وأيد هذا العمل من قبل R01 GM088156 وT32 HL007713-18. نود أن نشكر بيل ومايكل Pennie كارمان من جامعة ولاية بنسلفانيا البحوث الأجهزة محل لمساعدتهم في تجميع جهاز لدينا المقوم منعكس.

وقد تمت الموافقة على جميع الإجراءات التي تنطوي على الحيوانات الواردة في هذه الوثيقة من قبل لجنة جامعة المؤسسية رعاية الحيوان واستخدام بنسلفانيا. 1. نظرة عامة على جهاز اختبار <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتكون جهاز الاختبار من 24 واضحة الاكريليك غرف أسطواني 10 سم في الطول و 5 سم في القطر (الحجم الكلي لل200 مل). وهذا الحجم هو المناسب لنموذجي 25 غ الماوس الكبار. غرف لديها منافذ في نهاية كل ومدخل ومخرج الغاز. نهاية منفذ غير قابلة للإزالة حتى أن الحيوانات قد تكون محملة بسهولة في الغرفة. وأغلقت فتحات ميناء الغاز بعناية مع شريط تفلون، بينما تستخدم مقاطع المطاط يا الدائري لختم نهاية القابلة للإزالة من غرف أسطواني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> هي التي شنت كل من المجلسين على رف أن يجلس داخل حمام مائي. يتم تركيب رف بحيث يتم المغمورة فقط الجزء السفلي من الغرف (تحت مداخل الغاز). للاستقرار، ونهاية الجزء الخلفي من غرفة تقع على الدعم بحيث chamb كاملإيه يجلس أفقيا. وهذا يضمن حتى الاتصال للغرفة بأكملها مع الحمام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أنابيب البولي ايثيلين يربط دبابة الأكسجين إلى المرذاذ مخدر، ثم يمر من خلال 10 لتر / دقيقة تدفق متر. أنابيب تنقسم إلى 25 المقاومات الصغيرة قطرها يساوي طول لضمان يتم تسليم تدفق يساوي كل من 24 غرف ومحلل وكيل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خطوط فراغ خروج كل من المجلسين في الطرف المقابل للمدخل الغاز. هذا يعزز تدفق أحادي الاتجاه الذي يلغي إعادة التنفس من ثاني أكسيد الكربون الزفير. خطوط فراغ في مشعب تجمع للاتصال على خط الشفط في المنزل. صمام البوب ​​قبالة على طول الخط الرئيسي فراغ يضمن ظروف الضغط الجوي داخل كل غرفة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم ملء حوض الاستحمام مع ما يكفي من المياه في الاتصال بالكامل أسفل كل غرفة. تعميم المياه من خلال الحمام والحفاظ على ثابت 37 درجة مئوية بواسطة مضخة. </li></ol> 2. تحقق النظام قبل التعرض <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Cهيك أن درجة حرارة الحمام المائي هو 37 درجة مئوية في جميع أنحاء الحمام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تدفق الأكسجين بمعدل 5 لتر / دقيقة (200 مل / دقيقة لكل غرفة + وكيل محلل). يغرق كل غرفة تحت الماء والبحث عن الفقاعات أو دخول الماء إلى الغرفة، وكلاهما يدل على وجود تسرب. ختم أي تسرب قبل بدء التجربة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لكل غرفة، وربط 500 مل / دقيقة تدفق متر في السطر بعد غرفة للتأكد من أن التدفقات ومتوازنة عبر كل من خطوط الغاز 25. وهذا يضمن أن تدفقات المدخلات 5 لتر / دقيقة سيتم توزيعها بالتساوي بحيث يتلقى كل غرفة 200 مل / دقيقة التدفق. أي غرفة لا تلقي تدفق المتوقع ينبغي أن يكون تدفق وتدفق أنابيب التحقق من العوائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> معايرة محلل كيل لضمان القراءة من 0.00٪ isoflurane وعند 100٪ من الأكسجين يتدفق. </li></ol> 3. زرع باقة درجة الحرارة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أسبوع واحد قبل التعود، تخدير كل فأر مع 2٪ isoflurane و. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعقيم منطقة الرقبة الظهرية مع بتدين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن تحت الجلد مستجيب درجة الحرارة ما بين لوحي الكتف باستخدام العقيمة، الجاهزة إبرة محقن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رصد موقع الحقن اليومية للعدوى والهجرة من مستجيب. </li></ol> 4. روض الحيوانات لاختبار الدوائر <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل أربعة أيام من أول تقييم، ووضع جميع الفئران في غرف فردية لمدة 2 ساعة مع 100٪ من الأكسجين المتدفقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر الخطوة 4.1 يوميا لمدة أربعة أيام قبل التقييم لتجنب آثار الخلط من التوتر بسبب البيئة الجديدة. </li></ol> 5. تنفيذ التدخل الدوائي التي ترغب في اختبار للتأثيرات على التخدير الحساسية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قد يكون هذا التدخل لحقن التجسيمي في جزء معين من الدماغ 24، حقنة في الوريد أو داخل الصفاق 25، أو تسليم المخدرات إلى منطقة محددة في الدماغ عبر قنية 26. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لأن هذه الإجراءات نفسها قد تتغير حساسية مخدر بالمقارنة مع حيوان السذاجة، يجب أن تخضع لمجموعة التحكم السليم نفس الإجراء مع حقن السيارة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأكد من أن التدخل الدوائي لديه مدة طويلة بشكل مناسب للعمل إذا كنت تخطط للقيام تدريجي زيادة و / أو خفض تحديد حساسية مخدر كما هو موضح في الخطوة 6 أدناه، وإلا، انتقل إلى الخطوة 7. </li></ol> 6. تقييم التخدير الحساسية باستخدام تحديد شكل خطوات EC 50 لالتعريفي وظهور <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع كل حيوان في غرف فردية مع 100٪ من الأكسجين المتدفقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعيين تركيز isoflurane وإلى 0.4٪ * لمدة 15 دقيقة. خلال 2 دقيقة الأخيرة من هذه الفترة، وتقييم المنعكس المقوم كل حيوان من قبل المتداول بلطف الغرفة حتى يتم وضع الماوس على ظهرها. يعتبر المنعكس المقوم أن تكون سليمة إذا وفقط إذا كان الفأر هو قادرة على استعادة جميعمن الكفوف إلى أرضية الغرفة في غضون 2 دقيقة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> * لاحظ أن 0.4٪ isoflurane وsubhypnotic هو جرعة في الفئران C57BL/6J. إن وجدت الفئران تفقد المنعكس المقوم بها في الخطوة الأولى، كانت الجرعة الأولي كبيرة جدا وينبغي تخفيض في أيام لاحقة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسجيل حالة المنعكس التقويمي لكل الماوس ومسح كل البيانات الماوس لدرجة الحرارة. ويظهر سجل القالب في الجدول 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> زيادة تركيز isoflurane والتي كتبها ~ 0.05٪ لمدة 15 دقيقة ثم كرر الخطوة 7.2. نواصل القيام بهذا حتى فقدوا كل الحيوانات المنعكس المقوم بهم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اختياري: كرر نفس الإجراء لخفض جرعات isoflurane وتدريجي حتى استعادوا جميع الحيوانات المنعكس المقوم (انظر الخطوة 6.3). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لإنهاء التجربة، إيقاف isoflurane وطرد والنظام بأكمله مع 100٪ من الأكسجين لمدة 15 دقيقة. هذا سوف يساعد على منع نقص الأكسجة كما استرداد الفئران قبل إعادتهم إلى أقفاص وطنهم وسوف حماية experimenter من أي تعرض مخدر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اختياري: إذا كان عدد الحيوانات أو عدد تركيزات مخدر تقتصر بسبب القيود المفروضة على الموارد أو الوقت، والتقديرات وخاصة المعلمة منحنى مناسبا المنحدر قد يكون هيل بالتقدير تقدير الخطأ، وانخفاض زورا. في مثل هذه الحالات، قد يكون من الضروري تكرار قياس حساسية مخدر موضح في الخطوات 6،1-6،6 على ما يصل إلى يومين تجريبية إضافية للحصول على كامل المعلمة هيل المنحدر الحقيقي وتقديره الخطأ المقابلة. </li></ol> 7. تقييم التغييرات على المدى القصير في التخدير الحساسية مع الوقت لظهور <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع كل حيوان في غرف فردية مع 100٪ من الأكسجين المتدفقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعيين تركيز isoflurane وإلى 1.2٪، وهو ما يعادل تحريض ED 99 لمن النوع البري الفئران C57BL/6J 20. الحفاظ على ل30-60 دقيقة وهذا يتوقف على المدة المتوقعة للعمل من التدخل الحاد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأكيد LORR فييتم وضع جميع الحيوانات من قبل المتداول بلطف كل غرفة الفئران حتى على ظهورهم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إيقاف isoflurane وتدفق 100٪ والأكسجين. قياس الوقت حتى يستعيد كل حيوان المنعكس المقوم لها. ويعرف ذلك من خلال إخضاع جميع الكفوف الأربعة على أرضية الغرفة، وأكد من خلال وجود ثلاثة اختبارات متتالية مع المنعكس المقوم سليمة. </li></ol>

