Ce travail a été soutenu par R01 et T32 GM088156 HL007713-18. Nous tenons à remercier Bill Pennie et Michael Carman de l&#39;Université de Pennsylvanie recherche Instrumentation Boutique pour leur aide dans le montage de notre appareil de réflexe de redressement.

Toutes les procédures impliquant des animaux décrits ci-dessus ont été approuvés par l&#39;Université du comité institutionnel de protection et d&#39;utilisation des animaux de la Pennsylvanie. Une. Vue d&#39;ensemble de l&#39;appareil d&#39;essai <ol><li> L&#39;appareil d&#39;essai se compose de 24 chambres claires acrylique cylindriques de 10 cm de longueur et de 5 cm de diamètre (volume total de 200 ml). Cette taille est appropriée pour une souris adulte typique de 25 g. Chambers ont des ports à chaque extrémité pour l&#39;entrée et sortie de gaz. L&#39;extrémité de sortie est amovible de sorte que les animaux peuvent être facilement chargés dans la chambre. les sabords de gaz sont soigneusement scellées avec du ruban téflon, tandis que les joints toriques en caoutchouc sont utilisés pour sceller l&#39;extrémité amovible des chambres cylindriques. </li><li> Chaque chambre est montée sur un support qui se trouve à l&#39;intérieur d&#39;un bain d&#39;eau. Le support est monté de telle sorte que seule la partie inférieure des chambres (au-dessous des entrées de gaz) est immergée. Pour la stabilité, l&#39;extrémité arrière de la chambre repose sur un support de telle sorte que l&#39;ensemble de chamber se trouve horizontalement. Cette garantit un contact de l&#39;ensemble de chambre à la salle de bain. </li><li> un tube de polyéthylène relie un réservoir d&#39;oxygène à un vaporisateur d&#39;anesthésique, puis passe à travers un L / débitmètre 10 min. Le tube se divise en 25 résistances de faible diamètre d&#39;une longueur égale à assurer un écoulement égal est délivré à chacun des 24 chambres et à un analyseur d&#39;agent. </li><li> Les conduites de vide sortent chaque chambre à l&#39;extrémité opposée de l&#39;entrée de gaz. Cela favorise un écoulement unidirectionnel qui élimine réinhalation de dioxyde de carbone expiré. Les lignes de vide se combinent à un collecteur de se connecter à une ligne d&#39;aspiration en interne. Une valve pop-off le long de la ligne de vide principale assure des conditions de pression atmosphérique dans chaque chambre. </li><li> Le bain est rempli avec suffisamment d&#39;eau pour communiquer pleinement le fond de chaque chambre. L&#39;eau est mise en circulation à travers le bain et maintenu à une température constante de 37 ° C par une pompe. </li></ol> 2. Vérifiez le système avant l&#39;exposition <ol><li> Cdiable ce que la température du bain d&#39;eau est de 37 ° C tout au long de la baignoire. </li><li> Couler de l&#39;oxygène à un débit de 5 L / min (200 ml / min par l&#39;agent analyseur chambre +). Immerger chaque chambre sous l&#39;eau et de chercher les bulles ou entrée d&#39;eau dans la chambre, les deux qui sont indicatifs de fuites. Scellez toutes les fuites avant de commencer l&#39;expérience. </li><li> Pour chaque chambre, connecter un ml / min de 500 mètres d&#39;écoulement en ligne après la chambre pour s&#39;assurer que les flux sont équilibrés entre chacune des lignes de gaz 25. Cela assure que les flux d&#39;entrée de 5 L / min seront distribués uniformément de sorte que chaque chambre reçoit l&#39;écoulement 200 ml / min. Toute chambre pas recevoir le flux prévu devrait avoir son entrée et la sortie des tubes vérifier les obstructions. </li><li> Calibrer l&#39;analyseur d&#39;agent pour assurer une lecture de 0,00% d&#39;isoflurane quand 100% d&#39;oxygène circule. </li></ol> 3. Implant Température transpondeur <ol><li> Une semaine avant l&#39;accoutumance, anesthésier chaque souris avec 2% d&#39;isoflurane. </li><li> Stériliser la zone dorsale du cou avec de la bétadine. </li><li> Injecter un transpondeur sous-cutanée de température entre les omoplates à l&#39;aide de l&#39;aiguille d&#39;injecteur préemballé stérile. </li><li> Surveiller le site d&#39;injection par jour pendant l&#39;infection et la migration du transpondeur. </li></ol> 4. Habituer les animaux de test Chambers <ol><li> Quatre jours avant la première évaluation, placer toutes les souris dans des chambres individuelles pour 2 heures avec un courant de 100% d&#39;oxygène. </li><li> Répétez l&#39;étape 4.1 par jour pendant quatre jours avant l&#39;évaluation