are generally thought to be difficult and highly dependent on the skill of the individual surgeon. This is largely true, but there are a number of important principles that can reduce the difficulty of these procedures and enhance reproducibility. Orthotopic aortic transplantation is an excellent procedure in which to learn these principles because it involves only two end-to-end anastomoses, but requires good suturing technique and handling of the vessels for consistent success. This procedure begins with the procurement of a length of abdominal aorta from a donor animal, followed by division of the native aorta in the recipient. The procured aorta is then placed between the divided ends of the recipient aorta and sutured into place using end-to-end anastomoses. To accomplish this objective successfully requires a high degree of concentration, good tools, a steady hand, and an appreciation of how easily the vasculature of a mouse can be damaged, resulting in thrombosis. Learning these important principles is what occupies most of the beginner's time when learning microsurgery in small rodents. Throughout this protocol, we refer to these important points. This model can be used to study vascular disease in a variety of different experimental systems1-8. In the context shown here, it is most often used for the study of post-transplant vascular disease, a common long-term complication of solid organ transplantation in which intimal hyperplasia occurs within the allograft. The primary advantage of the model is that it facilitates quantitative morphometric analyses and the transplanted vessel lies contiguous to the endogenous vessel, which can serve as an additional control9. The technique shown here is most often used for mice weighing 18-25 grams. We have accumulated most of our experience using the C57BL/6J, BALB/cJ, and C3H/HeJ strains.

We describe a technique in which a section of the abdominal aorta from a mouse is transplanted orthotopically to just below the renal arteries in an allogeneic or syngeneic recipient. This technique can be useful in studies in which transplantation of large arteries of uniform size is deemed advantageous.

زرع مثلي الشريان الأورطي في الفئران لدراسة أمراض الأوعية الدموية

Vascular procedures involving anastomoses in the mouse are generally thought to be difficult and highly dependent on the skill of the individual surgeon. ...

5/6th Nephrectomy in Combination with High Salt Diet and Nitric Oxide Synthase Inhibition to Induce Chronic Kidney Disease in the Lewis Rat

Chronic kidney disease (CKD) is a global problem. Slowing CKD progression is a major health priority. Since CKD is characterized by complex derangements of homeostasis, integrative animal models are necessary to study development and progression of CKD. To study development of CKD and novel therapeutic interventions in CKD, we use the 5/6th nephrectomy ablation model, a well known experimental model of progressive renal disease, resembling several aspects of human CKD. The gross reduction in renal mass causes progressive glomerular and tubulo-interstitial injury, loss of remnant nephrons and development of systemic and glomerular hypertension. It is also associated with progressive intrarenal capillary loss, inflammation and glomerulosclerosis. Risk factors for CKD invariably impact on endothelial function. To mimic this, we combine removal of 5/6th of renal mass with nitric oxide (NO) depletion and a high salt diet. After arrival and acclimatization, animals receive a NO synthase inhibitor (NG-nitro-L-Arginine) (L-NNA) supplemented to drinking water (20 mg/L) for a period of 4 weeks, followed by right sided uninephrectomy. One week later, a subtotal nephrectomy (SNX) is performed on the left side. After SNX, animals are allowed to recover for two days followed by LNNA in drinking water (20 mg/L) for a further period of 4 weeks. A high salt diet (6%), supplemented in ground chow (see time line Figure 1), is continued throughout the experiment. Progression of renal failure is followed over time by measuring plasma urea, systolic blood pressure and proteinuria. By six weeks after SNX, renal failure has developed. Renal function is measured using 'gold standard' inulin and para-amino hippuric acid (PAH) clearance technology. This model of CKD is characterized by a reduction in glomerular filtration rate (GFR) and effective renal plasma flow (ERPF), hypertension (systolic blood pressure&gt;150 mmHg), proteinuria (&gt; 50 mg/24 hr) and mild uremia (&gt;10 mM). Histological features include tubulo-interstitial damage reflected by inflammation, tubular atrophy and fibrosis and focal glomerulosclerosis leading to massive reduction of healthy glomeruli within the remnant population (&lt;10%). Follow-up until 12 weeks after SNX shows further progression of CKD.