<ol>
	<li>Meyer, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zur+theorie+der+alkoholnarkose.+I.+Mittheilung.+Welche+Eigenschaft+der+An#228;sthetica+bedingt+ihre+narkotische+Wirkung?.">Zur theorie der alkoholnarkose. I. Mittheilung. Welche Eigenschaft der An#228;sthetica bedingt ihre narkotische Wirkung?.</a> Naunyn Schmiedebergs Arch. Exp. Pathol. Pharmakol. 42, 109-137 .</li><li>Overton, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Studien &#252;ber die Narkose: Zugleich ein Beitrag zur allgemeinen Pharmakologie. , (1901).</li><li>Bignall, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ontogeny+of+levels+of+neural+organization:+the+righting+reflex+as+a+model.">Ontogeny of levels of neural organization: the righting reflex as a model.</a> Exp. Neurol. 3 (3), 566-573 (1974).</li><li>Franks, N. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=General+anaesthesia:+from+molecular+targets+to+neuronal+pathways+of+sleep+and+arousal.">General anaesthesia: from molecular targets to neuronal pathways of sleep and arousal.</a> Nat. Rev. Neurosci. 9 (5), 370-386 (2008).</li><li>Smith, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Responses+of+laboratory+animals+to+some+injectable+anaesthetics.">Responses of laboratory animals to some injectable anaesthetics.</a> Lab. Anim. 27 (1), 30-39 (1993).</li><li>Schernthaner, A., Lendl, C., Busch, R., Henke, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+evaluation+of+three+medetomidine--midazolam--ketamine+combinations+for+neutering+of+ferrets+(Mustela+putorius+furo)].">Clinical evaluation of three medetomidine--midazolam--ketamine combinations for neutering of ferrets (Mustela putorius furo)].</a> Berliner und M&#252;nchener tier&#228;rztliche Wochenschrift. 121 (1-2), 1-10 (2008).</li><li>Mohammad, F. K., Zangana, I. K., Abdul-Latif, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Medetomidine+sedation+in+sheep.">Medetomidine sedation in sheep.</a> Zentralblatt f&#252;r Veterin&#228;rmedizin. Reihe A. 40 (5), 328-331 (1993).</li><li>Nicholls, E. A., Louie, G. L., Prokocimer, P. G., Maze, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Halothane+anesthetic+requirements+are+not+affected+by+aminophylline+treatment+in+rats+and+dogs.">Halothane anesthetic requirements are not affected by aminophylline treatment in rats and dogs.</a> Anesthesiology. 65 (6), 637-641 (1986).</li><li>Tung, A., Szafran, M. J., Bluhm, B., Mendelson, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sleep+Deprivation+Potentiates+the+Onset+and+Duration+of+Loss+of+Righting+Reflex+Induced+by+Propofol+and+Isoflurane.">Sleep Deprivation Potentiates the Onset and Duration of Loss of Righting Reflex Induced by Propofol and Isoflurane.</a> Anesthesiology. 97 (4), 906-911 (2002).</li><li>Pal, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+Minimum+Alveolar+Concentration+for+Isoflurane+and+Sevoflurane+in+a+Rodent+Model+of+Human+Metabolic+Syndrome.">Determination of Minimum Alveolar Concentration for Isoflurane and Sevoflurane in a Rodent Model of Human Metabolic Syndrome.</a> Anesth. 2 (2), 297-302 (2012).</li><li>Eger, E. I., Saidman 2nd, ., J, L., Brandstater, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temperature+dependence+of+halothane+and+cyclopropane+anesthesia+in+dogs:+correlation+with+some+theories+of+anesthetic+action.">Temperature dependence of halothane and cyclopropane anesthesia in dogs: correlation with some theories of anesthetic action.</a> Anesthesiology. 26 (6), 764-770 (1965).</li><li>Vitez, T. S., White, P. F., Eger, E. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=2nd+Effects+of+hypothermia+on+halothane+MAC+and+isoflurane+MAC+in+the+rat.">2nd Effects of hypothermia on halothane MAC and isoflurane MAC in the rat.</a> Anesthesiology. 41 (1), 80-81 (1974).</li><li>Antognini, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypothermia+eliminates+isoflurane+requirements+at+20+degrees+C.">Hypothermia eliminates isoflurane requirements at 20 degrees C.</a> Anesthesiology. 78 (6), 1152-1156 (1993).</li><li>McKenzie, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+temperature+on+the+anaesthetic+potency+of+halothane,+enflurane+and+ethanol+in+Daphnia+magna+(Cladocera:+Crustacea).">Effects of temperature on the anaesthetic potency of halothane, enflurane and ethanol in Daphnia magna (Cladocera: Crustacea).</a> Comp. Biochem. Physiol. C. 101 (1), 15-19 (1992).</li><li>Icaza, E. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isoflurane-Induced+Changes+in+Righting+Response+and+Breathing+are+Modulated+by+RGS+Proteins.">Isoflurane-Induced Changes in Righting Response and Breathing are Modulated by RGS Proteins.</a> Anesth. Analg. 109 (5), 1500-1505 (2009).</li><li>Drexler, B., Antkowiak, B., Engin, E., Rudolph, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+characterization+of+anesthetic+targets+by+mouse+molecular+genetics+approaches.">Identification and characterization of anesthetic targets by mouse molecular genetics approaches.</a> Can. 2 (2), 178-190 (2011).</li><li>Wafford, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiating+the+role+of+gamma-aminobutyric+acid+type+A+(GABAA)+receptor+subtypes.">Differentiating the role of gamma-aminobutyric acid type A (GABAA) receptor subtypes.</a> Biochem. 32 (Pt3), 553-556 (2004).</li><li>Lakhlani, P. