نود أن نشكر أناند سواروب على توفير فئران Nrl-GFP ، وJochen Haas للحصول على الدعم الفني ، وسيندي بوهم وإيميلي ليسمان تربية الحيوانات.	
	تم دعم هذا العمل من قبل دويتشه فورشونجسجيمينشافت (DFG): FZT 111 - مركز العلاجات التجديدية درسدن، وبرنامج منح بذور CRTD، وSFB 655، و ProRetina e.V. المؤسسة، وبرنامج الدراسات العليا DIGS-BB درسدن، و Fundação para a Ciência e Tecnologia (SFRH/BD/60787/2009)

بيان الاستخدام الأخلاقي ورعاية الحيوانات:
أجريت جميع التجارب على الحيوانات وفقا للقوانين الأوروبية والألمانية (Tierschutzgesetz) وتم الالتزام ببيان ARVO لاستخدام الحيوانات في أبحاث العيون والرؤية. تمت الموافقة على جميع التجارب على الحيوانات من قبل لجنة أخلاقيات الحيوان في جامعة دريسدن و Landesdirektion Dresden (رقم الموافقة: 24D-9168.11-1/2008-33).
1. قبل بدء تفكك الخلية وفرز الخلايا
<ol><li>تسمية ثلاثة أنابيب رد فعل 15 مل مع: غسل (W)، كسر إيجابي (+) وكسر سلبي (-).</li>
</ol>2. انفصال الشبكية
<ol><li>قطع رأس الجراء PN 4 باستخدام مقص.</li>
	<li>شطف رأس الجراء قريبا في الإيثانول 70٪ تليها الغسيل في برنامج تلفزيوني.</li>
	<li>نقل الرأس إلى HBSS الباردة وتنجيل العين (كرر هذه الخطوة لجميع رؤساء). ل enucleate، افتح الجفون وركز العين مع ملقط منحني في منطقة العصب البصري. ثم سحب العين بعناية من المدار.</li>
	<li>بعد تجميل جميع العيون، قم بعزل الشبكية: أدخل مقصا مغلقا إلى العصب البصري وافتح الشفرات. بيل وRPE / chorid بها. إزالة العدسات والأوعية الدموية باستخدام ملقط منحني.</li>
	<li>نقل شبكية العين المعزولة إلى أنبوب رد فعل 1.5 مل تحتوي على محلول papain (التي تقدمها عدة فك فصيلة papain).</li>
	<li>احتضان شبكية العين في محلول papain لمدة 30-60 دقيقة في حمام مائي أو شاكر (400 دورة في الدقيقة) في 37 درجة مئوية.<ol>
<li>في حين أن شبكية العين تحتضن في محلول الباباين ، ماصة 1 مل من محلول أوفوموكويد إلى أنبوب تفاعل 15 مل (التسمية "1").</li>
			<li>إضافة 60 ميكرولتر من DNase I (10 ملغ / مل) + 60 ميكرولتر من محلول أوفوموكويد (التي تقدمها عدة) + 520 ميكرولتر من EBSS إلى أنبوب رد فعل 15 مل (التسمية "2").</li>
		</ol>
</li>
	<li>بعد حضانة الباباين، نقل محلول papain التي تحتوي على شبكية العين هضمها جزئيا إلى أنبوب رد الفعل "2".</li>
	<li>باستخدام ماصة مصقول النار، وإجراء التفكك الميكانيكية (10x صعودا وهبوطا).</li>
	<li>ماصة تعليق خلية واحدة إلى أنبوب رد فعل "1". في محاولة لتوليد 2 طبقات بطبقات بلطف تعليق الخلية على رأس الحل ovomucoid.</li>
	<li>جهاز طرد مركزي لمدة 5 دقائق بسرعة 300 × غرام (حوالي 1300 دورة في الدقيقة).</li>
	<li>تجاهل supernatant وإعادة إنفاق الخلايا في 500 ميكرولتر من المخزن المؤقت MACS.</li>
</ol>3. فرز الخلايا باستخدام المغناطيسية المرتبطة فرز الخلايا (MACS)
<ol><li>إضافة X ميكرولتر الجرذ المضادة CD73 الأجسام المضادة ل500 ميكرولتر من أجل تحقيق تركيز النهائي من 10 ميكروغرام / مل.</li>
	<li>احتضان 5 دقائق على الجليد.</li>
	<li>ملء أنبوب رد الفعل 15 مل إلى 10 مل مع MACS العازلة والطرد المركزي لمدة 5 دقائق بسرعة 300 × ز.</li>
	<li>أزل الناتنات الفائق.</li>
	<li>Resuspend بيليه في 480 ميكرولتر MACS العازلة وإضافة 120 ميكروغرام من الميكروبات IgG الماعز المضادة للفئران.</li>
	<li>احتضان 15 دقيقة على الجليد; لا تحرض، يهز أو مزجها.</li>
	<li>ملء أنبوب رد الفعل 15 مل إلى 5 مل مع MACS العازلة والطرد المركزي لمدة 5 دقائق في 300 × ز.</li>
	<li>كما تم طرد أنبوب رد الفعل:<ol>
<li>ضبط عمود LS في الحامل المغناطيسي.</li>
			<li>وضع عامل تصفية preseparation أعلى العمود LS.</li>
			<li>هيدرات مرشح preseparation والعمود LS مع 3 مل MACS العازلة وجمع المخزن المؤقت MACS في أنبوب غسل (W).</li>
		</ol>
</li>
	<li>أزل الناتنات الفائق.</li>
	<li>Resuspend بيليه في 500 ميكرولتر MACS العازلة.</li>
	<li>قم بتحميل تعليق الخلية 500 ميكرولتر إلى الفلتر، ثم أضف 1 مل من المخزن المؤقت MACS إلى الفلتر واجمع الكسر السالب في أنبوب التفاعل السالب (-).</li>
	<li>بعد ذلك، أضف 3 × 3 مل من المخزن المؤقت MACS إلى العمود لغسل الخلايا غير المرتبطة بالعمود</li>
	<li>مرة واحدة هذه 9 مل هي من خلال العمود LS، وإزالة العمود من موقف المغناطيسي وتثبيته على رأس أنبوب رد فعل الكسر الإيجابي (+).</li>
	<li>تحميل بسرعة 5 مل من المخزن المؤقت MACS في العمود LS ووضع المكبس في العمود LS واضغط عليه حتى المخزن المؤقت بأكمله من خلال العمود.</li>
	<li>الطرد المركزي أنبوب رد الفعل الذي يحتوي على كسر إيجابي لمدة 5 دقائق في 300 × ز.</li>
	<li>إزالة supernatant، resuspend في 500 ميكرولتر من العازلة MACS والاحتفاظ بها في 4 درجة مئوية.</li>
	<li>عد إجمالي عدد الخلايا باستخدام جهاز عد الخلايا الشائعة.</li>
	<li>إعداد تعليق الخلية من كسر مفروز موجب يحتوي على 2 × 105 خلايا / ميكرول في المخزن المؤقت MACS والاحتفاظ عند 4 درجة مئوية</li>
</ol>4. زرع MAC فرزها الخلايا السلائف مستقبلات ضوئية في شبكية العين الماوس
<ol><li>تأكد من أن يكون كل من الحلول التالية جاهزة: 1 مل برنامج تلفزيوني معقم أو HBSS، 10 ميكرولتر DNAse I، 1-2 مل deionized عقيمة H2O، aliquots من كسور تعليق الخلية في 4 درجة مئوية.</li>
	<li>تخدير الماوس الكبار(أي 2-4 أشهر من العمر) مع حقن داخل الصفاق من هيدروكلوريد ميدتوميدين (0.01 ملغ/10 غرام وزن الجسم), الكيتامين (0.75 ملغ/10 غرام وزن الجسم). ثم القيام بحقن تحت الجلد من البوبرينورفين (0.05 ملغ / كغ وزن الجسم) لتخفيف الألم.</li>
	<li>توسيع التلاميذ مع انخفاض فينيليفرين 2.5٪ تروبيكميد 0.5٪.</li>
	<li>إصلاح الماوس في حامل رأس الماوس ومكان تحت المجهر ستيريو.</li>
	<li>تطبيق قطرة من هلام Visidic لمنع تجفيف العين.</li>
	<li>جعل ثقب صغير على الحدود بين تصلب القرنية (على التوالي أورا سيراتا)باستخدام عقيمة 30 G 1/2 في إبرة.</li>
	<li>قطع غطاء الشريحة المشتركة إلى قطع صغيرة (حوالي 5 ملم × 5 ملم) باستخدام قلم الماس، ووضع واحدة من هذه القطع على رأس القرنية، مما يسمح التصور المباشر للشبكية.</li>
	<li>قم بغسل حقنة الميكرويتر المفروقة عدة مرات بالماء المتأين.</li>
	<li>تحميل حقنة ميكرولتر مع 1 ميكرولتر من تعليق الخلية، إبرة مباشرة عرضيا من خلال الملتحمة والشد ووضع تحت السيطرة البصرية في النصف الأنفي من شبكية العين.</li>
