نود أن نشكر S. فيرنر لتوفير الغربان المستخدمة في هذه الدراسة وزارة الزراعة الأميركية، APHIS، WS، NWRC موظفي الرعاية الحيوانية لرعاية الحيوان والرصد. أذكر أو استخدام منتج لا يعني تأييد وزارة الزراعة الأميركية. تم توفير التمويل لهذه الدراسة من قبل وزارة الزراعة الأميركية، APHIS، الخدمات البيطرية.

ويتم تكييف بروتوكول لدينا من احد نشرنا سابقا 7. تمت الموافقة على جميع الإجراءات التي تنطوي على الحيوانات من قبل اللجنة المؤسسية رعاية الحيوان واستخدام وزارة الزراعة في الولايات المتحدة (USDA)، الحيوان ودائرة التفتيش الصحة النباتية (APHIS)، خدمات الحياة البرية (WS)، المركز القومي للبحوث الحياة البرية (NWRC). 1. الغراب Gavaging <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقدير مرور الوقت &#39;المواد الدماغ الزائفة &quot;من خلال القناة الهضمية من الغربان الأمريكية. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خلط 5 مل من طهي وتدافعت البيض كله مع صبغة زرقاء والتغذية الأنبوبية 1 الغراب باستخدام 2 في التغذية الأنبوبية إبرة (الشكل 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحقق الغراب كل 30 دقيقة حتى أزرق / أخضر البراز الملطخة لم تعد تفرز يجري. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحصول RML (سلالة تشاندلر) المصابة C57BL / 6 أدمغة فئران مصابة بمرض عضال و. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توليد 20٪ بالوزن / المجلد العادي والمصابة جناسة الماوس في الدماغ في الخالط رصاصة خلاط مع 1Xالفوسفات مخزنة المالحة (PBS) والخرز الزجاجي، ثم الطرد المركزي في 3000 x ج لمدة 1 دقيقة لإزالة الجسيمات الأكبر حجما. إزالة طاف وتمييع مع حجم مساو من برنامج تلفزيوني 1X لتوليد 10٪ بالوزن / المجلد في برنامج تلفزيوني العقيمة. تجميد في -80 درجة مئوية لحين الحاجة إليها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 17 ساعة قبل إزالة للتسمين الطعام، ولكن ليس الماء، من الأقلام الغراب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخصيص عشوائيا الغربان لمجموعات العلاج والتغذية الأنبوبية شفويا كل الغراب مع 5 مل من إما طبيعية أو المصابة جناسة الماوس الدماغ باستخدام إبرة 2 في أنبوب تغذية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل الغربان إلى أقفاص الفردية وجمع وتجميع جميع البراز داخل كل قفص لمدة 4 آخر ساعة التغذية الأنبوبية (الشكل 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التجانس البراز المجمعة لكل الغراب في الخالط رصاصة الخلاط مع الخرز الزجاجي حتى يتم التوصل إلى نسيج موحد. * البراز السائل كرو هي في معظمها ويمكن أن تكون مختلطة بسهولة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لكل الغراب، وتمييع 500 ميكرولتر من جناسة البراز إلى 9.5 مل برنامج تلفزيوني 1X لإجمالي حجم 10 مل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أجهزة الطرد المركزي في homogena برازيالشركة المصرية للاتصالات لمدة 15 دقيقة في 1،400 x ج واستخراج طاف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتقليل خطر حدوث العدوى الميكروبية الثانوية، وعلاج طاف مع 1 ميكرولتر من 100 وحدة / مل البنسلين و 100 ميكروغرام / مل الستربتوميسين (إينفيتروجن، NY) لكل 100 ميكرولتر من جناسة ثم ضع تحت ضوء الأشعة فوق البنفسجية في درجة حرارة الغرفة لمدة 20 دقيقة للحد من خطر التلوث الفيروسية والبكتيرية. بعد التعرض للأشعة فوق البنفسجية، وعينات يصوتن في 3000 النائب sonicator إلى وضع 70 لمدة 30 ثانية لعرقلة غشاء من أي الميكروبات المتبقية. </li></ol> 2. الماوس التلقيح <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عشوائيا تخصيص الفئران إلى مجموعات العلاج التالي (الجدول 1): <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مجموعة 1 - الفئران المعالجة الإيجابية تلقيح الغشاء البريتونى (IP) مع 1 مل من البراز جناسة من الغربان gavaged شفويا مع 5ML أدمغة فئران مصابة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مجموعة 2 - السلبية الفئران المعالجة تلقيح IP مع 1 مل من البراز جناسة من الغربان gavaged شفويا مع 5ML أدمغة الفأر العادي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تمييع بالعدوىد وطبيعية جناسة الماوس الدماغ للمجموعات 3 و 4 إلى 1:100 ث / ت في برنامج تلفزيوني 1X. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المجموعة 3 - السيطرة على الفئران الملقحة إيجابي IP مع 1 مل من المصابة جناسة الماوس في الدماغ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مجموعة 4 - السلبية السيطرة على الفئران الملقحة IP مع 1 مل من الطبيعي جناسة الماوس في الدماغ. </li></ol></li></ol><table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td></td><td> المجموعة المعاملة </td><td> عدد من الحيوانات </td></tr><tr><td> مجموعة 1 </td><td> سكرابي + كرو البراز </td><td> 100 </td></tr><tr><td> مجموعة 2 </td><td> سكرابي - كرو البراز </td><td> 25 </td></tr><tr><td> مجموعة 3 </td><td> سكرابي + ماوس الدماغ </td><td> 10 </td></tr><tr><td> مجموعة 4 </td><td> سكرابي - ماوس الدماغ </td><td> 5 </td></tr></tbody></table> . الجدول 1 حالة سكرابي من اللقاح (+ إيجابية أو سلبية -) وعدد من الحيوانات المستخدمة 7. <ol start="2" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الغشاء البريتونى تطعيم الماوس: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> القفا الماوس عن طريق الظهرية الفراء الرقبة مع الإبهام والسبابة وبلطف تدوير لفضح الجانب البطني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رفع نهاية الخلفي من الماوس حتى الرأس هو أقل قليلا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدراج 25 G الإبرة من خلال الجلد 1 سم، 1 سم الوحشي من خط الوسط، و 1-2 سم الأمامي إلى المفصل العجزي الحرقفي باستخدام حقنة تأمين إبرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 1 مل حقن تطعيم ببطء في الجسم تجويف الفأرة. </li></ol></li></ol> 3. رصد الماوس <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رصد الفئران يوميا حتى أنها تعبير عن علامات سريرية للماوس سكرابي. ويمكن أن تشمل العلامات السريرية: حداب، وترنح، وذيل شديدة، وعدم الاستمالة، والهزال، والخمول. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يسجل الفئران لكل من العلامات السريرية 6 عندما علامات واضحة جلية، حيث 0 = لا شيء مرئي، 1 = معتدلة، و 2 = شديد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الموت ببطء الفئران عندما مجموع الدرجات يوميا لتصل إلى كل علامة ≥ 8 ل1 يوم، 6 ≥ مستمر لمدة 3 أيام، أو على 365 يوما بعد التلقيح (نقطة في البوصة). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أدمغة الحصاد euthan التالية مباشرةآسيا وتخزينها في -70 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتأكيد تشخيص سكرابي، هضم عينات الدماغ مع 3 ميكرولتر من 50 ميكروغرام / مل من بروتين-K الحل (PK) المخفف على النحو التالي: 3.1. ميكرولتر PK، 12.5 ميكرولتر من 500 ملي EDTA، ودرجة الحموضة 8، 109.39 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني 1X لمدة 30 دقيقة عند 45 درجة مئوية، ثم إبطال نشاط PK بإضافة 8 ميكرولتر العازلة التحميل واحتضان العينات في 95 درجة مئوية لمدة 5 دقائق. عينات الحمل على 12٪ هلام SDS-PAGE، electrophorese ونقل إلى Immobilon PVDF غشاء وكتلة مع 5٪ الحليب الخالي في 0.2٪ توين 20 في برنامج تلفزيوني لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة. ثم بحث مع Bar224 المضادة للبي ار بي الأضداد وحيدة النسيلة مترافق إلى البيروكسيديز الفجل، مخففة في Superblock، لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة. شطف الغشاء لمدة 1 ساعة مع PBS-0.2٪ توين 20. لتصور، واحتضان الغربية وصمة عار 5 دقائق مع الركيزة chemiluminescent وصورة على G-مربع نظام التوثيق هلام. </li></ol>

