KF وKO وشارك في أول الكتاب إلى جانب KS وأيد هذا العمل في جزء من زمالة AHPBA (KS)، NIH K23 CA148964-01 (LZ)، وكلية جونز هوبكنز للطب جائزة السريرية عالم (LZ)، ومؤسسة Viragh ومركز السرطان تخطي Viragh البنكرياس في جامعة جونز هوبكنز (EMJ و LZ)، المؤسسة الوطنية البنكرياس (LZ)، وLefkofsky الأسرة مؤسسة (LZ)، وSPORE NCI في الجهاز الهضمي السرطان P50 CA062924 (EMJ، LZ)، ومؤسسة Lustgarten (LZ)، ومنح مركز سول غولدمان سرطان البنكرياس (KS ، BHE، LZ).

تتفق جميع التجارب على الحيوانات إلى المبادئ التوجيهية للجنة رعاية واستخدام الحيوان في جامعة جونز هوبكنز، وتمت المحافظة على الحيوانات وفقا للمبادئ التوجيهية للجمعية للتقويم والاعتماد للرعاية المختبرات (AAALAC). يتم إجراء العملية الجراحية تحت ظروف معقمة في غرفة العمليات التي يخضع ما لا يقل عن خمسة عشر تبادل الهواء في الساعة. يتم تعقيم جميع الأدوات قبل التعقيم قبل الإجراء ومرة ​​أخرى مع الايثانول 70٪ بين كل الماوس أثناء العملية. يصرح باستخدامها كل الفئران التي لا يتوقع أن يعيشوا العملية الجراحية تحت CO 2 لمدة 3 دقائق تليها خلع عنق الرحم في حين لا يزال تحت التخدير. 1. خلية التحضير <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الخلايا resuspend Panc02 مثقف في الفوسفات مخزنة المالحة في 2 X10 7 خلية / مل، والحفاظ على الجليد. </li></ol> 2. ماوس التحضير <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدارة Ketaminه (100 ملغ / كلغ) مختلطة مع زيلازين (10 ملغ / كلغ) داخل الصفاق إلى 8-12 أسبوع من العمر C57BL / 6 الفئران الإناث مقسمة على جرعات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحقق لمعرفة أن قرصة أخمص قدميه الانسحاب المنعكس هو إلغاء لضمان أن الفأر هو تخدير كامل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدارة جرعات إضافية من الكيتامين (100 ملغ / كلغ) مختلطة مع زيلازين (10 ملغ / كلغ) حسب الحاجة للتخدير الكامل الفئران. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق Puralube الطبيب البيطري مرهم للعيون من الفئران لمنع جفاف في حين أن الفئران تحت التخدير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حلق المنطقة الجراحية من الفئران لتفادي تلوث الجرح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الإعدادية المنطقة تحت الضلع الأيسر من شق مع الايثانول 70٪ ثم اليود. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع ثنى الجراحية حول البطن للحفاظ على العقم. </li></ol> 3. البطن <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إجراء شق تحت الضلع الأيسر في خط مع الأذن اليسرى عن طريق الجلد وعن طريق الغشاء البريتوني باستخدام مشرط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التعبير عن الطحال من خلال شق طريق تطبيق ص الرقمي المتزامنressure على طول جوانب الجمجمة والذيلية من شق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد موقع الأوعية الدموية الطحال في نهاية السفلي من الطحال. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقسيم الطحال عن طريق وضع اثنين الأفق متوسطة الحجم مقاطع ligating في وسط الطحال والحرص على تجنب إتلاف الأوعية الدموية الطحال في القطبين الطحال. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع القطب العلوي من الطحال العودة الى الصفاق لتجنب التلوث. </li></ol> 4. ورم حقن <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع 150 ميكرولتر من الفوسفات مخزنة المالحة الى 26 G س 5/8 &quot;حقنة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع 100 ميكرولتر من Panc02 (2 X10 6) خلايا في نفس حقنة الحفاظ على حقنة في وضع رأسي في جميع الأوقات خلال الحقن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تراجع الإبرة في محلول الإيثانول 70٪. وتراجع إبرة في الايثانول 70٪ لضمان العقم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن الخلايا ببطء في hemispleen تتعرض يجري التأكد يتم الاحتفاظ حقنة تستقيم في جميع الأوقات. شطبة من syrinينبغي مراعاتها جنرال الكتريك في جميع الأوقات من خلال كبسولة الطحال لتجنب حقن الخلايا تحت الطحال. يجب وحظ تبييض الأوعية الطحال والدم على الحقن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رفع الطحال وتطبيق احدة متوسطة الأفق كليب تحت الطحال إلى انسداد الأوعية الدموية الطحال. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق مقطع واحد الأفق صغير إلى الجانب الأكثر البعيدة من البنكرياس والطحال السفن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Ligate البنكرياس والطحال السفن من hemispleen عن طريق خفض فوق مقاطع الأفق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع الماوس على &#39;جانبها، ولري شق بالماء المقطر. </li></ol> 5. إغلاق البطن والشفاء من التخدير <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إغلاق الصفاق مع غرزة 4-0 على التوالي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق 2-3 مقاطع الجلد لإغلاق شق الجلد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدارة 0.1 ملغم / كغم البوبرينورفين أو 5-10 ملغ / كغ كاربروفين تحت الجلد لتخفيف الألم بعد الجراحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع الماوس على وسادة التدفئة للتفصيلأوفري حتى المحمول والماوس يوضح أنماط التنفس العادية. يتم إرجاع الحيوانات فقط على الشركة من الحيوانات الأخرى بعد تعافيه تماما من العملية الجراحية. </li></ol> 6. التشريح وفحص حصاد الكبد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ما بين 30 إلى 60 يوما بعد الجراحة، وسوف تبدأ الفئران لتظهر الأعراض السريرية لورم خبيث، وسوف تتطلب القتل الرحيم. وتشمل علامات المرض المنتشر تتطلب القتل الرحيم إنسانية البطن الموسع وتطوير الاستسقاء. الموت ببطء الفئران عن طريق استنشاق CO 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد استنشاق، نفذ خلع عنق الرحم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد أن تم تحديد الحيوان أن تكون غير مستجيبة، من خلال إجراء شق الصفاق لفضح البطن باستخدام مقص. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام ملقط ومقص، وقطع بلطف الكبد من البطن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الكبد في أكتوبر المجمع، وفلاش تجميد باستخدام النيتروجين السائل. تخزين الكبد في -80 درجة مئوية. بدلا من ذلك، يعيشص يمكن أن تكون ثابتة في 16٪ من الفورمالين محايدة مخزنة في RT لمدة 24 ساعة وجزءا لا يتجزأ من البارافين. </li></ol>