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Substitution+of+a+mutant+&#945;2a-adrenergic+receptor+via+"hit+and+run"+gene+targeting+reveals+the+role+of+this+subtype+in+sedative,+analgesic,+and+anesthetic-sparing+responses+in.">Substitution of a mutant &#945;2a-adrenergic receptor via "hit and run" gene targeting reveals the role of this subtype in sedative, analgesic, and anesthetic-sparing responses in.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 94 (18), 9950-9955 (1997).</li><li>Sonner, J. M., Gong, D., Eger, E. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naturally+Occurring+Variability+in+Anesthetic+Potency+Among+Inbred+Mouse+Strains.">Naturally Occurring Variability in Anesthetic Potency Among Inbred Mouse Strains.</a> Anesth. 91 (3), 720-726 (2000).</li><li>Sun, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+throughput+modular+chambers+for+rapid+evaluation+of+anesthetic+sensitivity.">High throughput modular chambers for rapid evaluation of anesthetic sensitivity.</a> BMC Anesthesiol. 6 (1), 13 (2006).</li><li>Hu, F. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypnotic+Hypersensitivity+to+Volatile+Anesthetics+and+Dexmedetomidine+in+Dopamine+&#946;-Hydroxylase+Knockout+Mice.">Hypnotic Hypersensitivity to Volatile Anesthetics and Dexmedetomidine in Dopamine &#946;-Hydroxylase Knockout Mice.</a> Anesthesiology. , (2012).</li><li>Kelz, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+essential+role+for+orexins+in+emergence+from+general+anesthesia.">An essential role for orexins in emergence from general anesthesia.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105 (4), 1309-1314 (2008).</li><li>Moore, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+Activation+of+Sleep-Promoting+VLPO+Neurons+by+Volatile+Anesthetics+Contributes+to+Anesthetic+Hypnosis.">Direct Activation of Sleep-Promoting VLPO Neurons by Volatile Anesthetics Contributes to Anesthetic Hypnosis.</a> Curr. 22 (21), 2008-2016 (2012).</li><li>Kirby, E. D., Jensen, K., Goosens, K. A., Kaufer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stereotaxic+Surgery+for+Excitotoxic+Lesion+of+Specific+Brain+Areas+in+the+Adult+Rat.">Stereotaxic Surgery for Excitotoxic Lesion of Specific Brain Areas in the Adult Rat.</a> J. Vis. Exp. (65), e4079 (2012).</li><li>Machholz, E., Mulder, G., Ruiz, C., Corning, B. F., Pritchett-Corning, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manual+Restraint+and+Common+Compound+Administration+Routes+in+Mice+and+Rats.">Manual Restraint and Common Compound Administration Routes in Mice and Rats.</a> J. Vis. Exp. (67), e2771 (2012).</li><li>Geiger, B. M., Frank, L. E., Caldera-Siu, A. D., Pothos, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survivable+Stereotaxic+Surgery+in+Rodents.">Survivable Stereotaxic Surgery in Rodents.</a> J. Vis. Exp. (20), e880 (2008).</li><li>Szymusiak, R., Alam, N., Steininger, T. L., McGinty, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sleep-waking+discharge+patterns+of+ventrolateral+preoptic/anterior+hypothalamic+neurons+in+rats.">Sleep-waking discharge patterns of ventrolateral preoptic/anterior hypothalamic neurons in rats.</a> Brain Res. (1-2), 178-188 (1998).</li><li>Nelson, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+sedative+component+of+anesthesia+is+mediated+by+GABAA+receptors+in+an+endogenous+sleep+pathway.">The sedative component of anesthesia is mediated by GABAA receptors in an endogenous sleep pathway.</a> Nat. Neurosci. 5 (10), 979-984 (2002).</li><li>Li, K. Y., Guan, Y., Krnjevi&#263;, K., Ye, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Propofol+Facilitates+Glutamatergic+Transmission+to+Neurons+of+the+Ventrolateral+Preoptic+Nucleus.">Propofol Facilitates Glutamatergic Transmission to Neurons of the Ventrolateral Preoptic Nucleus.</a> Anesthesiology. 111 (6), 1271-1278 (2009).</li><li>Friedman, E. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Conserved+Behavioral+State+Barrier+Impedes+Transitions+between+Anesthetic-Induced+Unconsciousness+and+Wakefulness:+Evidence+for+Neural+Inertia.">A Conserved Behavioral State Barrier Impedes Transitions between Anesthetic-Induced Unconsciousness and Wakefulness: Evidence for Neural Inertia.</a> PLoS ONE. 5 (7), e11903 (2010).</li><li>Lu, J., Greco, M. A., Shiromani, P., Saper, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+lesions+of+the+ventrolateral+preoptic+nucleus+on+NREM+and+REM+sleep.">Effect of lesions of the ventrolateral preoptic nucleus on NREM and REM sleep.</a> J. Neurosci. 20 (10), 3830-3842 (2000).</li><li>Sun, X., Whitefield, S., Rusak, B., Semba, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+analysis+of+suprachiasmatic+nucleus+projections+to+the+ventrolateral+preoptic+area+in+the+rat.">Electrophysiological analysis of suprachiasmatic nucleus projections to the ventrolateral preoptic area in the rat.</a> Eur. J. Neurosci. 14 (8), 1257-1274 (2001).</li><li>Ma, J., Shen, B., Stewart, L. S., Herrick, I. A., Leung, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+septohippocampal+system+participates+in+general+anesthesia.">The septohippocampal system participates in general anesthesia.</a> J. Neurosci. 22 (2), RC200 (2002).</li><li>Leung, L. S., Ma, J., Shen, B., Nachim, I., Luo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Medial+septal+lesion+enhances+general+anesthesia+response.">Medial septal lesion enhances general anesthesia response.</a> Exp. Neurol. , (2013).</li><li>Solt, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methylphenidate+Actively+Induces+Emergence+from+General+Anesthesia.">Methylphenidate Actively Induces Emergence from General Anesthesia.</a> Anesthesiology. 115 (4), 791-803 (2011).</li></ol>

