قدم الإنتاج والعمل التجريبي تعكس هذه الوثيقة بمساعدة المخلصين والمتحمسين لباريجا رينالدو. بتمويل من وزارة كولومبيا الإدارية للعلوم والتكنولوجيا والابتكار (Colciencias) ومنحة من مؤسسة بيل وميليندا غيتس من خلال مبادرة جراند استكشافات التحديات.

1. النباتات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أرض تعقيم البذور الفول (cv. كاليما) بغمر لهم لمدة دقيقتين في هيبوكلوريت الصوديوم 0.5٪ ودقيقتين في الايثانول 70٪. شطف البذور ثلاث مرات في الماء المقطر المعقم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقييم مدى نجاح التعقيم الخاص بك عن طريق الطلاء 100 ميكرولتر من الماء على وسائل الإعلام الشطف مشاركة dextroxe البطاطا (PDA) أجار، واحتضان لوحة لمدة 10 يوما في 25 ° C. إنهاء وإعادة التجربة إذا رأيت أي نمو على اللوحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> زرع البذور في مجموعات من ثلاثة في الأواني التي تحتوي على خليط من التربة المعقمة والرمل بنسبة 2:1. نقل الأواني إلى دائرة النمو عند 25 ° C، كاليفورنيا. 50٪ RH و 12 ساعة الضوئية. أسبوع واحد بعد الإنبات، والقضاء على اثنين من الشتلات الأقل قوية. الماء كل 2-3 أيام مع الماء المقطر المعقم وتخصيبها 10 و 20 يوما بعد زرع مع الحل 6 المياه ز / L من السماد NPK 15-15-15. </li></ol> 2. فطر <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحصول على تسويقيةاالجتماعية صياغة سلالة البوفيرية GHA bassiana (Mycotrol SE، Laverlam، كالي، كولومبيا). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتوليد ثقافة الأسهم واحد بوغ أو تعليق كاليفورنيا. 1 بتلقيح حلقة كاملة من غبيرات في 1 مل من محلول 0.1٪ من المياه تريتون X-100 و دوامة لمدة 10 ثانية. ثم، لوحة 100 ميكرولتر من التعليق على أجار نوبل 2.5٪ واحتضان لمدة 24 ساعة عند 25 ° C. نقل غبيرة واحد الإنبات إلى PDA لوحة ملم تحتوي على 100 وتنمو حتى أنها تغطي لوحة بأكمله (حوالي 3-4 أسابيع). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحت ظروف معقمة، تتخلص من نمو الفطريات من سطح المتوسطة وتعليقه في 10٪ مل العقيمة تريتون 0.1-X 100. دوامة لدقيقة واحدة. ثم، تصفية التعليق من خلال القماش القطني لإزالة خيوط معقمة والحصول على التعليق الأسهم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام عدادة الكريات لتقدير تركيز غبيري لتعليق الأوراق المالية. لتسهيل التهم غبيري، إعداد التخفيف 10،000 أضعاف المسلسل من الأسهم، في كل مرة تحويل 100 ميكرولتر Oو التعليق غبيري في 900 ميكرولتر من 0.1٪ تريتون X-100، وvortexing لمدة 10 ثانية قبل التخفيف المقبل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتوليد اللقاح، وضبط التعليق الأسهم إلى تركيز النهائي من 10 8 غبيرات / مل، وذلك باستخدام الصيغة: <img src="/files/ftp_upload/50360/50360eq1.jpg" alt="المعادلة 1" fo:src="/files/ftp_upload/50360/50360eq1highres.jpg"/></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتقييم الجدوى غبيري، لوحة 100 ميكرولتر من التخفيف 10،000 أضعاف على أجار نوبل 2.5٪ واحتضان لمدة 24 ساعة عند 25 ° C. ثم، وفحص ثلاث مجموعات عشوائية من 100 غبيرات لتقدير الإنبات في المئة. النظر في غبيرة نبتت أنبوب الجرثومية مرئية أطول من القطر النصف من المشاريع غبيرة منه متى. فقط استخدام التعليق عندما يتجاوز متوسط ​​نسبة الإنبات 90٪. </li></ol> 3. تلقيح <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطعيم النباتات عندما تصل لأول مرة مرحلة أوراق صحيح (حوالي 14 يوما بعد الزراعة). محطات المياه لقدرة التربة المعقمة مع تقطيرإد المياه 24 ساعة قبل التلقيح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> للأسلوب الرش الورقي، واستخدام رذاذ دليل لتطبيق التعليق غبيري (العلاج) أو 0.1٪ تريتون X-100 (التحكم) إلى السطح (العلوي) متجه نحو المحور الأوراق حتى تصل التشبع. تغطية الجزء العلوي من وعاء مع رقائق الألومنيوم لتجنب جولة الاعادة غبيري إلى التربة. بعد الرش، وتغطي النباتات مع كيس من البلاستيك لمدة 24 ساعة للحفاظ على مستوى عال من الرطوبة تسهيل غزو الفطرية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتغمر التربة الأسلوب، استخدم اسطوانة تخرج لتطبيق 10 مل من التعليق غبيري (العلاج) أو 0.1٪ تريتون X-. 100 (التحكم) على سطح التربة في قاعدة النبات </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد التطعيمات، والعودة إلى غرف النباتات النمو ترتيبها في تصميم القطاعات كاملة العشوائية. يجب تثبيت ما لا يقل عن أربع كتل التجريبية إضافية للسماح تقييم نمو النبات، بالإضافة إلى تقييم الاستعمار النابوت الداخلي، في التجربة نفسها. </li></ol> 4. يفالuations <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقييم التجربة كتلة واحدة في وقت واحد، واختيار القطع في ترتيب عشوائي. هذا مهم بشكل خاص للتجارب الكبيرة التي لا يمكن تقييمها في يوم واحد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل معالجة النبات، وتسجيل قياس ارتفاعه من القاعدة إلى النسيج الإنشائي القمي. ثم، اقتلاع بعناية وغسل جيدا في مياه جارية الصنبور. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> من كل عينة، مصنع نشرتين، قطعتين من الجذر وقطعتين من الجذعية. حدد عينات عشوائية من أوراق النشرة الحقيقية الأولى من المصنع. ثم، يجب الحصول على عينات الجذعية اثنين، 3 سم طويلة لكل منهما، في الفترة من منتصف المصنع وبالقرب من سطح التربة. وأخيرا، يجب الحصول على عينات أصل اثنين، كما 3 سم طويلة لكل منهما، في الفترة من منتصف الجذر و1 سم من وراء تلميح الجذر. وضع عينات على ثلاثة أكياس الورق وتسمية منفصلة بشكل مناسب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد غسل وأخذ العينات جميع النباتات في كتلة، تبدأ من خلال تجهيز الأوراق، ثم الجذور والسيقان وأخيرا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعقيم السطح رقضايا في غطاء تدفق الصفحي معقمة كما في 1.1 أعلاه. شطف كل عينة ثلاث مرات عن طريق الغمر في الماء المقطر المعقم والسماح لها الجافة في ورقة منشفة معقمة. ثم، تشريح وتجاهل حواف الخارجي، حيث قد تم القضاء endophytes بسبب الاتصال مع المطهرات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع العينة قلصت إلى ستة أقسام، حيث بلغ متوسطها 6X6 مم للأوراق و 6 ملم طويلة لالسيقان والجذور. لوحة من الأقسام الستة على طبق بتري 60 مم مع وسائل الإعلام PDA تستكمل مع المضادات الحيوية التتراسيكلين، الستربتوميسين والبنسلين في كل ملغ / L 2. ختم لوحة مع parafilm واحتضان في الظلام في 25 ° C. كل مصنع ينتج ستة صفائح، وهما جزء النبات الواحد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغيير ماء الشطف بعد معالجة كل كتلة لجزء النبات معين. قبل التخلص من المياه المستعملة الشطف، لوحة لعينة مؤلفة من 100 ميكرولتر على وسائل الإعلام PDA واحتضان لمدة 10 يوما عند درجة حرارة 25 C لتقييم نجاح التعقيم. إذا نمو الفطريات تستتبعه، لا تعتبر العينات المطابقة للتحليلات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تفقد لوحات كل 2-3 أيام لمدة 20 يوما لمراقبة وتسجيل نمو الفطريات. أقسام المصنع المكوس ونقل واظهار وجود endophytes الفطرية التي تحتوي على لوحات جديدة PDA. هذا سوف تجنب تلوث أقسام المصنع المجاورة في لوحة الأصلي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سجل B. ويمكن تحديد bassiana النمو من أقسام المصنع. البوفيرية bassiana من فطر مميزة كثيفة بيضاء تصبح كريم لأصفر باهت على حافة. عندما تكون في شك، تحميل العينة في قطرة ماء وتفتيش تحت المجهر، وتبحث عن غبيرات كروي الشكل وconidiophores متعرج الشكل، سمة من الأنواع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام كتل التجريبية إضافية لتقييم تأثير العلاج على الكتلة الحيوية النباتية. الأولى، وقياس طولهم من القاعدة إلى أعلى النسيج الإنشائي القمي. ثم، اقتلاع النباتات بعناية وغسل في ماء الصنبور والسماح لهم الجافة في C ° 45 لمدة ثلاثة أيام لتحديد وزنها الجاف. </li></ol>