A two-stage method to establish chronic kidney disease (CKD) in the Lewis rat by surgically removing 5/6th of renal mass is described. Combination of the surgical procedure, NOS-inhibition and a high-salt diet leads to a model resembling human CKD, allowing study of causal mechanisms and development of novel therapeutic interventions.

5/6th استئصال الكلية في تركيبة مع حمية عالية الملح والنيتريك أوكسيد تثبيط سينسيز للحث على مرض الكلى المزمن في الفئران لويس

Chronic kidney disease (CKD) is a global problem. Slowing CKD progression is a major health priority. Since CKD is characterized by complex derangements ...

Assessment of Vascular Function in Patients With Chronic Kidney Disease

Patients with chronic kidney disease (CKD) have significantly increased risk of cardiovascular disease (CVD) compared to the general population, and this is only partially explained by traditional CVD risk factors. Vascular dysfunction is an important non-traditional risk factor, characterized by vascular endothelial dysfunction (most commonly assessed as impaired endothelium-dependent dilation [EDD]) and stiffening of the large elastic arteries. While various techniques exist to assess EDD and large elastic artery stiffness, the most commonly used are brachial artery flow-mediated dilation (FMDBA) and aortic pulse-wave velocity (aPWV), respectively. Both of these noninvasive measures of vascular dysfunction are independent predictors of future cardiovascular events in patients with and without kidney disease. Patients with CKD demonstrate both impaired FMDBA, and increased aPWV. While the exact mechanisms by which vascular dysfunction develops in CKD are incompletely understood, increased oxidative stress and a subsequent reduction in nitric oxide (NO) bioavailability are important contributors. Cellular changes in oxidative stress can be assessed by collecting vascular endothelial cells from the antecubital vein and measuring protein expression of markers of oxidative stress using immunofluorescence. We provide here a discussion of these methods to measure FMDBA, aPWV, and vascular endothelial cell protein expression.

The degree of vascular dysfunction and contributing physiological mechanisms can be assessed in patients with chronic kidney disease by measuring brachial artery flow-mediated dilation, aortic pulse-wave velocity, and vascular endothelial cell protein expression.

تقييم وظيفة الأوعية الدموية في المرضى الذين يعانون من مرض الكلى المزمن

Patients with chronic kidney disease (CKD) have significantly increased risk of cardiovascular disease (CVD) compared to the general population, and this ...

A Possible Zebrafish Model of Polycystic Kidney Disease: Knockdown of wnt5a Causes Cysts in Zebrafish Kidneys

Polycystic kidney disease (PKD) is one of the most common causes of end-stage kidney disease, a devastating disease for which there is no cure. The molecular mechanisms leading to cyst formation in PKD remain somewhat unclear, but many genes are thought to be involved. Wnt5a is a non-canonical glycoprotein that regulates a wide range of developmental processes. Wnt5a works through the planar cell polarity (PCP) pathway that regulates oriented cell division during renal tubular cell elongation. Defects of the PCP pathway have been found to cause kidney cyst formation. Our paper describes a method for developing a zebrafish cystic kidney disease model by knockdown of the wnt5a gene with wnt5a antisense morpholino (MO) oligonucleotides. Tg(wt1b:GFP) transgenic zebrafish were used to visualize kidney structure and kidney cysts following wnt5a knockdown. Two distinct antisense MOs (AUG - and splice-site) were used and both resulted in curly tail down phenotype and cyst formation after wnt5a knockdown. Injection of mouse Wnt5a mRNA, resistant to the MOs due to a difference in primary base pair structure, rescued the abnormal phenotype, demonstrating that the phenotype was not due to &#8220;off-target&#8221; effects of the morpholino. This work supports the validity of using a zebrafish model to study wnt5a function in the kidney.

A Possible Zebrafish Model of Polycystic Kidney Disease: Knockdown of wnt5a Causes Cysts in Zebrafish Kidneys

We describe a method of generating a possible zebrafish model of polycystic kidney disease. We used Tg(wt1b:GFP) fish to visualize kidney structure. Knockdown of wnt5a was by morpholino injection. Pronephric cyst formation after wnt5a knockdown was observed in this GFP transgenic zebrafish.