	<li>لكمة بلطف ثقب في شبكية العين حتى الوصول إلى الفضاء تحت الشبكية، وحقن تعليق الخلية في الفضاء تحت الشبكية.</li>
	<li>مراقبة انفصال الثيران من شبكية العين، والتي ينبغي أن تكون موحدة، وتغطي ما يقرب من 1/4 من مساحة الشبكية دون أي نزيف.</li>
	<li>سحب الحقنة بلطف، ثقب الشبكية الأختام تلقائيا.</li>
	<li>اغسل حقنة الميكرويتر عدة مرات بالماء المتأين.</li>
	<li>تحرير الماوس من حامل الرأس.</li>
	<li>استيقظ الماوس عن طريق حقن هيدروكلوريد atipamozole لعكس تأثير هيدروكلوريد ميدتوميدين.</li>
	<li>ضع الماوس لوقت الاستيقاظ في غرفة مظلمة دافئة (حوالي 25 درجة مئوية).</li>
	<li>في اليومين التاليين بعد الزرع ، يجب إعطاء البوبرينورفين (0.05 ملغ / كجم من وزن الجسم) عن طريق الحقن تحت الجلد في الصباح وبعد الظهر لتخفيف الألم.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Bartsch, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+cells+integrate+into+the+outer+nuclear+layer+and+differentiate+into+mature+photoreceptors+after+subretinal+transplantation+into+adult+mice.">Retinal cells integrate into the outer nuclear layer and differentiate into mature photoreceptors after subretinal transplantation into adult mice.</a> Exp. Eye Res. 86, 691-700 (2008).</li><li>MacLaren, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+repair+by+transplantation+of+photoreceptor+precursors.">Retinal repair by transplantation of photoreceptor precursors.</a> Nature. 444, 203-207 (2006).</li><li>Eberle, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Outer+segment+formation+of+transplanted+photoreceptor+precursor+cells.">Outer segment formation of transplanted photoreceptor precursor cells.</a> PLoS One. 7, (2012).</li><li>Lakowski, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cone+and+rod+photoreceptor+transplantation+in+models+of+the+childhood+retinopathy+Leber+congenital+amaurosis+using+flow-sorted+Crx-positive+donor+cells.">Cone and rod photoreceptor transplantation in models of the childhood retinopathy Leber congenital amaurosis using flow-sorted Crx-positive donor cells.</a> Hum. Mol. Genet. 19, 4545-4559 (2010).</li><li>Barber, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repair+of+the+degenerate+retina+by+photoreceptor+transplantation.">Repair of the degenerate retina by photoreceptor transplantation.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 110, 354-359 (2013).</li><li>Pearson, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Restoration+of+vision+after+transplantation+of+photoreceptors.">Restoration of vision after transplantation of photoreceptors.</a> Nature. , (2012).</li><li>Singh, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversal+of+end-stage+retinal+degeneration+and+restoration+of+visual+function+by+photoreceptor+transplantation.">Reversal of end-stage retinal degeneration and restoration of visual function by photoreceptor transplantation.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 110, (2013).</li><li>Eberle, D., Schubert, S., Postel, K., Corbeil, D., Ader, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+integration+of+transplanted+CD73-positive+photoreceptor+precursors+into+adult+mouse+retina.">Increased integration of transplanted CD73-positive photoreceptor precursors into adult mouse retina.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 52, 6462-6471 (2011).</li><li>Koso, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD73,+a+novel+cell+surface+antigen+that+characterizes+retinal+photoreceptor+precursor+cells.">CD73, a novel cell surface antigen that characterizes retinal photoreceptor precursor cells.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 50, 5411-5418 (2009).</li><li>Lakowski, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effective+transplantation+of+photoreceptor+precursor+cells+selected+via+cell+surface+antigen+expression.">Effective transplantation of photoreceptor precursor cells selected via cell surface antigen expression.</a> Stem Cells. 29, 1391-1404 (2011).</li><li>Akimoto, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+of+GFP+to+newborn+rods+by+Nrl+promoter+and+temporal+expression+profiling+of+flow-sorted+photoreceptors.">Targeting of GFP to newborn rods by Nrl promoter and temporal expression profiling of flow-sorted photoreceptors.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 103, 3890-3895 (2006).</li><li>Eiraku, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-organizing+optic-cup+morphogenesis+in+three-dimensional+culture.">Self-organizing optic-cup morphogenesis in three-dimensional culture.</a> Nature. 472, 51-56 (2011).</li><li>Nakano, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-formation+of+optic+cups+and+storable+stratified+neural+retina+from+human+ESCs.">Self-formation of optic cups and storable stratified neural retina from human ESCs.</a> Cell Stem Cell. 10, 771-785 (2012).</li><li>Osakada, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+the+generation+of+rod+and+cone+photoreceptors+from+mouse,+monkey+and+human+embryonic+stem+cells.">Toward the generation of rod and cone photoreceptors from mouse, monkey and human embryonic stem cells.</a> Nat. Biotechnol. 26, 215-224 (2008).</li><li>Lee, M. Y., Lufkin, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+&amp;#34;Three-step+MACS&amp;#34;:+a+novel+strategy+for+isolating+rare+cell+populations+in+the+absence+of+known+cell+surface+markers+from+complex+animal+tissue.">Development of the &amp;#34;Three-step MACS&amp;#34;: a novel strategy for isolating rare cell populations in the absence of known cell surface markers from complex animal tissue.</a> J. Biomol. Tech. 23, 69-77 (2012).</li></ol>