<ol>
	<li>Prusiner, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+proteinaceous+infectious+particles+cause+scrapie.">Novel proteinaceous infectious particles cause scrapie.</a> Science. 216 (4542), 136-144 (1982).</li><li>Miller, M. W., Williams, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epizootiology+of+chronic+wasting+disease+in+free-ranging+cervids+in+Colorado+and+Wyoming.">Epizootiology of chronic wasting disease in free-ranging cervids in Colorado and Wyoming.</a> Journal of Wildlife Diseases. 36 (4), 676-690 (2000).</li><li>Miller, M. W., Williams, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Horizontal+prion+transmission+in+mule+deer.">Horizontal prion transmission in mule deer.</a> Nature. 425 (6953), 35-36 (2003).</li><li>Sigurdson, C. J., Adriano, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+Wasting+Disease.">Chronic Wasting Disease.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1772 (6), 610-618 (2007).</li><li>Miller, M. W., Williams, E. S., Hobbs, N. T., Wolfe, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environmental+sources+of+prion+transmission+in+mule+deer.">Environmental sources of prion transmission in mule deer.</a> Emerging Infectious Diseases. 10 (6), 1003-1006 (2004).</li><li>Mathiason, C. K., Hays, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infectious+prions+in+pre-clinical+deer+and+transmission+of+chronic+wasting+disease+solely+by+environmental+exposure.">Infectious prions in pre-clinical deer and transmission of chronic wasting disease solely by environmental exposure.</a> PLoS ONE. 4 (6), e5916 (2009).</li><li>VerCauteren, K. C., Pilon, J. L., Nash, P. B., Phillips, G. E., Fischer, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prion+remains+infectious+after+passage+through+digestive+system+of+American+crows+(Corvus+crachyrhunchos).">Prion remains infectious after passage through digestive system of American crows (Corvus crachyrhunchos).</a> PLoS ONE. 7 (10), e45774 (2012).</li><li>Imran, M., Mahmood, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+overview+of+animal+prion+diseases.">An overview of animal prion diseases.</a> Virology Journal. 8 (493), (2011).</li><li>Watts, J. C., Balachandran, A., Westaway, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+expanding+universe+of+prion+disease.">The expanding universe of prion disease.</a> PLoS PATHOGENS. 2 (3), e26 (2006).</li><li>Bruce, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transmissions+to+mice+indicate+that+'new+variant'+CJD+is+caused+by+the+BSE+agent.">Transmissions to mice indicate that 'new variant' CJD is caused by the BSE agent.</a> Nature. 389 (6650), 498-501 (1997).</li><li>Ryder, S., Dexter, G., Bellworty, S., Tongue, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Demonstration+of+lateral+transmission+of+scrapie+between+sheep+kept+under+natural+conditions+using+lymphoid+tissue+biopsy.">Demonstration of lateral transmission of scrapie between sheep kept under natural conditions using lymphoid tissue biopsy.</a> Research in Veterinary Science. 76 (2004), 211-217 (2004).</li><li>Collinge, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+risk+of+prion+zoonoses.">The risk of prion zoonoses.</a> Science. 335 (6067), 411-413 (2012).</li><li>Beringue, V., Vilotte, J. L., Laude, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prion+agent+diversity+and+species+barrier.">Prion agent diversity and species barrier.</a> Veterinary Research. 39 (47), (2008).</li><li>Harrington, R. D., Baszler, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+species+barrier+limits+transmission+of+chronic+wasting+disease+to+mink+(Mustela+vison).">A species barrier limits transmission of chronic wasting disease to mink (Mustela vison).</a> The Journal of General Virology. 89 (4), 1086-1096 (2008).</li><li>Wisniewski, H. M., Sigurdarson, S., Rubenstein, R., Kascsak, R. J., Carp, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mites+as+vectors+for+scrapie.">Mites as vectors for scrapie.</a> Lancet. 347 (9008), 1114 (1996).</li><li>Post, K., Riesner, D., Walldorf, V., Mehlhorn, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fly+larvae+and+pupae+as+vectors+for+scrapie.">Fly larvae and pupae as vectors for scrapie.</a> Lancet. 354 (9194), 1969-1970 (1999).</li><li>Matthews, D., Cooke, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+potential+for+transmissible+spongiform+encephalopathies+in+non-ruminant+livestock+and+fish.">The potential for transmissible spongiform encephalopathies in non-ruminant livestock and fish.