עבודה זו נתמכה על ידי R01 GM088156 וT32 HL007713-18. ברצוננו להודות ביל Pennie ומייקל קרמן מאוניברסיטת פנסילבניה מחקר חנות מכשור על עזרתם בהרכבת מנגנון רפלקס ליישר שלנו.

כל ההליכים כרוכים בבעלי חיים המפורטים במסמך זה אושרו על ידי האוניברסיטה והעדה מוסדי הטיפול בבעלי חיים ושימוש של פנסילבניה. 1. סקירה כללית של מנגנון הבדיקה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מנגנון הבדיקה מורכב מ24 תאים גליליים אקריליק ברורים 10 סנטימטר אורך ו 5 ס&quot;מ קוטר (נפח כולל של 200 מיליליטר). גודל זה הוא מתאים לעכבר בוגר 25 גרם טיפוסי. יש לשכות יציאות בכל קצה לכניסת גז וחשמל. הסוף לשקע הוא נשלף, כך שעשויים להיות טעונים בעלי חיים בקלות אל תוך החדר. פתחי יציאת גז חתומים בזהירות עם סרט טפלון, בעוד אטמי הגומי O-טבעת משמשים לאטום את הסוף להסרה של התאים גליליים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כל תא הוא רכוב על מדף שיושב בתוך אמבט מים. המתלה מצוידת, כך שהחלק התחתון בלבד של התאים (מתחת לפתחי כניסת הגז) הוא שקוע. ליציבות, הקצה האחורי של החדר נשען על תמיכה, כך שכל chambאה יושב בצורה אופקית. זה מבטיח מגע אפילו של כל החדר עם האמבטיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צינורות פוליאתילן מתחבר מיכל חמצן למאדת הרדמה, ולאחר מכן עוברים דרך L / מד זרימת דקות 10. הצינור מתפצל ל25 נגדים בקוטר קטן באורך שווה, כדי להבטיח זרימה שווה מועברת לכל אחד מהתאים 24 ומנתח סוכן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קווי אבק לצאת מכל חדר בקצה השני של כניסת הגז. זה מקדם את הזרימה חד כיווני שמונעת נשימה חוזרת של נשף פחמן דו חמצני. קווי הוואקום לשלב בסעפת כדי להתחבר לקו יניקה בתוך הבית. שסתום קופץ מלאורך קו הוואקום העיקרי מבטיח תנאי לחץ אטמוספרי בתוך כל תא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> האמבטיה מלאה במספיק מים כדי ליצור קשר עם החלק התחתון של כל תא באופן מלא. המים מופצים דרך האמבטיה ומתוחזק בC 37 o מתמדת על ידי משאבה. </li></ol> 2. בדוק את מערכת לפני החשיפה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Cלעזאזל שהטמפרטורה של אמבט המים היא 37 C o לאורך האמבטיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זרימת חמצן בשיעור של 5 ליטר / דקה (200 מיליליטר / דקה לכל תא + מנתח סוכן). להטביע כל תא מתחת למים ולחפש בועות או כניסה של מים לתוך התא, אשר שניהם מעידים על הדלפות. לאטום כל הדלפות לפני תחילת הניסוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לכל חדר, להתחבר 500 מד זרימת מיליליטר / דקה בתור אחרי קאמרי לוודא כי תזרים מאוזנים על פני כל אחד מ25 קווי הגז. הדבר מבטיח כי תזרים קלט 5 ליטר / דקה יחולק באופן שווה, כך שכל תא מקבל 200 זרימת מיליליטר / דקה. כל תא אינו מקבל את הזרימה הצפויה צריך להיות הזרימה שלה וצינורות יצוא בדקו עבור חסימות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כייל את מנתח הסוכן כדי להבטיח קריאה של isoflurane 0.00% כאשר 100% חמצן זורם. </li></ol> 3. משדר טמפרטורת שתל <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שבוע לפני הרגלה, להרדים כל עכבר עם isoflurane 2%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחטא את אזור צוואר הגב עם בטאדין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזריק תת עורי משדר טמפרטורה בין השכמות באמצעות מחט מזרק סטרילי, ארוזה מראש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפקח על אתר ההזרקה יומי לזיהום והגירה של המשדר. </li></ol> 4. להרגיל בעלי חיים לתאי בדיקה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ארבעה ימים לפני ההערכה הראשונה, למקם את כל העכברים לתאים בודדים במשך שעה 2 עם 100% חמצן זורם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלב 4.1 יומי לארבעה ימים שקדמו להערכה, כדי למנוע תופעות של הבלבול של לחץ בשל סביבה חדשה. </li></ol> 5. לבצע התערבות תרופתי שאתה רוצה לבדוק להשפעות על ההרדמה רגישות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התערבות זו עשויה להיות הזרקת stereotaxic לחלק מסוים של המוח 24, הזרקה תוך ורידית או intraperitoneal 25, או מסירה של תרופה לאזור ספציפי במוח באמצעות צינורית 26. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכיוון שהליכים אלה עצמם עשויים לשנות את רגישות חומר הרדמה בהשוואה לבעלי חיים תמימים, קבוצת ביקורת ראויה צריכה לעבור את אותו תהליך עם זריקות רכב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא שיש לו את ההתערבות תרופתי משך הפעולה ארוך כראוי אם אתם מתכננים לעשות בשלבים הגדלת ו / או הקטנת קביעת רגישות הרדמה כפי שמוצג בשלב 6 שלהלן, אחרת, דלג לשלב 7. </li></ol> 6. להעריך הרדמה רגישות באמצעות קביעה בשלבים EC 50 לאינדוקציה וצמיחה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים כל בעלי חיים לתאי אדם עם 100% חמצן זורם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קבע את ריכוז isoflurane ל* 0.4% ל15 דקות. במהלך 2 דקות האחרונות של תקופה זו, להעריך את רפלקס ליישר של כל בעלי חיים על ידי בעדינות מגלגל את החדר עד שהעכבר ממוקם על הגב שלה. רפלקס ליישר נחשב שלם אם ורק אם העכבר הוא מסוגל לשחזר את כלמכפותיו על הרצפה של החדר בתוך 2 דקות. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> * שים לב שisoflurane 0.4% הוא מינון subhypnotic בעכברי C57BL/6J. אם כל עכברים לאבד את רפלקס ליישרם בשלב הראשון, במינון הראשוני היה גדול מדי ויש להפחית בימים שלאחר מכן. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקלט את המדינה ליישר רפלקס לכל עכבר ולסרוק כל עכבר לנתוני טמפרטורה. שיא תבנית מוצג בטבלה 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להגדיל את ריכוז isoflurane ידי ~ 0.05% במשך 15 דקות וחזור על שלב 7.2. תמשיך לעשות את זה עד שכל בעלי החיים שאיבדו רפלקס ליישרם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אופציונאלי: לחזור על אותה הפרוצדורה להפחתת מינוני isoflurane צעד חכם עד שכל בעלי החיים יש חזרה רפלקס ליישרם (ראה שלב 6.3). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לסיים את הניסוי, כבה את isoflurane ולשטוף את המערכת כולה עם 100% חמצן במשך 15 דקות. זה יעזור כדי למנוע היפוקסיה כעכברים להתאושש לפני שחזרו לכלובים בביתם ויגן על experimenter מכל חשיפת הרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אופציונאלי: אם מספר בעלי החיים או מספר ריכוזי הרדמה מוגבל בשל אילוצי משאבים או זמן, המדרון עשויה היל יש הערכות-במיוחד פרמטר עקומה בכושר הערכת מעריכים, באופן כוזב נמוכה שגיאה. במקרים כאלה, ייתכן שיהיה צורך לחזור על מדידת רגישות ההרדמה מתואר בשלבים 6.1-6.6 בעד שני ימי ניסיון נוספים להשיג פרמטר של מדרון הגבעה האמיתי והערכת השגיאה המקבילה שלה באופן מלא. </li></ol> 7. להעריך את השינויים לטווח קצר בהרדמת רגישות עם זמן להופעה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים כל בעלי חיים לתאי אדם עם 100% חמצן זורם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קבע את ריכוז isoflurane ל.1.2%, אשר תואם את האינדוקציה ED 99 לעכברי C57BL/6J פראי מסוג 20. לשמור על 30-60 דקות בהתאם למשך הצפוי של פעולה של ההתערבות חריפה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאשר LORR בכל בעלי החיים על ידי בעדינות מגלגל את כל חדר עד שעכברים מונחים על גבם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כבה את isoflurane וזרימת חמצן 100%. מדוד את הזמן עד שכל חיה חוזר לרפלקס ליישרה. זה מוגדר על ידי מיקום של כל ארבע כפות הרגליים על הרצפה של החדר ואושר על ידי נוכחותם של שלוש בדיקות ברציפות עם רפלקס ליישר ללא פגע. </li></ol>