ولا يعلن صاحبا البلاغ عن وجود مصالح مالية متنافسة.

زرع تحت الشبكية من الخلايا السلائف مستقبلات ضوئية يمثل أداة موثوقة لتحقيق دمج هذه الخلايا الحساسة للضوء في شبكية العين المضيفة بأعداد كبيرة1,2. وهذا قد يسمح بإنشاء العلاج الخلوي لعلاج أمراض الشبكية التنكسية في المستقبل6. السكان المانحة من الخلايا، معزولة حاليا من شبكية العين PN 4، هو خليط م...

الرؤية هي واحدة من الحواس الرئيسية للبشر. ويشكل ضعف هذا الشعور والعمى أحد الأسباب الرئيسية للإعاقة في البلدان الصناعية. السبب الرئيسي لضعف البصر أو العمى هو انحطاط الشبكية ، الذي يتميز بفقدان الخلايا المستقبلة ضوئيا ، حيث يمكن ملاحظته في الضمور البقعي ، والتهاب الشبكية الصباغي ، وضمور المخروط القضيب ، وغيرها من الحالات. حتى الآن، لا يتوفر علاج فعال لاستعادة الرؤية المفقودة. في 2006 و 2008 ذكرت مختبرين مختلفين, مستقلة عن بعضها البعض, زرع ناجحة من الخلايا السلائف مستقبلات ضوئية قضيب في شبكية العين الفئران البرية الكبار1,2. وهكذا، تنشأ إمكانية زرع الخلايا السليفة مستقبلات ضوئية أيضا في شبكية العين المنحطة، لتحل محل مستقبلات ضوئية منحطة واستعادة الرؤية. في الواقع، وقد ثبت مؤخرا، أن مثل هذه الخلايا السلائف مستقبلات ضوئية زرع تثير معايير مورفولوجية من مستقبلات ضوئية ناضجة من النوع البري، مثل الأجزاء الخارجية المتقدمة بشكل صحيح3،المحطات متشابك على مقربة من الخلايا ثنائية القطب الذاتية وجسم الخلية المستديرة الموجودة في الطبقة النوويةالخارجية 2-4،فضلا عن القدرة على الاندماج وظيفيا في الدوائر العصبيةالمضيفة 5-7. أحد المبادئ الرئيسية لهذه الاستراتيجية هو استخدام الشبكية الفئران الصغيرة بعد الولادة اليوم 4 (PN 4، PN0 كما يوم الولادة)، مما أدى إلى خليط من أنواع مختلفة من الخلايا لزرع. على خلفية تطبيق علاجي في المستقبل ، يجب تنقية هذا الخليط لخلايا السلائف المستقبلة. وقد وصفت CD73 كأول علامة سطح الخلية محددة لتصورات ضوئية الشباب في شبكية العين8-10. هنا، ونحن نثبت طريقة تنقية الخلايا السلائف مستقبلات ضوئية على أساس هذه العلامة سطح الخلية ومع استخدام تقنية فرز الخلايا المرتبطة المغناطيسية (MACS). قد يكون ل MACS مزايا بالمقارنة مع تقنيات فرز الخلايا المنشطة بالفلورسنت ، نظرا لأوقات الفرز السريعة والتكيف الأسهل مع ظروف GMP. يمكننا أن نظهر إثراء ~ 90٪ ومعدل تكامل أعلى يصل إلى 3 أضعاف عند زرع السكان المخصبين في الفضاء تحت الشبكية في شبكية العين البرية الكبار. وهكذا، فإن المستقبل الضوئي القائم على MACS إثراء الخلايا السليفة وزرع تحت الشبكية، هي تقنيات موثوقة وواعدة لتطوير استراتيجية علاجية تجديدية لعلاج انحطاط الشبكية.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="585">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:195px;">Papain Dissociation System</td>
			<td style="width:111px;">Worthington&#160; Biochemical Corporation</td>
			<td style="width:103px;">LK003150</td>
			<td style="width:176px;">supplied DNase I is not used in the method</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">purified rat anti-mouse CD73, clone TY/23</td>
			<td style="width:111px;">BD Pharmingen</td>
			<td style="width:103px;">550738</td>
			<td style="width:176px;">Stock concentration 0.5mg/ml</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">Goat Anti-Rat IgG MicroBeads</td>
			<td style="width:111px;">Miltenyi</td>
			<td style="width:103px;">130-048-501</td>
			<td style="width:176px;">Total volume of 2ml</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">PBS</td>
			<td style="width:111px;">Gibco</td>
			<td style="width:103px;">10010-015</td>
			<td style="width:176px;">Used to count the total number of cells</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">DNase I</td>
			<td style="width:111px;">Sigma</td>
			<td style="width:103px;">D5025-150KU</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">HBSS</td>
			<td style="width:111px;">Gibco</td>
			<td style="width:103px;">14025050</td>
			<td style="width:176px;">Used for dissociation of the retinas</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">Trypan blue</td>
			<td style="width:111px;">Sigma</td>
			<td style="width:103px;">Fluka93595</td>
			<td style="width:176px;">Used to count the total number of cells</td>
		</tr>
		<tr height="100">
			<td height="100" style="height:100px;width:195px;">Vidisic</td>
			<td style="width:111px;">Dr. Mann Pharma / Andreae-Noris Zahn AG</td>
			<td style="width:103px;">-</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:195px;">Domitor</td>
			<td style="width:111px;">Pfizer</td>
			<td style="width:103px;">76579</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:195px;">Ketamin 10%</td>
			<td style="width:111px;">Ratiopharm</td>
			<td style="width:103px;">7538843</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:195px;">Antisedan</td>
			<td style="width:111px;">Pfizer</td>
			<td style="width:103px;">76590</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="81">
			<td height="81" style="height:81px;width:195px;">Phenylephrin 2.5%-Tropicamid 0.5%</td>
			<td style="width:111px;">University clinics Dresden pharmacy</td>