</a> Revue Scientifique Et Technique-Office International Des Epizooties. 22 (1), 283-296 (2003).</li><li>Jennelle, C. S., Samuel, M. D., Nolden, C. A., Berkley EA, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deer+carcass+decomposition+and+potential+scavenger+exposure+to+chronic+wasting+disease.">Deer carcass decomposition and potential scavenger exposure to chronic wasting disease.</a> Journal of Wildlife Management. 73 (5), 655-662 (2009).</li><li>Scherbel, C., Pichner, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Degradation+of+scrapie+associated+prion+protein+(PrPSc)+by+the+gastrointestinal+microbiota+of+cattle.">Degradation of scrapie associated prion protein (PrPSc) by the gastrointestinal microbiota of cattle.</a> Veterinary Research. 37 (5), 695-703 (2006).</li><li>Jeffrey, M., Gonza&#225;lez, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transportation+of+prion+protein+across+the+intestinal+mucosa+of+scrapie+susceptible+and+scrapie-resistant+sheep.">Transportation of prion protein across the intestinal mucosa of scrapie susceptible and scrapie-resistant sheep.</a> Journal of Pathology. 209 (1), 4-14 (2006).</li><li>Nicholson, E. M., Richt, J. A., Rasmussen, M. A., Hamir, A. N., Lebepe-Mazur, S., Horst, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exposure+of+sheep+scrapie+brain+homogenate+to+rumen-simulating+conditions+does+not+result+in+a+reduction+of+PrP(Sc)+levels.">Exposure of sheep scrapie brain homogenate to rumen-simulating conditions does not result in a reduction of PrP(Sc) levels.</a> Letters in Applied Microbiology. 44 (6), 631-636 (2007).</li><li>Motes C, M. a. l. u. q. u. e. r. d. e., Grassi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Excretion+of+BSE+and+scrapie+prions+in+stools+from+murine+models.">Excretion of BSE and scrapie prions in stools from murine models.</a> Veterinary Microbiology. 131 (1-2), 205-211 (2008).</li><li>Kruger, D., Thomzig, A., Lenz, G., Kampf, K., McBride, P., Beekes, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Faecal+shedding,+alimentary+clearance+and+intestinal+spread+of+prions+in+hamsters+fed+with+scrapie.">Faecal shedding, alimentary clearance and intestinal spread of prions in hamsters fed with scrapie.</a> Veterinary Research. 40 (1), 4 (2009).</li><li>Mathiason, C. K., Nalls, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Susceptibility+of+domestic+cats+to+chronic+wasting+disease.">Susceptibility of domestic cats to chronic wasting disease.</a> Journal of Virology. 87 (4), 1947-1956 (2013).</li><li>Bjorndal, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flexibility+of+digestive+responses+in+two+generalist+herbivores,+the+tortoises+Geochelone+carbonaria+and+Geochelone+denticulate.">Flexibility of digestive responses in two generalist herbivores, the tortoises Geochelone carbonaria and Geochelone denticulate.</a> Oecologia. 78 (3), 317-321 (1989).</li><li>Clark, R. G., Gentle, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimates+of+grain+passage+time+in+captive+mallards.">Estimates of grain passage time in captive mallards.</a> Canadian Journal of Zoology. 68 (11), 2275-2279 (1990).</li><li>Dierenfeld, E. S., Koontz, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feed+intake,+digestion+and+passage+of+proboscis+monkey+(Nasalis+larvatus)+in+captivity.">Feed intake, digestion and passage of proboscis monkey (Nasalis larvatus) in captivity.</a> Primates. 33 (3), 399-405 (1992).</li><li>Thompson, A. K., Samuel, M. D., Van Deelen, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternative+feeding+strategies+and+potential+disease+transmission+in+Wisconsin+white-tailed+deer.">Alternative feeding strategies and potential disease transmission in Wisconsin white-tailed deer.</a> Journal of Wildlife Management. 72 (2), 416-421 (2008).</li><li>Pulford, B., Spraker, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+PrPCWD+in+feces+from+naturally+exposed+Rocky+Mountain+elk+(Cervus+elaphus+nelsoni)+using+protein+misfolding+cyclic+amplification.">Detection of PrPCWD in feces from naturally exposed Rocky Mountain elk (Cervus elaphus nelsoni) using protein misfolding cyclic amplification.</a> Journal of Wildlife Diseases. 48 (2), 425-433 (2012).</li><li>Hicks, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guano+deposition+in+an+Oklahoma+crow+roost.">Guano deposition in an Oklahoma crow roost.</a> Condor. 81 (3), 247-250 (1979).</li><li>Aldous, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Winter+habits+of+crows+in+Oklahoma.">Winter habits of crows in Oklahoma.</a> Journal of Wildlife Management. 73 (4), 290-295 (1944).</li></ol>

