وقد تم تمويل هذا العمل من المنح المقدمة إلى LKM-K من المعاهد الوطنية للصحة / المعهد الوطني للسرطان (R01CA129822 وR01CA140995). د. المدينة المنورة، وذلك بفضل C. Kauwe ري، M. M-Kauwe وD. Revetto لاستمرار الدعم.

1. النظامية التسليم في الجسم الحي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خلط ما يكفي HerDox مع ملحي معقم لمساواة 0.2 مل من 0.004 ملغ / كغ جرعة من HerDox في حقن ل6-8 أسبوع من العمر NU / NU الماوس واضعة تحت الجلد الأورام طعم أجنبي الجهة الثنائية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رسم بلطف الخليط HerDox إلى حقنة الانسولين 3/10 سم مكعب مزودة إبرة 29G، وتجنب الفقاعات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وبفعل التخدير عن طريق التعرض isoflurane وجيزة في غرفة الاستقراء مجهزة بنظام الكسح الغاز (معدلات تدفق الأوكسجين: 0.5-1 لتر / دقيقة، وتركيز isoflurane و: 3-4٪ (أو أقل). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن الخليط كله في الوريد ذيل الماوس تخدير (0.2 مل لكل حقن). ويمكن أيضا حقن IV أن يؤديها في ضبط النفس، والماوس unanesthetized. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تكرار الحقن في نفس الماوس لمدة ستة أيام أكثر متتابعة، مرة واحدة يوميا. </li></ol> 2. التصوير مضان في الجسم الحي تراكم HerDox مضان في الأورام يمكنيتم كشفها بواسطة اليوم الأخير من حقن (يوم 7) باستخدام جهاز تصوير المتعدد. الإجراءات أدناه ينطوي على استخدام A-إضاءة الكلي والكشف عن نظام حسب الطلب (الشكل 1) 8. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدوره على المتعدد في تصوير بصري الجسم الحي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد الانبعاثات ممر الموجة مرشح (590 نانومتر ± 30 نانومتر) مناسبة للدوكسوروبيسين مضان الكشف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدوره على الأرجون ليزر كريبتون-ووضع ممر الموجة مرشح الإثارة (488 نانومتر ± 10 نانومتر) في مسار بصري ليزر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدوره على نظام التخدير وثم ضع الماوس في غرفة التخدير (معدلات تدفق الأوكسجين: 0.5-1 لتر / دقيقة، وتركيز isoflurane و: 3-4٪ (أو أقل) مجهزة بنظام الكسح الغاز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الماوس من غرفة التخدير إلى غرفة التصوير من المتعدد في الجسم الحي تصوير الضوئي عند الفأر هو تخدير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الرؤوس على الأنف من الفأرة وافتح تدفق لإدارة تخدير المستمرSIA خلال الحصول على الصور (معدلات تدفق الأوكسجين: 0.5-1 لتر / دقيقة، وتركيز isoflurane و: 2-3٪ (أو أقل). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحصول على صور مضان باستخدام ومدة التعرض من 5-15 ثانية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء تحليل الصور ومعالجتها بما في ذلك تصحيح الخلفية أو تعديل التباين. </li></ol> 3. مضان التصوير خارج الحي HerDox مضان ولا يمكن تصوير في الأورام وأجهزة محددة (بما في ذلك الكبد والكلى والطحال والقلب والعضلات والهيكل العظمي) تحصد من الفئران الموت الرحيم في 24 ساعة بعد (يوم 7) حقن النهائي من HerDox. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدوره على المتعدد في تصوير بصري الجسم الحي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد الانبعاثات ممر الموجة مرشح (580 نانومتر ± 20 نانومتر) لدوكسوروبيسين الكشف عن مضان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدوره على الأرجون ليزر كريبتون-ووضع ممر الموجة مرشح الإثارة (488 نانومتر ± 10 نانومتر) في مسار بصري ليزر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكان الأورام وأجهزة معينة رتبت على طبق بيتري في غرفة التصوير Oو على المتعدد في تصوير بصري الجسم الحي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحصول على صور مضان من الأنسجة باستخدام ومدة التعرض من 5-15 ثانية. ويرد مثال من الحصول على الصور مضان الأولي في الشكل 2A. تكرار نفس باستخدام بيتري طبق فارغ، والذي سيكون بمثابة الخلفية (الشكل 2B). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء تحليل الصور ومعالجتها بما في ذلك تصحيح الخلفية أو تعديل التباين. ويرد مثال لصورة تصحيحه في الشكل 2C، الناتجة عن الطرح من الشكل 2B 2A من الشكل. </li></ol> 4. في مجال التصوير متحد البؤر الموقع من الأورام في مجال التصوير متحد البؤر الموقع يسمح الكشف والتحليل من تراكم الورم HerDox على المستوى الخلوي. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدوره على لايكا SPE متحد البؤر المجهر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حدد 488 نانومتر ضوء الليزر لإثارة دوكسوروبيسين وانبعاث موجات (560-620 نانومتر) لدوكسوروبيسينالكشف عن مضان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حدد الهدف 40X 63X أو وانخفاض النفط الغمر على العدسة الهدف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخراج أورام جديدة من الفئران الموت الرحيم التي تلقت سابقا العلاجات HerDox وهمية كما هو موضح في الإجراء 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكان الأورام على طبق بيتري على الجليد لتجنب تدهور الأنسجة، ومن ثم نقل الأورام إلى T غرفة الدلتا للتصوير متحد البؤر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحصول على صور متحد البؤر من الأورام في أعماق تنسيق متسلسلة (حجم الخطوة: 1 ميكرون، وسمك: 20 ميكرون). ويرد مثال من الصور بالتتابع المكتسبة على طول المحور Z في الشكل 3، لوحة اليسار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أداء أقصى كثافة Z-الإسقاط من الصور. ويرد أقصى الإسقاط كثافة Z-مكدسة الصور في الشكل 3، اللوحة اليمنى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب يعني كثافة مضان من الحد الأقصى للكثافة Z - صور الإسقاط متوسط ​​كثافة مضان من الصور على الحقل العام للرأي تم حسابد باستخدام يماغيج. </li></ol> 5. التصوير الطيفي Ratiometric وتحليل التصوير الطيفي Ratiometric وتحليل يسمح التمييز بين دوكس مضان وتألق ذاتي. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الطاقة على المسح الضوئي ليزر متحد البؤر المجهر مضان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحصول على 15 صور للأورام المعالجة وغير المعالجة HerDox على عمق محدد ضمن النطاق الطيفي من 510-650 نانومتر، مع حجم خطوة من 10 نانومتر، والإثارة في 488 نانومتر باستخدام ضوء لايكا SPE المجهر متحد البؤر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يعد حل ميكرومتر 100 من دوكسوروبيسين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أداء التصوير الطيفي للميكرومتر حل 100 دوكسوروبيسين للحصول على البصمة الطيفية نقية من دوكس مضان (المدى الطيفي: 510-650 نانومتر، حجم الخطوة: 10 نانومتر). تآمر نتائج نموذجية من الحصول على الصور من التصوير الطيفي والناتجة الطيف مضان حيث يتم إظهارها على الرسم البياني في الشكل (4). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحصول على البصمة الطيفية تألق ذاتي من صورة جيوب (المدى الطيفي: 510-650 نانومتر، حجم الخطوة: 10 نانومتر) التي تم الحصول عليها عن طريق التصوير الطيفي للأورام غير المعالجة. تآمر نتائج نموذجية من الحصول على الصور من التصوير الطيفي والناتجة الطيف مضان حيث يتم إظهارها على الرسم البياني في الشكل 5. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توليد أربعة طيفية المرجعية (تألق ذاتي محض، 0.1.doxorubin +0.9. تألق ذاتي، 0.2. دوكسوروبيسين +0.8. تألق ذاتي، 0.3.doxorubin +0.7. تألق ذاتي) باستخدام برنامج قمنا بتطوير 9. ويرد منحنى نموذجي تظهر أربعة طيفية إشارة في الشكل (6). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أداء تصنيف الطيفية من الصور على النحو الذي حدده طيفية إشارة من خلال قياس المسافة الإقليدية باستخدام البرنامج الذي وضعت سابقا 9. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أداء unmixing الطيفية خطي من تلك الصور باستخدام برنامج الطيفية unmixing (المكونات في في ImageJ) وضعنا 7، 10، للمقارنة إلى التصوير الطيفي ratiometric والتحليل. بريدويرد xample فصل مضان HerDox من تألق ذاتي من قبل unmixing الطيفية الخطي في الشكل 7. </li></ol>