<ol>
	<li>Vega, F. E., Meyling, N. V., Luangsa-ard, J. J., Blackwell, M., Vega, F. E., Kaya, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Fungal entomopathogens in Insect Pathology. , 171-220 (2012).</li><li>Vega, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+pathology+and+fungal+endophytes.">Insect pathology and fungal endophytes.</a> Journal of invertebrate pathology. 98, 277-279 (2008).</li><li>Sasan, R. K., Bidochka, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+insect-pathogenic+fungus+Metarhizium+robertsii+(Clavicipitaceae)+is+also+an+endophyte+that+stimulates+plant+root+development.">The insect-pathogenic fungus Metarhizium robertsii (Clavicipitaceae) is also an endophyte that stimulates plant root development.</a> American journal of botany. 99, 101-107 (2012).</li><li>Elena, G. J., Beatriz, P. J., Alejandro, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metarhizium+anisopliae+(Metschnikoff)+Sorokin+promotes+growth+and+has+endophytic+activity+in+tomato+plants.">Metarhizium anisopliae (Metschnikoff) Sorokin promotes growth and has endophytic activity in tomato plants.</a> Advances in biological research. 5, 22-27 (2011).</li><li>Bing, L. A., Lewis, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+Ostrinia+nubilalis+(H&#252;bner)(Lepidoptera:+Pyralidae)+by+endophytic+Beauveria+bassiana+(Balsamo)+Vuillemin.">Suppression of Ostrinia nubilalis (H&#252;bner)(Lepidoptera: Pyralidae) by endophytic Beauveria bassiana (Balsamo) Vuillemin.</a> Environmental entomology. 20, 1207-1211 (1991).</li><li>Akello, J., Dubois, T., Coyne, D., Kyamanywa, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endophytic+Beauveria+bassiana+in+banana+(Musa+spp.)+reduces+banana+weevil+(Cosmopolites+sordidus)+fitness+and+damage.">Endophytic Beauveria bassiana in banana (Musa spp.) reduces banana weevil (Cosmopolites sordidus) fitness and damage.</a> Crop protection. 27, 1437-1441 (2008).</li><li>Gurulingappa, P., Sword, G. A., Murdoch, G., McGee, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colonization+of+crop+plants+by+fungal+entomopathogens+and+their+effects+on+two+insect+pests+when+in+planta.">Colonization of crop plants by fungal entomopathogens and their effects on two insect pests when in planta.</a> Biological. 55, 34-41 (2010).</li><li>Akello, J., Dubois, T., Coyne, D., Kyamanywa, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+endophytic+Beauveria+bassiana+on+populations+of+the+banana+weevil,+Cosmopolites+sordidus,+and+their+damage+in+tissue-cultured+banana+plants.">Effect of endophytic Beauveria bassiana on populations of the banana weevil, Cosmopolites sordidus, and their damage in tissue-cultured banana plants.</a> Entomologia experimentalis et applicata. 129, 157-165 (2008).</li><li>Ownley, B. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beauveria+bassiana:+Endophytic+colonization+and+plant+disease+control.">Beauveria bassiana: Endophytic colonization and plant disease control.</a> Journal of invertebrate pathology. 98, 267-270 (2008).</li><li>Ownley, B. H., Gwinn, K. D., Vega, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endophytic+fungal+entomopathogens+with+activity+against+plant+pathogens:+ecology+and+evolution.">Endophytic fungal entomopathogens with activity against plant pathogens: ecology and evolution.</a> BioControl. 55, 113-128 (2010).</li><li>Akello, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beauveria+bassiana+(Balsamo)+Vuillemin+as+an+endophyte+in+tissue+culture+banana+(Musa+spp.).">Beauveria bassiana (Balsamo) Vuillemin as an endophyte in tissue culture banana (Musa spp.).</a> Journal of invertebrate pathology. 96, 34-42 (2007).</li><li>G&#243;mez-Vidal, S., Lopez-Llorca, L. V., Jansson, H. B., Salinas, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endophytic+colonization+of+date+palm+(Phoenix+dactylifera+L.)+leaves+by+entomopathogenic+fungi.">Endophytic colonization of date palm (Phoenix dactylifera L.) leaves by entomopathogenic fungi.</a> Micron. 37, 624-632 (2006).</li><li>Posada, F., Vega, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+the+fungal+entomopathogen+Beauveria+bassiana+(Ascomycota:+Hypocreales)+as+an+endophyte+in+cocoa+seedlings+(Theobroma+cacao).">Establishment of the fungal entomopathogen Beauveria bassiana (Ascomycota: Hypocreales) as an endophyte in cocoa seedlings (Theobroma cacao).</a> Mycologia. 97, 1195-1200 (2005).</li><li>Tefera, T., Vidal, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+inoculation+method+and+plant+growth+medium+on+endophytic+colonization+of+sorghum+by+the+entomopathogenic+fungus+Beauveria+bassiana.">Effect of inoculation method and plant growth medium on endophytic colonization of sorghum by the entomopathogenic fungus Beauveria bassiana.</a> BioControl. 54, 663-669 (2009).</li><li>Posada, F., Vega, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inoculation+and+colonization+of+coffee+seedlings+(Coffea+arabica+L.)+with+the+fungal+entomopathogen+Beauveria+bassiana+(Ascomycota:+Hypocreales.">Inoculation and colonization of coffee seedlings (Coffea arabica L.) with the fungal entomopathogen Beauveria bassiana (Ascomycota: Hypocreales.</a> Mycoscience. 47, 284-289 (2006).</li><li>Akello, J., Dubois, T., Coyne, D., Kyamanywa, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+Beauveria+bassiana+dose+and+exposure+duration+on+colonization+and+growth+of+tissue+cultured+banana+(Musa+sp.)+plants.">The effects of Beauveria bassiana dose and exposure duration on colonization and growth of tissue cultured banana (Musa sp.) plants.</a> Biological. 49, 6-10 (2009).</li><li>Posada, F., Aime, M. C., Peterson, S. W., Rehner, S. A., Vega, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inoculation+of+coffee+plants+with+the+fungal+entomopathogen+Beauveria+bassiana+(Ascomycota:+Hypocreales).">Inoculation of coffee plants with the fungal entomopathogen Beauveria bassiana (Ascomycota: Hypocreales).