<ol>
	<li>Meyer, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zur+theorie+der+alkoholnarkose.+I.+Mittheilung.+Welche+Eigenschaft+der+An#228;sthetica+bedingt+ihre+narkotische+Wirkung?.">Zur theorie der alkoholnarkose. I. Mittheilung. Welche Eigenschaft der An#228;sthetica bedingt ihre narkotische Wirkung?.</a> Naunyn Schmiedebergs Arch. Exp. Pathol. Pharmakol. 42, 109-137 .</li><li>Overton, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Studien &#252;ber die Narkose: Zugleich ein Beitrag zur allgemeinen Pharmakologie. , (1901).</li><li>Bignall, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ontogeny+of+levels+of+neural+organization:+the+righting+reflex+as+a+model.">Ontogeny of levels of neural organization: the righting reflex as a model.</a> Exp. Neurol. 3 (3), 566-573 (1974).</li><li>Franks, N. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=General+anaesthesia:+from+molecular+targets+to+neuronal+pathways+of+sleep+and+arousal.">General anaesthesia: from molecular targets to neuronal pathways of sleep and arousal.</a> Nat. Rev. Neurosci. 9 (5), 370-386 (2008).</li><li>Smith, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Responses+of+laboratory+animals+to+some+injectable+anaesthetics.">Responses of laboratory animals to some injectable anaesthetics.</a> Lab. Anim. 27 (1), 30-39 (1993).</li><li>Schernthaner, A., Lendl, C., Busch, R., Henke, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+evaluation+of+three+medetomidine--midazolam--ketamine+combinations+for+neutering+of+ferrets+(Mustela+putorius+furo)].">Clinical evaluation of three medetomidine--midazolam--ketamine combinations for neutering of ferrets (Mustela putorius furo)].</a> Berliner und M&#252;nchener tier&#228;rztliche Wochenschrift. 121 (1-2), 1-10 (2008).</li><li>Mohammad, F. K., Zangana, I. K., Abdul-Latif, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Medetomidine+sedation+in+sheep.">Medetomidine sedation in sheep.</a> Zentralblatt f&#252;r Veterin&#228;rmedizin. Reihe A. 40 (5), 328-331 (1993).</li><li>Nicholls, E. A., Louie, G. L., Prokocimer, P. G., Maze, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Halothane+anesthetic+requirements+are+not+affected+by+aminophylline+treatment+in+rats+and+dogs.">Halothane anesthetic requirements are not affected by aminophylline treatment in rats and dogs.</a> Anesthesiology. 65 (6), 637-641 (1986).</li><li>Tung, A., Szafran, M. J., Bluhm, B., Mendelson, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sleep+Deprivation+Potentiates+the+Onset+and+Duration+of+Loss+of+Righting+Reflex+Induced+by+Propofol+and+Isoflurane.">Sleep Deprivation Potentiates the Onset and Duration of Loss of Righting Reflex Induced by Propofol and Isoflurane.</a> Anesthesiology. 97 (4), 906-911 (2002).</li><li>Pal, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+Minimum+Alveolar+Concentration+for+Isoflurane+and+Sevoflurane+in+a+Rodent+Model+of+Human+Metabolic+Syndrome.">Determination of Minimum Alveolar Concentration for Isoflurane and Sevoflurane in a Rodent Model of Human Metabolic Syndrome.</a> Anesth. 2 (2), 297-302 (2012).</li><li>Eger, E. I., Saidman 2nd, ., J, L., Brandstater, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temperature+dependence+of+halothane+and+cyclopropane+anesthesia+in+dogs:+correlation+with+some+theories+of+anesthetic+action.">Temperature dependence of halothane and cyclopropane anesthesia in dogs: correlation with some theories of anesthetic action.</a> Anesthesiology. 26 (6), 764-770 (1965).</li><li>Vitez, T. S., White, P. F., Eger, E. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=2nd+Effects+of+hypothermia+on+halothane+MAC+and+isoflurane+MAC+in+the+rat.">2nd Effects of hypothermia on halothane MAC and isoflurane MAC in the rat.</a> Anesthesiology. 41 (1), 80-81 (1974).</li><li>Antognini, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypothermia+eliminates+isoflurane+requirements+at+20+degrees+C.">Hypothermia eliminates isoflurane requirements at 20 degrees C.</a> Anesthesiology. 78 (6), 1152-1156 (1993).</li><li>McKenzie, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+temperature+on+the+anaesthetic+potency+of+halothane,+enflurane+and+ethanol+in+Daphnia+magna+(Cladocera:+Crustacea).">Effects of temperature on the anaesthetic potency of halothane, enflurane and ethanol in Daphnia magna (Cladocera: Crustacea).</a> Comp. Biochem. Physiol. C. 101 (1), 15-19 (1992).</li><li>Icaza, E. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isoflurane-Induced+Changes+in+Righting+Response+and+Breathing+are+Modulated+by+RGS+Proteins.">Isoflurane-Induced Changes in Righting Response and Breathing are Modulated by RGS Proteins.</a> Anesth. Analg. 109 (5), 1500-1505 (2009).</li><li>Drexler, B., Antkowiak, B., Engin, E., Rudolph, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+characterization+of+anesthetic+targets+by+mouse+molecular+genetics+approaches.">Identification and characterization of anesthetic targets by mouse molecular genetics approaches.</a> Can. 2 (2), 178-190 (2011).</li><li>Wafford, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiating+the+role+of+gamma-aminobutyric+acid+type+A+(GABAA)+receptor+subtypes.">Differentiating the role of gamma-aminobutyric acid type A (GABAA) receptor subtypes.</a> Biochem. 32 (Pt3), 553-556 (2004).</li><li>Lakhlani, P. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Substitution+of+a+mutant+&#945;2a-adrenergic+receptor+via+"hit+and+run"+gene+targeting+reveals+the+role+of+this+subtype+in+sedative,+analgesic,+and+anesthetic-sparing+responses+in.">Substitution of a mutant &#945;2a-adrenergic receptor via "hit and run" gene targeting reveals the role of this subtype in sedative, analgesic, and anesthetic-sparing responses in.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 94 (18), 9950-9955 (1997).</li><li>Sonner, J. M., Gong, D., Eger, E. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naturally+Occurring+Variability+in+Anesthetic+Potency+Among+Inbred+Mouse+Strains.">Naturally Occurring Variability in Anesthetic Potency Among Inbred Mouse Strains.</a> Anesth. 91 (3), 720-726 (2000).</li><li>Sun, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+throughput+modular+chambers+for+rapid+evaluation+of+anesthetic+sensitivity.">High throughput modular chambers for rapid evaluation of anesthetic sensitivity.</a> BMC Anesthesiol. 6 (1), 13 (2006).</li><li>Hu, F. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypnotic+Hypersensitivity+to+Volatile+Anesthetics+and+Dexmedetomidine+in+Dopamine+&#946;-Hydroxylase+Knockout+Mice.">Hypnotic Hypersensitivity to Volatile Anesthetics and Dexmedetomidine in Dopamine &#946;-Hydroxylase Knockout Mice.</a> Anesthesiology. , (2012).</li><li>Kelz, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+essential+role+for+orexins+in+emergence+from+general+anesthesia.">An essential role for orexins in emergence from general anesthesia.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105 (4), 1309-1314 (2008).</li><li>Moore, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+Activation+of+Sleep-Promoting+VLPO+Neurons+by+Volatile+Anesthetics+Contributes+to+Anesthetic+Hypnosis.">Direct Activation of Sleep-Promoting VLPO Neurons by Volatile Anesthetics Contributes to Anesthetic Hypnosis.</a> Curr. 22 (21), 2008-2016 (2012).</li><li>Kirby, E. D., Jensen, K., Goosens, K. A., Kaufer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stereotaxic+Surgery+for+Excitotoxic+Lesion+of+Specific+Brain+Areas+in+the+Adult+Rat.">Stereotaxic Surgery for Excitotoxic Lesion of Specific Brain Areas in the Adult Rat.</a> J. Vis. Exp. (65), e4079 (2012).</li><li>Machholz, E., Mulder, G., Ruiz, C., Corning, B. F., Pritchett-Corning, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manual+Restraint+and+Common+Compound+Administration+Routes+in+Mice+and+Rats.">Manual Restraint and Common Compound Administration Routes in Mice and Rats.</a> J. Vis. Exp. (67), e2771 (2012).</li><li>Geiger, B. M., Frank, L. E., Caldera-Siu, A. D., Pothos, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survivable+Stereotaxic+Surgery+in+Rodents.">Survivable Stereotaxic Surgery in Rodents.</a> J. Vis. Exp. (20), e880 (2008).</li><li>Szymusiak, R., Alam, N., Steininger, T. L., McGinty, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sleep-waking+discharge+patterns+of+ventrolateral+preoptic/anterior+hypothalamic+neurons+in+rats.">Sleep-waking discharge patterns of ventrolateral preoptic/anterior hypothalamic neurons in rats.</a> Brain Res. (1-2), 178-188 (1998).</li><li>Nelson, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+sedative+component+of+anesthesia+is+mediated+by+GABAA+receptors+in+an+endogenous+sleep+pathway.">The sedative component of anesthesia is mediated by GABAA receptors in an endogenous sleep pathway.</a> Nat. Neurosci. 5 (10), 979-984 (2002).</li><li>Li, K. Y., Guan, Y., Krnjevi&#263;, K., Ye, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Propofol+Facilitates+Glutamatergic+Transmission+to+Neurons+of+the+Ventrolateral+Preoptic+Nucleus.">Propofol Facilitates Glutamatergic Transmission to Neurons of the Ventrolateral Preoptic Nucleus.</a> Anesthesiology. 111 (6), 1271-1278 (2009).</li><li>Friedman, E. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Conserved+Behavioral+State+Barrier+Impedes+Transitions+between+Anesthetic-Induced+Unconsciousness+and+Wakefulness:+Evidence+for+Neural+Inertia.">A Conserved Behavioral State Barrier Impedes Transitions between Anesthetic-Induced Unconsciousness and Wakefulness: Evidence for Neural Inertia.</a> PLoS ONE. 5 (7), e11903 (2010).</li><li>Lu, J., Greco, M. A., Shiromani, P., Saper, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+lesions+of+the+ventrolateral+preoptic+nucleus+on+NREM+and+REM+sleep.">Effect of lesions of the ventrolateral preoptic nucleus on NREM and REM sleep.</a> J. Neurosci. 20 (10), 3830-3842 (2000).</li><li>Sun, X., Whitefield, S., Rusak, B., Semba, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+analysis+of+suprachiasmatic+nucleus+projections+to+the+ventrolateral+preoptic+area+in+the+rat.">Electrophysiological analysis of suprachiasmatic nucleus projections to the ventrolateral preoptic area in the rat.</a> Eur. J. Neurosci. 14 (8), 1257-1274 (2001).</li><li>Ma, J., Shen, B., Stewart, L. S., Herrick, I. A., Leung, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+septohippocampal+system+participates+in+general+anesthesia.">The septohippocampal system participates in general anesthesia.</a> J. Neurosci. 22 (2), RC200 (2002).</li><li>Leung, L. S., Ma, J., Shen, B., Nachim, I., Luo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Medial+septal+lesion+enhances+general+anesthesia+response.">Medial septal lesion enhances general anesthesia response.</a> Exp. Neurol. , (2013).</li><li>Solt, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methylphenidate+Actively+Induces+Emergence+from+General+Anesthesia.">Methylphenidate Actively Induces Emergence from General Anesthesia.</a> Anesthesiology. 115 (4), 791-803 (2011).</li></ol>