أعلن عن أي تضارب في المصالح.

نحن يبرهن على وجود إجراءات لتوثيق مرور المواد بي ار بي الدقة عن طريق الجهاز الهضمي من الغربان. استخدمنا الطرق التقليدية لتحديد ما إذا الغربان لديها القدرة على نقل من مادة بي ار بي الدقة إلى مناطق جغرافية خالية من الأمراض. وقد قيمت الآخرين مقاومة بي ار بي <su...

الاعتلال الدماغي الاسفنجي المعدية (TSE) هي الاضطرابات المعدية القاتلة الاعصاب التي تؤثر على الحياة البرية، والحيوانات الأليفة، والبشر. وكيل المعدية الأمراض بورصة طوكيو يبدو أن تتجمع الأشكال الإسوية أو الممرضة (بي ار بي الدقة) من بروتينات بريون 1. وتشمل الأمراض الحيوانية بورصة طوكيو مرض الهزال المزمن (CWD) في الغزلان بغل (Odocoileus hemionus)، الأيل الأبيض الذيل (Odocoileus virginianus)، الأيائل (Cervus elaphus)، وحيوان الموظ (alces Alces)؛ سكرابي في الأغنام والماعز؛ اعتلال الدماغ الإسفنجي البقري ( مرض جنون البقر) في الأبقار المحلية؛ المعدية التهاب الدماغ المنك المنك في المزارع؛ اعتلال الدماغ الاسفنجي في القطط القطط؛ الغريبة الاعتلال الدماغي الإسفنجي ذوات الحوافر في حديقة الحيوانات الغريبة يجتر من الأبقار الأسرة، واعتلال الدماغ الإسفنجي في الرئيسيات غير البشرية 8. المرض بورصة طوكيو بشرية واحدة، والبديل مرض كروتزفيلد جاكوب، أمر نادر الحدوث ويعتقد أن الحصول عليها عن طريق استهلاك بي ار بي الدقة-كونتامانالغذاء ated 9. وبالمثل، يمكن أن تصيب البشر إذا مرض جنون البقر ويستهلك لحوم البقر الملوثة 10. من جميع الأمراض بورصة طوكيو، سكرابي وCWD هما فقط مع الأوبئة ومصادر للعدوى الاكتفاء الذاتي يفترض أن يكون من الحيوان الى الحيوان 2،3،11 وكذلك من المصادر البيئية 4-6. تشير البحوث إلى أن معظم الأمراض بورصة طوكيو تتطلب فترات حضانة طويلة ملحوظ من الأحداث التعرض للمواد الطبيعية بي ار بي الدقة لمظهر من مظاهر علامات سريرية 2-4،6،8 والحواجز الأنواع الظاهر تقليل، ولكن لا تقضي على إمكانات، انتقال بين الأنواع 12-14 . تحديد آليات لانتشار بريون المعدية (بي ار بي الدقة) المواد من المهم للغاية للرد على الأسئلة حول كيفية نقل الأمراض بورصة طوكيو عبر المناظر الطبيعية. وأشارت التحقيقات التجريبية التي الحشرات 15،16 والدواجن والخنازير 17، والغربان الأمريكية (غراب براكhyrhynchos) 7،18 ناقلة أو المشتتات السلبي من مادة بي ار بي الدقة. وقد تم مؤخرا توثيق مرور المواد بي ار بي الدقة عن طريق الجهاز الهضمي من الغربان، مما يدل على الدور الذي قد تلعبه في تشتيت الأمراض بورصة طوكيو 7. هذه النتائج تجعل من المعقول أن الغربان، زبال، يمكن أن تواجهها، تستهلك، ونقل المواد المعدية عن طريق البراز الترسيب، إلى مناطق خالية من المرض. واستخدمت الإجراءات علينا أن نظهر هنا لتوثيق مرور المواد بي ار بي الدقة من خلال نظام الهضم من الغربان وسوف يسهل كثيرا تطبيق هذه الأساليب لزبال الأخرى ونماذج أكلة اللحوم أنواع محددة في البحوث المستقبلية ذات الصلة. في هذه الدراسة تم استخدام الأساليب التقليدية للتحقيق وسيلة غير تقليدية لتهريب المواد بي ار بي الدقة، والتي يمكن أن تسهم في انتشار والعبء الإجمالي للمادة بي ار بي الدقة.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="545">
	<tbody>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:217px;">RML Chandler strain mouse-adapted scrapie</td>
			<td style="width:112px;">Rocky Mountain Laboratories</td>
			<td style="width:137px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:217px;">RC57BL/6 mice</td>
			<td style="width:112px;">Hilltop Lab Animals</td>
			<td style="width:137px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:217px;">American crows</td>
			<td style="width:112px;">wild captured</td>
			<td style="width:137px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:217px;">Pen/Strep</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td style="width:137px;">15140-122</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:217px;">Phosphate buffered Saline</td>
			<td style="width:112px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:137px;">70011-044</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:217px;">Sonicator</td>
			<td>Misonix</td>
			<td style="width:137px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:217px;">Proteinase-K solution</td>
			<td style="width:112px;">Roche</td>
			<td align="right" style="width:137px;">3115887001</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:217px;">Loading buffer</td>
			<td style="width:112px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:137px;">NP0007 and 0009</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:217px;">Bis-tris SDS PAGE 12% gel</td>
			<td style="width:112px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:137px;">NP0342</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:217px;">Immobilon PVDF membrane</td>
			<td style="width:112px;">Millipore</td>
			<td style="width:137px;">1SEQ00010</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:217px;">Tween 20</td>
			<td style="width:112px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:137px;">P2287</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:217px;">Bullet blender homogenizer</td>
			<td style="width:112px;">Braintree Scientific</td>
			<td style="width:137px;">BBX24B</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:217px;">2.3 mm Zirconia/silica beads</td>
			<td style="width:112px;">BioSpec Products</td>
			<td style="width:137px;">11079125Z</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:217px;">Bar224 anti-PrP monoclonal antibody</td>
			<td style="width:112px;">Cayman Chemical</td>
			<td align="right" style="width:137px;">10009035</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:217px;">Superblock</td>
			<td style="width:112px;">Thermo Scientific</td>
			<td align="right" style="width:137px;">37517</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:217px;">chemiluminescent substrate</td>
			<td style="width:112px;">Millipore</td>
			<td style="width:137px;">WBKLS0500</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:217px;">G-box gel documentation system</td>
			<td style="width:112px;">Syngene</td>
			<td style="width:137px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