</a> Mycological research. 111, 748-757 (2007).</li><li>Brownbridge, M., Reay, S. D., Nelson, T. L., Glare, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistence+of+Beauveria+bassiana+(Ascomycota:+Hypocreales)+as+an+endophyte+following+inoculation+of+radiata+pine+seed+and+seedlings.">Persistence of Beauveria bassiana (Ascomycota: Hypocreales) as an endophyte following inoculation of radiata pine seed and seedlings.</a> Biological control. 61, 194-200 (2012).</li><li>Posada, F. J., Chaves, F. C., Gianfagna, T. J., Pava-Ripoll, M., Hebbar, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+the+fungal+entomopathogen+Beauveria+bassiana+as+an+endophyte+in+cocoa+pods+(Theobroma+cacao+L.).">Establishment of the fungal entomopathogen Beauveria bassiana as an endophyte in cocoa pods (Theobroma cacao L.).</a> Revista U.D.C.A. actualidad &amp; divulgaci&#243;n cient&#237;fica. 13, 71-78 (2010).</li><li>Quesada-Moraga, E., Landa, B. B., Mu&#241;oz-Ledesma, J., Jim&#233;nez-D&#237;az, R. M., Santiago-Alvarez, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endophytic+colonisation+of+opium+poppy,+Papaver+somniferum,+by+an+entomopathogenic+Beauveria+bassiana+strain.">Endophytic colonisation of opium poppy, Papaver somniferum, by an entomopathogenic Beauveria bassiana strain.</a> Mycopathologia. 161, 323-329 (2006).</li><li>Biswas, C., Dey, P., Satpathy, S., Satya, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+the+fungal+entomopathogen+Beauveria+bassiana+as+a+season+long+endophyte+in+jute+(Corchorus+olitorius)+and+its+rapid+detection+using+SCAR+marker.">Establishment of the fungal entomopathogen Beauveria bassiana as a season long endophyte in jute (Corchorus olitorius) and its rapid detection using SCAR marker.</a> BioControl. , 1-7 (2011).</li><li>Bing, L. A., Lewis, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Occurrence+of+the+entomopathogen+Beauveria+bassiana+(Balsamo)+Vuillemin+in+different+tillage+regimes+and+in+Zea+mays+L.+and+virulence+towards+Ostrinia+nubilalis+(H&#252;bner).">Occurrence of the entomopathogen Beauveria bassiana (Balsamo) Vuillemin in different tillage regimes and in Zea mays L. and virulence towards Ostrinia nubilalis (H&#252;bner).</a> Agriculture, ecosystems &amp; environment. 45, 147-156 (1993).</li><li>Akello, J., Sikora, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systemic+acropedal+influence+of+endophyte+seed+treatment+on+Acyrthosiphon+pisum+and+Aphis+fabae+offspring+development+and+reproductive+fitness.">Systemic acropedal influence of endophyte seed treatment on Acyrthosiphon pisum and Aphis fabae offspring development and reproductive fitness.</a> Biological. 61, 215-221 (2012).</li><li>Reddy, N. P., Ali Khan, A. P., Devi, U. K., Sharma, H. C., Reineke, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+millet+crop+plant+(Sorghum+bicolor)+with+the+entomopathogenic+fungus+(Beauveria+bassiana)+to+combat+infestation+by+the+stem+borer,+Chilo+partellus+Swinhoe+(Lepidoptera:+Pyralidae.">Treatment of millet crop plant (Sorghum bicolor) with the entomopathogenic fungus (Beauveria bassiana) to combat infestation by the stem borer, Chilo partellus Swinhoe (Lepidoptera: Pyralidae.</a> Journal of Asia Pacific. 12, 221 (2009).</li><li>Quesada-Moraga, E., Mu&#241;oz-Ledesma, F. J., Santiago-Alvarez, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systemic+protection+of+Papaver+somniferum+L.+against+Iraella+luteipes+(Hymenoptera:+Cynipidae)+by+an+endophytic+strain+of+Beauveria+bassiana+(Ascomycota:+Hypocreales).">Systemic protection of Papaver somniferum L. against Iraella luteipes (Hymenoptera: Cynipidae) by an endophytic strain of Beauveria bassiana (Ascomycota: Hypocreales).</a> Environmental entomology. 38, 723-730 (2009).</li><li>Cherry, A. J., Banito, A., Djegui, D., Lomer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+the+stem-borer+Sesamia+calamistis+(Lepidoptera;+Noctuidae)+in+maize+following+seed+dressing,+topical+application+and+stem+injection+with+African+isolates+of+Beauveria+bassiana.">Suppression of the stem-borer Sesamia calamistis (Lepidoptera; Noctuidae) in maize following seed dressing, topical application and stem injection with African isolates of Beauveria bassiana.</a> International journal of pest management. 50, 67-73 (2004).</li><li>Gurulingappa, P., McGee, P. A., Sword, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endophytic+Lecanicillium+lecanii+and+Beauveria+bassiana+reduce+the+survival+and+fecundity+of+Aphis+gossypii+following+contact+with+conidia+and+secondary+metabolites.">Endophytic Lecanicillium lecanii and Beauveria bassiana reduce the survival and fecundity of Aphis gossypii following contact with conidia and secondary metabolites.</a> Crop protection. 30, 349-353 (2011).</li><li>van Schoonhoven, A., Voysest, O., Schwartz, H. F., Pastor-Corrales, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Common beans in Latin America and their constraints in Bean production problems in the tropics. , 33-57 (1989).</li><li>De Vos, M., Jander, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Choice+and+no-choice+assays+for+testing+the+resistance+of+A.+thaliana+to+chewing+insects.">Choice and no-choice assays for testing the resistance of A. thaliana to chewing insects.</a> J. Vis. Exp. (15), e683 (2008).</li><li>Parsa, S., Sotelo, G., Cardona, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterizing+herbivore+resistance+mechanisms:+spittlebugs+on+Brachiaria+spp.+as+an+example.">Characterizing herbivore resistance mechanisms: spittlebugs on Brachiaria spp. as an example.</a> J. Vis. Exp. (52), e3047 (2011).</li><li>Atamian, H., Roberts, P., Kaloshian, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+and+low+throughput+screens+with+root-knot+nematodes+Meloidogyne+spp.">High and low throughput screens with root-knot nematodes Meloidogyne spp.</a> J. Vis. Exp. (61), e3629 (2012).</li></ol>