والكتاب ليس لديهم ما يكشف.

على الرغم من تقييم LORR في ماوس واحدة هي المهمة التي تبدو واضحة، إلا أن ذلك ضروري للحفاظ على الظروف الفسيولوجية متطابقة بين الموضوعات من أجل جمع بيانات موثوقة من مجموعة من الحيوانات. وينظم بإحكام، ذات قدرة عالية جهاز LORR المقدمة هنا يوفر وسيلة لتوحيد التجارب وتعظيم الك?...

يتم تعريف التخدير العام من خلال قدرتها على أن يسبب حالة من التنويم المغناطيسي عكسها في مجموعة متنوعة واسعة من الأنواع، ولكن تفسيرا لكيف يمكن لهذه الدرجة متنوعة من العقاقير يمكن ان يبقى كل انتزاع نقطة نهاية المفرد بعيد المنال. وقد افترض عدد من النظريات على مر السنين، بدءا من علاقة ماير اوفرتون بين قوة مخدر والدهون الذوبان، والذي اقترح اضطرابات غشاء العامة كأساس لالتنويم المغناطيسي 1،2. وتشير المزيد من الأدلة الأخيرة التي تؤثر على الأهداف البروتين الإشارات العصبية تساهم في آثار مخدر. وقد أثبتت الفئران لتكون نموذجا لا غنى عنه لاستكشاف هذه النظريات بسبب التماثل بين الفئران والاستجابة مخدر الإنسان. على الرغم من الماوس لا يمكن سؤاله عن الوعي ذاتية لها تحت التخدير العام، وبعض ردود الفعل البدائية تخدم تدابير بديلة مفيدة للالقوارض التنويم المغناطيسي. في الأيام القليلة الأولى بعد الولادة، والفئران تطوير المقوم التركيب انعكاسيةonse يمنعهم من وضعه بشكل سلبي في موقف ضعيف 3. جرعة التخدير التي ماوس يفقد المنعكس المقوم لها يرتبط بشكل جيد مع الجرعات المنومة الإنسان 4. لقد أصبح تقييم فقدان المنعكس التقويمي (LORR) معيار المختبر تستخدم على نطاق واسع لاختبار حساسية مخدر في الفئران فضلا عن مجموعة متنوعة من الأنواع الأخرى بما في ذلك الفئران، خنزير غينيا، الأرانب، النمس والأغنام والكلب 5-8. جرعة من مخدر يعطى في LORR التي سوف تحدث لأفراد الأنواع غير متسقة للغاية، ولكن يمكن أن تحول بشكل كبير من العوامل البيئية. على سبيل المثال، الفئران بالحرمان من النوم أكثر حساسية لكلا التخدير المتطايرة والوريد 9 و الفئران مع القدرة الهوائية العالية هي أقل حساسية للisoflurane و10. وقد تبين أيضا انخفاض حرارة الجسم إلى خفض جرعة التخدير اللازمة للعديد من التنويم المغناطيسي لفي طائفة واسعة من الأنواع 11-14. من أجللتحديد جرعة مخدر موثوق الذي LORR يحدث في مجموعة من حيوانات التجارب، فمن الأهمية بمكان أن يتم تقييم البيئة التي تسيطر عليها بعناية لتقليل التوتر، والحفاظ على euthermia، وتقديم كميات متساوية من المخدرات لجميع المواد الدراسية. وليس من المستغرب، ومن المعروف أيضا العوامل الوراثية لتغيير حساسية مخدر 15-18. وبالتالي، ينبغي أيضا النظر بعناية في السيطرة على الخلفية الوراثية 19. وضعنا جهازا يضمن متطابقة تسليم مخدر الغازية إلى كل من الفئران 24 مع الحفاظ على ثابت 37 س C بيئة. تصميم اسطوانية شفافة الغرف التعرض لدينا يسمح لتقييم LORR بسرعة وسهولة التكامل من القياسات الفسيولوجية القياس عن بعد. وقد تبين هذا النظام لقياس بدقة isoflurane و، هالوثان، والحث سيفوفلوران EC 50 والوقت لظهور في البرية من نوع الفئران 20. وقد استخدمنا أيضاهذا النظام لمراقبة التغيرات في حساسية مخدر في الفئران مع الطفرات الجينية والآفات المستهدفة طائي 21-23. نحن هنا وصف اثنين من الطرق التي يمكن تقييم حساسية مخدر بعد التدخل الدوائي باستخدام جهاز لدينا بيئة تسيطر عليها. phenotyping ثابت للدولة من تحريض التخدير المتطايرة والحساسية ظهور يتطلب 8-10 ساعات، وبالتالي أفضل مصممة خصيصا للدراسات التي لا تتغير الظروف التجريبية، مثل التدخلات الدوائية المزمن أو طويل المفعول. ومع ذلك، لعلاج قصير المفعول الذي تتبدد بشكل ملحوظ مع مرور الوقت الآثار نحن أيضا تقديم إجراء بسيط لتقييم التغيرات في المقوم منعكس التالية إبر دقيقة جدا استهدفت stereotactically أو العلاجات المخدرات عن طريق الحقن التي تؤثر بشكل كبير على ظهور مخدر. هذه الاختبارات تمثل مجموعة فرعية صغيرة من التطبيقات المحتملة لهذا النظام بيئة تسيطر عليها، والتي يمكن تكييفها لأي عدد من subjالنظام الأوروبي من مجموعة متنوعة من الأنواع لتلقي أي نوع من العلاج استنشاقه.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="461">
	<colgroup>
		<col />
		<col span="2" />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:115px;">Name of the Reagent</td>
			<td style="width:88px;">Company</td>
			<td style="width:88px;">Catalogue Number</td>