pour éviter les effets de confusion de stress dû à un nouvel environnement. </li></ol> 5. Effectuer l&#39;intervention pharmacologique que vous souhaitez tester pour les effets sur la sensibilité anesthésique <ol><li> Cette intervention peut être une injection stéréotaxique dans une partie spécifique du cerveau 24, une injection intraveineuse ou intrapéritonéale 25, ou à la livraison d&#39;un médicament à une zone spécifique du cerveau par une canule 26. </li><li> Du fait que ces procédures peuvent eux-mêmes modifier la sensibilité anesthésique par rapport à un animal naïf, un groupe témoin approprié devrait subir le même mode opératoire avec des injections de véhicule. </li><li> Veiller à ce que l&#39;intervention pharmacologique a une suffisamment longue durée d&#39;action si vous envisagez de faire un pas à pas l&#39;augmentation et / ou diminution de la détermination de la sensibilité anesthésique, comme indiqué à l&#39;étape 6 ci-dessous, sinon, passez à l&#39;étape 7. </li></ol> 6. Évaluer anesthésique sensibilité en utilisant le pas à pas CE 50 Détermination de l&#39;induction et de l&#39;émergence <ol><li> Placez chaque animal dans des chambres individuelles avec un courant de 100% d&#39;oxygène. </li><li> Régler la concentration d&#39;isoflurane à 0,4% * pendant 15 min. Pendant les 2 dernières minutes de cette période, évaluer réflexe de redressement de chaque animal en roulant doucement la chambre jusqu&#39;à ce que la souris est placé sur le dos. Le réflexe de redressement est considérée comme intacte si et seulement si la souris est capable de restaurer tousde ses pattes sur le plancher de la chambre à moins de 2 min. <ol><li> * Notez que 0,4% d&#39;isoflurane est une dose subhypnotic chez les souris C57BL/6J. Si des souris perdent leur réflexe de redressement lors de la première étape, la dose initiale était trop grande et doit être réduite les jours suivants. </li></ol></li><li> Enregistrer l&#39;état du réflexe de redressement pour chaque souris et analyser chaque souris pour les données de température. Un enregistrement de modèle est représenté dans le tableau 1. </li><li> Augmenter la concentration d&#39;isoflurane par ~ 0,05% pendant 15 minutes et répéter l&#39;étape 7.2. Continuer ainsi jusqu&#39;à ce que tous les animaux ont perdu leur réflexe de redressement. </li><li> Facultatif: répétez la même procédure pour diminuer les doses isoflurane étape par étape jusqu&#39;à ce que tous les animaux ont retrouvé leur réflexe de redressement (voir l&#39;étape 6.3). </li><li> Pour mettre fin à l&#39;expérience, éteignez l&#39;isoflurane et rincer tout le système avec 100% d&#39;oxygène pendant 15 min. Cela aidera à prévenir l&#39;hypoxie que les souris récupérer avant d&#39;être retournées à leurs cages et protéger la experimenter de toute exposition anesthésique. </li><li> Facultatif: si le nombre d&#39;animaux ou le nombre de concentrations anesthésiques est limité en raison du manque de ressources ou de temps, les estimations, en particulier des paramètres de la courbe d&#39;ajustement de la pente peuvent avoir sous-estimé la colline faussement estimation basse, d&#39;erreur. Dans de tels cas, il peut être nécessaire de répéter la mesure de la sensibilité anesthésie décrit dans les étapes 6.1 à 6.6 sur un maximum de deux jours expérimentales supplémentaires pour obtenir pleinement le paramètre de la véritable pente de Hill et son estimation d&#39;erreur correspondant. </li></ol> 7. Évaluer les changements à court terme dans anesthésique sensibilité avec le temps à l&#39;émergence <ol><li> Placez chaque animal dans des chambres individuelles avec un courant de 100% d&#39;oxygène. </li><li> Régler la concentration d&#39;isoflurane à 1,2%, ce qui correspond à l&#39;induction ED 99 pour la souris C57BL/6J de type sauvage 20. Maintenir pendant 30-60 minutes en fonction de la durée prévue de l&#39;action de l&#39;intervention aiguë. </li><li> Confirmez LORR danstous les animaux en roulant doucement chaque chambre jusqu&#39;à ce que les souris sont placées sur le dos. </li><li> Désactiver l&#39;isoflurane et le débit 100% d&#39;oxygène. Mesurer le temps jusqu&#39;à ce que chaque animal retrouve son réflexe de redressement. Ceci est défini par la mise en place de l&#39;ensemble des quatre pattes sur le plancher de la chambre et confirmé par la présence de trois essais consécutifs avec un réflexe de redressement intact. </li></ol>