<ol>
	<li>American Cancer Society. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cancer Facts &amp; Figures. , (2013).</li><li>Clark, C. E., Beatty, G. L., Vonderheide, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunosurveillance+of+pancreatic+adenocarcinoma:+insights+from+genetically+engineered+mouse+models+of+cancer.">Immunosurveillance of pancreatic adenocarcinoma: insights from genetically engineered mouse models of cancer.</a> Cancer letters. 279, 1-7 (2009).</li><li>Rhim, A. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EMT+and+dissemination+precede+pancreatic+tumor+formation.">EMT and dissemination precede pancreatic tumor formation.</a> Cell. 148, 349-361 (2012).</li><li>Frese, K. K., Tuveson, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maximizing+mouse+cancer+models.">Maximizing mouse cancer models.</a> Nature reviews. Cancer. 7, 645-658 (2007).</li><li>Corbett, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+and+chemotherapeutic+response+of+two+transplantable+ductal+adenocarcinomas+of+the+pancreas+in+C57BL/6+mice.">Induction and chemotherapeutic response of two transplantable ductal adenocarcinomas of the pancreas in C57BL/6 mice.</a> Cancer research. 44, 717-726 (1984).</li><li>Leao, I. C., Ganesan, P., Armstrong, T. D., Jaffee, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effective+depletion+of+regulatory+T+cells+allows+the+recruitment+of+mesothelin-specific+CD8+T+cells+to+the+antitumor+immune+response+against+a+mesothelin-expressing+mouse+pancreatic+adenocarcinoma.">Effective depletion of regulatory T cells allows the recruitment of mesothelin-specific CD8 T cells to the antitumor immune response against a mesothelin-expressing mouse pancreatic adenocarcinoma.</a> Clinical and translational science. 1, 228-239 (2008).</li><li>Jain, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergistic+effect+of+a+granulocyte-macrophage+colony-stimulating+factor-transduced+tumor+vaccine+and+systemic+interleukin-2+in+the+treatment+of+murine+colorectal+cancer+hepatic+metastases.">Synergistic effect of a granulocyte-macrophage colony-stimulating factor-transduced tumor vaccine and systemic interleukin-2 in the treatment of murine colorectal cancer hepatic metastases.</a> Annals of surgical oncology. 10, 810-820 (2003).</li><li>Yoshimura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+targeting+of+antitumor+immune+responses+with+engineered+live-attenuated+Listeria+monocytogenes.">Selective targeting of antitumor immune responses with engineered live-attenuated Listeria monocytogenes.</a> Cancer research. 66, 1096-1104 (2006).</li><li>Yoshimura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+attenuated+Listeria+monocytogenes+effectively+treats+hepatic+colorectal+cancer+metastases+and+is+strongly+enhanced+by+depletion+of+regulatory+T+cells.">Live attenuated Listeria monocytogenes effectively treats hepatic colorectal cancer metastases and is strongly enhanced by depletion of regulatory T cells.</a> Cancer research. 67, 10058-10066 (2007).</li><li>Olino, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor-associated+antigen+expressing+Listeria+monocytogenes+induces+effective+primary+and+memory+T-cell+responses+against+hepatic+colorectal+cancer+metastases.">Tumor-associated antigen expressing Listeria monocytogenes induces effective primary and memory T-cell responses against hepatic colorectal cancer metastases.</a> Annals of surgical oncology. 19, 597-607 (2012).</li><li>Hingorani, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trp53R172H+and+KrasG12D+cooperate+to+promote+chromosomal+instability+and+widely+metastatic+pancreatic+ductal+adenocarcinoma+in+mice.">Trp53R172H and KrasG12D cooperate to promote chromosomal instability and widely metastatic pancreatic ductal adenocarcinoma in mice.</a> Cancer cell. 7, 469-483 (2005).</li><li>Marion, A., Aoudi, W., Basarab, A., Delachartre, P., Vray, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+flow+evaluation+in+high-frequency,+40+MHz+imaging:+a+comparative+study+of+four+vector+velocity+estimation+methods.">Blood flow evaluation in high-frequency, 40 MHz imaging: a comparative study of four vector velocity estimation methods.</a> Ultrasonics. 50, 683-690 (2010).</li><li>Zheng, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tyrosine+23+phosphorylation-dependent+cell-surface+localization+of+annexin+A2+is+required+for+invasion+and+metastases+of+pancreatic+cancer.">Tyrosine 23 phosphorylation-dependent cell-surface localization of annexin A2 is required for invasion and metastases of pancreatic cancer.</a> PloS one. 6, e19390 (2011).</li></ol>