			<td style="width:103px;">-</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:195px;"></td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:103px;"></td>
			<td style="width:176px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:195px;">Name of Equipment</td>
			<td style="width:111px;">Company</td>
			<td style="width:103px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:176px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:195px;">Pre-Separation Filters</td>
			<td style="width:111px;">Miltenyi</td>
			<td style="width:103px;">130-041-407</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:195px;">LS Columns</td>
			<td style="width:111px;">Miltenyi</td>
			<td style="width:103px;">130-042-401</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:195px;">MACS MultiStand</td>
			<td style="width:111px;">Miltenyi</td>
			<td style="width:103px;">130-042-303</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:195px;">QuadroMACS Separator</td>
			<td style="width:111px;">Miltenyi</td>
			<td style="width:103px;">130-090-976</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:195px;">fire polish glass pasteur pipette</td>
			<td style="width:111px;">Brand</td>
			<td style="width:103px;">74777 20</td>
			<td style="width:176px;">The pipette&#8217;s tips need to be fire-polished and autoclaved.</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:195px;">MACS 15ml tube rack</td>
			<td style="width:111px;">Miltenyi</td>
			<td style="width:103px;">130-091-052</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:195px;">Cell count chamber</td>
			<td style="width:111px;">Carl Roth</td>
			<td style="width:103px;">T728.1</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">Sterile 15ml tubes</td>
			<td style="width:111px;">Greiner Bio-one</td>
			<td style="width:103px;">188271</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">Leica M651 MSD</td>
			<td style="width:111px;">Leica</td>
			<td style="width:103px;">M651 MSD</td>
			<td style="width:176px;">can be used instead of Olympus SZX10</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">Olympus SZX10</td>
			<td style="width:111px;">Olympus</td>
			<td style="width:103px;">SZX10</td>
			<td style="width:176px;">can be used instead of Leica M651 MSD</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">Olympus inverted stereo microscope CKX41</td>
			<td style="width:111px;">Olympus</td>
			<td style="width:103px;">CKX41</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">Cell culture hood Thermo Scientific MSC-Advance</td>
			<td style="width:111px;">Thermo scientific</td>
			<td style="width:103px;">51025411</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:195px;">1.5ml reaction tube</td>
			<td style="width:111px;">Sarstedt</td>
			<td style="width:103px;">727706400</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:195px;">2ml reaction tube</td>
			<td style="width:111px;">Sarstedt</td>
			<td style="width:103px;">72695</td>
			<td style="width:176px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">Eppendorf Centrifuge 5702</td>
			<td style="width:111px;">VWR (Eppendorf)</td>
			<td style="width:103px;">521-0733</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:195px;">Mouse head holder</td>
			<td style="width:111px;">myNeurolab</td>
			<td style="width:103px;">471030</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">BD Microlance 3 30G 1/2&#8221;</td>
			<td style="width:111px;">BD Pharmingen</td>
			<td style="width:103px;">304000</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">Hamilton microliter syringe 5&#181;l, 75RN</td>
			<td style="width:111px;">Hamilton</td>
			<td style="width:103px;">065-7634-01</td>
			<td style="width:176px;">delivered without needles</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">Hamilton RN special needle GA34</td>
			<td style="width:111px;">Hamilton</td>
			<td style="width:103px;">065-207434</td>
			<td style="width:176px;">Blunt, 12mm length</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:195px;">Vannas-T&#252;bingen Spring Scissors - 5mm Blades Straight</td>
			<td style="width:111px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:103px;">15003-08</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:195px;">Dumont #7 Forceps - Titanium Biologie</td>
			<td style="width:111px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:103px;">11272-40</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:195px;">Diamond pen</td>
			<td style="width:111px;">Tools-tech</td>
			<td style="width:103px;">-</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:195px;">15x15mm Cover slips</td>
			<td style="width:111px;">Sparks</td>
			<td style="width:103px;">MIC3366</td>
			<td style="width:176px;">-</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