الكتاب تعلن أنه ليس لديهم المصالح المتنافسة المالية.

ويمكن لعوامل كثيرة تؤثر على نتيجة محددة من تجربة لإنشاء entomopathogen الفطرية باعتبارها نابوت داخلي. نتائجنا تظهر طريقة التلقيح هو واحد منهم. العوامل البيولوجية في تجربة تشمل المحاصيل الأنواع أو الأصناف المختارة والفطرية سلالة الأنواع entomopathogen أو عزل المستخدمة. عوامل أخرى للنظر في التلاعب تشمل تركيز اللقاح، عمر النبات خلال التطعيمات، وظروف المصنع المتنامية. سيكون من المثالي لأسلوب التلقيح أن يؤدي إلى الأجهزة عن طريق الاستعمار مصنع 14،17،18،21 على entomopathogen الفطرية. بدلا من ذلك، يبدو أن أساليب التلقيح تميل لصالح نمط محدد من الاستعمار المحلي. في القهوة، على سبيل المثال، وبخاخ الأوراق صالح الاستعمار ورقة بينما الجرعات التربة صالح الاستعمار الجذر 17. وجدنا نفس النمط في الفول المشتركة. في نهاية المطاف، ينبغي أن اختيار طريقة التلقيح تكونمسترشدة في ذلك المكان المقصود للنابوت داخلي داخل مصنع، مطابقة يفترض أن مكانة من النبات أو الممرض الهدف النبات. على الرغم من أن يمكن أن تستخدم عادة، والكشف النوعي والكمي نابوت داخلي يعتمد على وسائل الإعلام الثقافات يكون مكلفا وصعبا وعرضة للخطأ. على سبيل المثال، تم تقييم ما مجموعه أقسام المصنع 10800 (مطلي على أطباق بتري 1،800) في تجربة لتحسين B. التطعيمات bassiana على الموز 16. للخروج من هذه، كانت مستعمرة من قبل أقسام 4496 B. المفترضة bassiana، على النحو المحدد أساسا عن طريق التشكل مستعمرة. بوضوح، كان يمكن أن يكون التحقق من الأنواع المجهرية لكل مستعمرة خطوة مرغوب فيه ولكن لا يمكن تحمله. من ناحية أخرى، كانت مستعمرة من قبل فطريات 1176 الأقسام الأخرى والتخلص منها ومعالجتها وعداد المفقودين البيانات 16. احتمال وجود، مع ذلك، أن B. كان bassiana منافس الفقراء أو أبطأ في النمو، ويمكن في نهاية المطاف ظهرت في هذه الأقسام إذا كانالوقت الكافي llowed. ولذلك، طرق الكشف نابوت داخلي يعتمد على وسائل الإعلام الثقافات على مدى كاذبة ايجابيات وسلبيات كاذبة. وفقا لذلك، ووضع الكشف أكثر موثوقية وأساليب القياس الكمي، على سبيل المثال ما يبرره جيدا تلك القائمة على تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR) المقايسات 20،21،24،. ينبغي أن يكون الهدف النهائي للتجارب التلقيح في تطوير علاج فعال النظامية التي توفر المقاومة ضد دائم / والحيوانات العاشبة أو المرض. A المعقول، ولكن حتى الآن لم تختبر، هو أن فرضية مدى الاستعمار النابوت الداخلي يجب أن ترتبط بشكل إيجابي مع مدى نابوت داخلي بوساطة المقاومة. الخطوة التالية الطبيعية بعد تحسين أساليب التلقيح، ويمكن بالتالي النظر في هذه العلاقة. يمكن الفيديو بروتوكولات عدة تساعد الباحثين تصميم فحص مقاومة مناسبة للآفة المستهدفة أو الممرض 29-31. في نهاية المطاف، من هذا الاختبار ما سيحدد نجاح قائحطريقة نشوئها، ويرتبط به من احتمال المكافحة البيولوجية النابوت الداخلي.