<ol>
	<li>Agadjanian, H., Chu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemotherapy+Targeting+by+DNA+Capture+in+Viral+Protein+Particles.">Chemotherapy Targeting by DNA Capture in Viral Protein Particles.</a> Nanomedicine. 7 (3), 335-352 (2012).</li><li>Agadjanian, H., Ma, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+detection+and+elimination+by+a+targeted+gallium+corrole.">Tumor detection and elimination by a targeted gallium corrole.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 106 (15), 6105-6110 (2009).</li><li>Agadjanian, H., Weaver, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specific+delivery+of+corroles+to+cells+via+noncovalent+conjugates+with+viral+proteins.">Specific delivery of corroles to cells via noncovalent conjugates with viral proteins.</a> Pharm. Res. 23 (2), 367-377 (2006).</li><li>Medina-Kauwe, L. K., Maguire, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-viral+gene+delivery+to+human+breast+cancer+cells+by+targeted+Ad5+penton+proteins.">Non-viral gene delivery to human breast cancer cells by targeted Ad5 penton proteins.</a> Gene Therapy. , 81753-81761 (2001).</li><li>Medina-Kauwe, L. K., Kasahara, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3PO,+a+novel+non-viral+gene+delivery+system+using+engineered+Ad5+penton+proteins.">3PO, a novel non-viral gene delivery system using engineered Ad5 penton proteins.</a> Gene Therapy. , 8795-8803 (2001).</li><li>Rentsendorj, A., Xie, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Typical+and+atypical+trafficking+pathways+of+Ad5+penton+base+recombinant+protein:+implications+for+gene+transfer.">Typical and atypical trafficking pathways of Ad5 penton base recombinant protein: implications for gene transfer.</a> Gene Ther. 13 (10), 821-836 (2006).</li><li>Hwang, J. Y., Park, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multimodality+Imaging+In+vivo+for+Preclinical+Assessment+of+Tumor-Targeted+Doxorubicin+Nanoparticles.">Multimodality Imaging In vivo for Preclinical Assessment of Tumor-Targeted Doxorubicin Nanoparticles.</a> PLoS ONE. 7 (4), e34463 (2012).</li><li>Hwang, J. Y., Wachsmann-Hogiu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Multimode+Optical+Imaging+System+for+Preclinical+Applications+In+Vivo:+Technology+Development,+Multiscale+Imaging,+and+Chemotherapy+Assessment.">A Multimode Optical Imaging System for Preclinical Applications In Vivo: Technology Development, Multiscale Imaging, and Chemotherapy Assessment.</a> Mol. Imaging Biol. , (2011).</li><li>Hwang, J. Y., Gross, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ratiometric+spectral+imaging+for+fast+tumor+detection+and+chemotherapy+monitoring+in+vivo.">Ratiometric spectral imaging for fast tumor detection and chemotherapy monitoring in vivo.</a> J. Biomed. Opt. 16 (6), 066007 (2011).</li><li>Fujimoto, J. G., Farkas, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biomedical Optical Imaging. , (2009).</li><li>Hwang, J. Y., Moffatt-Blue, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multimode+optical+imaging+of+small+animals:+development+and+applications.">Multimode optical imaging of small animals: development and applications.</a> Proc. of SPIE. 6411, (2007).</li><li>Ducros, M., Moreaux, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectral+unmixing:+analysis+of+performance+in+the+olfactory+bulb+in+vivo.">Spectral unmixing: analysis of performance in the olfactory bulb in vivo.</a> PLoS One. 4 (2), e4418 (2009).</li><li>Zimmermann, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectral+imaging+and+linear+unmixing+in+light+microscopy.">Spectral imaging and linear unmixing in light microscopy.</a> Adv. Biochem. Eng. Biotechnol. , 95245-95265 (2005).</li></ol>