الكتاب ليس لديهم الصراعات ذات الصلة التي تهم الكشف عنها.

هذا نموذج الفئران قبل السريرية لورم خبيث في البنكرياس السرطان إلى الكبد عن طريق تقنية الحقن hemispleen هو النموذج الأول وصف يعكس العديد من الحالات السريرية والمناعية للمرضى الذين يعانون من المرض المنتشر في الكبد. هذا النموذج يقدم العديد من المزايا على نماذج الفئران الأخ...

غدية الأقنية البنكرياسية (PDA) هو رابع سبب لوفيات السرطان ذات الصلة في الولايات المتحدة 1. بقاء خمس سنوات لمرضى PDA النقيلي هو 2-12٪ 1. على الرغم من أن العلاج الكيميائي المساعد والمواد الجديدة المساعدة لسرطان البنكرياس هو أكثر فعالية اليوم من أي وقت مضى، لا يزال هناك حاجة ماسة لعلاجات جديدة. تطوير علاجات جديدة تستلزم النماذج الحيوانية قبل السريرية موثوقة. على الرغم من أن نماذج ورم تحت الجلد هي واضحة للاستخدام، وتشمل عيوب عدم قدرة هذه الأورام إلى metastasize وتحاكي تطور الورم وmicroenvironments ينظر في السرطانات البشرية. النماذج المعدلة وراثيا، مثل الماوس المعدلة وراثيا تحتوي على البروتين p53 KRAS والضربة القاضية في الطفرات أنكجنيك (نموذج KPC) 2 ونموذج مؤسسة البترول الكويتية مع النسب التتبع YFP (نموذج PKCY) 3 تسمح لدراسة الأورام التي تحدث بشكل طبيعي في immunocompeteالفئران الإقليم الشمالي. بالإضافة إلى ذلك، المكروية الورم هي دون تغيير وتشبه عن كثب ما تشهده تطور الورم البشري. للأسف، توقيت تطوير ورم متغير ضمن هذه النماذج، الأمر الذي يجعل من الصعب دراسة العلاجات التجريبية. بالإضافة إلى ذلك، backcrossing من هذه الفئران يتطلب قدرا كبيرا من الوقت والالتزام المالي، وهي ليست دائما ممكنة. أخيرا، تستلزم نماذج الماوس طعم أجنبي PDA زرع المناعة الفئران، والتي غيرت أو microenvironments الورم غائبة. ونتيجة لذلك، فإن فعالية العلاجات التجريبية أثبتت في هذه النماذج قبل السريرية غالبا ما تكون غير قابلة للتكرار في التجارب السريرية البشرية 4. هذا نموذج الفأر hemisplenectomy يستخدم الخلايا السرطانية Panc02، والتي هي، ميثيل كولانترين يسببها البنكرياس خط الخلية السرطانية مكون للأورام عالية المستمدة من C57BL / 6 الفئران 5، 6. بالإضافة إلى ذلك، خطوط الخلايا PDA الفئران الأخرى المستمدة من هيئة التصنيع العسكري مؤسسة البترول الكويتيةه يمكن استخدامها في هذا النموذج. Schulick وآخرون قد وضعت سابقا تقنية hemisplenectomy وخلق نموذج الفأر مسانج الانبثاث سرطان القولون 7. هذا النموذج hemisplenectomy (الشكل 1) تقدم ثابت ومتساو التلقيح الورم في الفئران مناعيا الإقراض نفسها إلى التحقيق في العوامل العلاجية رواية 7-10.