subretinal transplantation of macs purified photoreceptor precursor cells into the adult mouse retina

ويمثل ضعف البصر والعمى الناجم عن فقدان خلايا استشعار الضوء في شبكية العين، أي المستقبلات الضوئية، السبب الرئيسي للإعاقة في البلدان الصناعية. يمثل استبدال المستقبلات الضوئية المتحللة عن طريق زرع الخلايا خيارا علاجيا محتملا في التطبيقات السريرية المستقبلية. في الواقع، أظهرت الدراسات السابقة السريرية الحديثة أن المستقبلات الضوئية غير الناضجة، المعزولة عن شبكية عين فأرة حديثي الولادة في اليوم الرابع بعد الولادة، لديها القدرة على الاندماج في شبكية العين الماوس الكبار بعد زرع تحت الشبكية. ولدت الخلايا المانحة مورفولوجيا مستقبلات ضوئية ناضجة بما في ذلك الأجزاء الداخلية والخارجية ، وجسم خلية مستديرة تقع في الطبقة النووية الخارجية ، ومحطات متشابكة على مقربة من الخلايا ثنائية القطب الذاتية. والواقع أن التقارير الأخيرة أظهرت أن المستقبلات الضوئية المانحة تندمج وظيفيا في الدوائر العصبية للفئران المضيفة. لتطبيق السريرية في المستقبل من هذا النهج استبدال الخلايا، تعليق تنقية الخلايا التي تختارها يجب أن تتولد ووضعها في الموضع الصحيح للاندماج السليم في العين. لإثراء سلائف المستقبلات الضوئية، ينبغي أن يستند الفرز إلى مستضدات سطح الخلية المحددة لتجنب التعديل الوراثي للمراسل للخلايا المانحة. هنا نعرض فرز الخلايا المرتبطة بالمغناطيسية (MACS) - إثراء سلائف مستقبلات ضوئية قضيب قابلة للزراعة معزولة عن شبكية العين الوليدية للفئران المراسلة الخاصة بالمصولجان الضوئي استنادا إلى علامة سطح الخلية CD73. الحضانة مع الأجسام المضادة لمكافحة CD73 تليها الأجسام المضادة الثانوية المقترنة حبة صغيرة سمح لإثراء السلائف مستقبلات ضوئية قضيب من قبل MACS إلى ما يقرب من 90٪. بالمقارنة مع قياس التدفق الخلوي ، فإن MACS لديه ميزة أنه يمكن تطبيقه بسهولة على معايير GMP وأنه يمكن فرز كميات عالية من الخلايا في فترات زمنية قصيرة نسبيا. أدى حقن تعليق الخلايا المخصب في الفضاء تحت الشبكي للفئران البرية البالغة إلى ارتفاع معدل التكامل بمقدار 3 أضعاف مقارنة بتعليق الخلايا غير المفحذ.

من أجل تقييم قدرة مستقبلات ضوئية قضيب على الاندماج في شبكية العين الماوس، تم استخدام خط مراسل الماوس، الذي هو مدفوع GFP من قبل سستة لووسين الشبكية العصبية (Nrl، Nrl-GFP) المروج11. Nrl هو أقرب علامة على مستقبلات ضوئية قضيب بدء التعبير في E12.5 طوال مرحلة البلوغ، مما يسمح وضع علامات محددة من الخلا?...