المؤلف، دانيال فاركاس، هو رئيس مجلس إدارة التصوير الجزيئي الطيفي. الكتاب المتبقية ليس لها المصالح المتنافسة.

دوكس مضان يمكن كشفها في الجسم الحي باستخدام تصوير المتعدد عندما الأورام تحت الجلد. ومع ذلك، فإن جرعة علاجية فعالة من HerDox (0.004 ملغ / كلغ) تحت عتبة الكشف بعد جرعة واحدة. في المقابل، بعد 7 حقن يومية (1x/day لمدة 7 أيام)، وتراكم الورم والإبقاء على الجسيمات كافية لتمكين التص?...

استهداف الورم من العلاج الكيميائي لديه القدرة على القضاء على الخلايا السرطانية في جرعة أقل بالمقارنة مع الأدوية غير مستهدفة لأن أكثر من العلاج تسليمها يمكن أن تتراكم في وجهتها المقصودة بدلا من توزيعها على الأنسجة غير السرطانية. حيث أن الوضع الأخير سيضعف من فعالية الدواء وبالتالي تتطلب جرعات أعلى لتكون فعالة، استهداف الورم على حد سواء مزايا علاجية والسلامة على معيار المعاملة غير المستهدفة. استهداف العلاج الكيميائي عن طريق التغليف في الجسيمات النانوية الذاتي تجميعها يسمح للدواء أن تظل غير معدلة كيميائيا على النقيض من الأدوية التي ترتبط تساهميا إلى جزيئات الاستهداف. على هذا النحو الربط لديه القدرة على تغيير النشاط من كل من المخدرات وجزيء الاستهداف؛ يسمح التجمع غير التساهمية فاعلية الدواء ليتم الاحتفاظ بها. لقد أظهرنا سابقا أن الرواية ثلاثة مكونات، مجمع الذاتي تجميعها، HerDox، تستهدف HER2 + الأورام <em&gt; في الجسم الحي، ويتسبب الاجتثاث الورم للنمو في حين أن يجنب الأنسجة الطبيعية، بما في ذلك القلب 1. يتم تشكيل HerDox من خلال التفاعلات غير التساهمية بين مستقبلات ملزم بروتين الخلية الاختراق، HerPBK10، وكيل العلاج الكيميائي، دوكسوروبيسين (دوكس)، عبر رابط صغير الحمض النووي. HerPBK10 يربط الإنسان مستقبلات عامل نمو البشرة (HER) ويطلق الإلتقام مستقبلات بوساطة 2-4، في حين يتم إنجاز اختراق غشاء endosomal من خلال إدماج اتش المستمدة بينتون قاعدة قفيصة البروتين 4-6. A المجال المشحون إيجابيا على البروتين تمكن الحمض النووي ملزم 4، 5، التي من خلالها دوكس DNA-مقحم يمكن نقلها للتسليم المستهدفة. بالإلكترونات، إقحام، وربما تفاعلات البروتين oligomerization تسهيل التجميع الذاتي في جولة 10-20 نانومتر الجزيئات التي هي مستقرة في الدم وتحت الموسعة التخزين عند درجات حرارة مختلفة 1. التفضيلية التي تستهدف لهاومما يسهل 2 + خلايا الورم عن طريق تقارب يجند المحسن عندما يتم رفع HER2. وقد أظهرت دراساتنا السابقة أن تسليم النظامية من غلة HerDox تراكم تفضيلي في الأورام أكثر من الأنسجة غير السرطانية وبالمقارنة مع تشتته دوكس 1، وتغلغل في الخلايا السرطانية في الجسم الحي 7. وقد لاحظنا أن إطلاق HerDox دوكس بعد دخول الخلايا السرطانية، مما يتيح تراكم دوكس في نواة 1. يظهر ورم تراكم للربط مع مستوى مستقبلات، مثل الأورام HER2، معربا عن منخفض نسبيا تتراكم أقل HerDox مقارنة مع الذين لديهم مستويات أعلى نسبيا HER2 1. وعلاوة على ذلك، فإن التركيز الفعال موت الخلايا يسلك جود علاقة عكسية مع HER2 العرض على خطوط الخلايا السرطانية معربا عن اختلاف سطح الخلية HER2 مستويات 1. HerDox يسلك ميزة العلاجية والسلامة على دوكس تشتته، كما يحدث قتل الورم في أكثر من جرعة أقل 10 مرات مقارنة untarالمخدرات geted وينتج أي تأثير سلبي للكشف على القلب (الكشف عن ضربات القلب والنسيجية وصمة عار) أو الكبد (الكشف عن النفق وصمة عار) الأنسجة، وعلى النقيض من تشتته دوكس 1. على الرغم من الاشتقاق من البروتين قفيصة الفيروسية، يسلك HerPBK10 لا المناعية للكشف على المستويات العلاجية 2. بينما الأجسام المضادة الموجودة من قبل لاتش كله يمكن التعرف HerPBK10، أنهم غير قادرين على منع الخلية ملزم 2. يقاس حجم الورم مع مرور الوقت هو الطريقة القياسية لتقييم الكفاءة العلاجية من العلاجات المستهدفة، واستخدمت لتقييم الكفاءة العلاجية من HerDox. وقد سمح هذا النهج مع المكمل في الجسم الحي وخارج الحي مضان التصوير كثافة لنا لتقييم أفضل استهداف كفاءة 7. قمنا بدمج تحديدا التصوير متحد البؤر الموقع من الأورام مع رفعه في التحليل الطيفي للدوكس مضان للتحقق من أن لا HerDoxر تراكمت فقط في الأورام في الجسم الحي ولكن توغلوا في خلايا الورم ودوكس تسليمها إلى السيتوبلازم والنواة 7. وعلاوة على ذلك التحليل الطيفي مكن لنا أن نميز بين دوكس مضان من تألق ذاتي 7. نحن هنا لشرح بمزيد من التفصيل نهجنا لتقييم HerDox في الجسم الحي بعد الولادة النظامية، والأهم من ذلك، لتقييم الاستهداف من خلال أساليب التصوير المتعدد والتحليلات.