entomopathogens الفطرية هي مهمة المنظمين للسكان الحشرات مع إمكانات كبيرة كما mycopesticides 1. إلا في الآونة الأخيرة، ومع ذلك، وقد ثبت أن يحدث entomopathogens الفطرية وendophytes، سواء بشكل طبيعي واستجابة لأساليب التلقيح المختلفة 2. وظيفة الإيكولوجية للentomopathogens الفطرية النابوت الداخلي ما زال مجهولا إلى حد كبير، ولكن بعض الدراسات تشير الى تورط لهم في نمو النبات 3،4، ومقاومة النبات 5-8، ومقاومة الأمراض 9،10. ويتمثل الهدف العام من الأساليب المقدمة هنا هو لإدخال entomopathogen الفطرية باعتبارها نابوت داخلي، وذلك استعدادا لعمليات التقييم اللاحق للالمكافحة البيولوجية النابوت الداخلي. البوفيرية bassiana (بالسامو) Vullemin (Ascomycota: المستلحمات) هو أفضل درس entomopathogen الفطرية النابوت الداخلي 5-9،11-19، ومتاح للmycopesticide التجارية. اختبار طرق التلقيح لإنشاء <eم&gt; B. bassiana باعتبارها نابوت داخلي تشمل الجرعات التربة 14،17، 18 و الطلاء البذور الغمر 14، 13،15 الضمادات الجذير الجنيني، وجذر ورهيزومي الغمر 11،16،18، الجذعية حقن 17، 14،17،20 الرش والرش الورقي زهرة 19. باستخدام هذه الأساليب، أدخلت الباحثين B. bassiana في الموز 11، الفول 7، الكاكاو 13، القهوة 17، الذرة 7، القطن 7، النخيل 12، الجوت 21، خشخاش الأفيون 20، اليقطين 7، رديتا الصنوبر 18، الذرة 14، 7 و الطماطم القمح 7. الأدلة الحديثة تشير إلى أن B. النابوت الداخلي bassiana لديه القدرة على حماية النباتات من الآفات ليس فقط المفصلية 5-7،22-27، ولكن أيضا من بعض مسببات الأمراض النباتية 9. الحبة المشتركة عادية (فاصيلوس فولجاريس) تعد من بين أبرز المحاصيل عرضة للآفاتوالأمراض. يمكن أن تتأثر بها أكثر من 400 الآفات ومسببات الأمراض 200، التي هجوم يعتقد أنه إنتاج الفول معظم عاملا يحد عبر المناطق 28. وفقا لذلك، قد يكون الفول المشتركة المحاصيل نموذجا ممتازا لدراسة الطيف الكامل من المكافحة البيولوجية النابوت الداخلي من قبل B. bassiana. كخطوة أولى في هذا الاتجاه، توضح هذه المقالة الرش الورقي والجرعات التربة وطرق التلقيح لإدخال B.bassiana باعتبارها نابوت داخلي في الفول المشتركة.

<table border="1">
<tbody>
	<tr>
 	<td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>REAGENTS</td>
 </tr>
 <tr>
 	<td>Name of Reagent/Material</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalog Number</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 	<td>Mycotrol SE	</td>
 <td>Laverlam</td>
 <td>4167</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 	<td>Noble agar</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>A5431-250G</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 	<td>Penicillin G sodium salt</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>P3032-25MU</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 	<td>Petri dish (100 x 15 mm)</td>
 <td>Fisher</td>
 <td>08-757-12</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 	<td>Petri dish (60 x 15 mm)</td>
 <td>Fisher</td>
 <td>08-757-13A</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 	<td>Potato dextrose agar</td>
 <td>Difco</td>
 <td>213400</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 	<td>Regular bleach (NaOCl)</td>
 <td>CLOROX</td>
 <td>N/A</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 	<td>Streptomycin sulfate salt</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>S6501-25G</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 	<td>Tetracycline</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>T3258-25G</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 	<td>Triple quince (NPK)</td>
 <td>ABOCOL</td>
 <td>N/A</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 	<td>Triton X-100</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>X-100</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 	<td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>EQUIPMENT</td>
 </tr>
 <tr>
 	<td>Biological safety cabinet</td>
 <td>NuAire</td>
 <td>NU-425-600</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 	<td>Hemocytometer</td>
 <td>Fisher</td>
 <td>02-671-10 </td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 	<td>Leica DM LB microscope</td>
 <td>Leica</td>
 <td>N/A</td>
 <td></td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

establishing fungal entomopathogens as endophytes: towards endophytic biological control

البوفيرية bassiana هو entomopathogen الفطرية، مع القدرة على استعمار النباتات endophytically. باعتبارها B.، نابوت داخلي قد bassiana تلعب دورا في حماية النباتات من الحيوانات العاشبة والمرض. هذا البروتوكول يوضح أساليب التلقيح سنتين إلى إنشاء B. bassiana endophytically في الفول المشتركة (فاصيلوس الشائع)، وذلك استعدادا لعمليات التقييم التي المكافحة البيولوجية النابوت الداخلي. وتزرع النباتات من البذور المعقمة سطح لمدة أسبوعين قبل الحصول على B. تطبيق bassiana علاج 10 8 غبيرات / مل (أو الماء) إما رذاذ الأوراق أو تغمر التربة. وبعد أسبوعين، ويتم حصاد النباتات وأوراقها وعينات، السيقان والجذور لتقييم الاستعمار الفطرية النابوت الداخلي. لهذا، يتم بشكل فردي عينات سطح تعقيمها، مقطعة إلى مقاطع متعددة، وحضنت في وسائل الإعلام البطاطا أجار دكستروز لمدة 20 يوما. ويتم تفتيش وسائل الإعلام كل يوم 2-3 لمراقبة نمو الفطريات كماsociated مع أقسام المصنع وتسجيل وقوع B. bassiana لتقدير مدى استعمارها النابوت الداخلي. التحليلات للنجاح التلقيح مقارنة وقوع B. bassiana داخل جزء معين النبات (أوراق أي ينبع أو الجذور) عبر العلاجات والضوابط. بالإضافة إلى طريقة التلقيح، ونتائج محددة من التجربة قد تعتمد على أنواع المحاصيل المستهدفة أو متنوعة، والأنواع الفطرية entomopathogen سلالة أو عزل المستخدمة، وظروف المصنع المتنامية.