Watch this Scientific Journal Video about Subretinal Transplantation of MACS Purified Photoreceptor Precursor Cells into the Adult Mouse Retina at JoVE.com

Subretinal Transplantation of MACS Purified Photoreceptor Precursor Cells into the Adult Mouse Retina

زرع الخلايا يمثل استراتيجية لعلاج انحطاط الشبكية تتميز بفقدان مستقبلات ضوئية. هنا نصف طريقة لإثراء المستقبلات الضوئية القابلة للزراعة وتطعيمها تحت الشبكية في الفئران البالغة.

زرع تحت الشبكية من MACS تنقية الخلايا السلائف مستقبلات ضوئية في شبكية العين الماوس الكبار

Vision impairment and blindness due to the loss of the light-sensing cells of the retina, i.e. photoreceptors, represents the main reason for disability ...

subretinal-transplantation-macs-purified-photoreceptor-precursor

Research

JoVE Journal

Medicine

10.6K Views.  Technische Universität Dresden. زرع الخلايا يمثل استراتيجية لعلاج انحطاط الشبكية تتميز بفقدان مستقبلات ضوئية. هنا نصف طريقة لإثراء المستقبلات الضوئية القابلة للزراعة وتطعيمها تحت الشبكية في الفئران البالغة.

Video: Subretinal Transplantation of MACS Purified Photoreceptor Precursor Cells into the Adult Mouse Retina

A Mouse Model of in Utero Transplantation

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus. For example, in utero transplantation (IUT) of hematopoietic stem cells has been used to successfully treat patients with severe combined immunodeficiency.1,2 In several other conditions, however, IUT has been attempted without success.3 Given these mixed results, the availability of an efficient non-human model to study the biological sequelae of stem cell transplantation and gene therapy is critical to advance this field. We and others have used the mouse model of IUT to study factors affecting successful engraftment of in utero transplanted hematopoietic stem cells in both wild-type mice4-7 and those with genetic diseases.8,9 The fetal environment also offers considerable advantages for the success of in utero gene therapy. For example, the delivery of adenoviral10, adeno-associated viral10, retroviral11, and lentiviral vectors12,13 into the fetus has resulted in the transduction of multiple organs distant from the site of injection with long-term gene expression. in utero gene therapy may therefore be considered as a possible treatment strategy for single gene disorders such as muscular dystrophy or cystic fibrosis. Another potential advantage of IUT is the ability to induce immune tolerance to a specific antigen. As seen in mice with hemophilia, the introduction of Factor IX early in development results in tolerance to this protein.14 
In addition to its use in investigating potential human therapies, the mouse model of IUT can be a powerful tool to study basic questions in developmental and stem cell biology. For example, one can deliver various small molecules to induce or inhibit specific gene expression at defined gestational stages and manipulate developmental pathways. The impact of these alterations can be assessed at various timepoints after the initial transplantation. Furthermore, one can transplant pluripotent or lineage specific progenitor cells into the fetal environment to study stem cell differentiation in a non-irradiated and unperturbed host environment.
The mouse model of IUT has already provided numerous insights within the fields of immunology, and developmental and stem cell biology. In this video-based protocol, we describe a step-by-step approach to performing IUT in mouse fetuses and outline the critical steps and potential pitfalls of this technique.

A Mouse Model of in Utero Transplantation

The mouse model of in utero transplantation is a versatile tool that can be used to study the potential clinical applications of stem cell transplantation and gene therapy in the fetus. In this protocol, we present a general approach to performing this technique

نموذج الفأر من في الرحم زراعة

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus.  For example, in ...

Subretinal Injection of Gene Therapy Vectors and Stem Cells in the Perinatal Mouse Eye

The loss of sight affects approximately 3.4 million people in the United States and is expected to increase in the upcoming years.1 Recently, gene therapy and stem cell transplantations have become key therapeutic tools for treating blindness resulting from retinal degenerative diseases. Several forms of autologous transplantation for age-related macular degeneration (AMD), such as iris pigment epithelial cell transplantation, have generated encouraging results, and human clinical trials have begun for other forms of gene and stem cell therapies.2 These include RPE65 gene replacement therapy in patients with Leber's congenital amaurosis and an RPE cell transplantation using human embryonic stem (ES) cells in Stargardt's disease.3-4 Now that there are gene therapy vectors and stem cells available for treating patients with retinal diseases, it is important to verify these potential therapies in animal models before applying them in human studies. The mouse has become an important scientific model for testing the therapeutic efficacy of gene therapy vectors and stem cell transplantation in the eye.5-8 In this video article, we present a technique to inject gene therapy vectors or stem cells into the subretinal space of the mouse eye while minimizing damage to the surrounding tissue.

This surgical technique illustrates the injection of gene therapy vectors and stem cells into the subretinal space of the mouse eye.

تحت الشبكية حقن المتجهات العلاج الجيني والخلايا الجذعية في العين ماوس

The loss of sight affects approximately 3.4 million people in the United States and is expected to increase in the upcoming years.1 Recently, gene therapy ...

Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the occurrence of subretinal hemorrhage can affect photoreceptor cell death in the detached retina. Hence, it is advantageous to create reproducible RDs without subretinal hemorrhage for evaluating photoreceptor cell death. We modified a previously reported method to create bullous and persistent RDs in a reproducible location with rare occurrence of subretinal hemorrhage. The critical step of this modified method is the creation of a self-sealing scleral incision, which can prevent leakage of sodium hyaluronate after injection into the subretinal space. To make the self-sealing scleral incision, a scleral tunnel is created, followed by scleral penetration into the choroid with a 30 G needle. Although choroidal hemorrhage may occur during this step, astriction with a surgical spear reduces the rate of choroidal hemorrhage. This method allows a more reproducible and reliable model of photoreceptor death in diseases that involve RD such as rhegmatogenous RD, retinopathy of prematurity, diabetic retinopathy, central serous chorioretinopathy, and age-related macular degeneration (AMD).