<table border="1">
<tbody>
 <tr>
 <td>Name of the reagent</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalogue number</td>
 <td>Comments (optional)</th
 ></tr>
 <tr>
 <td >Fluorescence laser scanning confocal microscope</td>
 <td >Leica</td>
 <td >SPE</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>In Vivo Optical Imager</td>
 <td>Spectral Molecular Imaging</td>
 <td>Multimode In Vivo Optical Imager</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td >Doxorubicin-HCl</td>
 <td >Sigma-Aldrich</td>
 <td >D4035</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td >Nude (NU/NU) mouse, female, 6-8 week</td>
 <td >Charles River</td>
 <td >Strain code 088</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td >MDA-MB-435 human HER2+ tumor cells</td>
 <td >NCI-Frederick Cancer DCTD Tumor/Cell Line Repository</td>
 <td >0507292</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td >3/10 cc insulin syringe U-100 with 29G x 1/2" Ultra-FineIV permanently attached needle</td>
 <td >BD</td>
 <td >309301</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td >Delta T chamber </td>
 <td >Bioptechs </td>
 <td >04200417B</td>
 <td></td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

analysis of targeted viral protein nanoparticles delivered to her2+ tumors

جسيمات متناهية الصغر HER2 + ورم المستهدفة، HerDox، يسلك تراكم الورم تفضيلية والاجتثاث الورم للنمو في نموذج حيواني من HER2 + سرطان. يتم تشكيل HerDox من قبل غير التساهمية التجميع الذاتي للورم استهدفت خلية البروتين اختراق مع وكيل العلاج الكيميائي، دوكسوروبيسين، عن طريق رابط صغير الحمض النووي. مزيج من بالإلكترونات، إقحام، والتفاعلات oligomerization تسهيل التجميع الذاتي في جولة 10-20 الجسيمات نانومتر. HerDox يسلك الاستقرار في الدم وكذلك في تخزين طويلة في درجات حرارة مختلفة. تسليم النظامية من HerDox في الفئران الحاملة للورم ينتج في موت خلايا الورم مع عدم وجود آثار ضارة يمكن كشفها إلى الأنسجة غير السرطانية، بما في ذلك القلب والكبد (التي تخضع الضرر تميزت دوكسوروبيسين تشتته). HER2 ارتفاع يسهل استهداف الخلايا معربا عن الإنسان مستقبلات عامل نمو البشرة، وبالتالي الأورام بعرض مستويات مرتفعة HER2 يحمل أكبر تراكم HerDox مقارنة اكسبريس الخلاياالغناء المستويات الدنيا، سواء في التجارب المختبرية والحية. وقد سمح التصوير كثافة مضان جنبا إلى جنب مع التحليل الطيفي ومتحد البؤر في الموقع لنا للتحقق من الورم في الجسم الحي استهداف واختراق الخلايا السرطانية من HerDox بعد الولادة النظامية. نحن هنا التفاصيل طرقنا لتقييم الورم عبر استهداف التصوير المتعدد بعد الولادة النظامية.

ويبين الشكل 1 في الجسم الحي النموذج تصوير الضوئي، التي بنيت لغرض الحصول على الصور تحت طرائق متعددة، بما في ذلك كثافة مضان، الطيفية، والعمر، 2 الفوتون، متحد البؤر داخل الحيوية، والتصوير تلألؤ بيولوجي. وبالإضافة إلى ذلك، فإن تبريد الكاميرا حساسية عالية و...

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Targeted Viral Protein Nanoparticles Delivered to HER2+ Tumors at JoVE.com

Analysis of Targeted Viral Protein Nanoparticles Delivered to HER2+ Tumors

تفاصيل هذه المقالة الإجراءات لتحليل التصوير البصري للجسيمات متناهية الصغر للورم المستهدفة، HerDox. على وجه الخصوص، وصفت تفاصيل استخدام جهاز التصوير المتعدد للكشف عن الورم استهداف وتقييم تغلغل الورم هنا.

تحليل المستهدفة البروتين الفيروسي النانوية يسلم إلى HER2 + أورام

The HER2+ tumor-targeted nanoparticle, HerDox, exhibits tumor-preferential accumulation and tumor-growth ablation in an animal model of HER2+ cancer. ...

analysis-targeted-viral-protein-nanoparticles-delivered-to-her2

Research

JoVE Journal

Bioengineering

10.9K Views.  University of Southern California. تفاصيل هذه المقالة الإجراءات لتحليل التصوير البصري للجسيمات متناهية الصغر للورم المستهدفة، HerDox. على وجه الخصوص، وصفت تفاصيل استخدام جهاز التصوير المتعدد للكشف عن الورم استهداف وتقييم تغلغل الورم هنا.