			<td style="width:171px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:115px;">Oxygen</td>
			<td style="width:88px;">Airgas</td>
			<td style="width:88px;">OX300</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:115px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:88px;">Butler Schein</td>
			<td style="width:88px;"></td>
			<td style="width:171px;">Any volatile anesthetic of interest may be substituted</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:115px;">Name of Material</td>
			<td style="width:88px;">Company</td>
			<td style="width:88px;">Catalogue Number</td>
			<td style="width:171px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:115px;">Mass flow meter- 10 SLPM</td>
			<td style="width:88px;">Omega Engineering</td>
			<td style="width:88px;">FMA-A2309</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:115px;">Mass flow meter- 500 SCCM</td>
			<td style="width:88px;">Omega Engineering</td>
			<td style="width:88px;">FMA-A2305</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:115px;">Anesthetic agent analyzer/gas indicator</td>
			<td style="width:88px;">AM Bickford</td>
			<td style="width:88px;">FI-21 Riken</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:115px;">Heating water pump</td>
			<td style="width:88px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:88px;">13-874-175</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:115px;">Temperature transponders</td>
			<td style="width:88px;">BMDS</td>
			<td style="width:88px;">IPTT-300</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:115px;">RF temperature reader</td>
			<td style="width:88px;">BMDS</td>
			<td style="width:88px;">DAS-6007</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessing changes in volatile general anesthetic sensitivity of mice after local or systemic pharmacological intervention

واحد نقطة النهاية المرغوب فيه من التخدير العام هو حالة من اللاوعي، والمعروف أيضا باسم التنويم المغناطيسي. تحديد الدولة المنومة في الحيوانات هو أقل وضوحا مما هو عليه في المرضى من البشر. الام البديلة السلوكية المستخدمة على نطاق واسع لالتنويم المغناطيسي في القوارض هو فقدان المنعكس التقويمي (LORR)، أو النقطة التي الحيوان لم يعد يستجيب لغريزة فطرية بهم لتجنب ضعف الظهرية الاستلقاء. قمنا بتطوير نظام لتقييم LORR في 24 الفئران في وقت واحد بينما يسيطر بعناية ليفند المحتملة، بما في ذلك التقلبات في درجات الحرارة وتدفق الغاز متفاوتة. تسمح هذه الدوائر تقييم موثوق به للحساسية مخدر مقاسا الكمون للعودة من المنعكس المقوم (RORR) بعد التعرض مخدر الثابتة. بدلا من ذلك، وذلك باستخدام زيادات تدريجية (أو النقصان) في تركيز مخدر، أيضا تمكين غرف تحديد حساسية السكان لتحريض (أو ظهور) مقاساEC 50 وهيل المنحدر. أخيرا، وغرف التحكم البيئي وصفها هنا يمكن تكييفها لمجموعة متنوعة من الاستخدامات البديلة، بما في ذلك تسليم استنشاق أنواع أخرى من المخدرات، ودراسات علم السموم، ومتزامنة في الوقت الحقيقي رصد العلامات الحيوية.

يوضح الشكل 1 فائدة الخطوة الحكيمة LORR فحص لتحديد الآثار طويلة الأمد للتدخل الدوائي. حمض Ibotenic (IBA) هو ناهض من الجلوتاميرجي N-ميثيل-D-asparate (NMDA) مستقبلات التي غالبا ما تستخدم باعتبارها excitotoxin أن تسبب الآفات العصبية الدائمة. نحن هنا حقن 10 NL من 1٪ IBA ثنائيا في مجال بطنان...

Watch this Scientific Journal Video about Assessing Changes in Volatile General Anesthetic Sensitivity of Mice after Local or Systemic Pharmacological Intervention at JoVE.com

Assessing Changes in Volatile General Anesthetic Sensitivity of Mice after Local or Systemic Pharmacological Intervention

فقدان المنعكس المقوم قد خدم فترة طويلة كبديل السلوكية القياسية لفقدان الوعي، وتسمى أيضا التنويم المغناطيسي، في الحيوانات المختبرية. ويمكن الكشف عن تغييرات في حساسية مخدر المتطايرة الناجمة عن التدخلات الدوائية مع نظام تقييم عالية الإنتاجية التي تسيطر عليها بعناية، والتي يمكن تكييفها لتسليم أي العلاجية المستنشق.