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Les auteurs n&#39;ont rien à révéler.

Bien que l&#39;évaluation de LORR en un seul clic est une tâche apparemment simple, il est néanmoins essentiel de maintenir des conditions physiologiques identiques entre les sujets afin de recueillir des données fiables à partir d&#39;un groupe d&#39;animaux. L&#39;, appareil de LORR haute capacité strictement réglementé présenté ici propose une façon de normaliser les expériences et de maximiser l&#39;efficacité. En suivant les principes de base de la thermorégulation et la distribution de débit égal, ...

Anesthésiques généraux sont définis par leur capacité à provoquer un état réversible de l&#39;hypnose dans une grande variété d&#39;espèces, encore une explication quant à la façon dont une telle classe diversifiée de médicaments peut tout obtenir un point de terminaison singulier reste insaisissable. Un certain nombre de théories ont été avancées au fil des ans, à partir de la corrélation entre Meyer-Overton pouvoir anesthésiant et solubilité dans les lipides, ce qui suggère des perturbations généraux de la membrane de base à l&#39;hypnose 1,2. Des données plus récentes suggèrent que les cibles de protéines affectant la signalisation neuronale contribuent à des effets anesthésiants. Les souris se sont avérées être un modèle indispensable à l&#39;exploration de ces théories en raison de l&#39;homologie entre la souris et la réactivité de l&#39;anesthésique humain. Bien que la souris ne peut pas être interrogé sur sa conscience subjective sous anesthésie générale, certains réflexes primitifs servent mesures de substitution utiles de rongeur hypnose. Dans les premiers jours suivant la naissance, les souris développent un redressement resp réflexiveonse qui les empêche d&#39;être passivement placé en décubitus dorsal 3. La dose d&#39;anesthésie au cours de laquelle une souris perd son réflexe de redressement est bien corrélée avec des doses hypnotiques humaines 4. Évaluation de la perte de réflexe de redressement (LORR) est devenu un standard de laboratoire largement utilisé pour tester la sensibilité anesthésie chez les souris ainsi qu&#39;une variété d&#39;autres espèces, y compris chez le rat, cochon Guinée, lapin, furet, moutons, chien et 5-8. La dose d&#39;un anesthésique administré à laquelle LORR aura lieu pour les membres d&#39;une espèce est extrêmement cohérent, mais il peut être déplacé de manière significative par des facteurs environnementaux. Par exemple, les rats privés de sommeil sont plus sensibles à la fois aux anesthésiques volatiles et intraveineuse 9 et le rat avec la capacité aérobie élevée sont moins sensibles à l&#39;isoflurane 10. L&#39;hypothermie a également été montré une diminution de la dose de nombreux anesthésiques nécessaires à l&#39;hypnose dans un large spectre d&#39;espèces de 11 à 14. Pourà identifier de manière fiable la dose anesthésique à qui LORR se produit dans un groupe d&#39;animaux de laboratoire, il est essentiel que l&#39;environnement d&#39;évaluation être soigneusement contrôlée pour minimiser le stress, maintenir euthermia, et de livrer des quantités égales de drogue à tous les sujets. Sans surprise, les facteurs génétiques sont également connus pour modifier la sensibilité anesthésie 15-18. Par conséquent, une attention particulière devrait également être accordée au contrôle pour le fond génétique 19. Nous avons mis au point un appareil qui assure la livraison de gaz anesthésique identique à chacun des 24 souris tout en maintenant un environnement constant de C 37 o. Le design cylindrique transparente de nos chambres d&#39;exposition permet une évaluation de LORR rapide et une intégration facile des mesures physiologiques télémétriques. Ce système a été montré pour mesurer avec précision l&#39;isoflurane, halothane et le sévoflurane induction CE 50 et le temps de l&#39;émergence de souris de type sauvage 20. Nous avons également utiliséce système pour observer les changements dans la sensibilité anesthésie chez la souris avec des mutations génétiques et des lésions hypothalamiques ciblées 21-23. Nous décrivons ici deux façons de sensibilité anesthésie peut être évaluée après une intervention pharmacologique utilisant notre appareil dans un environnement contrôlé. L&#39;état d&#39;équilibre de phénotypage volatile induction anesthésique et de la sensibilité de l&#39;émergence nécessite 8-10 heures et est donc mieux adaptée pour des études dans des conditions expérimentales qui ne changent pas, comme dans les interventions pharmacologiques chroniques ou de longue durée d&#39;action. Toutefois, pour les traitements à action rapide dont les effets se dissiper au fil du temps, nous présentons également une procédure simple pour évaluer les changements de réflexe de redressement suivantes microinjections stéréotaxique ciblées ou des traitements de drogues injectables qui ont une incidence significative émergence anesthésie. Ces tests représentent un petit sous-ensemble des applications potentielles de ce système dans un environnement contrôlé, qui pourrait être adapté pour n&#39;importe quel nombre de subjects d&#39;une variété d&#39;espèces de recevoir tout type de thérapeutique par inhalation.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="461">
	<colgroup>
		<col />
		<col span="2" />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:115px;">Name of the Reagent</td>
			<td style="width:88px;">Company</td>
			<td style="width:88px;">Catalogue Number</td>
			<td style="width:171px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:115px;">Oxygen</td>
			<td style="width:88px;">Airgas</td>
			<td style="width:88px;">OX300</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:115px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:88px;">Butler Schein</td>
			<td style="width:88px;"></td>
			<td style="width:171px;">Any volatile anesthetic of interest may be substituted</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:115px;">Name of Material</td>
			<td style="width:88px;">Company</td>
			<td style="width:88px;">Catalogue Number</td>
			<td style="width:171px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:115px;">Mass flow meter- 10 SLPM</td>
			<td style="width:88px;">Omega Engineering</td>
			<td style="width:88px;">FMA-A2309</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:115px;">Mass flow meter- 500 SCCM</td>
			<td style="width:88px;">Omega Engineering</td>
			<td style="width:88px;">FMA-A2305</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:115px;">Anesthetic agent analyzer/gas indicator</td>
			<td style="width:88px;">AM Bickford</td>
			<td style="width:88px;">FI-21 Riken</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:115px;">Heating water pump</td>
			<td style="width:88px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:88px;">13-874-175</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:115px;">Temperature transponders</td>
			<td style="width:88px;">BMDS</td>
			<td style="width:88px;">IPTT-300</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:115px;">RF temperature reader</td>
			<td style="width:88px;">BMDS</td>
			<td style="width:88px;">DAS-6007</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessing changes in volatile general anesthetic sensitivity of mice after local or systemic pharmacological intervention