نموذج الزرد ممكن من مرض الكلى المتعدد الكيسات: ضربة قاضية لل<em&gt; wnt5a</em&gt; أسباب الخراجات في الكلى اسماك الزرد

Polycystic kidney disease (PKD) is one of the most common causes of end-stage kidney disease, a devastating disease for which there is no cure. The ...

Use of Ultra-high Field MRI in Small Rodent Models of Polycystic Kidney Disease for In Vivo Phenotyping and Drug Monitoring

Several in vivo pre-clinical studies in Polycystic Kidney Disease (PKD) utilize orthologous rodent models to identify and study the genetic and molecular mechanisms responsible for the disease, and are very convenient for rapid drug screening and testing of promising therapies. A limiting factor in these studies is often the lack of efficient non-invasive methods for sequentially analyzing the anatomical and functional changes in the kidney. Magnetic resonance imaging (MRI) is the current gold standard imaging technique to follow autosomal dominant polycystic kidney disease (ADPKD) patients, providing excellent soft tissue contrast and anatomic detail and allowing Total Kidney Volume (TKV) measurements.A major advantage of MRI in rodent models of PKD is the possibility for in vivo imaging allowing for longitudinal studies that use the same animal and therefore reducing the total number of animals required. In this manuscript, we will focus on using Ultra-high field (UHF) MRI to non-invasively acquire in vivo images of rodent models for PKD. The main goal of this work is to introduce the use of MRI as a tool for in vivo phenotypical characterization and drug monitoring in rodent models for PKD.

Use of Ultra-high Field MRI in Small Rodent Models of Polycystic Kidney Disease for In Vivo Phenotyping and Drug Monitoring

The use of ultra-high field MRI as a non-invasive way to obtain phenotypic information of rodent models for polycystic kidney disease and to monitor interventions is described. Compared with the traditional histological approach, MRI images can be acquired in vivo, allowing for longitudinal follow-up.

استخدام فائقة MRI الميداني في القوارض الصغيرة نماذج من مرض الكلى المتعدد الكيسات ل<em&gt; في فيفو</em&gt; Phenotyping والدواء المراقبة

Several in vivo pre-clinical studies in Polycystic Kidney Disease (PKD) utilize orthologous rodent models to identify and study the genetic and molecular ...

Symmetric Bihemispheric Postmortem Brain Cutting to Study Healthy and Pathological Brain Conditions in Humans

Neuropathologists, at times, feel intimidated by the amount of knowledge needed to generate definitive diagnoses for complex neuropsychiatric phenomena described in those patients for whom a brain autopsy has been requested. Although the advancements of biomedical sciences and neuroimaging have revolutionized the neuropsychiatric field, they have also generated the misleading idea that brain autopsies have only a confirmatory value. This false idea created a drastic reduction of autopsy rates and, consequently, a reduced possibility to perform more detailed and extensive neuropathological investigations, which are necessary to comprehend numerous normal and pathological aspects yet unknown of the human brain. The traditional inferential method of correlation between observed neuropsychiatric phenomena and corresponding localization/characterization of their possible neurohistological correlates continues to have an undeniable value. In the context of neuropsychiatric diseases, the traditional clinicopathological method is still the best possible methodology (and often the only available) to link unique neuropsychiatric features to their corresponding neuropathological substrates, since it relies specifically upon the direct physical assessment of brain tissues. The assessment of postmortem brains is based on brain cutting procedures that vary across different neuropathology centers. Brain cuttings are performed in a relatively extensive and systematic way based on the various clinical and academic contingencies present in each institution. A more anatomically inclusive and symmetric bi-hemispheric brain cutting methodology should at least be used for research purposes in human neuropathology to coherently investigate, in depth, normal and pathological conditions with the peculiarities of the human brain (i.e., hemispheric specialization and lateralization for specific functions). Such a method would provide a more comprehensive collection of neuropathologically well-characterized brains available for current and future biotechnological and neuroimaging techniques. We describe a symmetric bi-hemispheric brain cutting procedure for the investigation of hemispheric differences in human brain pathologies and for use with current as well as future biomolecular/neuroimaging techniques.