יש המחברים אין לחשוף.

למרות הערכה של LORR בעכבר אחת היא משימה פשוטה לכאורה, זה בכל זאת חיוני כדי לשמור על תנאים פיסיולוגיים זהים בין נושאים על מנת לאסוף נתונים מהימנים מקבוצה של בעלי חיים. , מנגנון LORR קיבולת גבוהה המוסדר היטב שהוצג כאן מציע דרך לתקנן ניסויים ולמקסם את היעילות. על ידי ביצוע פע?...

הרדמה כללית מוגדרות על ידי היכולת שלהם לגרום למצב הפיך בהיפנוזה במגוון רחב של מינים, ובכל זאת הסבר איך כיתה מגוונת כגון תרופות כל יכולה לעורר נקודת סיום ביחיד נותרת חמקמקה. מספר התיאוריות שהציג לאורך השנים, החל מהמתאם מאייר-אוברטון בין עוצמת הרדמה ומסיסות שומנים בדם, אשר הציע שיבושי קרום כלליים כבסיס ל1,2 היפנוזה. ראיות חדשות יותר מצביעות על כך שמטרות חלבון משפיעים על איתות עצבית לתרום להשפעות הרדמה. עכברים הוכיחו להיות מודל חיוני לחקר התיאוריות אלה בגלל ההומולוגיה בין עכברי והיענות הרדמה אנושית. למרות שעכבר לא יכול להישאל על המודעות הסובייקטיבית שלה תחת הרדמה כללית, רפלקסים פרימיטיביים מסוימים לשמש מדדים פונדקאיות כשימושיים של היפנוזה מכרסם. בימים הראשונים שלאחר לידה, עכברים לפתח שו&quot;ת ליישר רפלקסיביתonse שמונע מהם שיוצבו באופן פסיבי במצב שכיבה 3. המינון של הרדמה שבה עכבר מאבד את רפלקס ליישרה וקושרת היטב עם מינונים היפנוטיים אדם 4. ההערכה של אובדן רפלקס ליישר (LORR) הפכה לסטנדרטית במעבדה בשימוש נרחבת לבדיקת רגישות הרדמה בעכברים, כמו גם מגוון רחב של מינים אחרים, כולל עכברים, שפן ניסיונות, ארנבת, החמוס, כבשים וכלב 5-8. המינון של חומר הרדמה שניתנה בי LORR יתרחש לחברים של מינים הוא עקבי מאוד, אבל זה יכול להיות מוזז באופן משמעותי על ידי גורמים סביבתיים. לדוגמא, חולדות שנשללה שינה רגישות יותר לשני חומרי הרדמה נדיפים ווריד 9 וחולדות עם יכולת אירובית גבוהה פחות רגישים לisoflurane 10. היפותרמיה גם הוכח להקטין את המינון של חומרי הרדמה רבות הנדרשות להיפנוזה במגוון גדול של מיני 11-14. על מנתכדי לזהות את מינון חומר ההרדמה שבי LORR מתרחש בקבוצה של חיות ניסוי מהימן, זה קריטי, כי סביבת ההערכה להיות מבוקרת בקפידה כדי למזער את הלחץ, לשמור על euthermia, ולספק כמויות שווה של תרופה לכל הנושאים. באופן לא מפתיע, גורמים גנטיים ידועים גם לשנות את רגישות ההרדמה 15-18. כתוצאה מכך, שיקול זהיר יש לתת גם לשליטה על רקע גנטי 19. פיתחנו מנגנון שמבטיח אספקת חומר הרדמה גזים זהה לכל אחד מ24 עכברים תוך שמירה על סביבת C 37 o קבועה. העיצוב הגלילי השקוף של תאי החשיפה שלנו מאפשר להערכת LORR המהיר ושילוב קל של מדידות פיסיולוגיות telemetric. מערכת זו הוכח כדי למדוד במדויק isoflurane, halothane, ואינדוקצית sevoflurane 50 EC וזמן הופעתה בwild-type עכברים 20. יש לנו גם בשימושבמערכת זו כדי לצפות שינויים ברגישות לחומר הרדמה בעכברים עם מוטציות גנטיות ונגעי ההיפותלמוס ממוקדים 21-23. כאן אנו מתארים שתי דרכים שבהן רגישות הרדמה ניתן להעריך לאחר התערבות תרופתית באמצעות מנגנון הסביבה המבוקר שלנו. phenotyping מצב היציב של אינדוקציה הרדמה נדיפים ורגישות הופעה דורש 8-10 שעות וכתוצאה מכך הוא מותאם ביותר ללימודים שבתנאי ניסוי לא משתנים, כמו בהתערבויות תרופתיים כרוניות או ארוכות טווח. עם זאת, לטיפולים, משחק קצר תופעות שיתפזרו באופן משמעותי לאורך זמן אנחנו גם להציג הליך פשוט כדי להעריך את השינויים בליישר רפלקס הבא microinjections stereotactically הממוקד או טיפולים תרופתיים תוך ורידי המשפיעים הופעת הרדמה באופן משמעותי. בדיקות אלה מייצגות קבוצה קטנה של היישומים הפוטנציאליים עבור מערכת של הסביבה מבוקרת זו, אשר יכולה להיות מותאמת לכל מספר של Subjects של מגוון מינים כדי לקבל כל סוג של טיפול בשאיפה.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="461">
	<colgroup>
		<col />
		<col span="2" />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:115px;">Name of the Reagent</td>
			<td style="width:88px;">Company</td>
			<td style="width:88px;">Catalogue Number</td>
			<td style="width:171px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:115px;">Oxygen</td>