Un critère souhaitable de l&#39;anesthésie générale est l&#39;état d&#39;inconscience, aussi connu comme l&#39;hypnose. Définir l&#39;état hypnotique chez les animaux est moins simple qu&#39;elle ne l&#39;est chez les patients humains. Un substitut du comportement largement utilisé pour l&#39;hypnose chez les rongeurs est la perte du réflexe de redressement (LORR), ou le moment où l&#39;animal ne répond plus à leur instinct inné d&#39;éviter la vulnérabilité de décubitus dorsal. Nous avons développé un système d&#39;évaluation LORR dans 24 souris simultanément tout en contrôlant soigneusement pour les facteurs de confusion potentiels, y compris les variations de température et différents flux de gaz. Ces chambres permettent une évaluation fiable de la sensibilité anesthésie mesurée par la latence pour revenir du réflexe de redressement (RORR) après une exposition anesthésie fixe. Sinon, en utilisant par étapes augmente (ou diminue) de la concentration anesthésique, les chambres permettent également la détermination de la sensibilité de la population à induction (ou l&#39;émergence), telle que mesurée parCE 50 et la pente de Hill. Enfin, les chambres environnementales contrôlées décrites ici peuvent être adaptés pour une variété d&#39;utilisations alternatives, y compris la livraison inhalé d&#39;autres médicaments, des études de toxicologie et simultanée surveillance en temps réel des signes vitaux.