Video: Analysis of Targeted Viral Protein Nanoparticles Delivered to HER2+ Tumors

Introduction to the Ultrasound Targeted Microbubble Destruction Technique

In UTMD, bioactive molecules, such as negatively charged plasmid DNA vectors encoding a gene of interest, are added to the cationic shells of lipid microbubble contrast agents7-9. In mice these vector-carrying microbubbles can be administered intravenously or directly to the left ventricle of the heart. In larger animals they can also be infused through an intracoronary catheter. The subsequent delivery from the circulation to a target organ occurs by acoustic cavitation at a resonant frequency of the microbubbles. It seems likely that the mechanical energy generated by the microbubble destruction results in transient pore formation in or between the endothelial cells of the microvasculature of the targeted region10. As a result of this sonoporation effect, the transfection efficiency into and across the endothelial cells is enhanced, and transgene-encoding vectors are deposited into the surrounding tissue. Plasmid DNA remaining in the circulation is rapidly degraded by nucleases in the blood, which further reduces the likelihood of delivery to non-sonicated tissues and leads to highly specific target-organ transfection.

Ultrasound Targeted Microbubble Destruction (UTMD) can be used to direct site-specific delivery of bioactive molecules, including therapeutic genes, to target organs accessible to ultrasound, such as the heart and liver1-6.

مقدمة لتقنية الموجات فوق الصوتية مستهدفة تدمير Microbubble

In UTMD, bioactive molecules, such as negatively charged plasmid DNA vectors encoding a gene of interest, are added to the cationic shells of lipid ...

Design of a Cyclic Pressure Bioreactor for the Ex Vivo Study of Aortic Heart Valves

The aortic valve, located between the left ventricle and the aorta, allows for unidirectional blood flow, preventing backflow into the ventricle. Aortic valve leaflets are composed of interstitial cells suspended within an extracellular matrix (ECM) and are lined with an endothelial cell monolayer. The valve withstands a harsh, dynamic environment and is constantly exposed to shear, flexion, tension, and compression. Research has shown calcific lesions in diseased valves occur in areas of high mechanical stress as a result of endothelial disruption or interstitial matrix damage1-3. Hence, it is not surprising that epidemiological studies have shown high blood pressure to be a leading risk factor in the onset of aortic valve disease4. 
The only treatment option currently available for valve disease is surgical replacement of the diseased valve with a bioprosthetic or mechanical valve5. Improved understanding of valve biology in response to physical stresses would help elucidate the mechanisms of valve pathogenesis. In turn, this could help in the development of non-invasive therapies such as pharmaceutical intervention or prevention. Several bioreactors have been previously developed to study the mechanobiology of native or engineered heart valves6-9. Pulsatile bioreactors have also been developed to study a range of tissues including cartilage10, bone11 and bladder12. The aim of this work was to develop a cyclic pressure system that could be used to elucidate the biological response of aortic valve leaflets to increased pressure loads. 
The system consisted of an acrylic chamber in which to place samples and produce cyclic pressure, viton diaphragm solenoid valves to control the timing of the pressure cycle, and a computer to control electrical devices. The pressure was monitored using a pressure transducer, and the signal was conditioned using a load cell conditioner. A LabVIEW program regulated the pressure using an analog device to pump compressed air into the system at the appropriate rate. The system mimicked the dynamic transvalvular pressure levels associated with the aortic valve; a saw tooth wave produced a gradual increase in pressure, typical of the transvalvular pressure gradient that is present across the valve during diastole, followed by a sharp pressure drop depicting valve opening in systole. The LabVIEW program allowed users to control the magnitude and frequency of cyclic pressure. The system was able to subject tissue samples to physiological and pathological pressure conditions. This device can be used to increase our understanding of how heart valves respond to changes in the local mechanical environment.

Design of a Cyclic Pressure Bioreactor for the Ex Vivo Study of Aortic Heart Valves

A cyclic pressure bioreactor capable of subjecting heart valve tissue to physiological and pathological pressure conditions has been designed. A LabVIEW program allows users to control pressure magnitude, amplitude and frequency. This device can be used to study the mechanobiology of heart valve tissue or isolated cells.

تصميم مفاعل حيوي لضغط الدوري السابقين فيفو دراسة صمامات القلب الأورطي

The aortic valve, located between the left ventricle and the aorta, allows for unidirectional blood flow, preventing backflow into the ventricle. Aortic ...

Cellular Lipid Extraction for Targeted Stable Isotope Dilution Liquid Chromatography-Mass Spectrometry Analysis