تقييم التغيرات في المتطايرة العام التخدير حساسية من الفئران بعد التدخل الدوائي المحلي أو الجهازية

One desirable endpoint of general anesthesia is  the state of unconsciousness, also known as hypnosis. Defining the hypnotic state in animals is  less ...

assessing-changes-volatile-general-anesthetic-sensitivity-mice-after

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Pharmacology

Medicine

Unit 1

Local Anesthetics

Drugs for Pain Management: Opioid Analgesics and General Anesthetics

SCIENTISTS IN ACTION

13.5K Views.  Perelman School of Medicine, University of Pennsylvania.  فقدان المنعكس المقوم قد خدم فترة طويلة كبديل السلوكية القياسية لفقدان الوعي، وتسمى أيضا التنويم المغناطيسي، في الحيوانات المختبرية. ويمكن الكشف عن تغييرات في حساسية مخدر المتطايرة الناجمة عن التدخلات الدوائية مع نظام تقييم عالية الإنتا?...

Video: Assessing Changes in Volatile General Anesthetic Sensitivity of Mice after Local or Systemic Pharmacological Intervention

Assessing Teratogenic Changes in a Zebrafish Model of Fetal Alcohol Exposure

Fetal alcohol syndrome (FAS) is a severe manifestation of embryonic exposure to ethanol. It presents with characteristic defects to the face and organs, including mental retardation due to disordered and damaged brain development. Fetal alcohol spectrum disorder (FASD) is a term used to cover a continuum of birth defects that occur due to maternal alcohol consumption, and occurs in approximately 4% of children born in the United States. With 50% of child-bearing age women reporting consumption of alcohol, and half of all pregnancies being unplanned, unintentional exposure is a continuing issue2. In order to best understand the damage produced by ethanol, plus produce a model with which to test potential interventions, we developed a model of developmental ethanol exposure using the zebrafish embryo. Zebrafish are ideal for this kind of teratogen study3-8. Each pair lays hundreds of eggs, which can then be collected without harming the adult fish. The zebrafish embryo is transparent and can be readily imaged with any number of stains. Analysis of these embryos after exposure to ethanol at different doses and times of duration and application shows that the gross developmental defects produced by ethanol are consistent with the human birth defect. Described here are the basic techniques used to study and manipulate the zebrafish FAS model.

In order to understand the molecular mechanisms of the ethanol-induced developmental damage, we have developed a zebrafish model of ethanol exposure and are exploring the physical, cellular, and genetic alterations that occur after ethanol exposure1. We then seek to find potential interventions and rapidly test them in this animal model.

تقييم التغييرات المشوهة في نموذج الزرد من التعرض الكحول الجنينية

Fetal alcohol syndrome (FAS) is a severe manifestation of embryonic exposure to ethanol. It presents with characteristic defects to the face and organs, ...

Monitoring of Systemic and Hepatic Hemodynamic Parameters in Mice

The use of mouse models in experimental research is of enormous importance for the study of hepatic physiology and pathophysiological disturbances. However, due to the small size of the mouse, technical details of the intraoperative monitoring procedure suitable for the mouse were rarely described. Previously we have reported a monitoring procedure to obtain hemodynamic parameters for rats. Now, we adapted the procedure to acquire systemic and hepatic hemodynamic parameters in mice, a species ten-fold smaller than rats. This film demonstrates the instrumentation of the animals as well as the data acquisition process needed to assess systemic and hepatic hemodynamics in mice. Vital parameters, including body temperature, respiratory&#160;rate&#160;and heart&#160;rate were recorded throughout the whole procedure. Systemic hemodynamic parameters consist of carotid artery pressure (CAP) and central venous pressure (CVP). Hepatic perfusion parameters include portal vein pressure (PVP), portal flow rate as well as the flow rate of the common hepatic artery (table 1). Instrumentation and data acquisition to record the normal values was completed within 1.5 h. Systemic and hepatic hemodynamic parameters remained within normal ranges during this procedure.
This procedure is challenging but feasible. We have already applied this procedure to assess hepatic hemodynamics in normal mice as well as during 70% partial hepatectomy and in liver lobe clamping experiments. Mean PVP after resection (n= 20), was 11.41&#177;2.94 cmH2O which was significantly higher (P&#60;0.05) than before resection (6.87&#177;2.39 cmH2O). The results of liver lobe clamping experiment indicated that this monitoring procedure is sensitive and suitable for detecting small changes in portal pressure and portal flow rate. In conclusion, this procedure is reliable in the hands of an experienced micro-surgeon but should be limited to experiments where mice are absolutely needed.

This film demonstrates how to acquire systemic and hepatic hemodynamics in mice. The whole monitoring includes acquisition of vital parameters, systemic blood pressure, central venous pressure, common hepatic artery flow rate, and portal vein pressure as well as the portal flow rate in mice.

رصد معلمات الجهازية والكبد الدورة الدموية في الفئران

The use of mouse models in experimental research is of enormous importance for the study of hepatic physiology and pathophysiological disturbances. ...

The bm12 Inducible Model of Systemic Lupus Erythematosus (SLE) in C57BL/6 Mice

Systemic lupus erythematosus (SLE) is an autoimmune disease with diverse clinical and immunological manifestations. Several spontaneous and inducible animal models mirror common components of human disease, including the bm12 transfer model. Upon transfer of bm12 splenocytes or purified CD4 T cells, C57BL/6 mice rapidly develop large frequencies of T follicular helper cells (Tfh), germinal center (GC) B cells, and plasma cells followed by high levels of circulating anti-nuclear antibodies. Since this model utilizes mice on a pure C57BL/6 background, researchers can quickly and easily study disease progression in transgenic or knockout mouse strains in a relatively short period of time. Here we describe protocols for the induction of the model and the quantitation Tfh, GC B cells, and plasma cells by multi-color flow cytometry. Importantly, these protocols can also be used to characterize disease in most mouse models of SLE and identify Tfh, GC B cells, and plasma cells in other disease models.