			<td style="width:88px;">Airgas</td>
			<td style="width:88px;">OX300</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:115px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:88px;">Butler Schein</td>
			<td style="width:88px;"></td>
			<td style="width:171px;">Any volatile anesthetic of interest may be substituted</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:115px;">Name of Material</td>
			<td style="width:88px;">Company</td>
			<td style="width:88px;">Catalogue Number</td>
			<td style="width:171px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:115px;">Mass flow meter- 10 SLPM</td>
			<td style="width:88px;">Omega Engineering</td>
			<td style="width:88px;">FMA-A2309</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:115px;">Mass flow meter- 500 SCCM</td>
			<td style="width:88px;">Omega Engineering</td>
			<td style="width:88px;">FMA-A2305</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:115px;">Anesthetic agent analyzer/gas indicator</td>
			<td style="width:88px;">AM Bickford</td>
			<td style="width:88px;">FI-21 Riken</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:115px;">Heating water pump</td>
			<td style="width:88px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:88px;">13-874-175</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:115px;">Temperature transponders</td>
			<td style="width:88px;">BMDS</td>
			<td style="width:88px;">IPTT-300</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:115px;">RF temperature reader</td>
			<td style="width:88px;">BMDS</td>
			<td style="width:88px;">DAS-6007</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessing changes in volatile general anesthetic sensitivity of mice after local or systemic pharmacological intervention

נקודת סיום רצויה אחד מהרדמה הכללית הוא המצב של חוסר הכרה, הידוע גם בהיפנוזה. הגדרת המצב ההיפנוטי בבעלי חיים היא פחות ברורה מאשר בחולים אנושיים. הפונדקאי התנהגותי בשימוש נרחב להיפנוזה במכרסמים הוא אובדן ליישר רפלקס (LORR), או הנקודה שבה החיה כבר לא מגיבה לאינסטינקט המולד שלהם, כדי למנוע את הפגיעות של כיבה על גב. אנחנו פיתחנו מערכת להערכת LORR ב24 עכברים בו זמנית תוך שליטה בזהירות לבלבול פוטנציאלי, כוללים תנודות טמפרטורה ושונים תזרים גז. תאים אלה יאפשר הערכה אמינה של רגישות הרדמה כפי שהיא נמדדת על ידי חביון להשבה של רפלקס ליישר (RORR) בעקבות חשיפת הרדמה קבועה. לחלופין, באמצעות עלייה בשלבים (או ירידה) בריכוז חומר הרדמה, התאים גם לאפשר קביעת הרגישות של אוכלוסייה לאינדוקציה (או הופעתה), כפי שנמדדו על ידיEC 50 ומדרון גבעה. לבסוף, תאי הסביבה המבוקר המתוארים כאן ניתן להתאים למגוון רחב של שימושים אלטרנטיביים, כוללים משלוח בשאיפה של תרופות אחרות, מחקרי רעלים, וניטור בזמן אמת בו זמנית של סימנים חיוניים.

איור 1 מדגים את התועלת של assay LORR צעד החכם לקביעת השפעות ארוך טווח של התערבות תרופתית. חומצת Ibotenic (רשות השידור) היא אגוניסט של glutamatergic קולטן N-methyl-D-asparate (NMDA) המשמש לעתים קרובות כexcitotoxin לגרום לנגעים עצביים קבועים. כאן אנו הזרקנו 10 NL של 1% בילטרלי רשות השידור לאזור vent...

Watch this Scientific Journal Video about Assessing Changes in Volatile General Anesthetic Sensitivity of Mice after Local or Systemic Pharmacological Intervention at JoVE.com

Assessing Changes in Volatile General Anesthetic Sensitivity of Mice after Local or Systemic Pharmacological Intervention

אובדן של רפלקס ליישר שימש עוד פונדקאית התנהגותיות סטנדרטית לחוסר הכרה, המכונה גם היפנוזה, בחיות מעבדה. שינויים ברגישות לחומר הרדמה נדיפים הנגרמים על ידי התערבויות תרופתיים יכולים להיות מזוהים עם מערכת מבוקרת בקפידה תפוקה גבוהה הערכה, אשר עשוי להיות מותאמת לאספקה ​​של כל טיפולי בשאיפה.