procedures for identifying infectious prions after passage through the digestive system of an avian species

ومن المرجح بريون المعدية (بي ار بي الدقة) مادة سبب قاتلة، الاعصاب المعدية اعتلال الدماغ الإسفنجي (TSE) الأمراض 1. انتقال الأمراض بورصة طوكيو، مثل مرض الهزال المزمن (CWD)، يفترض أن يكون من الحيوان الى الحيوان 2،3 وكذلك من المصادر البيئية 4-6. الزبالين والحيوانات آكلة اللحوم لديها القدرة على نقل من مادة بي ار بي الدقة من خلال الاستهلاك وإفراز الملوثة CWD الجيف. وقد وثقت العمل مؤخرا بمرور المواد بي ار بي الدقة عن طريق الجهاز الهضمي من الغربان الأمريكية (غراب brachyrhynchos)، زبال أمريكا الشمالية المشتركة 7. نحن تصف الإجراءات المستخدمة لتوثيق مرور المواد بي ار بي الدقة من خلال الغربان الأمريكية. تم gavaged الغربان مع RML سلالة تتكيف مع الماوس سكرابي وتم جمع فضلاتها 4 آخر ساعة تسمين. والبراز الغراب ثم تجميع وحقن الغشاء البريتونى فيC57BL / 6 الفئران. تم رصد الفئران يوميا حتى أعربوا عن علامات سريرية للماوس سكرابي والموت الرحيم كانت بعد ذلك. تم رصد الفئران أعراض حتى 365 يوما بعد التلقيح. أجري تحليل لطخة غربية لتأكيد حالة المرض. وكشفت النتائج أن البريونات المعدية تبقى بعد السفر عن طريق الجهاز الهضمي من الغربان وموجودة في البراز، مما تسبب المرض في الفئران الاختبار.

شرح الإجراءات المستخدمة أن الجهاز الهضمي من الغربان لا يلغي بي ار بي الدقة العدوى 4 ساعة بعد بالتزقيم عن طريق الفم من جناسة سكرابي الدماغ 7. كل عشرين الغربان التي تم gavaged مع المواد بي ار بي الدقة تنتقل لاحقا مادة بي ار بي الدقة عبر البراز إلى الفئ...

Watch this Scientific Journal Video about Procedures for Identifying Infectious Prions After Passage Through the Digestive System of an Avian Species at JoVE.com

Procedures for Identifying Infectious Prions After Passage Through the Digestive System of an Avian Species

الزبالين لديها القدرة على نقل من المعدية التي تنتقل البريونات اعتلال الدماغ الإسفنجي في فضلاتها إلى مناطق خالية من المرض. نحن أساليب التفاصيل المستخدمة لتحديد ما إذا تبقى البريونات سكرابي الماوس تكييفها المعدية بعد مرور الرغم من أن الجهاز الهضمي من الغربان الأمريكية (غراب brachyrhynchos)، مستهلكا شيوعا من الحيوانات النافقة.

إجراءات لتحديد المعدية البريونات بعد المرور عبر الجهاز الهضمي لأنواع الطيور

Infectious prion (PrPRes) material is likely the cause of fatal, neurodegenerative transmissible spongiform encephalopathy (TSE) diseases1. Transmission ...

procedures-for-identifying-infectious-prions-after-passage-through

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

11.0K Views.  USDA.  الزبالين لديها القدرة على نقل من المعدية التي تنتقل البريونات اعتلال الدماغ الإسفنجي في فضلاتها إلى مناطق خالية من المرض. نحن أساليب التفاصيل المستخدمة لتحديد ما إذا تبقى البريونات سكرابي الماوس تكييفها المعدية بعد مرور الرغم من أن الجها...

Video: Procedures for Identifying Infectious Prions After Passage Through the Digestive System of an Avian Species

Development of a Negative Selectable Marker for Entamoeba histolytica

Entamoeba histolytica is the causative agent of amebiasis and infects up to 10% of the world's population. The molecular techniques that have enabled the up- and down-regulation of gene expression rely on the transfection of stably maintained plasmids. While these have increased our understanding of Entamoeba virulence factors, the capacity to integrate exogenous DNA into genome, which would allow reverse genetics experiments, would be a significant advantage in the study of this parasite. The challenges presented by this organism include inability to select for homologous recombination events and difficulty to cure episomal plasmid DNA from transfected trophozoites. The later results in a high background of exogenous DNA, a major problem in the identification of trophozoites in which a bona fide genomic integration event has occurred. We report the development of a negative selection system based upon transgenic expression of a yeast cytosine deaminase and uracil phosphoribosyl transferase chimera (FCU1) and selection with prodrug 5-fluorocytosine (5-FC). The FCU1 enzyme converts non-toxic 5-FC into toxic 5-fluorouracil and 5-fluorouridine-5'-monophosphate. E. histolytica lines expressing FCU1 were found to be 30 fold more sensitive to the prodrug compared to the control strain.