La figure 1 montre l&#39;utilité du dosage LORR étape par étape pour déterminer les effets à long terme d&#39;une intervention pharmacologique. Acide iboténique (IBA) est un agoniste de la glutamatergique N-méthyl-D-aspartate (NMDA) qui est souvent utilisé comme un excitotoxine à provoquer des lésions neuronales permanentes. Ici nous avons injecté 10 nl de 1% IBA bilatérale dans la zone préoptique ventro (VLPO) de souris C57BL/6J une semaine avant le test. La majorité des neurones dans ce ...

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Assessing Changes in Volatile General Anesthetic Sensitivity of Mice after Local or Systemic Pharmacological Intervention

Perte du réflexe de redressement a longtemps servi comme un substitut de comportement standard pour la perte de conscience, aussi appelé l&#39;hypnose, chez les animaux de laboratoire. Altérations de la sensibilité anesthésique volatil causés par des interventions pharmacologiques peuvent être détectés avec un système d&#39;évaluation à haut débit soigneusement contrôlé, qui peut être adapté pour la livraison de toute thérapeutique inhalé.

Évaluer les changements dans volatils anesthésie générale sensibilité des souris après l&#39;intervention pharmacologique local ou systémique

One desirable endpoint of general anesthesia is  the state of unconsciousness, also known as hypnosis. Defining the hypnotic state in animals is  less ...

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Medicine

Unit 1

Local Anesthetics

Drugs for Pain Management: Opioid Analgesics and General Anesthetics

SCIENTISTS IN ACTION

13.5K vues.  Perelman School of Medicine, University of Pennsylvania.  Perte du réflexe de redressement a longtemps servi comme un substitut de comportement standard pour la perte de conscience, aussi appelé l'hypnose, chez les animaux de laboratoire. Altérations de la sensibilité anesthésique volatil causés par des interventions pharmacologiques peuvent être détectés avec un système d'évaluation à haut débit soigneusement contrôlé, qui peut être adapté pour la livraison de toute thérapeutique inhalé. 

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Assessing Teratogenic Changes in a Zebrafish Model of Fetal Alcohol Exposure

Fetal alcohol syndrome (FAS) is a severe manifestation of embryonic exposure to ethanol. It presents with characteristic defects to the face and organs, including mental retardation due to disordered and damaged brain development. Fetal alcohol spectrum disorder (FASD) is a term used to cover a continuum of birth defects that occur due to maternal alcohol consumption, and occurs in approximately 4% of children born in the United States. With 50% of child-bearing age women reporting consumption of alcohol, and half of all pregnancies being unplanned, unintentional exposure is a continuing issue2. In order to best understand the damage produced by ethanol, plus produce a model with which to test potential interventions, we developed a model of developmental ethanol exposure using the zebrafish embryo. Zebrafish are ideal for this kind of teratogen study3-8. Each pair lays hundreds of eggs, which can then be collected without harming the adult fish. The zebrafish embryo is transparent and can be readily imaged with any number of stains. Analysis of these embryos after exposure to ethanol at different doses and times of duration and application shows that the gross developmental defects produced by ethanol are consistent with the human birth defect. Described here are the basic techniques used to study and manipulate the zebrafish FAS model.

In order to understand the molecular mechanisms of the ethanol-induced developmental damage, we have developed a zebrafish model of ethanol exposure and are exploring the physical, cellular, and genetic alterations that occur after ethanol exposure1. We then seek to find potential interventions and rapidly test them in this animal model.

Évaluer les changements tératogènes dans un modèle de poisson zèbre de l&#39;exposition d&#39;alcoolisation fœtale

Fetal alcohol syndrome (FAS) is a severe manifestation of embryonic exposure to ethanol. It presents with characteristic defects to the face and organs, ...