הערכת שינויים בנדיפות כללית הרדמה רגישות של עכברים לאחר התערבות תרופתי מקומית או מערכתית

One desirable endpoint of general anesthesia is  the state of unconsciousness, also known as hypnosis. Defining the hypnotic state in animals is  less ...

assessing-changes-volatile-general-anesthetic-sensitivity-mice-after

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Pharmacology

Medicine

Unit 1

Local Anesthetics

Drugs for Pain Management: Opioid Analgesics and General Anesthetics

SCIENTISTS IN ACTION

13.5K Views.  Perelman School of Medicine, University of Pennsylvania.  אובדן של רפלקס ליישר שימש עוד פונדקאית התנהגותיות סטנדרטית לחוסר הכרה, המכונה גם היפנוזה, בחיות מעבדה. שינויים ברגישות לחומר הרדמה נדיפים הנגרמים על ידי התערבויות תרופתיים יכולים להיות מזוהים עם מערכת מבוקרת בקפידה תפוקה גבוהה הערכה, אשר ...

Video: Assessing Changes in Volatile General Anesthetic Sensitivity of Mice after Local or Systemic Pharmacological Intervention

Assessing Teratogenic Changes in a Zebrafish Model of Fetal Alcohol Exposure

Fetal alcohol syndrome (FAS) is a severe manifestation of embryonic exposure to ethanol. It presents with characteristic defects to the face and organs, including mental retardation due to disordered and damaged brain development. Fetal alcohol spectrum disorder (FASD) is a term used to cover a continuum of birth defects that occur due to maternal alcohol consumption, and occurs in approximately 4% of children born in the United States. With 50% of child-bearing age women reporting consumption of alcohol, and half of all pregnancies being unplanned, unintentional exposure is a continuing issue2. In order to best understand the damage produced by ethanol, plus produce a model with which to test potential interventions, we developed a model of developmental ethanol exposure using the zebrafish embryo. Zebrafish are ideal for this kind of teratogen study3-8. Each pair lays hundreds of eggs, which can then be collected without harming the adult fish. The zebrafish embryo is transparent and can be readily imaged with any number of stains. Analysis of these embryos after exposure to ethanol at different doses and times of duration and application shows that the gross developmental defects produced by ethanol are consistent with the human birth defect. Described here are the basic techniques used to study and manipulate the zebrafish FAS model.

In order to understand the molecular mechanisms of the ethanol-induced developmental damage, we have developed a zebrafish model of ethanol exposure and are exploring the physical, cellular, and genetic alterations that occur after ethanol exposure1. We then seek to find potential interventions and rapidly test them in this animal model.

הערכת שינויים teratogenic במודל דג הזברה של חשיפה אלכוהול עוברית

Fetal alcohol syndrome (FAS) is a severe manifestation of embryonic exposure to ethanol. It presents with characteristic defects to the face and organs, ...

Monitoring of Systemic and Hepatic Hemodynamic Parameters in Mice

The use of mouse models in experimental research is of enormous importance for the study of hepatic physiology and pathophysiological disturbances. However, due to the small size of the mouse, technical details of the intraoperative monitoring procedure suitable for the mouse were rarely described. Previously we have reported a monitoring procedure to obtain hemodynamic parameters for rats. Now, we adapted the procedure to acquire systemic and hepatic hemodynamic parameters in mice, a species ten-fold smaller than rats. This film demonstrates the instrumentation of the animals as well as the data acquisition process needed to assess systemic and hepatic hemodynamics in mice. Vital parameters, including body temperature, respiratory&#160;rate&#160;and heart&#160;rate were recorded throughout the whole procedure. Systemic hemodynamic parameters consist of carotid artery pressure (CAP) and central venous pressure (CVP). Hepatic perfusion parameters include portal vein pressure (PVP), portal flow rate as well as the flow rate of the common hepatic artery (table 1). Instrumentation and data acquisition to record the normal values was completed within 1.5 h. Systemic and hepatic hemodynamic parameters remained within normal ranges during this procedure.
This procedure is challenging but feasible. We have already applied this procedure to assess hepatic hemodynamics in normal mice as well as during 70% partial hepatectomy and in liver lobe clamping experiments. Mean PVP after resection (n= 20), was 11.41&#177;2.94 cmH2O which was significantly higher (P&#60;0.05) than before resection (6.87&#177;2.39 cmH2O). The results of liver lobe clamping experiment indicated that this monitoring procedure is sensitive and suitable for detecting small changes in portal pressure and portal flow rate. In conclusion, this procedure is reliable in the hands of an experienced micro-surgeon but should be limited to experiments where mice are absolutely needed.

This film demonstrates how to acquire systemic and hepatic hemodynamics in mice. The whole monitoring includes acquisition of vital parameters, systemic blood pressure, central venous pressure, common hepatic artery flow rate, and portal vein pressure as well as the portal flow rate in mice.

ניטור של פרמטרים מערכתיים והבדיה המודינמית בעכברים

The use of mouse models in experimental research is of enormous importance for the study of hepatic physiology and pathophysiological disturbances. ...

The bm12 Inducible Model of Systemic Lupus Erythematosus (SLE) in C57BL/6 Mice

Systemic lupus erythematosus (SLE) is an autoimmune disease with diverse clinical and immunological manifestations. Several spontaneous and inducible animal models mirror common components of human disease, including the bm12 transfer model. Upon transfer of bm12 splenocytes or purified CD4 T cells, C57BL/6 mice rapidly develop large frequencies of T follicular helper cells (Tfh), germinal center (GC) B cells, and plasma cells followed by high levels of circulating anti-nuclear antibodies. Since this model utilizes mice on a pure C57BL/6 background, researchers can quickly and easily study disease progression in transgenic or knockout mouse strains in a relatively short period of time. Here we describe protocols for the induction of the model and the quantitation Tfh, GC B cells, and plasma cells by multi-color flow cytometry. Importantly, these protocols can also be used to characterize disease in most mouse models of SLE and identify Tfh, GC B cells, and plasma cells in other disease models.