The metabolism of fatty acids, such as arachidonic acid (AA) and linoleic acid (LA), results in the formation of oxidized bioactive lipids, including numerous stereoisomers1,2. These metabolites can be formed from free or esterified fatty acids. Many of these oxidized metabolites have biological activity and have been implicated in various diseases including cardiovascular and neurodegenerative diseases, asthma, and cancer3-7. Oxidized bioactive lipids can be formed enzymatically or by reactive oxygen species (ROS). Enzymes that metabolize fatty acids include cyclooxygenase (COX), lipoxygenase (LO), and cytochromes P450 (CYPs)1,8. Enzymatic metabolism results in enantioselective formation whereas ROS oxidation results in the racemic formation of products.
While this protocol focuses primarily on the analysis of AA- and some LA-derived bioactive metabolites; it could be easily applied to metabolites of other fatty acids. Bioactive lipids are extracted from cell lysate or media using liquid-liquid (l-l) extraction. At the beginning of the l-l extraction process, stable isotope internal standards are added to account for errors during sample preparation. Stable isotope dilution (SID) also accounts for any differences, such as ion suppression, that metabolites may experience during the mass spectrometry (MS) analysis9. After the extraction, derivatization with an electron capture (EC) reagent, pentafluorylbenzyl bromide (PFB) is employed to increase detection sensitivity10,11. Multiple reaction monitoring (MRM) is used to increase the selectivity of the MS analysis. Before MS analysis, lipids are separated using chiral normal phase high performance liquid chromatography (HPLC). The HPLC conditions are optimized to separate the enantiomers and various stereoisomers of the monitored lipids12. This specific LC-MS method monitors prostaglandins (PGs), isoprostanes (isoPs), hydroxyeicosatetraenoic acids (HETEs), hydroxyoctadecadienoic acids (HODEs), oxoeicosatetraenoic acids (oxoETEs) and oxooctadecadienoic acids (oxoODEs); however, the HPLC and MS parameters can be optimized to include any fatty acid metabolites13.
Most of the currently available bioanalytical methods do not take into account the separate quantification of enantiomers. This is extremely important when trying to deduce whether or not the metabolites were formed enzymatically or by ROS. Additionally, the ratios of the enantiomers may provide evidence for a specific enzymatic pathway of formation. The use of SID allows for accurate quantification of metabolites and accounts for any sample loss during preparation as well as the differences experienced during ionization. Using the PFB electron capture reagent increases the sensitivity of detection by two orders of magnitude over conventional APCI methods. Overall, this method, SID-LC-EC-atmospheric pressure chemical ionization APCI-MRM/MS, is one of the most sensitive, selective, and accurate methods of quantification for bioactive lipids.

This protocol will demonstrate the extraction and analysis of free and esterified bioactive fatty acids from cells. Fatty acids are accurately quantified using stable isotope dilution, chiral liquid chromatography, electron capture atmospheric chemical ionization multiple reaction monitoring mass spectrometry (SID-LC-ECAPCI-MRM/MS).

الخلوية لاستخراج الدهن المستهدفة التخفيف النظائر المستقرة تحليل السائل الطيف اللوني القداس

The metabolism of fatty acids, such as arachidonic acid (AA) and linoleic acid (LA), results in the formation of oxidized bioactive lipids, including ...

Therapeutic Gene Delivery and Transfection in Human Pancreatic Cancer Cells using Epidermal Growth Factor Receptor-targeted Gelatin Nanoparticles

More than 32,000 patients are diagnosed with pancreatic cancer in the United States per year and the disease is associated with very high mortality 1. Urgent need exists to develop novel clinically-translatable therapeutic strategies that can improve on the dismal survival statistics of pancreatic cancer patients. Although gene therapy in cancer has shown a tremendous promise, the major challenge is in the development of safe and effective delivery system, which can lead to sustained transgene expression. 
Gelatin is one of the most versatile natural biopolymer, widely used in food and pharmaceutical products. Previous studies from our laboratory have shown that type B gelatin could physical encapsulate DNA, which preserved the supercoiled structure of the plasmid and improved transfection efficiency upon intracellular delivery. By thiolation of gelatin, the sulfhydryl groups could be introduced into the polymer and would form disulfide bond within nanoparticles, which stabilizes the whole complex and once disulfide bond is broken due to the presence of glutathione in cytosol, payload would be released 2-5. Poly(ethylene glycol) (PEG)-modified GENS, when administered into the systemic circulation, provides long-circulation times and preferentially targets to the tumor mass due to the hyper-permeability of the neovasculature by the enhanced permeability and retention effect 6. Studies have shown over-expression of the epidermal growth factor receptor (EGFR) on Panc-1 human pancreatic adenocarcinoma cells 7. In order to actively target pancreatic cancer cell line, EGFR specific peptide was conjugated on the particle surface through a PEG spacer.8
Most anti-tumor gene therapies are focused on administration of the tumor suppressor genes, such as wild-type p53 (wt-p53), to restore the pro-apoptotic function in the cells 9. The p53 mechanism functions as a critical signaling pathway in cell growth, which regulates apoptosis, cell cycle arrest, metabolism and other processes 10. In pancreatic cancer, most cells have mutations in p53 protein, causing the loss of apoptotic activity. With the introduction of wt-p53, the apoptosis could be repaired and further triggers cell death in cancer cells 11. 
Based on the above rationale, we have designed EGFR targeting peptide-modified thiolated gelatin nanoparticles for wt-p53 gene delivery and evaluated delivery efficiency and transfection in Panc-1 cells.

Type B gelatin-based engineered nanovectors system (GENS) was developed for systemic gene delivery and transfection in the treatment of pancreatic cancer. By modification with epidermal growth factor receptor (EGFR) specific peptide on the surface of nanparticles, they could target on EGFR receptor and release plasmid under reducing environment, such as high intracellular glutathione concentrations.

تسليم الجينات والخلايا البشرية في ترنسفكأيشن سرطان البنكرياس باستخدام مستقبلات عامل نمو البشرة استهداف الجيلاتين المستندة Nanovectors المهندسة

More than 32,000 patients are diagnosed with pancreatic cancer in the United States per year and the disease is associated with very high mortality 1. ...