<table><tbody><tr><td>Cell culture media and components</td><td></td><td></td><td>will vary depending on cell line</td></tr><tr><td>Phosphate Buffered Saline</td><td>Gibco by Life Technologies</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>15 ml centrifuge tubes</td><td>Corning</td><td>430052</td><td></td></tr><tr><td>Curved Operating Scissor</td><td>Roboz Surgical Store</td><td>RS-6835</td><td></td></tr><tr><td>Micro Dissecting Graefe Forceps</td><td>Roboz Surgical Store</td><td>RS-5130</td><td></td></tr><tr><td>Needle holder (regular)</td><td>World Precision Instruments, Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>3-0 or 4-0 suture</td><td></td><td></td><td>courtesy of dept of surgery, Johns Hopkins</td></tr><tr><td>Weck Horizon Open Ligating Clip Applier, small, angled</td><td>Teleflex</td><td>137085</td><td></td></tr><tr><td>Weck Horizon Open Ligating Clip Applier, medium, angled</td><td>Teleflex</td><td>237115</td><td></td></tr><tr><td>Weck Horizon medium ligating clips</td><td>Teleflex</td><td>002200</td><td></td></tr><tr><td>Weck Horizon small ligating clips</td><td>Teleflex</td><td>001200</td><td></td></tr><tr><td>Syringe, 1 cc, tb syringe, 3/8&quot; slip tip</td><td>Becton Dickinson</td><td>309625</td><td></td></tr><tr><td>Syringe, 1 cc, tb syringe, 5/8&quot; slip tip</td><td>Becton Dickinson</td><td>309597</td><td></td></tr><tr><td>9 mm Autoclip Applier</td><td>Mikron</td><td>427630</td><td></td></tr><tr><td>9 mm Autoclip</td><td>Becton Dickinson</td><td>427631</td><td></td></tr><tr><td>Heating pad</td><td>Sunbeam</td><td>CAT93</td><td></td></tr><tr><td>70% Ethanol</td><td></td><td></td><td>sold by numerous vendors</td></tr><tr><td>Ketamine Hydrochloride&amp;nbsp;</td><td>Hospira</td><td>22395DD</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine hydrochloride</td><td>Sigma</td><td>X1251</td><td></td></tr></tbody></table>

a preclinical murine model of hepatic metastases

وقد وضعت العديد من نماذج الفئران لدراسة السرطانات البشرية وتعزيز فهم علاج السرطان والتنمية. هنا، يتم وصف وقبل السريرية، نموذج الفئران ورم البنكرياس الانبثاث الكبد عن طريق الحقن hemispleen من الخلايا السرطانية في البنكرياس الفئران مسانج. هذا النموذج يقلد الكثير من الحالات السريرية في المرضى الذين يعانون من المرض المنتشر في الكبد. الفئران تتطور باستمرار الانبثاث في كبد السماح للتحقيق في عملية النقيلي، اختبار العلاج التجريبي، والبحوث ورم المناعة.