The bm12 Inducible Model of Systemic Lupus Erythematosus SLE in C57BL/6 Mice

The transfer of bm12 lymphocytes into a C57BL/6 recipient is an established model of systemic lupus erythematosus. Here we describe how to initiate disease using this model and how to characterize T follicular helper cells, germinal center B cells and plasma cells by flow cytometry.

דגם bm12 העין מתנהל של זאבת אדמנתית המערכתית (לופוס) בC57BL עכברים / 6

Systemic lupus erythematosus (SLE) is an autoimmune disease with diverse clinical and immunological manifestations. Several spontaneous and inducible ...

Visualization of Vascular and Parenchymal Regeneration after 70% Partial Hepatectomy in Normal Mice

A modified silicone injection procedure was used for visualization of the hepatic vascular tree. This procedure consisted of in-vivo injection of the silicone compound, via a 26 G catheter, into the portal or hepatic vein. After silicone injection, organs were explanted and prepared for ex-vivo micro-CT (&#181;CT) scanning. The silicone injection procedure is technically challenging. Achieving a successful outcome requires extensive microsurgical experience from the surgeon. One of the challenges of this procedure involves determining the adequate perfusion rate for the silicone compound. The perfusion rate for the silicone compound needs to be defined based on the hemodynamic of the vascular system of interest. Inappropriate perfusion rate can lead to an incomplete perfusion, artificial dilation and rupturing of vascular trees.
The 3D reconstruction of the vascular system was based on CT scans and was achieved using preclinical software such as HepaVision. The quality of the reconstructed vascular tree was directly related to the quality of silicone perfusion. Subsequently computed vascular parameters indicative of vascular growth, such as total vascular volume, were calculated based on the vascular reconstructions. Contrasting the vascular tree with silicone allowed for subsequent histological work-up of the specimen after &#181;CT scanning. The specimen can be subjected to serial sectioning, histological analysis and whole slide scanning, and thereafter to 3D reconstruction of the vascular trees based on histological images. This is the prerequisite for the detection of molecular events and their distribution with respect to the vascular tree. This modified silicone injection procedure can also be used to visualize and reconstruct the vascular systems of other organs. This technique has the potential to be extensively applied to studies concerning vascular anatomy and growth in various animal and disease models.

Tools used for visualizing vascular regeneration require methods for contrasting the vascular trees. This film demonstrated a delicate injection technique used to achieve optimal contrasting of the vascular trees and illustrate the potential benefits resulting from a detailed analysis of the resulting specimen using &#181;CT and histological serial sections.

ויזואליזציה של התחדשות כלי דם Parenchymal לאחר 70% חלקיות כריתה בעכברים נורמליים

A modified silicone injection procedure was used for visualization of the hepatic vascular tree. This procedure consisted of in-vivo injection of the ...

Intrasplenic Transplantation of Hepatocytes After Partial Hepatectomy in NOD.SCID Mice

Partial hepatectomy is a versatile and reproducible method to study liver regeneration and the effect of cell based therapeutics in various pathological conditions. Partial hepatectomy also facilitates the increased engraftment and proliferation of transplanted cells by accelerating neovascularization and cell migration towards the liver. Here, we describe a simple protocol for performing 30% hepatectomy and transplantation of cells in the spleen of a non-obese diabetic/severe combined immunodeficient NOD.SCID (NOD.CB17-Prkdcscid/J) mouse. 
In this procedure, two small incisions are made. The first incision is to expose and resect the left lobe of the liver, and another small incision is made to expose the spleen for the intrasplenic transplantation of cells. This procedure does not require any specialized surgical skills, and it can be completed in 5-7 minutes with less stress and pain, faster recovery, and better survival. We have demonstrated the transplantation of hepatocytes isolated from a green fluorescent protein (GFP) expressing mouse (Transgenic C57BL/6-Tg (UBC-GFP) 30Scha/J), as well as hepatocyte like cells of human origin (NeoHep) in partially hepatectomized NOD.SCID mice.

We have described a protocol for performing partial hepatectomy (PHx) and cell transplantation via spleen in NOD.SCID (NOD.CB17-Prkdcscid/J) mice. In this protocol, an incision is made to expose and resect the left lobe of the liver followed by another incision for the intrasplenic transplantation of cells.

השתלת intrasplenic של Hepatocytes לאחר Hepatectomy חלקית ב במנוד ראש. SCID עכברים

Partial hepatectomy is a versatile and reproducible method to study liver regeneration and the effect of cell based therapeutics in various pathological ...

Isolation of Regenerating Hepatocytes after Partial Hepatectomy in Mice

Partial hepatectomy has been widely used to investigate liver regeneration in mice, but the isolation of high yields of viable hepatocytes for downstream single-cell applications is challenging. A marked accumulation of lipids within regenerating hepatocytes is observed during the first 2 days of normal liver regeneration in mice. This so-called transient regeneration-associated steatosis (TRAS) is temporary but partially overlaps the major proliferative phase. Density-gradient purification is the backbone of most existing protocols for the isolation of primary hepatocytes. As gradient purification relies on the density and size of cells, it separates non-steatotic from steatotic hepatocyte populations. Therefore, fatty hepatocytes often are lost, yielding non-representative hepatocyte fractions. 
The presented protocol describes an easy and reliable method for the in vivo isolation of regenerating hepatocytes regardless of their lipid content. Hepatocytes from male C57BL/6 mice are isolated 24-48 h after hepatectomy by a classic two-step collagenase perfusion approach. A standard peristaltic pump drives the warmed solutions via the catheterized inferior vena cava into the remnant, using a retrograde perfusion technique with outflow through the portal vein. Hepatocytes are dissociated by collagenase for their release from the Glisson's capsule. After washing and careful centrifugation, the hepatocytes can be used for any downstream analyses. In conclusion, this paper describes a straightforward and reproducible technique for the isolation of a representative population of regenerating hepatocytes after partial hepatectomy in mice. The method may also aid the study of fatty liver disease.