Recherche

Médecine

Monitoring of Systemic and Hepatic Hemodynamic Parameters in Mice

The use of mouse models in experimental research is of enormous importance for the study of hepatic physiology and pathophysiological disturbances. However, due to the small size of the mouse, technical details of the intraoperative monitoring procedure suitable for the mouse were rarely described. Previously we have reported a monitoring procedure to obtain hemodynamic parameters for rats. Now, we adapted the procedure to acquire systemic and hepatic hemodynamic parameters in mice, a species ten-fold smaller than rats. This film demonstrates the instrumentation of the animals as well as the data acquisition process needed to assess systemic and hepatic hemodynamics in mice. Vital parameters, including body temperature, respiratory&#160;rate&#160;and heart&#160;rate were recorded throughout the whole procedure. Systemic hemodynamic parameters consist of carotid artery pressure (CAP) and central venous pressure (CVP). Hepatic perfusion parameters include portal vein pressure (PVP), portal flow rate as well as the flow rate of the common hepatic artery (table 1). Instrumentation and data acquisition to record the normal values was completed within 1.5 h. Systemic and hepatic hemodynamic parameters remained within normal ranges during this procedure.
This procedure is challenging but feasible. We have already applied this procedure to assess hepatic hemodynamics in normal mice as well as during 70% partial hepatectomy and in liver lobe clamping experiments. Mean PVP after resection (n= 20), was 11.41&#177;2.94 cmH2O which was significantly higher (P&#60;0.05) than before resection (6.87&#177;2.39 cmH2O). The results of liver lobe clamping experiment indicated that this monitoring procedure is sensitive and suitable for detecting small changes in portal pressure and portal flow rate. In conclusion, this procedure is reliable in the hands of an experienced micro-surgeon but should be limited to experiments where mice are absolutely needed.

This film demonstrates how to acquire systemic and hepatic hemodynamics in mice. The whole monitoring includes acquisition of vital parameters, systemic blood pressure, central venous pressure, common hepatic artery flow rate, and portal vein pressure as well as the portal flow rate in mice.

Surveillance des paramètres hémodynamiques systémiques et hépatique chez la souris

The use of mouse models in experimental research is of enormous importance for the study of hepatic physiology and pathophysiological disturbances. ...

The bm12 Inducible Model of Systemic Lupus Erythematosus (SLE) in C57BL/6 Mice

Systemic lupus erythematosus (SLE) is an autoimmune disease with diverse clinical and immunological manifestations. Several spontaneous and inducible animal models mirror common components of human disease, including the bm12 transfer model. Upon transfer of bm12 splenocytes or purified CD4 T cells, C57BL/6 mice rapidly develop large frequencies of T follicular helper cells (Tfh), germinal center (GC) B cells, and plasma cells followed by high levels of circulating anti-nuclear antibodies. Since this model utilizes mice on a pure C57BL/6 background, researchers can quickly and easily study disease progression in transgenic or knockout mouse strains in a relatively short period of time. Here we describe protocols for the induction of the model and the quantitation Tfh, GC B cells, and plasma cells by multi-color flow cytometry. Importantly, these protocols can also be used to characterize disease in most mouse models of SLE and identify Tfh, GC B cells, and plasma cells in other disease models.

The bm12 Inducible Model of Systemic Lupus Erythematosus SLE in C57BL/6 Mice

The transfer of bm12 lymphocytes into a C57BL/6 recipient is an established model of systemic lupus erythematosus. Here we describe how to initiate disease using this model and how to characterize T follicular helper cells, germinal center B cells and plasma cells by flow cytometry.

Le bm12 inductible modèle du lupus érythémateux disséminé (SLE) dans C57BL / 6

Systemic lupus erythematosus (SLE) is an autoimmune disease with diverse clinical and immunological manifestations. Several spontaneous and inducible ...

Visualization of Vascular and Parenchymal Regeneration after 70% Partial Hepatectomy in Normal Mice

A modified silicone injection procedure was used for visualization of the hepatic vascular tree. This procedure consisted of in-vivo injection of the silicone compound, via a 26 G catheter, into the portal or hepatic vein. After silicone injection, organs were explanted and prepared for ex-vivo micro-CT (&#181;CT) scanning. The silicone injection procedure is technically challenging. Achieving a successful outcome requires extensive microsurgical experience from the surgeon. One of the challenges of this procedure involves determining the adequate perfusion rate for the silicone compound. The perfusion rate for the silicone compound needs to be defined based on the hemodynamic of the vascular system of interest. Inappropriate perfusion rate can lead to an incomplete perfusion, artificial dilation and rupturing of vascular trees.
The 3D reconstruction of the vascular system was based on CT scans and was achieved using preclinical software such as HepaVision. The quality of the reconstructed vascular tree was directly related to the quality of silicone perfusion. Subsequently computed vascular parameters indicative of vascular growth, such as total vascular volume, were calculated based on the vascular reconstructions. Contrasting the vascular tree with silicone allowed for subsequent histological work-up of the specimen after &#181;CT scanning. The specimen can be subjected to serial sectioning, histological analysis and whole slide scanning, and thereafter to 3D reconstruction of the vascular trees based on histological images. This is the prerequisite for the detection of molecular events and their distribution with respect to the vascular tree. This modified silicone injection procedure can also be used to visualize and reconstruct the vascular systems of other organs. This technique has the potential to be extensively applied to studies concerning vascular anatomy and growth in various animal and disease models.