Development of a Negative Selectable Marker for Entamoeba histolytica

We report development of a negative selection system in E. histolytica based upon transgenic expression of a chimeric protein (FCU1) and selection with the prodrug 5-fluorocytosine. The FCU1 protein is a fusion of yeast cytosine deaminase and uracil phosphoribosyltransferase. Expression of FCU1 resulted in increased E. histolytica sensitivity towards 5-fluorocytosine.

وضع علامة سلبية لإختيار a المتحولة الحالة للنسج</em

Entamoeba histolytica is the causative agent of amebiasis and infects up to 10% of the world's population. The molecular techniques that have enabled the ...

Propagating and Detecting an Infectious Molecular Clone of Maedi-visna Virus that Expresses Green Fluorescent Protein

Maedi-visna virus (MVV) is a lentivirus of sheep, causing slowly progressive interstitial pneumonia and encephalitis1. The primary target cells of MVV in vivo are considered to be of the monocyte lineage2. Certain strains of MVV can replicate in other cell types, however3,4. The green fluorescent protein is a commonly used marker for studying lentiviruses in living cells. We have inserted the egfp gene into the gene for dUTPase of MVV. The dUTPase gene is well conserved in most lentivirus strains of sheep and goats and has been shown to be important in replication of CAEV5. However, dUTPase has been shown to be dispensable for replication of the molecular clone of MVV used in this study both in vitro and in vivo6. MVV replication is strictly confined to cells of sheep or goat origin. We use a primary cell line from the choroid plexus of sheep (SCP cells) for transfection and propagation of the virus7. The fluorescent MVV is fully infectious and EGFP expression is stable over at least 6 passages8. There is good correlation between measurements of TCID50 and EGFP. This virus should therefore be useful for rapid detection of infected cells in studies of cell tropism and pathogenicity in vitro and in vivo8.

We describe a molecular clone of maedi-visna virus that expresses GFP and is fully infectious. Replication of this virus can be detected by using fluorescence microscopy and flow cytometry.

وكشف ونشر استنساخ المعدية الجزيئية لفيروس ميثة-فيزنا أن تعرب عن بروتين الفلورية الخضراء

Maedi-visna virus (MVV) is a lentivirus of sheep, causing slowly progressive interstitial pneumonia and encephalitis1. The primary target cells of MVV in ...

Protein Misfolding Cyclic Amplification of Prions

Prions are infectious agents that cause the inevitably fatal transmissible spongiform encephalopathy (TSE) in animals and humans9,18. The prion protein has two distinct isoforms, the non-infectious host-encoded protein (PrPC) and the infectious protein (PrPSc), an abnormally-folded isoform of PrPC 8.
One of the challenges of working with prion agents is the long incubation period prior to the development of clinical signs following host inoculation13. This traditionally mandated long and expensive animal bioassay studies. Furthermore, the biochemical and biophysical properties of PrPSc are poorly characterized due to their unusual conformation and aggregation states.
PrPSc can seed the conversion of PrPC to PrPSc in vitro14. PMCA is an in vitro technique that takes advantage of this ability using sonication and incubation cycles to produce large amounts of PrPSc, at an accelerated rate, from a system containing excess amounts of PrPC and minute amounts of the PrPSc seed19. This technique has proven to effectively recapitulate the species and strain specificity of PrPSc conversion from PrPC, to emulate prion strain interference, and to amplify very low levels of PrPSc from infected tissues, fluids, and environmental samples6,7,16,23 .
This paper details the PMCA protocol, including recommendations for minimizing contamination, generating consistent results, and quantifying those results. We also discuss several PMCA applications, including generation and characterization of infectious prion strains, prion strain interference, and the detection of prions in the environment.

Protein misfolding cyclic amplification (PMCA) is an in vitro assay for the study of prion conversion and strain and species barriers. It can also be used as a prion detection assay.

تضخيم بروتين دوري Misfolding من البريونات

Prions  are infectious agents that cause the inevitably fatal transmissible spongiform  encephalopathy (TSE) in animals and humans9,18. The prion protein ...

Viral Concentration Determination Through Plaque Assays: Using Traditional and Novel Overlay Systems

Plaque assays remain one of the most accurate methods for the direct quantification of infectious virons and antiviral substances through the counting of discrete plaques (infectious units and cellular dead zones) in cell culture. Here we demonstrate how to perform a basic plaque assay, and how differing overlays and techniques can affect plaque formation and production. Typically solid or semisolid overlay substrates, such as agarose or carboxymethyl cellulose, have been used to restrict viral spread, preventing indiscriminate infection through the liquid growth medium. Immobilized overlays restrict cellular infection to the immediately surrounding monolayer, allowing the formation of discrete countable foci and subsequent plaque formation. To overcome the difficulties inherent in using traditional overlays, a novel liquid overlay utilizing microcrystalline cellulose and carboxymethyl cellulose sodium has been increasingly used as a replacement in the standard plaque assay. Liquid overlay plaque assays can be readily performed in either standard 6 or 12 well plate formats as per traditional techniques and require no special equipment. Due to its liquid state and subsequent ease of application and removal, microculture plate formats may alternatively be utilized as a rapid, accurate and high throughput alternative to larger scale viral titrations. Use of a non heated viscous liquid polymer offers the opportunity to streamline work, conserves reagents, incubator space, and increases operational safety when used in traditional or high containment labs as no reagent heating or glassware are required. Liquid overlays may also prove more sensitive than traditional&#160;overlays for certain heat labile viruses.

Plaque assays are the gold standard for viral quantification, utilizing entrapping overlays on host cellular monolayers to determine viral titers. While various semisolid overlays have traditionally been used, here we demonstrate plaque techniques comparing semisolid overlays to a novel liquid microcrystalline cellulose among several families of viruses.

تحديد تركيز الفيروسي من خلال البلاك فحوصات: نظم تراكب عن طريق التقليدية والرواية

Plaque assays remain one of the most accurate methods for the direct quantification of infectious virons and antiviral substances through the counting of ...