Organized brain cutting procedures are necessary to correlate specific neuropsychiatric phenomena with definitive neuropathologic diagnoses. Brain cuttings are performed differently based on various clinico-academic contingencies. This protocol describes a symmetric bihemispheric brain cutting procedure to investigate hemispheric differences in human brain pathologies and to maximize current and future biomolecular/neuroimaging techniques.

متماثل Bihemispheric تشريح الدماغ قطع لدراسة الصحية والمرضية شروط الدماغ في البشر

Neuropathologists, at times, feel intimidated by the amount of knowledge needed to generate definitive diagnoses for complex neuropsychiatric phenomena ...

A Model to Simulate Clinically Relevant Hypoxia in Humans

In case of apnea, arterial partial pressure of oxygen (pO2) decreases, while partial pressure of carbon dioxide (pCO2) increases. To avoid damage to hypoxia sensitive organs such as the brain, compensatory circulatory mechanisms help to maintain an adequate oxygen supply. This is mainly achieved by increased cerebral blood flow. Intermittent hypoxia is a commonly seen phenomenon in patients with obstructive sleep apnea. Acute airway obstruction can also result in hypoxia and hypercapnia. Until now, no adequate model has been established to simulate these dynamics in humans. Previous investigations focusing on human hypoxia used inhaled hypoxic gas mixtures. However, the resulting hypoxia was combined with hyperventilation and is therefore more representative of high altitude environments than of apnea. Furthermore, the transferability of previously performed animal experiments to humans is limited and the pathophysiological background of apnea induced physiological changes is poorly understood. In this study, healthy human apneic divers were utilized to mimic clinically relevant hypoxia and hypercapnia during apnea. Additionally, pulse-oximetry and Near Infrared Spectroscopy (NIRS) were used to evaluate changes in cerebral and peripheral oxygen saturation before, during, and after apnea.

Hypoxia simulation in humans has usually been performed by inhaling hypoxic gas mixtures. For this study, apneic divers were used to simulate dynamic hypoxia in humans. Additionally, physiological changes in desaturation and re-saturation kinetics were evaluated with non-invasive tools such as Near-Infrared-Spectroscopy (NIRS) and peripheral oxygenation saturation (SpO2).

نموذج لمحاكاة نقص الأكسجة ذات الصلة سريريا في البشر

In case of apnea, arterial partial pressure of oxygen (pO2) decreases, while partial pressure of carbon dioxide (pCO2) increases. To avoid damage to ...

In Vivo Imaging of Cx3cr1gfp/gfp Reporter Mice with Spectral-domain Optical Coherence Tomography and Scanning Laser Ophthalmoscopy

Spectral domain optical coherence tomography (SD-OCT) and scanning laser ophthalmoscopy (SLO) are extensively used in experimental ophthalmology. In the present protocol, mice expressing green fluorescent protein (gfp) under the promoter of Cx3cr1 (BALB/c-Cx3cr1gfp/gfp) were used to image microglia cells in vivo in the retina. Microglia are resident macrophages of the retina and have been implicated in several retinal diseases1,2,3,4,5,6. This protocol provides a detailed approach for generation of retinal B-scans, with SD-OCT, and imaging of microglia cell distribution in Cx3cr1gfp/gfp mice with SLO in vivo, using an ophthalmic imaging platform system. The protocol can be used in several reporter mouse lines. However, there are some limitations to the protocol presented here. First, both SLO and SD-OCT, when used in the high-resolution mode, collect data with high axial resolution but the lateral resolution is lower (3.5 &#181;m and 6 &#181;m, respectively). Moreover, the focus and saturation level in SLO is highly dependent on parameter selection and correct alignment of the eye. Additionally, using devices designed for human patients in mice is challenging due to the higher total optical power of the mouse eye compared to the human eye; this can lead to lateral magnification inaccuracies7, which are also dependent on the magnification by the mouse lens among others. However, despite that the axial scan position is dependent upon lateral magnification, the axial SD-OCT measurements are accurate8.

In Vivo Imaging of Cx3cr1gfp/gfp Reporter Mice with Spectral-domain Optical Coherence Tomography and Scanning Laser Ophthalmoscopy

This protocol describes how high-resolution imaging techniques such as spectral domain optical coherence tomography and scanning laser ophthalmoscopy can be utilized in small rodents, using an ophthalmic imaging platform system, to obtain information on retinal thickness and microglial cell distribution, respectively.