خلايا الورم Panc02 حقنها في hemispleen (الشكل 1) الانبثاث الكبد النموذج في 100٪ من الفئران، بينما لا يلاحظ الرئة والانبثاث البريتوني إذا تم تنفيذ هذه التقنية بشكل صحيح. وقد تم تنفيذ هذه التقنية على أكثر من مائة الفئران باستخدام الخلايا في Panc02 متعددة، تجارب مستقلة، وبت...

Watch this Scientific Journal Video about A Preclinical Murine Model of Hepatic Metastases at JoVE.com

A Preclinical Murine Model of Hepatic Metastases

A، نموذج الفئران قبل السريرية الانبثاث الكبدي تنفيذ عبر تقنية الحقن hemispleen.

وما قبل السريرية الفئران نموذج من الانبثاث الكبدي

Numerous murine models have been developed to study human cancers and advance the understanding of cancer treatment and development. Here, a preclinical, ...

a-preclinical-murine-model-of-hepatic-metastases

Research

JoVE Journal

Medicine

28.5K Views.  The Johns Hopkins University School of Medicine.  A، نموذج الفئران قبل السريرية الانبثاث الكبدي تنفيذ عبر تقنية الحقن hemispleen. 

Video: A Preclinical Murine Model of Hepatic Metastases

Murine Bioluminescent Hepatic Tumour Model

This video describes the establishment of liver metastases in a mouse model that can be subsequently analysed by bioluminescent imaging. Tumour cells are administered specifically to the liver to induce a localised liver tumour, via mobilisation of the spleen and splitting into two, leaving intact the vascular pedicle for each half of the spleen. Lewis lung carcinoma cells that constitutively express the firefly luciferase gene (luc1) are inoculated into one hemi-spleen which is then resected 10 minutes later. The other hemi-spleen is left intact and returned to the abdomen. Liver tumour growth can be monitored by bioluminescence imaging using the IVIS whole body imaging system. Quantitative imaging of tumour growth using IVIS provides precise quantitation of viable tumour cells. Tumour cell death and necrosis due to drug treatment is indicated early by a reduction in the bioluminescent signal. This mouse model allows for investigating the mechanisms underlying metastatic tumour-cell survival and growth and can be used for the evaluation of therapeutics of liver metastasis. 

This article describes a procedure for the induction of orthotopic bioluminescent liver tumours in mice, and subsequent analysis of tumour growth confined to the liver using live whole body luminescence imaging.

فأري الورم الكبدي Bioluminescent النموذجي

This video describes the establishment of liver metastases in a mouse model that can be subsequently analysed by bioluminescent imaging. Tumour cells are ...

Advanced Animal Model of Colorectal Metastasis in Liver: Imaging Techniques and Properties of Metastatic Clones

Patients with a limited number of hepatic metastases and slow rates of progression can be successfully treated with local treatment approaches1,2. However, little is known about the heterogeneity of liver metastases, and animal models capable of evaluating the development of individual metastatic colonies are needed. Here, we present an advanced model of hepatic metastases that provides the ability to quantitatively visualize the development of individual tumor clones in the liver and estimate their growth kinetics and colonization efficiency. We generated a panel of monoclonal derivatives of HCT116 human colorectal cancer cells stably labeled with luciferase and tdTomato and possessing different growth properties. With a splenic injection followed by a splenectomy, the majority of these clones are able to generate hepatic metastases, but with different frequencies of colonization and varying growth rates. Using the In Vivo&#160;Imaging System (IVIS), it is possible to visualize and quantify metastasis development with in vivo luminescent and ex vivo fluorescent imaging. In addition, Diffuse Luminescent Imaging Tomography (DLIT) provides a 3D distribution of liver metastases in vivo. Ex vivo fluorescent imaging of harvested livers provides quantitative measurements of individual hepatic metastatic colonies, allowing for the evaluation of the frequency of liver colonization and the growth kinetics of metastases. Since the model is similar to clinically observed liver metastases, it can serve as a modality for detecting genes associated with liver metastasis and for testing potential ablative or adjuvant treatments for liver metastatic disease.

The ability of metastatic clones to colonize distant sites depends on their proliferation capacity and/or their ability to survive in the host microenvironment without significant proliferation. Here, we present an animal model that allows quantitative visualization of both types of liver colonization by metastatic clones.

المتقدم نموذج حيواني من القولون والمستقيم ورم خبيث في الكبد: تقنيات التصوير وخصائص النقيلي النسخ

Patients with a limited number of hepatic metastases and slow rates of progression can be successfully treated with local treatment approaches1,2. ...