Tools used for visualizing vascular regeneration require methods for contrasting the vascular trees. This film demonstrated a delicate injection technique used to achieve optimal contrasting of the vascular trees and illustrate the potential benefits resulting from a detailed analysis of the resulting specimen using &#181;CT and histological serial sections.

Visualisation des vasculaire et parenchymateuse Régénération après 70% hépatectomie partielle chez des souris normales

A modified silicone injection procedure was used for visualization of the hepatic vascular tree. This procedure consisted of in-vivo injection of the ...

Intrasplenic Transplantation of Hepatocytes After Partial Hepatectomy in NOD.SCID Mice

Partial hepatectomy is a versatile and reproducible method to study liver regeneration and the effect of cell based therapeutics in various pathological conditions. Partial hepatectomy also facilitates the increased engraftment and proliferation of transplanted cells by accelerating neovascularization and cell migration towards the liver. Here, we describe a simple protocol for performing 30% hepatectomy and transplantation of cells in the spleen of a non-obese diabetic/severe combined immunodeficient NOD.SCID (NOD.CB17-Prkdcscid/J) mouse. 
In this procedure, two small incisions are made. The first incision is to expose and resect the left lobe of the liver, and another small incision is made to expose the spleen for the intrasplenic transplantation of cells. This procedure does not require any specialized surgical skills, and it can be completed in 5-7 minutes with less stress and pain, faster recovery, and better survival. We have demonstrated the transplantation of hepatocytes isolated from a green fluorescent protein (GFP) expressing mouse (Transgenic C57BL/6-Tg (UBC-GFP) 30Scha/J), as well as hepatocyte like cells of human origin (NeoHep) in partially hepatectomized NOD.SCID mice.

We have described a protocol for performing partial hepatectomy (PHx) and cell transplantation via spleen in NOD.SCID (NOD.CB17-Prkdcscid/J) mice. In this protocol, an incision is made to expose and resect the left lobe of the liver followed by another incision for the intrasplenic transplantation of cells.

Intra-splénique Transplantation d’hépatocytes après hépatectomie partielle en clin de œil. Souris SCID

Partial hepatectomy is a versatile and reproducible method to study liver regeneration and the effect of cell based therapeutics in various pathological ...

Sleeve Gastrectomy in Mice using Surgical Clips

The number of people who are overweight and obese is continually increasing both in the adult and adolescent populations. This coincides with the increased universal phenomenon of type 2 diabetes (T2D) and other metabolic problems. Bariatric surgery, such as SG, is currently one of the most effective and commonly used long-term treatment for obesity and T2D, but the association between them is not completely explored yet. The mechanisms underlying the outcomes seen after bariatric surgery in humans can be investigated based on preclinical animal studies. The SG reduces body weight, glucose levels and many metabolic parameters, and is easy to perform with a low incidence of complications. The goal of this work is to provide a simple method and an uncomplicated preclinical model of bariatric surgery in animals for researchers.

The prevalence of diabetes and obesity is continuously increasing worldwide. The mechanisms between diabetes, obesity and their associated mortality and co-morbidities need to be further investigated. Here, we present a protocol for sleeve gastrectomy (SG) in animals as an uncomplicated preclinical model of bariatric surgery.

Gastrectomie à manches chez les souris à l’aide de clips chirurgicaux

The number of people who are overweight and obese is continually increasing both in the adult and adolescent populations. This coincides with the ...