Lipid-laden hepatocytes are inherent to liver regeneration but are usually lost upon density-gradient centrifugation. Here, we present an optimized cell isolation protocol that retains steatotic hepatocytes, yielding representative populations of regenerating hepatocytes after partial hepatectomy in mice.

בידוד של הפטוציטים מתחדשים לאחר כריתת כבד חלקית בעכברים

Partial hepatectomy has been widely used to investigate liver regeneration in mice, but the isolation of high yields of viable hepatocytes for downstream ...

המנגנון של סלידרוסיד בדיכוי נדידת תאי MCF-7 והתפשטותם

Exploring the Pharmacological Action and Molecular Mechanism of Salidroside in Inhibiting MCF-7 Cell Proliferation and Migration

Salidroside (Sal) contains anti-carcinogenic, anti-hypoxic, and anti-inflammatory pharmacological activities. However, its underlying anti-breast cancer mechanisms have been only incompletely elucidated. Hence, this protocol intended to decode the potential of Sal in regulating the PI3K-AKT-HIF-1&#945;-FoxO1 pathway in the malignant proliferation of human breast cancer MCF-7 cells. First, the pharmacological activity of Sal against MCF-7 was evaluated by CCK-8 and cell scratch assays. Moreover, the resistance of MCF-7 cells was measured by migration and Matrigel invasion assays. For cell apoptosis and cycle assays, MCF-7 cells were processed in steps with annexin V-FITC/PI and cell cycle-staining detection kits for flow cytometry analyses, respectively. The levels of reactive oxygen species (ROS) and Ca2+ were examined by DCFH-DA and Fluo-4 AM immunofluorescence staining. The activities of Na+-K+-ATPase and Ca2+-ATPase were determined using the corresponding commercial kits. The protein and gene expression levels in apoptosis and the PI3K-AKT-HIF-1&#945;-FoxO1 pathway were further determined using western blot and qRT-PCR analyses, respectively. We found that Sal treatment significantly restricted the proliferation, migration, and invasion of MCF-7 cells with dose-dependent effects. Meanwhile, Sal administration also dramatically forced MCF-7 cells to undergo apoptosis and cell cycle arrest. The immunofluorescence tests showed that Sal observably stimulated ROS and Ca2+ production in MCF-7 cells. Further data confirmed that Sal promoted the expression levels of pro-apoptotic proteins, Bax, Bim, cleaved caspase-9/7/3, and their corresponding genes. Consistently, Sal intervention prominently reduced the expression of the Bcl-2, p-PI3K/PI3K, p-AKT/AKT, mTOR, HIF-1&#945;, and FoxO1 proteins and their corresponding genes. In conclusion, Sal can be used as a potential herb-derived compound for treating breast cancer, as it may reduce the malignant proliferation, migration, and invasion of MCF-7 cells by inhibiting the PI3K-AKT-HIF-1&#945;-FoxO1 pathway.

מחבר זרקור: חקר המנגנונים המולקולריים של סלידרוסיד בטיפול בסרטן השד 

The present protocol describesa comprehensive strategy for evaluating the pharmacological action and mechanism of salidroside in inhibiting MCF-7 cell proliferation and migration.

חקר הפעולה הפרמקולוגית והמנגנון המולקולרי של סלידרוסיד בעיכוב התרבות ונדידת תאי MCF-7

Salidroside (Sal) contains anti-carcinogenic, anti-hypoxic, and anti-inflammatory pharmacological activities. However, its underlying anti-breast cancer ...

פיתוח תוכנית פעילות גופנית לחולי דלקת מפרקים שגרונית

Evaluation of Changes in Hydration and Body Cell Mass with Bioelectrical Impedance Analysis after Exercise Program for Rheumatoid Arthritis Patients

Rheumatoid arthritis (RA) is a debilitating disease that can result in complications such as rheumatoid cachexia. While physical exercise has shown benefits for RA patients, its impact on hydration and body cell mass remains uncertain. The presence of pain, inflammation, and joint changes often restrict activity and make traditional body composition assessments unreliable due to altered hydration levels. Bioelectrical impedance is a commonly used method for estimating body composition, but it has limitations since it was primarily developed for the general population and does not consider changes in body composition. On the other hand, bioelectrical impedance vectorial analysis (BIVA) offers a more comprehensive approach. BIVA involves graphically interpreting resistance (R) and reactance (Xc), adjusted for height, to provide valuable information about hydration status and the integrity of the cell mass.
Twelve women with RA were included in this study. At the beginning of the study, hydration and body cell mass measurements were obtained using the BIVA method. Subsequently, the patients participated in a six-month dynamic exercise program encompassing cardiovascular capacity, strength, and coordination training. To evaluate changes in hydration and body cell mass, the differences in the R and Xc parameters, adjusted for height, were compared using BIVA confidence software. The results showed notable changes: resistance decreased after the exercise program, while reactance increased. BIVA, as a classification method, can effectively categorize patients into dehydration, overhydration, normal, athlete, thin, cachectic, and obese categories. This makes it a valuable tool for assessing RA patients, as it provides information independent of body weight or prediction equations. Overall, the implementation of BIVA in this study shed light on the effects of the exercise program on hydration and body cell mass in RA patients. Its advantages lie in its ability to provide comprehensive information and overcome the limitations of traditional body composition assessment methods.

מחבר זרקור: יישום BIVA לניתוח גורמי סיכון למחלות בחולים עם מסת גוף נמוכה 

This protocol assesses alterations in hydration and body cell mass status using bioelectrical impedance vectorial analysis following a dynamic exercise program designed for patients with rheumatoid arthritis. The dynamic exercise program itself is detailed, highlighting its components focused on cardiovascular capacity, strength, and coordination. The protocol details steps, instruments, and limitations.

הערכת שינויים בהידרציה ובמסת תאי הגוף באמצעות ניתוח עכבה ביואלקטרית לאחר תוכנית פעילות גופנית לחולי דלקת מפרקים שגרונית

Rheumatoid arthritis (RA) is a debilitating disease that can result in complications such as rheumatoid cachexia. While physical exercise has shown ...