Cancer Research

Surgical Procedures and Methodology for a Preclinical Murine Model of De Novo Mammary Cancer Metastasis

A rate-limiting aspect of transgenic mouse models of mammary adenocarcinoma is that primary tumor burden in mammary tissue typically defines study end-points. Thus, studies focused on elucidating mechanisms of late-stage de novo metastasis are compromised, as are studies examining efficacy of anti-cancer therapies targeting mediators of metastasis in the adjuvant setting. Numerous murine mammary cancer models have been developed via targeted expression of dominant oncoproteins to mammary epithelial cells yielding models variably mimicking histopathologic and transcriptome-defined breast cancer subtypes common in women1. While much has been learned regarding the biology of mammary carcinogenesis with these models, their utility in identifying molecules regulating growth of late-stage metastasis are compromised as mice are typically euthanized at earlier time points due to significant primary tumor burden. Moreover, since a significant percentage of women diagnosed with breast cancer receive adjuvant therapy after surgical resection of primary tumors and prior to presence of detectable metastatic disease, preclinical models of de novo metastasis are urgently needed as platforms to evaluate new therapies aimed at targeting metastatic foci. To address these deficiencies, we developed a murine model of de novo mammary cancer metastasis, wherein primary mammary tumors are surgically resected, and metastatic foci subsequently develop over a 115 day post-surgical period. This long latency provides a tractable model to identify functionally significant regulators of metastatic progression in mice lacking primary tumor, as well as a model to evaluate preclinical therapeutic efficacy of agents aimed at blocking functionally significant molecules aiding metastatic tumor survival and growth.

Surgical Procedures and Methodology for a Preclinical Murine Model of De Novo Mammary Cancer Metastasis

Pre-clinical models evaluating adjuvant therapy targeting breast cancer metastasis are lacking. To address this, we developed a murine model of de novo pulmonary mammary adenocarcinoma metastasis, wherein therapies administered in the adjuvant setting (post surgical resection of primary tumors) can be evaluated for efficacy in impacting previously seeded pulmonary metastases.

الإجراءات الجراحية ومنهجية لنموذج الفئران قبل السريرية<em&gt; دي نوفو</em&gt; سرطان الثديي الانبثاث

A rate-limiting aspect of transgenic mouse models of mammary adenocarcinoma is that primary tumor burden in mammary tissue typically defines study ...

A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer

Breast cancer is the leading cause of cancer-related mortality in women worldwide. Liver metastasis is involved in upwards of 30% of cases with breast cancer metastasis, and results in poor outcomes with median survival rates of only 4.8 - 15 months. Current rodent models of breast cancer metastasis, including primary tumor cell xenograft and spontaneous tumor models, rarely metastasize to the liver. Intracardiac and intrasplenic injection models do result in liver metastases, however these models can be confounded by concomitant secondary-site metastasis, or by compromised immunity due to removal of the spleen to avoid tumor growth at the injection site. To address the need for improved liver metastasis models, a murine portal vein injection method that delivers tumor cells firstly and directly to the liver was developed. This model delivers tumor cells to the liver without complications of concurrent metastases in other organs or removal of the spleen. The optimized portal vein protocol employs small injection volumes of 5 - 10 &#956;l, &#8805; 32 gauge needles, and hemostatic gauze at the injection site to control for blood loss. The portal vein injection approach in Balb/c female mice using three syngeneic mammary tumor lines of varying metastatic potential was tested; high-metastatic 4T1 cells, moderate-metastatic D2A1 cells, and low-metastatic D2.OR cells. Concentrations of &#8804; 10,000 cells/injection results in a latency of ~ 20 - 40 days for development of liver metastases with the higher metastatic 4T1 and D2A1 lines, and &#62; 55 days for the less aggressive D2.OR line. This model represents an important tool to study breast cancer metastasis to the liver, and may be applicable to other cancers that frequently metastasize to the liver including colorectal and pancreatic adenocarcinomas.

A surgical procedure was developed to deliver mammary tumor cells to the murine liver via portal vein injection. This model permits investigation of late stages of liver metastasis in a fully immune competent host, including tumor cell extravasation, seeding, survival, and metastatic outgrowth in the liver.

والوريد البابي حقن نموذج لدراسة الكبد الانبثاث من سرطان الثدي

Breast cancer is the leading cause of cancer-related mortality in women worldwide. Liver metastasis is involved in upwards of 30% of cases with breast ...