The bm12 Inducible Model of Systemic Lupus Erythematosus SLE in C57BL/6 Mice

The transfer of bm12 lymphocytes into a C57BL/6 recipient is an established model of systemic lupus erythematosus. Here we describe how to initiate disease using this model and how to characterize T follicular helper cells, germinal center B cells and plasma cells by flow cytometry.

ومحرض نموذج bm12 من الذئبة الحمامية الجهازية (SLE) في C57BL / 6 الفئران

Systemic lupus erythematosus (SLE) is an autoimmune disease with diverse clinical and immunological manifestations. Several spontaneous and inducible ...

Visualization of Vascular and Parenchymal Regeneration after 70% Partial Hepatectomy in Normal Mice

A modified silicone injection procedure was used for visualization of the hepatic vascular tree. This procedure consisted of in-vivo injection of the silicone compound, via a 26 G catheter, into the portal or hepatic vein. After silicone injection, organs were explanted and prepared for ex-vivo micro-CT (&#181;CT) scanning. The silicone injection procedure is technically challenging. Achieving a successful outcome requires extensive microsurgical experience from the surgeon. One of the challenges of this procedure involves determining the adequate perfusion rate for the silicone compound. The perfusion rate for the silicone compound needs to be defined based on the hemodynamic of the vascular system of interest. Inappropriate perfusion rate can lead to an incomplete perfusion, artificial dilation and rupturing of vascular trees.
The 3D reconstruction of the vascular system was based on CT scans and was achieved using preclinical software such as HepaVision. The quality of the reconstructed vascular tree was directly related to the quality of silicone perfusion. Subsequently computed vascular parameters indicative of vascular growth, such as total vascular volume, were calculated based on the vascular reconstructions. Contrasting the vascular tree with silicone allowed for subsequent histological work-up of the specimen after &#181;CT scanning. The specimen can be subjected to serial sectioning, histological analysis and whole slide scanning, and thereafter to 3D reconstruction of the vascular trees based on histological images. This is the prerequisite for the detection of molecular events and their distribution with respect to the vascular tree. This modified silicone injection procedure can also be used to visualize and reconstruct the vascular systems of other organs. This technique has the potential to be extensively applied to studies concerning vascular anatomy and growth in various animal and disease models.

Tools used for visualizing vascular regeneration require methods for contrasting the vascular trees. This film demonstrated a delicate injection technique used to achieve optimal contrasting of the vascular trees and illustrate the potential benefits resulting from a detailed analysis of the resulting specimen using &#181;CT and histological serial sections.

التصور الأوعية الدموية ومتني التجديد بعد استئصال الكبد الجزئي 70٪ في الفئران العادية

A modified silicone injection procedure was used for visualization of the hepatic vascular tree. This procedure consisted of in-vivo injection of the ...

Intrasplenic Transplantation of Hepatocytes After Partial Hepatectomy in NOD.SCID Mice

Partial hepatectomy is a versatile and reproducible method to study liver regeneration and the effect of cell based therapeutics in various pathological conditions. Partial hepatectomy also facilitates the increased engraftment and proliferation of transplanted cells by accelerating neovascularization and cell migration towards the liver. Here, we describe a simple protocol for performing 30% hepatectomy and transplantation of cells in the spleen of a non-obese diabetic/severe combined immunodeficient NOD.SCID (NOD.CB17-Prkdcscid/J) mouse. 
In this procedure, two small incisions are made. The first incision is to expose and resect the left lobe of the liver, and another small incision is made to expose the spleen for the intrasplenic transplantation of cells. This procedure does not require any specialized surgical skills, and it can be completed in 5-7 minutes with less stress and pain, faster recovery, and better survival. We have demonstrated the transplantation of hepatocytes isolated from a green fluorescent protein (GFP) expressing mouse (Transgenic C57BL/6-Tg (UBC-GFP) 30Scha/J), as well as hepatocyte like cells of human origin (NeoHep) in partially hepatectomized NOD.SCID mice.

We have described a protocol for performing partial hepatectomy (PHx) and cell transplantation via spleen in NOD.SCID (NOD.CB17-Prkdcscid/J) mice. In this protocol, an incision is made to expose and resect the left lobe of the liver followed by another incision for the intrasplenic transplantation of cells.

إينتراسبلينيك زرع خلايا الكبد بعد ظهرت جزئيا في إيماءة. الفئران مشمولان

Partial hepatectomy is a versatile and reproducible method to study liver regeneration and the effect of cell based therapeutics in various pathological ...

Isolation of Regenerating Hepatocytes after Partial Hepatectomy in Mice

Partial hepatectomy has been widely used to investigate liver regeneration in mice, but the isolation of high yields of viable hepatocytes for downstream single-cell applications is challenging. A marked accumulation of lipids within regenerating hepatocytes is observed during the first 2 days of normal liver regeneration in mice. This so-called transient regeneration-associated steatosis (TRAS) is temporary but partially overlaps the major proliferative phase. Density-gradient purification is the backbone of most existing protocols for the isolation of primary hepatocytes. As gradient purification relies on the density and size of cells, it separates non-steatotic from steatotic hepatocyte populations. Therefore, fatty hepatocytes often are lost, yielding non-representative hepatocyte fractions. 
The presented protocol describes an easy and reliable method for the in vivo isolation of regenerating hepatocytes regardless of their lipid content. Hepatocytes from male C57BL/6 mice are isolated 24-48 h after hepatectomy by a classic two-step collagenase perfusion approach. A standard peristaltic pump drives the warmed solutions via the catheterized inferior vena cava into the remnant, using a retrograde perfusion technique with outflow through the portal vein. Hepatocytes are dissociated by collagenase for their release from the Glisson's capsule. After washing and careful centrifugation, the hepatocytes can be used for any downstream analyses. In conclusion, this paper describes a straightforward and reproducible technique for the isolation of a representative population of regenerating hepatocytes after partial hepatectomy in mice. The method may also aid the study of fatty liver disease.