Safety Precautions and Operating Procedures in an (A)BSL-4 Laboratory: 1. Biosafety Level 4 Suit Laboratory Suite Entry and Exit Procedures

Biosafety level 4 (BSL-4) suit laboratories are specifically designed to study high-consequence pathogens for which neither infection prophylaxes nor treatment options exist. The hallmarks of these laboratories are: custom-designed airtight doors, dedicated supply and exhaust airflow systems, a negative-pressure environment, and mandatory use of positive-pressure (&#8220;space&#8221;) suits. The risk for laboratory specialists working with highly pathogenic agents is minimized through rigorous training and adherence to stringent safety protocols and standard operating procedures. Researchers perform the majority of their work in BSL-2 laboratories and switch to BSL-4 suit laboratories when work with a high-consequence pathogen is required. Collaborators and scientists considering BSL-4 projects should be aware of the challenges associated with BSL-4 research both in terms of experimental technical limitations in BSL-4 laboratory space and the increased duration of such experiments. Tasks such as entering and exiting the BSL-4 suit laboratories are considerably more complex and time-consuming compared to BSL-2 and BSL-3 laboratories. The focus of this particular article is to address basic biosafety concerns and describe the entrance and exit procedures for the BSL-4 laboratory at the NIH/NIAID Integrated Research Facility at Fort Detrick. Such procedures include checking external systems that support the BSL-4 laboratory, and inspecting and donning positive-pressure suits, entering the laboratory, moving through air pressure-resistant doors, and connecting to air-supply hoses. We will also discuss moving within and exiting the BSL-4 suit laboratories, including using the chemical shower and removing and storing positive-pressure suits.

Safety Precautions and Operating Procedures in an ABSL-4 Laboratory: 1. Biosafety Level 4 Suit Laboratory Suite Entry and Exit Procedures

Although researchers are generally knowledgeable about procedures and safety precautions required for biosafety level 1 or 2 (BSL-1/2) experiments, they may not be familiar with experimental procedures in BSL-4 suit laboratories. This article provides a detailed visual demonstration of BSL-4 suit laboratory systems check, laboratory entry, movement, and exit procedures.

احتياطات السلامة وإجراءات التشغيل في (A) BSL-4 المختبر: 1. سلامة الأحيائية مستوى 4 البدلة مختبر جناح دخول وخروج إجراءات

Biosafety level 4 (BSL-4) suit laboratories are specifically designed to study high-consequence pathogens for which neither infection prophylaxes nor ...

Safety Precautions and Operating Procedures in an (A)BSL-4 Laboratory: 2. General Practices

Work in a biosafety level 4 (BSL-4) containment laboratory requires time and great attention to detail. The same work that is done in a BSL-2 laboratory with non-high-consequence pathogens will take significantly longer in a BSL-4 setting. This increased time requirement is due to a multitude of factors that are aimed at protecting the researcher from laboratory-acquired infections, the work environment from potential contamination and the local community from possible release of high-consequence pathogens. Inside the laboratory, movement is restricted due to air hoses attached to the mandatory full-body safety suits. In addition, disinfection of every item that is removed from Class II biosafety cabinets (BSCs) is required. Laboratory specialists must be trained in the practices of the BSL-4 laboratory and must show high proficiency in the skills they are performing. The focus of this article is to outline proper procedures and techniques to ensure laboratory biosafety and experimental accuracy using a standard viral plaque assay as an example procedure. In particular, proper techniques to work safely in a BSL-4 environment when performing an experiment will be visually emphasized. These techniques include: setting up a Class II BSC for experiments, proper cleaning of the Class II BSC when finished working, waste management and safe disposal of waste generated inside a BSL-4 laboratory, and the removal of inactivated samples from inside a BSL-4 laboratory to the BSL-2 laboratory.

Safety Precautions and Operating Procedures in an ABSL-4 Laboratory: 2. General Practices

Performing viral assays in a BSL-4 laboratory is more involved compared to work in a BSL-2 laboratory due to required additional safety precautions. Here, we present an overview of practices and procedures used inside a BSL-4 laboratory illustrating proper Class II biosafety cabinet usage, waste management/disposal, and sample removal.

احتياطات السلامة وإجراءات التشغيل في (A) مختبر BSL-4: 2. الممارسات العامة

Work in a biosafety level 4 (BSL-4) containment laboratory requires time and great attention to detail. The same work that is done in a BSL-2 laboratory ...

Safety Precautions and Operating Procedures in an (A)BSL-4 Laboratory: 4. Medical Imaging Procedures

Medical imaging using animal models for human diseases has been utilized for decades; however, until recently, medical imaging of diseases induced by high-consequence pathogens has not been possible. In 2014, the National Institutes of Health, National Institute of Allergy and Infectious Diseases, Integrated Research Facility at Fort Detrick opened an Animal Biosafety Level 4 (ABSL-4) facility to assess the clinical course and pathology of infectious diseases in experimentally infected animals. Multiple imaging modalities including computed tomography (CT), magnetic resonance imaging, positron emission tomography, and single photon emission computed tomography are available to researchers for these evaluations. The focus of this article is to describe the workflow for safely obtaining a CT image of a live guinea pig in an ABSL-4 facility. These procedures include animal handling, anesthesia, and preparing and monitoring the animal until recovery from sedation. We will also discuss preparing the imaging equipment, performing quality checks, communication methods from "hot side" (containing pathogens) to "cold side," and moving the animal from the holding room to the imaging suite.

Safety Precautions and Operating Procedures in an ABSL-4 Laboratory: 4. Medical Imaging Procedures

Here, we present an overview of the preparation and animal handling procedures required to safely perform medical imaging in an animal biosafety level 4 laboratory. Computed tomography of a mock-infected guinea pig illustrates these procedures that may be used to evaluate the disease caused by a high consequence pathogen.