An Oncogenic Hepatocyte-Induced Orthotopic Mouse Model of Hepatocellular Cancer Arising in the Setting of Hepatic Inflammation and Fibrosis

The absence of a clinically relevant animal model addressing the typical immune characteristics of hepatocellular cancer (HCC) has significantly impeded elucidation of the underlying mechanisms and development of innovative immunotherapeutic strategies. To develop an ideal animal model recapitulating human HCC, immunocompetent male C57BL/6J mice first receive a carbon tetrachloride (CCl4) injection to induce liver fibrosis, then receive histologically-normal oncogenic hepatocytes from young male SV40 T antigen (TAg)-transgenic mice (MTD2) by intra-splenic (ISPL) inoculation. Androgen generated in recipient male mice at puberty initiates TAg expression under control of a liver-specific promoter. As a result, the transferred hepatocytes become cancer cells and form tumor masses in the setting of liver fibrosis/cirrhosis. This novel model mimics human HCC initiation and progression in the context of liver fibrosis/cirrhosis and reflects the most typical features of human HCC including immune dysfunction.

Here, we describe the development of a clinically relevant murine model of liver cancer recapitulating the typical immune features of hepatocellular cancer (HCC).

نموذج ماوس متثّل بالكبد من سرطان الكبد الناشئ في إعداد التهاب الكبد والتليف

The absence of a clinically relevant animal model addressing the typical immune characteristics of hepatocellular cancer (HCC) has significantly impeded ...

Murine Model of Metastatic Liver Tumors in the Setting of Ischemia Reperfusion Injury

Liver ischemia and reperfusion (I/R) injury, a common clinical challenge, remains an inevitable pathophysiological process that has been shown to induce multiple tissue and organ damage. Despite recent advances and therapeutic approaches, the overall morbidity has remained unsatisfactory especially in patients with underlying parenchymal abnormalities. In the context of aggressive cancer growth and metastasis, surgical I/R is suspected to be the promoter regulating tumor recurrence. This article aims to describe a clinically relevant murine model of liver I/R and colorectal liver metastasis. In doing so, we aim to assist other investigators in establishing and perfecting this model for their routine research practice to better understand the effects of liver I/R on promoting liver metastases.

We describe in detail a clinically relevant colorectal cancer liver metastases (CRLM) tumor model and the influence of liver ischemia reperfusion (I/R) in tumor growth and metastasis. This model can help to better understand the mechanisms underlying surgery-induced promotion of liver metastatic growth.

نموذج مورين من أورام الكبد النقيلي في وضع إصابة نقص تروية التسريب

Liver ischemia and reperfusion (I/R) injury, a common clinical challenge, remains an inevitable pathophysiological process that has been shown to induce ...

Portal Vein Injection of Colorectal Cancer Organoids to Study the Liver Metastasis Stroma

Hepatic metastasis of colorectal cancer (CRC) is a leading cause of cancer-related death. Cancer-associated fibroblasts (CAFs), a major component of the tumor microenvironment, play a crucial role in metastatic CRC progression and predict poor patient prognosis. However, there is a lack of satisfactory mouse models to study the crosstalk between metastatic cancer cells and CAFs. Here, we present a method to investigate how liver metastasis progression is regulated by the metastatic niche and possibly could be restrained by stroma-directed therapy. Portal vein injection of CRC organoids generated a desmoplastic reaction, which faithfully recapitulated the fibroblast-rich histology of human CRC liver metastases. This model was tissue-specific with a higher tumor burden in the liver when compared to an intra-splenic injection model, simplifying mouse survival analyses. By injecting luciferase-expressing tumor organoids, tumor growth kinetics could be monitored by in vivo imaging. Moreover, this preclinical model provides a useful platform to assess the efficacy of therapeutics targeting the tumor mesenchyme. We describe methods to examine whether adeno-associated virus-mediated delivery of a tumor-inhibiting stromal gene to hepatocytes could remodel the tumor microenvironment and improve mouse survival. This approach enables the development and assessment of novel therapeutic strategies to inhibit hepatic metastasis of CRC.

Portal vein injection of colorectal cancer (CRC) organoids generates stroma-rich liver metastasis. This mouse model of CRC hepatic metastasis represents a useful tool to study tumor-stroma interactions and develop novel stroma-directed therapeutics such as adeno-associated virus-mediated gene therapies.

حقن الوريد البابي لسرطان القولون والمستقيم العضوي لدراسة سدى ورم خبيث في الكبد

Hepatic metastasis of colorectal cancer (CRC) is a leading cause of cancer-related death. Cancer-associated fibroblasts (CAFs), a major component of the ...

An Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer Metastasis

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but rather the formation of distinct metastasis, the ability to effectively model this progression pre-clinically is of high value. In this model, cells are directly implanted into the ventral lobe of the prostate in Balb/c athymic mice, and allowed to progress for 4-6 weeks. At experiment termination, several distinct endpoints can be measured, such as size and molecular characterization of the primary tumor, the presence and quantification of circulating tumor cells in the blood and bone marrow, and formation of metastasis to the lung. In addition to a variety of endpoints, this model provides a picture of a cells ability to invade and escape the primary organ, enter and survive in the circulatory system, and implant and grow in a secondary site. This model has been used effectively to measure metastatic response to both changes in protein expression as well as to response to small molecule therapeutics, in a short turnaround time.

This orthotopic model of human prostate cancer allows for quantification of tumor size, circulating tumor cells, and formation of distinct metastasis to the lung. As cells must escape the primary organ, enter the blood stream, and implant into a secondary site, this model effectively recapitulates the scenario in humans.

على الفئران نموذج مثلي من سرطان البروستاتا البشرية الانبثاث

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of  human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but  ...

Non-Invasive PET/MR Imaging in an Orthotopic Mouse Model of Hepatocellular Carcinoma

Preclinical experimental models of hepatocellular carcinoma (HCC) that recapitulate human disease represent an important tool to study tumorigenesis and evaluate novel therapeutic approaches. Non-invasive whole-body imaging using positron emission tomography (PET) provides critical insights into the in vivo characteristics of tissues at the molecular level in real-time. We present here a protocol for orthotopic HCC xenograft creation with and without hepatic artery ligation (HAL) to induce tumor hypoxia and the assessment of their tumor metabolism in vivo using [18F]Fluoromisonidazole ([18F]FMISO) and [18F]Fluorodeoxyglucose ([18F]FDG) PET/magnetic resonance (MR) imaging. Tumor hypoxia could be readily visualized using the hypoxia marker [18F]FMISO, and it was found that the [18F]FMISO uptake was higher in HCC mice that underwent HAL than in the non-HAL group, whereas [18F]FDG could not distinguish tumor hypoxia between the two groups. HAL tumors also displayed a higher level of hypoxia-inducible factor (HIF)-1&#945; expression in response to hypoxia. Quantification of HAL tumors showed a 2.3-fold increase in [18F]FMISO uptake based on the standardized value uptake (SUV) approach.

Here, we present a protocol to create orthotopic hepatocellular carcinoma xenografts with and without hepatic artery ligation and perform non-invasive positron emission tomography (PET) imaging of tumor hypoxia using [18F]Fluoromisonidazole ([18F]FMISO) and [18F]Fluorodeoxyglucose ([18F]FDG).

التصوير غير الجراحي PET / MR في نموذج فأر تقويمي لسرطان الخلايا الكبدية

Preclinical experimental models of hepatocellular carcinoma (HCC) that recapitulate human disease represent an important tool to study tumorigenesis and ...

A "Patient-Like" Orthotopic Syngeneic Mouse Model of Hepatocellular Carcinoma Metastasis

The majority of cancer-related deaths are caused by the metastasis of the cancer rather than the primary tumor itself. Yet, the underlying mechanisms of cancer metastasis are still unclear. Animal models are essential for elucidating the mechanisms and for evaluating novel strategies for the treatment of metastatic cancers. Here, an in-depth description of a &#8220;patient-like&#8221; orthotopic syngeneic mouse model for exploring the mechanisms of metastasis of solid organ tumors is provided. The survival surgical implantation of BNL 1ME A.7R.1 mouse hepatocellular carcinoma cells directly into the liver (the organ of origin) of the inbred wild-type immune competent laboratory mouse strain, BALB/c is described. The success and reproducibility of this methodology recommends it for widespread use in elucidating the biological mechanisms of solid organ cancer metastasis.

The metastatic spread of cancer is the major cause of cancer-related deaths. We provide an in-depth description of our survival surgery methodology for establishing a &#8220;patient-like&#8221; orthotopic syngeneic mouse model system for studying the mechanisms of metastasis in solid organ tumors.

A &quot;المريض مثل&quot; مثلي مسانج نموذج الفأر من سرطان الكبد الانبثاث

The majority of cancer-related deaths are caused by the metastasis of the cancer rather than the primary tumor itself. Yet, the underlying mechanisms of ...

وما قبل السريرية الفئران نموذج من الانبثاث الكبدي

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video