كان B. bassiana قادرة على استعمار endophytically P. الشائع في الاستجابة للعلاجات التلقيح أظهرت (الشكل 1). أدى كل من الرش الورقي والتربة في الجرعات الاستعمار النابوت الداخلي من قبل B. bassiana في أكثر من 80٪ من النباتات المعاملة (الشكل 2). ومع ذلك، يتوقف مدى الاستعمار من جانب محطة تقييم وطريقة التلقيح المستخدمة. ورد الأوراق لأفضل التطعيمات الرذاذ. جذور، من ناحية أخرى، رد فقط لجرعة التطعيم. وأخيرا، ردت بالمثل ينبع إلى كل من أساليب التلقيح. B. لم يتم الكشف عن bassiana في أي من أقسام المصنع السيطرة. مستقلة عن endophytes والعلاج غير B. نمت bassiana من 15٪ من تقييم أقسام المصنع، ولكن تم تشريح على الخروج من لوحات وسائل الإعلام قبل أن يتمكنوا من غزو الأقسام المجاورة وتؤثر على النتائج. وعلاجها ومكافحتها النباتات تمييزه بوضوح بعد أسبوعين من التطعيم. تم الكشف عن عدم وجود فروق في وزنهم في الجافة وطولهم. <img src="/files/ftp_upload/50360/50360fig1.jpg" alt="الشكل 1"/> الشكل 1. ممثل نتائج العلاجات التلقيح على الاستعمار النابوت الداخلي للنباتات الفول (فاصيلوس الشائع السيرة الذاتية كاليما.) من bassiana البوفيرية الأعلى الأيسر: لوحات تحكم مع أي نمو. أعلى اليمين: نابوت داخلي الفطرية من قسم النبات تلويث وحة بأكمله. أسفل اليسار: B. bassiana متزايد من أقسام المصنع اثنين. أسفل اليمين: النابوت الداخلي B. bassiana غبيرات وconidiophores ينظر اليها على انها تحت المجهر. <img src="/files/ftp_upload/50360/50360fig2.jpg" alt="الشكل 2" fo:content-width="4.5in" fo:src="/files/ftp_upload/50360/50360fig2highres.jpg"/> الشكل 2. تأثير التلقيح من العلاجات على الاستعمار النابوت الداخلي من مكتب التحقيقات الفرنسىالنباتات غير عادية (فاصيلوس الشائع السيرة الذاتية. كاليما) من bassiana البوفيرية، بعد أسبوعين من التطعيم مع GHA التوتر. الاستعمار النسبة تمثل عدد من أقسام المصنع المستعمر مقسوما على عدد من الأبواب مثقف.

Watch this Scientific Journal Video about Establishing Fungal Entomopathogens as Endophytes: Towards Endophytic Biological Control at JoVE.com

Establishing Fungal Entomopathogens as Endophytes: Towards Endophytic Biological Control

هذا البروتوكول يوضح أساليب التلقيح اثنين إلى تقديم entomopathogen الفطرية<em&gt; البوفيرية bassiana</em&gt; باعتبارها نابوت داخلي في الفول المشتركة (<em&gt; الشائع فاصيلوس</em&gt;)، وذلك استعدادا لعمليات التقييم التي المكافحة البيولوجية النابوت الداخلي.

إنشاء Entomopathogens الفطرية وEndophytes: نحو المكافحة البيولوجية النابوت الداخلي

 Beauveria bassiana is a fungal entomopathogen with the ability to colonize plants endophytically. As an endophyte, B. bassiana may play a role in ...

establishing-fungal-entomopathogens-as-endophytes-towards-endophytic

Research

JoVE Journal

Bioengineering

34.4K Views.  International Center for Tropical Agriculture (CIAT), Cali, Colombia. هذا البروتوكول يوضح أساليب التلقيح اثنين إلى تقديم entomopathogen الفطرية البوفيرية bassiana باعتبارها نابوت داخلي في الفول المشتركة ( الشائع فاصيلوس)، وذلك استعدادا لعمليات التقييم التي المكافحة البيولوجية النابوت الداخلي.

Video: Establishing Fungal Entomopathogens as Endophytes: Towards Endophytic Biological Control

Engineering Biological-Based Vascular Grafts Using a Pulsatile Bioreactor

Much effort has been devoted to develop and advance the methodology to regenerate functional small-diameter arterial bypasses. In the physiological environment, both mechanical and chemical stimulation are required to maintain the proper development and functionality of arterial vessels1,2.
Bioreactor culture systems developed by our group are designed to support vessel regeneration within a precisely controlled chemo-mechanical environment mimicking that of native vessels. Our bioreactor assembly and maintenance procedures are fairly simple and highly repeatable3,4. Smooth muscle cells (SMCs) are seeded onto a tubular polyglycolic acid (PGA) mesh that is threaded over compliant silicone tubing and cultured in the bioreactor with or without pulsatile stimulation for up to 12 weeks. There are four main attributes that distinguish our bioreactor from some predecessors. 1) Unlike other culture systems that simulate only the biochemical surrounding of native blood vessels, our bioreactor also creates a physiological pulsatile environment by applying cyclic radial strain to the vessels in culture. 2) Multiple engineered vessels can be cultured simultaneously under different mechanical conditions within a controlled chemical environment. 3) The bioreactor allows a mono layer of endothelial cells (EC) to be easily coated onto the luminal side of engineered vessels for animal implantation models. 4) Our bioreactor can also culture engineered vessels with different diameter size ranged from 1 mm to 3 mm, saving the effort to tailor each individual bioreactor to fit a specific diameter size. 
The engineered vessels cultured in our bioreactor resemble native blood vessels histologically to some degree. Cells in the vessel walls express mature SMC contractile markers such as smooth muscle myosin heavy chain (SMMHC)3. A substantial amount of collagen is deposited within the extracellular matrix, which is responsible for ultimate mechanical strength of the engineered vessels5. Biochemical analysis also indicates that collagen content of engineered vessels is comparable to that of native arteries6. Importantly, the pulsatile bioreactor has consistently regenerated vessels that exhibit mechanical properties that permit successful implantation experiments in animal models3,7. Additionally, this bioreactor can be further modified to allow real-time assessment and tracking of collagen remodeling over time, non-invasively, using a non-linear optical microscopy (NLOM)8. To conclude, this bioreactor should serve as an excellent platform to study the fundamental mechanisms that regulate the regeneration of functional small-diameter vascular grafts.

Our group has developed a bioreactor culture system that mimics the physiological pulsatile stresses of the cardiovascular system to regenerate implantable small-diameter vascular grafts.

الطعوم الوعائية الهندسة البيولوجية ، عن طريق بناء مفاعل حيوي نابض

Much effort has been devoted to develop and advance the methodology to regenerate functional small-diameter arterial bypasses. In the physiological ...

Imaging of Biological Tissues by Desorption Electrospray Ionization Mass Spectrometry

Mass spectrometry imaging (MSI) provides untargeted molecular information with the highest specificity and spatial resolution for investigating biological tissues at the hundreds to tens of microns scale. When performed under ambient conditions, sample pre-treatment becomes unnecessary, thus simplifying the protocol while maintaining the high quality of information obtained. Desorption electrospray ionization (DESI) is a spray-based ambient MSI technique that allows for the direct sampling of surfaces in the open air, even in vivo. When used with a software-controlled sample stage, the sample is rastered underneath the DESI ionization probe, and through the time domain, m/z information is correlated with the chemical species' spatial distribution. The fidelity of the DESI-MSI output depends on the source orientation and positioning with respect to the sample surface and mass spectrometer inlet. Herein, we review how to prepare tissue sections for DESI imaging and additional experimental conditions that directly affect image quality. Specifically, we describe the protocol for the imaging of rat brain tissue sections by DESI-MSI.