احتياطات السلامة وإجراءات التشغيل في (A) BSL-4 مختبر: 4. إجراءات التصوير الطبية

Medical imaging using animal models for human diseases has been utilized for decades; however, until recently, medical imaging of diseases induced by ...

Safety Precautions and Operating Procedures in an (A)BSL-4 Laboratory: 3. Aerobiology

Aerosol or inhalational studies of high-consequence pathogens have recently been increasing in number due to the perceived threat of intentional aerosol releases or unexpected natural aerosol transmission. Specific laboratories designed to perform these experiments require tremendous engineering controls to provide a safe and secure working environment and constant systems maintenance to sustain functionality. Class III biosafety cabinets, also referred to as gloveboxes, are gas-tight enclosures with non-opening windows. These cabinets are maintained under negative pressure by double high-efficiency-particulate-air (HEPA)-filtered exhaust systems and are the ideal primary containment for housing aerosolization equipment. A well planned workflow between staff members within high containment from, for instance, an animal biosafety level-4 (ABSL-4) suit laboratory to the ABSL-4 cabinet laboratory is a crucial component for successful experimentation. For smooth study execution, establishing a communication network, moving equipment and subjects, and setting up and placing equipment, requires staff members to meticulously plan procedures prior to study initiation. Here, we provide an overview and a visual representation of how aerobiology research is conducted at the National Institutes of Health, National Institute of Allergy and Infectious Diseases Integrated Research Facility at Fort Detrick, Maryland, USA, within an ABSL-4 environment.

Safety Precautions and Operating Procedures in an ABSL-4 Laboratory: 3. Aerobiology

As high-consequence pathogens can potentially infect subjects through airborne particles, aerobiology has been increasingly applied in pathogenesis research and medical countermeasure development. We present a detailed visual demonstration of aerobiology procedures during an aerosol challenge in nonhuman primates in an animal biosafety level 4 maximum containment environment.

احتياطات السلامة وإجراءات التشغيل في (A) BSL-4 مختبر: 3. البيولوجيا الهوائية

Aerosol or inhalational studies of high-consequence pathogens have recently been increasing in number due to the perceived threat of intentional aerosol ...

Zika Virus Infectious Cell Culture System and the In Vitro Prophylactic Effect of Interferons

Zika Virus (ZIKV) is an emerging pathogen that is linked to fetal developmental abnormalities such as microcephaly, eye defects, and impaired growth. ZIKV is an RNA virus of the Flaviviridae family. ZIKV is mainly transmitted by mosquitoes, but can also be spread by maternal to fetal vertical transmission as well as sexual contact. To date, there are no reliable treatment or vaccine options available to protect those infected by the virus. The development of a reproducible, effective Zika virus infectious cell culture system is critical for studying the molecular mechanisms of ZIKV replication as well as drug and vaccine development. In this regard, a protocol describing a mammalian cell-based in vitro Zika virus culture system for viral production and growth analysis is reported here. Details on the formation of plaques by Zika virus on a cell monolayer and plaque assay for measuring viral titer are presented. Viral genome replication kinetics and double-stranded RNA genome replicatory intermediates are determined. This culture platform was utilized to screen against a library of a small set of cytokines resulting in the identification of interferon-&#945; (IFN-&#945;), IFN-&#946; and IFN-&#947; as potent inhibitors of Zika viral growth. In summary, an in vitro infectious Zika viral culture system and various virological assays are demonstrated in this study, which has the potential to greatly benefit the research community in elucidating further the mechanisms of viral pathogenesis and the evolution of viral virulence. Antiviral IFN-alpha can further be evaluated as a prophylactic, post-exposure prophylactic, and treatment option for Zika virus infections in high-risk populations, including infected pregnant women.

Zika Virus Infectious Cell Culture System and the In Vitro Prophylactic Effect of Interferons

Zika Virus (ZIKV), an emerging pathogen, is linked to fetal developmental abnormalities and microcephaly. The establishment of an effective infectious cell culture system is crucial for studies of ZIKV replication as well as vaccine and drug development. In this study, various virological assays pertaining to ZIKV are illustrated and discussed.

زيكا الفيروسات نظام المعدية خلية الثقافة و<em&gt; في المختبر</em&gt; وقائية تأثير الانترفيرونات

Zika Virus (ZIKV) is an emerging pathogen that is linked to fetal developmental abnormalities such as microcephaly, eye defects, and impaired growth. ZIKV ...

Isolating Lymphocytes from the Mouse Small Intestinal Immune System

The intestinal immune system plays an essential role in maintaining the barrier function of the gastrointestinal tract by generating tolerant responses to dietary antigens and commensal bacteria while mounting effective immune responses to enteropathogenic microbes. In addition, it has become clear that local intestinal immunity has a profound impact on distant and systemic immunity. Therefore, it is important to study how an intestinal immune response is induced and what the immunologic outcome of the response is. Here, a detailed protocol is described for the isolation of lymphocytes from small intestine inductive sites like the gut-associated lymphoid tissue Peyer&#39;s patches and the draining mesenteric lymph nodes and effector sites like the lamina propria and the intestinal epithelium. This technique ensures isolation of a large numbers of lymphocytes from small intestinal tissues with optimal purity and viability and minimal cross compartmental contamination within acceptable time constraints. The technical capability to isolate lymphocytes and other immune cells from intestinal tissues enables the understanding of immune responses to gastrointestinal infections, cancers, and inflammatory diseases.

Here we describe a detailed protocol for the isolation of lymphocytes from the inductive sites including the gut-associated lymphoid tissue Peyer&#39;s patches and the draining mesenteric lymph nodes, and the effector sites including the lamina propria and the intestinal epithelium of the small intestinal immune system.

عزل الخلايا الليمفاوية من الماوس صغيرة المعوية المناعي

The intestinal immune system plays an essential role in maintaining the barrier function of the gastrointestinal tract by generating tolerant responses to ...