Lipid-laden hepatocytes are inherent to liver regeneration but are usually lost upon density-gradient centrifugation. Here, we present an optimized cell isolation protocol that retains steatotic hepatocytes, yielding representative populations of regenerating hepatocytes after partial hepatectomy in mice.

عزل خلايا الكبد المتجددة بعد استئصال الكبد الجزئي في الفئران

Partial hepatectomy has been widely used to investigate liver regeneration in mice, but the isolation of high yields of viable hepatocytes for downstream ...

آلية ساليدروسيد في قمع هجرة خلايا MCF-7 وانتشارها

Exploring the Pharmacological Action and Molecular Mechanism of Salidroside in Inhibiting MCF-7 Cell Proliferation and Migration

Salidroside (Sal) contains anti-carcinogenic, anti-hypoxic, and anti-inflammatory pharmacological activities. However, its underlying anti-breast cancer mechanisms have been only incompletely elucidated. Hence, this protocol intended to decode the potential of Sal in regulating the PI3K-AKT-HIF-1&#945;-FoxO1 pathway in the malignant proliferation of human breast cancer MCF-7 cells. First, the pharmacological activity of Sal against MCF-7 was evaluated by CCK-8 and cell scratch assays. Moreover, the resistance of MCF-7 cells was measured by migration and Matrigel invasion assays. For cell apoptosis and cycle assays, MCF-7 cells were processed in steps with annexin V-FITC/PI and cell cycle-staining detection kits for flow cytometry analyses, respectively. The levels of reactive oxygen species (ROS) and Ca2+ were examined by DCFH-DA and Fluo-4 AM immunofluorescence staining. The activities of Na+-K+-ATPase and Ca2+-ATPase were determined using the corresponding commercial kits. The protein and gene expression levels in apoptosis and the PI3K-AKT-HIF-1&#945;-FoxO1 pathway were further determined using western blot and qRT-PCR analyses, respectively. We found that Sal treatment significantly restricted the proliferation, migration, and invasion of MCF-7 cells with dose-dependent effects. Meanwhile, Sal administration also dramatically forced MCF-7 cells to undergo apoptosis and cell cycle arrest. The immunofluorescence tests showed that Sal observably stimulated ROS and Ca2+ production in MCF-7 cells. Further data confirmed that Sal promoted the expression levels of pro-apoptotic proteins, Bax, Bim, cleaved caspase-9/7/3, and their corresponding genes. Consistently, Sal intervention prominently reduced the expression of the Bcl-2, p-PI3K/PI3K, p-AKT/AKT, mTOR, HIF-1&#945;, and FoxO1 proteins and their corresponding genes. In conclusion, Sal can be used as a potential herb-derived compound for treating breast cancer, as it may reduce the malignant proliferation, migration, and invasion of MCF-7 cells by inhibiting the PI3K-AKT-HIF-1&#945;-FoxO1 pathway.

تسليط الضوء على المؤلف: استكشاف الآليات الجزيئية لساليدروسيد في علاج سرطان الثدي 

The present protocol describesa comprehensive strategy for evaluating the pharmacological action and mechanism of salidroside in inhibiting MCF-7 cell proliferation and migration.

استكشاف العمل الدوائي والآلية الجزيئية للساليدروسيد في تثبيط تكاثر خلايا MCF-7 وهجرتها

Salidroside (Sal) contains anti-carcinogenic, anti-hypoxic, and anti-inflammatory pharmacological activities. However, its underlying anti-breast cancer ...

تطوير برنامج تمرين لمرضى التهاب المفاصل الروماتويدي

Evaluation of Changes in Hydration and Body Cell Mass with Bioelectrical Impedance Analysis after Exercise Program for Rheumatoid Arthritis Patients

Rheumatoid arthritis (RA) is a debilitating disease that can result in complications such as rheumatoid cachexia. While physical exercise has shown benefits for RA patients, its impact on hydration and body cell mass remains uncertain. The presence of pain, inflammation, and joint changes often restrict activity and make traditional body composition assessments unreliable due to altered hydration levels. Bioelectrical impedance is a commonly used method for estimating body composition, but it has limitations since it was primarily developed for the general population and does not consider changes in body composition. On the other hand, bioelectrical impedance vectorial analysis (BIVA) offers a more comprehensive approach. BIVA involves graphically interpreting resistance (R) and reactance (Xc), adjusted for height, to provide valuable information about hydration status and the integrity of the cell mass.
Twelve women with RA were included in this study. At the beginning of the study, hydration and body cell mass measurements were obtained using the BIVA method. Subsequently, the patients participated in a six-month dynamic exercise program encompassing cardiovascular capacity, strength, and coordination training. To evaluate changes in hydration and body cell mass, the differences in the R and Xc parameters, adjusted for height, were compared using BIVA confidence software. The results showed notable changes: resistance decreased after the exercise program, while reactance increased. BIVA, as a classification method, can effectively categorize patients into dehydration, overhydration, normal, athlete, thin, cachectic, and obese categories. This makes it a valuable tool for assessing RA patients, as it provides information independent of body weight or prediction equations. Overall, the implementation of BIVA in this study shed light on the effects of the exercise program on hydration and body cell mass in RA patients. Its advantages lie in its ability to provide comprehensive information and overcome the limitations of traditional body composition assessment methods.

تسليط الضوء على المؤلف: تنفيذ BIVA لتحليل عوامل خطر المرض في المرضى الذين يعانون من انخفاض كتلة خلايا الجسم 

This protocol assesses alterations in hydration and body cell mass status using bioelectrical impedance vectorial analysis following a dynamic exercise program designed for patients with rheumatoid arthritis. The dynamic exercise program itself is detailed, highlighting its components focused on cardiovascular capacity, strength, and coordination. The protocol details steps, instruments, and limitations.

تقييم التغيرات في الترطيب وكتلة خلايا الجسم مع تحليل المعاوقة الكهربائية الحيوية بعد برنامج التمرين لمرضى التهاب المفاصل الروماتويدي

Rheumatoid arthritis (RA) is a debilitating disease that can result in complications such as rheumatoid cachexia. While physical exercise has shown ...