Isolation of Regenerating Hepatocytes after Partial Hepatectomy in Mice

Partial hepatectomy has been widely used to investigate liver regeneration in mice, but the isolation of high yields of viable hepatocytes for downstream single-cell applications is challenging. A marked accumulation of lipids within regenerating hepatocytes is observed during the first 2 days of normal liver regeneration in mice. This so-called transient regeneration-associated steatosis (TRAS) is temporary but partially overlaps the major proliferative phase. Density-gradient purification is the backbone of most existing protocols for the isolation of primary hepatocytes. As gradient purification relies on the density and size of cells, it separates non-steatotic from steatotic hepatocyte populations. Therefore, fatty hepatocytes often are lost, yielding non-representative hepatocyte fractions. 
The presented protocol describes an easy and reliable method for the in vivo isolation of regenerating hepatocytes regardless of their lipid content. Hepatocytes from male C57BL/6 mice are isolated 24-48 h after hepatectomy by a classic two-step collagenase perfusion approach. A standard peristaltic pump drives the warmed solutions via the catheterized inferior vena cava into the remnant, using a retrograde perfusion technique with outflow through the portal vein. Hepatocytes are dissociated by collagenase for their release from the Glisson's capsule. After washing and careful centrifugation, the hepatocytes can be used for any downstream analyses. In conclusion, this paper describes a straightforward and reproducible technique for the isolation of a representative population of regenerating hepatocytes after partial hepatectomy in mice. The method may also aid the study of fatty liver disease.

Lipid-laden hepatocytes are inherent to liver regeneration but are usually lost upon density-gradient centrifugation. Here, we present an optimized cell isolation protocol that retains steatotic hepatocytes, yielding representative populations of regenerating hepatocytes after partial hepatectomy in mice.

Isolement des hépatocytes régénérants après hépatectomie partielle chez la souris

Partial hepatectomy has been widely used to investigate liver regeneration in mice, but the isolation of high yields of viable hepatocytes for downstream ...

Mécanisme du salidroside dans la suppression de la migration et de la prolifération des cellules MCF-7

Exploring the Pharmacological Action and Molecular Mechanism of Salidroside in Inhibiting MCF-7 Cell Proliferation and Migration

Salidroside (Sal) contains anti-carcinogenic, anti-hypoxic, and anti-inflammatory pharmacological activities. However, its underlying anti-breast cancer mechanisms have been only incompletely elucidated. Hence, this protocol intended to decode the potential of Sal in regulating the PI3K-AKT-HIF-1&#945;-FoxO1 pathway in the malignant proliferation of human breast cancer MCF-7 cells. First, the pharmacological activity of Sal against MCF-7 was evaluated by CCK-8 and cell scratch assays. Moreover, the resistance of MCF-7 cells was measured by migration and Matrigel invasion assays. For cell apoptosis and cycle assays, MCF-7 cells were processed in steps with annexin V-FITC/PI and cell cycle-staining detection kits for flow cytometry analyses, respectively. The levels of reactive oxygen species (ROS) and Ca2+ were examined by DCFH-DA and Fluo-4 AM immunofluorescence staining. The activities of Na+-K+-ATPase and Ca2+-ATPase were determined using the corresponding commercial kits. The protein and gene expression levels in apoptosis and the PI3K-AKT-HIF-1&#945;-FoxO1 pathway were further determined using western blot and qRT-PCR analyses, respectively. We found that Sal treatment significantly restricted the proliferation, migration, and invasion of MCF-7 cells with dose-dependent effects. Meanwhile, Sal administration also dramatically forced MCF-7 cells to undergo apoptosis and cell cycle arrest. The immunofluorescence tests showed that Sal observably stimulated ROS and Ca2+ production in MCF-7 cells. Further data confirmed that Sal promoted the expression levels of pro-apoptotic proteins, Bax, Bim, cleaved caspase-9/7/3, and their corresponding genes. Consistently, Sal intervention prominently reduced the expression of the Bcl-2, p-PI3K/PI3K, p-AKT/AKT, mTOR, HIF-1&#945;, and FoxO1 proteins and their corresponding genes. In conclusion, Sal can be used as a potential herb-derived compound for treating breast cancer, as it may reduce the malignant proliferation, migration, and invasion of MCF-7 cells by inhibiting the PI3K-AKT-HIF-1&#945;-FoxO1 pathway.

Pleins feux sur l’auteur : Explorer les mécanismes moléculaires du salidroside dans le traitement du cancer du sein 

The present protocol describesa comprehensive strategy for evaluating the pharmacological action and mechanism of salidroside in inhibiting MCF-7 cell proliferation and migration.

Exploration de l’action pharmacologique et du mécanisme moléculaire du salidroside dans l’inhibition de la prolifération et de la migration des cellules MCF-7

Salidroside (Sal) contains anti-carcinogenic, anti-hypoxic, and anti-inflammatory pharmacological activities. However, its underlying anti-breast cancer ...