Desorption electrospray ionization mass spectrometry (DESI-MS) is an ambient method by which samples, including biological tissues, can be imaged with minimal sample preparation. By rastering the sample below the ionization probe, this spray-based technique provides sufficient spatial resolution to discern molecular features of interest within tissue sections.

التصوير من الأنسجة البيولوجية بواسطة الامتزاز Electrospray التأين الطيف الكتلي

Mass spectrometry imaging (MSI) provides untargeted molecular information with the highest specificity and spatial resolution for investigating biological ...

In situ TEM of Biological Assemblies in Liquid

Researchers regularly use Transmission Electron Microscopes (TEMs) to examine biological entities and to assess new materials. Here, we describe an additional application for these instruments- viewing viral assemblies in a liquid environment. This exciting and novel method of visualizing biological structures utilizes a recently developed microfluidic-based specimen holder. Our video article demonstrates how to assemble and use a microfluidic holder to image liquid specimens within a TEM. In particular, we use simian rotavirus double-layered particles (DLPs) as our model system. We also describe steps to coat the surface of the liquid chamber with affinity biofilms that tether DLPs to the viewing window. This permits us to image assemblies in a manner that is suitable for 3D structure determination. Thus, we present a first glimpse of subviral particles in a native liquid environment.

In situ TEM of Biological Assemblies in Liquid

Here we describe a procedure to image viral complexes in liquid at nanometer resolution using a transmission electron microscope.

في الموقع TEM من الجمعيات البيولوجية في السائل

Researchers regularly use Transmission Electron Microscopes (TEMs) to examine biological entities and to assess new materials. Here, we describe an ...

Synthesis of Hydrogels with Antifouling Properties As Membranes for Water Purification

Hydrogels have been widely utilized to enhance the surface hydrophilicity of membranes for water purification, increasing the antifouling properties and thus achieving stable water permeability through membranes over time. Here, we report a facile method to prepare hydrogels based on zwitterions for membrane applications. Freestanding films can be prepared from sulfobetaine methacrylate (SBMA) with a crosslinker of poly(ethylene glycol) diacrylate (PEGDA) via photopolymerization. The hydrogels can also be prepared by impregnation into hydrophobic porous supports to enhance the mechanical strength. These films can be characterized by attenuated total reflection Fourier transform infrared spectroscopy (ATR-FTIR) to determine the degree of conversion of the (meth)acrylate groups, using goniometers for hydrophilicity and differential scanning calorimetry (DSC) for polymer chain dynamics. We also report protocols to determine the water permeability in dead-end filtration systems and the effect of foulants (bovine serum albumin, BSA) on membrane performance.

This paper reports practical methods to prepare hydrogels in freestanding films and impregnated membranes and to characterize their physical properties, including water transport properties.

توليف الهلاميات المائية مع خصائص المضادة للحشف والأغشية لتنقية المياه

Hydrogels have been widely utilized to enhance the surface hydrophilicity of membranes for water purification, increasing the antifouling properties and ...

Synthesis of Biocompatible Liquid Crystal Elastomer Foams as Cell Scaffolds for 3D Spatial Cell Cultures

Here, we present a step-by-step preparation of a 3D, biodegradable, foam-like cell scaffold. These scaffolds were prepared by cross-linking star block co-polymers featuring cholesterol units as side-chain pendant groups, resulting in smectic-A (SmA) liquid crystal elastomers (LCEs). Foam-like scaffolds, prepared using metal templates, feature interconnected microchannels, making them suitable as 3D cell culture scaffolds. The combined properties of the regular structure of the metal foam and of the elastomer result in a 3D cell scaffold that promotes not only higher cell proliferation compared to conventional porous templated films, but also better management of mass transport (i.e., nutrients, gases, waste, etc.). The nature of the metal template allows for the easy manipulation of foam shapes (i.e., rolls or films) and for the preparation of scaffolds of different pore sizes for different cell studies while preserving the interconnected porous nature of the template. The etching process does not affect the chemistry of the elastomers, preserving their biocompatible and biodegradable nature. We show that these smectic LCEs, when grown for extensive time periods, enable the study of clinically relevant and complex tissue constructs while promoting the growth and proliferation of cells.

This study presents a methodology to prepare 3D, biodegradable, foam-like cell scaffolds based on biocompatible side-chain liquid crystal elastomers (LCEs). Confocal microscopy experiments show that foam-like LCEs allow for cell attachment, proliferation, and the spontaneous alignment of C2C12s myoblasts.

توليف حيويا الكريستال السائل المرنة كسوات كما السقالات الخليوي لزراعات الخلايا 3D المكانية

Here, we present a step-by-step preparation of a 3D, biodegradable, foam-like cell scaffold. These scaffolds were prepared by cross-linking star block ...

Biological Compatibility Profile on Biomaterials for Bone Regeneration

Large non-union bone fractures are a significant challenge in orthopedic surgery. Although auto- and allogeneic bone grafts are excellent for healing such lesions, there are potential complications with their use. Thus, material scientists are developing synthetic, biocompatible biomaterials to overcome these problems. In this study, we present a multidisciplinary platform for evaluating biomaterials for bone repair. We combined expertise from bone biology and immunology to develop a platform including in vitro osteoclast (OC) and osteoblast (OB) assays and in vivo mouse models of bone repair, immunogenicity, and allergenicity. We demonstrate how to perform the experiments, summarize the results, and report on biomaterial biocompatibility. In particular, we tested OB viability, differentiation, and mineralization and OC viability and differentiation in the context of &#946;-tricalcium phosphate (&#946;-TCP) disks. We also tested a &#946;-TCP/Collagen (&#946;-TCP/C) foam which is a commercially available material used clinically for bone repair in a critical-sized calvarial bone defect mouse model to determine the effects on the early phase of bone healing. In parallel experiments, we evaluated immune and allergic responses in mice. Our approach generates a biological compatibility profile of a bone biomaterial with a range of parameters necessary for predicting the biocompatibility of biomaterials used for bone healing and repair in patients.

The number of novel biomaterials engineered for repairing large bone lesions is continuously expanding with the aim to enhance bone healing and overcome the complications associated with bone transplantation. Here, we present a multidisciplinary strategy for pre-clinical biocompatibility testing of biomaterials for bone repair.