Viral Nanoparticles for In vivo Tumor Imaging

The use of nanomaterials has the potential to revolutionize materials science and medicine. Currently, a number of different nanoparticles are being investigated for applications in imaging and therapy. Viral nanoparticles (VNPs) derived from plants can be regarded as self-assembled bionanomaterials with defined sizes and shapes. Plant viruses under investigation in the Steinmetz lab include icosahedral particles formed by Cowpea mosaic virus (CPMV) and Brome mosaic virus (BMV), both of which are 30 nm in diameter. We are also developing rod-shaped and filamentous structures derived from the following plant viruses: Tobacco mosaic virus (TMV), which forms rigid rods with dimensions of 300 nm by 18 nm, and Potato virus X (PVX), which form filamentous particles 515 nm in length and 13 nm in width (the reader is referred to refs. 1 and 2 for further information on VNPs).
From a materials scientist's point of view, VNPs are attractive building blocks for several reasons: the particles are monodisperse, can be produced with ease on large scale in planta, are exceptionally stable, and biocompatible. Also, VNPs are "programmable" units, which can be specifically engineered using genetic modification or chemical bioconjugation methods 3. The structure of VNPs is known to atomic resolution, and modifications can be carried out with spatial precision at the atomic level4, a level of control that cannot be achieved using synthetic nanomaterials with current state-of-the-art technologies.
In this paper, we describe the propagation of CPMV, PVX, TMV, and BMV in Vigna ungiuculata and Nicotiana benthamiana plants. Extraction and purification protocols for each VNP are given. Methods for characterization of purified and chemically-labeled VNPs are described. In this study, we focus on chemical labeling of VNPs with fluorophores (e.g. Alexa Fluor 647) and polyethylene glycol (PEG). The dyes facilitate tracking and detection of the VNPs 5-10, and PEG reduces immunogenicity of the proteinaceous nanoparticles while enhancing their pharmacokinetics 8,11. We demonstrate tumor homing of PEGylated VNPs using a mouse xenograft tumor model. A combination of fluorescence imaging of tissues ex vivo using Maestro Imaging System, fluorescence quantification in homogenized tissues, and confocal microscopy is used to study biodistribution. VNPs are cleared via the reticuloendothelial system (RES); tumor homing is achieved passively via the enhanced permeability and retention (EPR) effect12. The VNP nanotechnology is a powerful plug-and-play technology to image and treat sites of disease in vivo. We are further developing VNPs to carry drug cargos and clinically-relevant imaging moieties, as well as tissue-specific ligands to target molecular receptors overexpressed in cancer and cardiovascular disease.

Viral Nanoparticles for In vivo Tumor Imaging

Plant viral nanoparticles (VNPs) are promising platforms for applications in biomedicine. Here, we describe the procedures for plant VNP propagation, purification, characterization, and bioconjugation. Finally, we show the application of VNPs for tumor homing and imaging using a mouse xenograft model and fluorescence imaging.

الفيروسية النانوية ل<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; التصوير ورم

The use of nanomaterials has the potential to revolutionize materials science and medicine. Currently, a number of different nanoparticles are being ...

Evaluation of Polymeric Gene Delivery Nanoparticles by Nanoparticle Tracking Analysis and High-throughput Flow Cytometry

Non-viral gene delivery using polymeric nanoparticles has emerged as an attractive approach for gene therapy to treat genetic diseases1 and as a technology for regenerative medicine2. Unlike viruses, which have significant safety issues, polymeric nanoparticles can be designed to be non-toxic, non-immunogenic, non-mutagenic, easier to synthesize, chemically versatile, capable of carrying larger nucleic acid cargo and biodegradable and/or environmentally responsive. Cationic polymers self-assemble with negatively charged DNA via electrostatic interaction to form complexes on the order of 100 nm that are commonly termed polymeric nanoparticles. Examples of biomaterials used to form nanoscale polycationic gene delivery nanoparticles include polylysine, polyphosphoesters, poly(amidoamines)s and polyethylenimine (PEI), which is a non-degradable off-the-shelf cationic polymer commonly used for nucleic acid delivery1,3 . Poly(beta-amino ester)s (PBAEs) are a newer class of cationic polymers4 that are hydrolytically degradable5,6 and have been shown to be effective at gene delivery to hard-to-transfect cell types such as human retinal endothelial cells (HRECs)7, mouse mammary epithelial cells8, human brain cancer cells9 and macrovascular (human umbilical vein, HUVECs) endothelial cells10.
A new protocol to characterize polymeric nanoparticles utilizing nanoparticle tracking analysis (NTA) is described. In this approach, both the particle size distribution and the distribution of the number of plasmids per particle are obtained11. In addition, a high-throughput 96-well plate transfection assay for rapid screening of the transfection efficacy of polymeric nanoparticles is presented. In this protocol, poly(beta-amino ester)s (PBAEs) are used as model polymers and human retinal endothelial cells (HRECs) are used as model human cells. This protocol can be easily adapted to evaluate any polymeric nanoparticle and any cell type of interest in a multi-well plate format.

A protocol for nanoparticle tracking analysis (NTA) and high-throughput flow cytometry to evaluate polymeric gene delivery nanoparticles is described. NTA is utilized to characterize the nanoparticle particle size distribution and the plasmid per particle distribution. High-throughput flow cytometry enables quantitative transfection efficacy evaluation for a library of gene delivery biomaterials.

تقييم توصيل الجينات البوليمرية الجسيمات النانوية من تحليل تتبع جسيمات متناهية الصغر وعالية الإنتاجية قياس التدفق الخلوي

Non-viral gene delivery using polymeric nanoparticles has emerged as an attractive approach for gene therapy to treat genetic diseases1 and as a ...

Harmonic Nanoparticles for Regenerative Research

In this visualized experiment, protocol details are provided for in vitro labeling of human embryonic stem cells (hESC) with second harmonic generation nanoparticles (HNPs). The latter are a new family of probes recently introduced for labeling biological samples for multi-photon imaging. HNPs are capable of doubling the frequency of excitation light by the nonlinear optical process of second harmonic generation with no restriction on the excitation wavelength.
Multi-photon based methodologies for hESC differentiation into cardiac clusters (maintained as long term air-liquid cultures) are presented in detail. In particular, evidence on how to maximize the intense second harmonic (SH) emission of isolated HNPs during 3D monitoring of beating cardiac tissue in 3D is shown. The analysis of the resulting images to retrieve 3D displacement patterns is also detailed.