في فيفو التصوير من "الفئران مراسل" Cx3cr1التجارة والنقل/التجارة والنقل مع المجالات الطيفية الضوئية التماسك التصوير المقطعي وفحص تنظير العين الليزر

Spectral domain optical coherence tomography (SD-OCT) and scanning laser ophthalmoscopy (SLO) are extensively used in experimental ophthalmology. In the ...

Assessment of Kidney Function in Mouse Models of Glomerular Disease

The use of murine models to mimic human kidney disease is becoming increasingly common. Our research is focused on the assessment of glomerular function in diabetic nephropathy and podocyte-specific VEGF-A knock-out mice; therefore, this protocol describes the full kidney work-up used in our lab to assess these mouse models of glomerular disease, enabling a vast amount of information regarding kidney and glomerular function to be obtained from a single mouse. In comparison to alternative methods presented in the literature to assess glomerular function, the use of the method outlined in this paper enables the glomerular phenotype to be fully evaluated from multiple aspects. By using this method, the researcher can determine the kidney phenotype of the model and assess the mechanism as to why the phenotype develops. This vital information on the mechanism of disease is required when examining potential therapeutic avenues in these models. The methods allow for detailed functional assessment of the glomerular filtration barrier through measurement of the urinary albumin creatinine ratio and individual glomerular water permeability, as well as both structural and ultra-structural examination using the Periodic Acid Schiff stain and electron microscopy. Furthermore, analysis of the genes dysregulated at the mRNA and protein level enables mechanistic analysis of glomerular function. This protocol outlines the generic but adaptable methods that can be applied to all mouse models of glomerular disease.

This protocol describes a full kidney work-up that should be carried out in mouse models of glomerular disease. The methods allow for detailed functional, structural, and mechanistic analysis of glomerular function, which can be applied to all mouse models of glomerular disease.

تقييم لوظيفة الكلي في نماذج الماوس من المرض الكبيبي

The use of murine models to mimic human kidney disease is becoming increasingly common. Our research is focused on the assessment of glomerular function ...

Delivery of Exogenous Artificially Synthesized miRNA Mimic to the Kidney Using Polyethylenimine Nanoparticles in Several Kidney Disease Mouse Models

microRNAs&#160;(miRNAs), small noncoding RNAs (21-25 bases) that are not translated into proteins, inhibit lots of target messenger RNAs (mRNAs) by destabilizing and inhibiting their translation in various kidney diseases. Therefore, alternation of miRNA expression by exogenous artificially synthesized miRNA mimics is a potentially useful treatment option for inhibiting the development of many kidney diseases. However, because serum RNAase immediately degrades systematically administered exogenous miRNA mimics in vivo, delivery of miRNA to the kidney remains a challenge. Therefore, vectors that can protect exogenous miRNA mimics from degradation by RNAase and significantly deliver them to the kidney are necessary. Many studies have used viral vectors to deliver exogenous miRNA mimics or inhibitors to the kidney. However, viral vectors may cause an interferon response and/or genetic instability. Therefore, the development of viral vectors is also a hurdle for the clinical use of exogenous miRNA mimics or inhibitors. To overcome these concerns regarding viral vectors, we developed a nonviral vector method to deliver miRNA mimics to the kidney using tail vein injection of polyethylenimine nanoparticles (PEI-NPs), which led to significant overexpression of target miRNAs in several mouse models of kidney disease.

Here, we deliver exogenous artificially synthesized miRNA mimics to the kidney via tail vein injection of a nonviral vector and polyethylenimine nanoparticles in several kidney disease mouse models. This led to significant overexpression of target miRNA in the kidney, resulting in inhibited progression of kidney disease in several mouse models.

توصيل miRNA الخارجي المركب صناعيا إلى الكلى باستخدام جسيمات البولي إيثيلينيمين النانوية في العديد من نماذج الفئران لأمراض الكلى

microRNAs&#160;(miRNAs), small noncoding RNAs (21-25 bases) that are not translated into proteins, inhibit lots of target messenger RNAs (mRNAs) by ...