Creating experimental retinal detachments with a reproducible and sustained height of detachment, and without subretinal hemorrhage, is important for studying the pathophysiology of photoreceptor cell loss in retinal disease and evaluating potential therapeutic interventions. Here, we report such a method in detail.

شبكية العين مفرزة النموذجي في القوارض بواسطة حقن تحت الشبكية من هيالورونات الصوديوم

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the ...

Transplantation of Pulmonary Valve Using a Mouse Model of Heterotopic Heart Transplantation

Tissue engineered heart valves, especially decellularized valves, are starting to gain momentum in clinical use of reconstructive surgery with mixed results. However, the cellular and molecular mechanisms of the neotissue development, valve thickening, and stenosis development are not researched extensively. To answer the above questions, we developed a murine heterotopic heart valve transplantation model. A heart valve was harvested from a valve donor mouse and transplanted to a heart donor mouse. The heart with a new valve was transplanted heterotopically to a recipient mouse. The transplanted heart showed its own heartbeat, independent of the recipient&#8217;s heartbeat. The blood flow was quantified using a high frequency ultrasound system with a pulsed wave Doppler. The flow through the implanted pulmonary valve showed forward flow with minimal regurgitation and the peak flow was close to 100 mm/sec. This murine model of heart valve transplantation is highly versatile, so it can be modified and adapted to provide different hemodynamic environments and/or can be used with various transgenic mice to study neotissue development in a tissue engineered heart valve.

In order to understand the cellular and molecular mechanisms underlying neotissue formation and stenosis development in tissue engineered heart valves, a murine model of heterotopic heart valve transplantation was developed. A pulmonary heart valve was transplanted to recipient using the heterotopic heart transplantation technique.

زرع صمام الرئوي عن طريق نموذج الفأر من غيري مكاني القلب زرع

Tissue engineered heart valves, especially decellularized valves, are starting to gain momentum in clinical use of reconstructive surgery with mixed ...

Mouse Kidney Transplantation: Models of Allograft Rejection

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely replicates both the technical and pathological processes that occur in human renal transplantation. Although mouse models of allogeneic rejection in organs other than the kidney exist, and are more technically feasible, there is evidence that different organs elicit disparate rejection modes and dynamics, for instance the time course of rejection in cardiac and renal allograft differs significantly in certain strain combinations. This model is an attractive tool for many reasons despite its technical challenges. As inbred mouse strain haplotypes are well characterized it is possible to choose donor and recipient combinations to model acute allograft rejection by transplanting across MHC class I and II loci. Conversely by transplanting between strains with similar haplotypes a chronic process can be elicited were the allograft kidney develops interstitial fibrosis and tubular atrophy. We have modified the surgical technique to reduce operating time and improve ease of surgery, however a learning curve still needs to be overcome in order to faithfully replicate the model. This study will provide key points in the surgical procedure and aid the process of establishing this technique.

Here, we present a protocol to study the immunology of rejection. The surgical model presented reports a short operating time and a concise technique. Depending on the donor-recipient strain combination, the transplanted kidney may develop acute cellular rejection or chronic allograft damage, defined by interstitial fibrosis and tubular atrophy.

الماوس زرع الكلى: نماذج من طعم خيفي رفض

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely ...

Performing Subretinal Injections in Rodents to Deliver Retinal Pigment Epithelium Cells in Suspension

The conversion of light into electrical impulses occurs in the outer retina and is accomplished largely by rod and cone photoreceptors and retinal pigment epithelium (RPE) cells. RPE provide critical support for photoreceptors and death or dysfunction of RPE cells is characteristic of age-related macular degeneration (AMD), the leading cause of permanent vision loss in people age 55 and older. While no cure for AMD has been identified, implantation of healthy RPE in diseased eyes may prove to be an effective treatment, and large numbers of RPE cells can be readily generated from pluripotent stem cells. Several interesting questions regarding the safety and efficacy of RPE cell delivery can still be examined in animal models, and well-accepted protocols used to inject RPE have been developed. The technique described here has been used by multiple groups in various studies and involves first creating a hole in the eye with a sharp needle. Then a syringe with a blunt needle loaded with cells is inserted through the hole and passed through the vitreous until it gently touches the RPE. Using this injection method, which is relatively simple and requires minimal equipment, we achieve consistent and efficient integration of stem cell-derived RPE cells in between the host RPE that prevents significant amount of photoreceptor degeneration in animal models. While not part of the actual protocol, we also describe how to determine the extent of the trauma induced by the injection, and how to verify that the cells were injected into the subretinal space using in vivo imaging modalities. Finally, the use of this protocol is not limited to RPE cells; it may be used to inject any compound or cell into the subretinal space.

Here we present a community accepted protocol in multimedia format for subretinally injecting a bolus of RPE cells in rats and mice. This approach can be used for determining rescue potentials, safety profiles, and survival capacities of grafted RPE cells upon implantation in animal models of retinal degeneration.

أداء تحت الشبكية الحقن في القوارض لتسليم خلايا الظهارة الصبغية الشبكية في تعليق

The conversion of light into electrical impulses occurs in the outer retina and is accomplished largely by rod and cone photoreceptors and retinal pigment ...