الشخصية التوافق البيولوجي في الحيوية لتجديد العظام

Large non-union bone fractures are a significant challenge in orthopedic surgery. Although auto- and allogeneic bone grafts are excellent for healing such ...

Initial 3D Cell Cluster Control in a Hybrid Gel Cube Device for Repeatable Pattern Formations

The importance of in vitro 3D cultures is considerably emphasized in cell/tissue culture. However, the lack of experimental repeatability is one of its restrictions. Producing few repeatable results of pattern formation deteriorates the analysis of the mechanisms underlying the self-organization. Reducing variation in initial culture conditions, such as the cell density and distribution in the extracellular matrix (ECM), is crucial to enhance the repeatability of a 3D culture. In this article, we demonstrate a simple but robust procedure for controlling the initial cell cluster shape in a 3D extracellular matrix to obtain highly repeatable pattern formations. A micromold with a desired shape was fabricated by using photolithography or a machining process, and it formed a 3D pocket in the ECM contained in a hybrid gel cube (HGC). Highly concentrated cells were then injected in the pocket so that the cell cluster shape matched with the fabricated mold shape. The employed HGC allowed multi-directional scanning by its rotation, which enabled high-resolution imaging and the capture of the entire tissue structure even though a low-magnification lens was used. Normal human bronchial epithelial cells were used to demonstrate the methodology.&#160;

We present a procedure for controlling the initial cell cluster shape in a 3D extracellular matrix to obtain a repeatable pattern formation. A cubic device containing two different hydrogels is employed to achieve multi-directional imaging for tissue pattern formation.

التحكم الكتلة الخلية الأولى 3D في جهاز مكعب جل هجين لتشكيلات نمط التكرار

The importance of in vitro 3D cultures is considerably emphasized in cell/tissue culture. However, the lack of experimental repeatability is one of its ...

Experimental Methods to Study Human Postural Control

Many components of the nervous and musculoskeletal systems act in concert to achieve the stable, upright human posture. Controlled experiments accompanied by appropriate mathematical methods are needed to understand the role of the different sub-systems involved in human postural control. This article describes a protocol for performing perturbed standing experiments, acquiring experimental data, and carrying out the subsequent mathematical analysis, with the aim of understanding the role of musculoskeletal system and central control in human upright posture. The results generated by these methods are important, because they provide insight into the healthy balance control, form the basis for understanding the etiology of impaired balance in patients and the elderly, and aid in the design of interventions to improve postural control and stability. These methods can be used to study the role of somatosensory system, intrinsic stiffness of ankle joint, and visual system in postural control, and may also be extended to investigate the role of vestibular system. The methods are to be used in the case of an ankle strategy, where the body moves primarily about the ankle joint and is considered a single-link inverted pendulum.

This article presents an experimental/analytic framework to study human postural control. The protocol provides step-by-step procedures for performing standing experiments, measuring body kinematics and kinetics signals, and analyzing the results to provide insight into the mechanisms underlying human postural control.

الطرق التجريبية لدراسة السيطرة على الوضعية البشرية

Many components of the nervous and musculoskeletal systems act in concert to achieve the stable, upright human posture. Controlled experiments accompanied ...

Synthesis of Near-Infrared Emitting Gold Nanoclusters for Biological Applications

Over the past decade, fluorescent gold nanoclusters (AuNCs) have witnessed growing popularity in biological applications and enormous efforts have been devoted to their development. In this protocol, a recently developed, facile method for preparation of water soluble, biocompatible, and colloidally stable near-infrared emitting AuNCs have been described in detail. This room-temperature, bottom-up chemical synthesis provides easily functionalizable AuNCs capped with thioctic acid and thiol-modified polyethylene glycol in aqueous solution. The synthetic approach requires neither organic solvents or additional ligand exchange nor extensive knowledge of synthetic chemistry to reproduce. The resulting AuNCs offer free surface carboxylic acids, which can be functionalized with various biological molecules bearing a free amine group without adversely affecting the photoluminescent properties of the AuNCs. A quick, reliable procedure for flow cytometric quantification and confocal microscopic imaging of AuNC uptake by HeLa cells also been described. Due to the large Stokes shift, proper setting of filters in flow cytometry and confocal microscopy is necessary for efficient detection of near-infrared photoluminescence of AuNCs.

A reliable and easily reproducible method for preparation of functionalizable, near-infrared emitting photoluminescent gold nanoclusters and their direct detection inside HeLa cells by flow cytometry and confocal laser scanning microscopy is described.

تركيب مجموعات نانوية ذهبية قريبة من الأشعة تحت الحمراء للتطبيقات البيولوجية

Over the past decade, fluorescent gold nanoclusters (AuNCs) have witnessed growing popularity in biological applications and enormous efforts have been ...

Electric and Magnetic Field Devices for Stimulation of Biological Tissues

Electric fields (EFs) and magnetic fields (MFs) have been widely used by tissue engineering to improve cell dynamics such as proliferation, migration, differentiation, morphology, and molecular synthesis. However, variables such stimuli strength and stimulation times need to be considered when stimulating either cells, tissues or scaffolds. Given that EFs and MFs vary according to cellular response, it remains unclear how to build devices that generate adequate biophysical stimuli to stimulate biological samples. In fact, there is a lack of evidence regarding the calculation and distribution when biophysical stimuli are applied. This protocol is focused on the design and manufacture of devices to generate EFs and MFs and implementation of a computational methodology to predict biophysical stimuli distribution inside and outside of biological samples. The EF device was composed of two parallel stainless-steel electrodes located at the top and bottom of biological cultures. Electrodes were connected to an oscillator to generate voltages (50, 100, 150 and 200 Vp-p) at 60 kHz. The MF device was composed of a coil, which was energized with a transformer to generate a current (1 A) and voltage (6 V) at 60 Hz. A polymethyl methacrylate support was built to locate the biological cultures in the middle of the coil. The computational simulation elucidated the homogeneous distribution of EFs and MFs inside and outside of biological tissues. This computational model is a promising tool that can modify parameters such as voltages, frequencies, tissue morphologies, well plate types, electrodes and coil size to estimate the EFs and MFs to achieve a cellular response.

This protocol describes the step-by-step process to build both electrical and magnetic stimulators used to stimulate biological tissues. The protocol includes a guideline to simulate computationally electric and magnetic fields and manufacture of stimulator devices.

أجهزة المجال الكهربائي والمغناطيسي لتحفيز الأنسجة البيولوجية

Electric fields (EFs) and magnetic fields (MFs) have been widely used by tissue engineering to improve cell dynamics such as proliferation, migration, ...