Protocol details are provided for in vitro labeling human embryonic stem cells with second harmonic generating nanoparticles. Methodologies for hESC investigation by multi-photon microscopy and their differentiation into cardiac clusters are also presented.

التوافقي النانوية للبحوث التجديدي

In this visualized experiment, protocol details are provided for in vitro labeling of human embryonic stem cells (hESC) with second harmonic generation ...

Production of Metal Nanoparticles by Pulsed Laser-ablation in Liquids: A Tool for Studying the Antibacterial Properties of Nanoparticles

The emergence of multidrug-resistant bacteria is a global clinical concern leading some to speculate about our return to a "pre-antibiotics" era of medicine. In addition to efforts to identify novel small-molecule antimicrobial drugs, there has been great interest in the use of metal nanoparticles as coatings for medical devices, wound dressings, and consumer packaging, due to their antimicrobial properties. The wide variety of methods available for nanoparticle synthesis results in a broad spectrum of chemical and physical properties which can affect antibacterial efficacy. This manuscript describes the pulsed laser-ablation in liquids (PLAL) method to create nanoparticles. This approach allows for the fine tuning of nanoparticle size, composition, and stability using post-irradiation methods as well as the addition of surfactants or volume excluders. By controlling particle size and composition, a large range of physical and chemical properties of metal nanoparticles can be explored which may contribute to their antimicrobial efficacy thereby opening new avenues for antibacterial development.

The antimicrobial properties of metals such as copper and silver have been recognized for centuries. This protocol describes pulsed laser-ablation in liquids, a method of synthesizing metal nanoparticles that provides the ability to fine tune the properties of these nanoparticles to optimize their antimicrobial effects.

إنتاج الجسيمات النانوية المعدنية عن طريق نابض بالليزر في الاجتثاث في السوائل: أداة لدراسة خصائص مضادة للجراثيم من الجسيمات النانوية

The emergence of multidrug-resistant bacteria is a global clinical concern leading some to speculate about our return to a "pre-antibiotics" era of ...

Correlative Light Electron Microscopy (CLEM) for Tracking and Imaging Viral Protein Associated Structures in Cryo-immobilized Cells

Due to its high resolution, electron microscopy (EM) is an indispensable tool for virologists. However, one of the main difficulties when analyzing virus-infected or transfected cells via EM are the low efficiencies of infection or transfection, hindering the examination of these cells. In order to overcome this difficulty, light microscopy (LM) can be performed first to allocate the subpopulation of infected or transfected cells. Thus, taking advantage of the use of fluorescent proteins (FPs) fused to viral proteins, LM is used here to record the positions of the "positive-transfected" cells, expressing a FP and growing on a support with an alphanumeric pattern. Subsequently, cells are further processed for EM via high pressure freezing (HPF), freeze substitution (FS) and resin embedding. The ultra-rapid freezing step ensures excellent membrane preservation of the selected cells that can then be analyzed at the ultrastructural level by transmission electron microscopy (TEM). Here, a step-by-step correlative light electron microscopy (CLEM) workflow is provided, describing sample preparation, imaging and correlation in detail. The experimental design can be also applied to address many cell biology questions.

Correlative Light Electron Microscopy CLEM for Tracking and Imaging Viral Protein Associated Structures in Cryo-immobilized Cells

A correlative light electron microscopy (CLEM) method is applied to image virus-induced intracellular structures via electron microscopy (EM) in cells that are previously selected by light microscopy (LM). LM and EM are combined as a hybrid imaging approach to achieve an integrated view of virus-host interactions.

المجهر الإلكتروني الارتباطية الخفيفة (كليم) لتتبع وتصوير البروتينات الفيروسية المرتبطة الهياكل في الخلايا المعطل تداولها البرد

Due to its high resolution, electron microscopy (EM) is an indispensable tool for virologists. However, one of the main difficulties when analyzing ...

Protein Kinase C-delta Inhibitor Peptide Formulation using Gold Nanoparticles

Protein kinase C-delta inhibitor (PKC&#948;i) is a promising drug to prevent ischemia-reperfusion-induced organ injury. It is usually conjugated to a cell-penetrating peptide, TAT, for intracellular delivery. However, TAT has shown non-specific biological activities. Gold nanoparticles (GNPs) can be used as drug delivery carriers without recognized toxicity. Therefore, we have used a GNP/peptide hybrid to deliver PKC&#948;i. Two short peptides (P2: CAAAAE and P4: CAAAAW), at a 95:5 ratio, were used to modify the surface properties of GNP. GNPs conjugated with PKC&#948;i (GNP/PKCi) are stable in distilled water, 0.9% NaCl, and phosphate-buffered saline (PBS) containing bovine serum albumin or fetal bovine serum. Intravenous injection of GNP-PKCi was previously shown to prevent ischemia-reperfusion injury of the lung. This article outlines a protocol to formulate GNP/PKCi and assess the physiochemical properties of GNP/PKCi. We have used similar methods to formulate other peptide-based drugs with GNP. This article will hopefully draw more attention to this novel intracellular drug delivery technology and its applications in vivo.

We have previously used a gold nanoparticle peptide hybrid to intravenously deliver a synthetic peptide, protein kinase C-delta inhibitor, which reduced ischemia-reperfusion-induced acute lung injury. Here we show the detailed protocol of the drug formulation. Other intracellular peptides can be formulated similarly.

البروتين كيناز ج-دلتا "الببتيد المانع صياغة" استخدام "الذهب جسيمات نانوية"

Protein kinase C-delta inhibitor (PKC&#948;i) is a promising drug to prevent ischemia-reperfusion-induced organ injury. It is usually conjugated to a ...