Encapsulation Thermogenic Preadipocytes for Transplantation into Adipose Tissue Depots

Cell encapsulation was developed to entrap viable cells within semi-permeable membranes. The engrafted encapsulated cells can exchange low molecular weight metabolites in tissues of the treated host to achieve long-term survival. The semipermeable membrane allows engrafted encapsulated cells to avoid rejection by the immune system. The encapsulation procedure was designed to enable a controlled release of bioactive compounds, such as insulin, other hormones, and cytokines. Here we describe a method for encapsulation of catabolic cells, which consume lipids for heat production and energy dissipation (thermogenesis) in the intra-abdominal adipose tissue of obese mice. Encapsulation of thermogenic catabolic cells may be potentially applicable to the prevention and treatment of obesity and type 2 diabetes. Another potential application of catabolic cells may include detoxification from alcohols or other toxic metabolites and environmental pollutants.

Here, we present a protocol for encapsulation of catabolic cells, which consume lipids for heat production in intra-abdominal adipose tissue and increase energy dissipation in obese mice.

التغليف حرارة Preadipocytes للزراعة إلى الدهنية مستودعات الأنسجة

Cell encapsulation was developed to entrap viable cells within semi-permeable membranes. The engrafted encapsulated cells can exchange low molecular ...

Orthotopic Hind Limb Transplantation in the Mouse

In vivo animal model systems, and in particular mouse models, have evolved into powerful and versatile scientific tools indispensable to basic and translational research in the field of transplantation medicine. A vast array of reagents is available exclusively in this setting, including mono- and polyclonal antibodies for both diagnostic and interventional applications. In addition, a vast number of genotyped, inbred, transgenic, and knock out strains allow detailed investigation of the individual contributions of humoral and cellular components to the complex interplay of an immune response and make the mouse the gold standard for immunological research. 
Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) delineates a novel field of transplantation using allografts to replace "like with like" in patients suffering traumatic or congenital tissue loss. This surgical methodological protocol shows the use of a non-suture cuff technique for super-microvascular anastomosis in an orthotopic mouse hind limb transplantation model. The model specifically allows for comparison between established paradigms in solid organ transplantation with a novel form of transplants consisting of various different tissue components. Uniquely, this model allows for the transplantation of a viable vascularized bone marrow compartment and niche that have the potential to exert a beneficial effect on the balance of immune acceptance and rejection. This technique provides a tool to investigate alloantigen recognition and allograft rejection and acceptance, as well as enables the pursuit of functional nerve regeneration studies to further advance this novel field of transplantation.

This novel model for orthotopic hind limb transplantation in the mouse, applying a non-suture cuff technique for super-microvascular anastomosis, provides a powerful tool for in&#160;vivo mechanistic immunological research related to vascularized composite allotransplantation (VCA).

مثلي هند الاطراف زرع في ماوس

In vivo animal model systems, and in particular mouse models, have evolved into powerful and versatile scientific tools indispensable to basic and ...

A Step by Step Protocol for Subretinal Surgery in Rabbits

Age related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa, and other RPE related diseases are the most common causes for irreversible loss of vision in adults in industrially developed countries. RPE transplantation appears to be a promising therapy, as it may replace dysfunctional RPE, restore its function, and thereby vision.
Here we describe a method for transplanting a cultured RPE monolayer on a scaffold into the subretinal space (SRS) of rabbits. After vitrectomy xenotransplants were delivered into the SRS using a custom made shooter consisting of a 20-gauge metallic nozzle with a polytetrafluoroethylene (PTFE) coated plunger. The current technique evolved in over 150 rabbit surgeries over 6 years. Post-operative follow-up can be obtained using non-invasive and repetitive in vivo imaging such as spectral domain optical coherence tomography (SD-OCT) followed by perfusion-fixed histology.
The method has well-defined steps for easy learning and high success rate. Rabbits are considered a large eye animal model useful in preclinical studies for clinical translation. In this context rabbits are a cost-efficient and perhaps convenient alternative to other large eye animal models.

Retinal pigment epithelium (RPE) replacement strategies and gene-based therapy are considered for several retinal degenerative conditions. For clinical translation, large eye animal models are required to study surgical techniques applicable in patients. Here we present a rabbit model for subretinal surgery geared towards RPE transplantation, which is versatile and cost-efficient.

خطوة بالبروتوكول الخطوة لجراحة تحت الشبكية في الأرانب

Age related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa, and other RPE related diseases are the most common causes for irreversible loss of vision in ...

Transplantation Into the Mouse Ovarian Fat Pad

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic transplantation of ovarian surface and tubal epithelia include intraperitoneal and intrabursal administration of cells. The respective limitations of these methods include poorly defined location of injected cells and limited space volume. Furthermore, they are poorly suited for long-term structural preservation of transplanted organs. To address these challenges, we have developed an alternative approach, which is based on the introduction of cells and tissue fragments into the mouse fat pad. The mouse ovarian fat pad is located in the immediate vicinity of the ovary and uterine tube (aka oviduct, fallopian tube), and provides a familiar microenvironment for cells and tissues of these organs. In our approach fluorescence-labeled mouse and human cells, and fragments of the uterine tube are engrafted by using minimally traumatic dorsal incision surgery. Transplanted cells and their outgrowths are easily located in the ovarian fat pad for over 40 days. Long-term transplantation of the entire uterine tube allows correct preservation of all principle tissue components, and does not result in adverse side effects, such as fibrosis and inflammation. Our approach should be uniquely applicable for answering important biological questions such as differentiation, regenerative and neoplastic potential of specific cell populations. Furthermore, it should be suitable for studies of microenvironmental factors in normal development and cancer.

We describe an ovarian fad pad transplantation assay suitable for studies of normal and transformed epithelia of the female reproductive tract. The mouse fat pad allows transplantation of large tissue fragments, is easily accessible for surgery and imaging, and provides the most favorable native environment for tissues of M&#252;llerian origin.

زرع في وسادة الفأرة المبيض الدهون

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic ...