KF und KO sind Co ersten Autoren zusammen mit KS Diese Arbeit wurde zum Teil durch die AHPBA Fellowship (KS), NIH K23 CA148964-01 (LZ), Johns Hopkins School of Medicine Clinical Scientist Award (LZ), Viragh Stiftung und das Überspringen Viragh Bauchspeicheldrüsenkrebszentrum an der Johns Hopkins (EMJ und unterstützt LZ), die National Foundation Pankreas (LZ), die Lefkofsky Family Foundation (LZ), das NCI SPORE in Magen-Darm-Krebs P50 CA062924 (EMJ, LZ), der Lustgarten-Stiftung (LZ) und die Sol Goldman Bauchspeicheldrüsenkrebszentrum Zuschüsse (KS , BHE, LZ).

Alle Tierversuche entsprach den Richtlinien der Animal Care und Verwenden Ausschuss der Johns Hopkins University, und die Tiere wurden in Übereinstimmung mit den Richtlinien der Gesellschaft für Evaluierung und Akkreditierung von Laborbetreuung (AAALAC) gehalten. Das chirurgische Verfahren wird unter sterilen Bedingungen im Operationssaal, die ein Minimum von fünfzehn Luftwechsel pro Stunde unterzogen geführt. Alle Instrumente werden durch Autoklavieren vor der Prozedur und erneut mit 70% Ethanol in zwischen jeder Maus während des Verfahrens sterilisiert. Alle Mäuse nicht erwartet, dass das chirurgische Verfahren überleben werden unter CO 2 für 3 min, gefolgt durch Genickbruch noch unter Narkose eingeschläfert. 1. Zellpräparation <ol><li> Resuspendieren kultiviert Panc02 Zellen in phosphatgepufferter Salzlösung mit 2 x 10 7 Zellen / ml, und auf Eis halten. </li></ol> 2. Maus Vorbereitung <ol><li> Verwalten KetaminE (100 mg / kg) mit Xylazin (10 mg / kg) gemischt intraperitoneal 8-12 Wochen alte weibliche C57BL / 6 Mäuse in geteilten Dosen. </li><li> Überprüfen Sie, ob der Zeh Prise Rückzug Reflex wird abgeschafft, um sicherzustellen, dass die Maus vollständig betäubt wird. </li><li> Verwaltung zusätzlicher Dosen von Ketamin (100 mg / kg) mit Xylazin (10 mg / kg) nach Bedarf, um die Mäuse vollständig betäuben gemischt. </li><li> Anwenden Puralube Vet Salbe auf die Augen der Mäuse um das Trocknen zu verhindern, während die Mäuse unter Anästhesie. </li><li> Rasur das Operationsgebiet der Mäuse zu einer Kontamination der Wunde zu vermeiden. </li><li> Bereiten Sie die linke subkostalen Bereich der Schnittführung mit 70% Ethanol und dann Iod. </li><li> Legen Sie ein Operationstuch um den Bauch, um die Sterilität zu erhalten. </li></ol> 3. Laparotomie <ol><li> Sie links subkostalen Einschnitt im Einklang mit dem linken Ohr durch die Haut und durch das Peritoneum mit einem Skalpell. </li><li> Ausdruck der Milz durch den Einschnitt durch die Anwendung gleichzeitiger digitaler pruck entlang der kranialen und kaudalen Aspekte des Einschnitts. </li><li> Suchen Sie die Milz Blutgefäße am unteren Ende der Milz. </li><li> Teilen Sie die Milz, indem zwei Horizon mittlerer Größe Liga Clips in der Mitte der Milz vorsichtig, um eine Beschädigung der Milz-Blutgefäße an der Milz Pole. </li><li> Legen Sie den oberen Pol der Milz zurück in die Bauchhöhle, um Verunreinigungen zu vermeiden. </li></ol> 4. Tumorinjektion <ol><li> Auszuarbeiten 150 ul Phosphat-gepufferter Kochsalzlösung in einer 26 G x 8.5 &quot;Spritze. </li><li> Auszuarbeiten 100 ul Panc02 (2 x10 6 Zellen) in die gleiche Spritze Aufrechterhaltung der Spritze in einer aufrechten Position zu jedem Zeitpunkt während der Injektion. </li><li> Tauchen Sie die Nadel in einem 70% igen Ethanollösung. Die Nadel wird in 70% Ethanol eingetaucht, um Sterilität zu gewährleisten. </li><li> Injizieren die Zellen langsam in die freigelegte hemispleen wobei Sie die Spritze aufrecht zu allen Zeiten gehalten. Die Abschrägung der syringe zu allen Zeiten durch die Milz Kapsel beobachtet werden, um zu vermeiden Injektion der Zellen in der Milz. Eine Weißfärbung der Milz und Blutgefäße sollte bei Injektion beobachtet werden. </li><li> Erhöhen die Milz und gelten ein Medium Horizont Clip unter der Milz, die Milz Blutgefäße verschließen. </li><li> Wenden Sie einen kleinen Horizont Clip auf die meisten distalen Aspekt der Bauchspeicheldrüse und Milz Gefäße. </li><li> Ligieren die Bauchspeicheldrüse und Milz Schiffe aus der hemispleen durch Schneiden über dem Horizont Clips. </li><li> Platzieren Sie die Maus auf seiner &#39;Seite, und bewässern den Schnitt mit destilliertem Wasser. </li></ol> 5. Bauchdeckenverschluss und aus der Narkose <ol><li> Schließen Sie das Bauchfell mit einem 4-0 Lauf Stich. </li><li> Gelten zwei vor drei Hautklammern, um den Hautschnitt zu schließen. </li><li> Verwalten 0,1 mg / kg Buprenorphin oder 5-10 mg / kg Carprofen subkutan postoperative Schmerzen zu lindern. </li><li> Platzieren Sie die Maus auf einem Heizkissen für recOvery, bis Handy und die Maus zeigt, regelmäßige Atmung. Tiere werden nur in der Gesellschaft von anderen Tieren, nach völlig von der Operation erholt zurückgekehrt. </li></ol> 6. Necropsy Prüfung und Ernten der Leber <ol><li> Zwischen 30 bis 60 Tage nach der Operation, wird Mäusen beginnen, klinische Symptome der Metastasierung zeigen und Euthanasie verlangen. Anzeichen von Metastasen erfordern humane Sterbehilfe sind vergrößerte Bauch und die Entwicklung von Aszites. Euthanize Mäuse durch Inhalation von CO 2. </li><li> Nach Einatmen, führen Genickbruch. </li><li> Nachdem das Tier festgestellt worden, die auf nicht sein, einen Einschnitt durch das Peritoneum, um den Bauch mit einer Schere aus. </li><li> Mit einer Pinzette und Schere vorsichtig schneiden die Leber aus dem Bauch. </li><li> Legen Sie die Leber in OCT-Verbindung und Flash mit flüssigem Stickstoff einfrieren. Bewahren Sie die Leber bei -80 ° C. Alternativ kann das Liver kann in 16% neutral gepuffertem Formalin bei RT für 24 h und in Paraffin eingebetteten fixiert werden. </li></ol>

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	<li>American Cancer Society. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cancer Facts &amp; Figures. , (2013).</li><li>Clark, C. E., Beatty, G. L., Vonderheide, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunosurveillance+of+pancreatic+adenocarcinoma:+insights+from+genetically+engineered+mouse+models+of+cancer.">Immunosurveillance of pancreatic adenocarcinoma: insights from genetically engineered mouse models of cancer.</a> Cancer letters. 279, 1-7 (2009).</li><li>Rhim, A. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EMT+and+dissemination+precede+pancreatic+tumor+formation.">EMT and dissemination precede pancreatic tumor formation.</a> Cell. 148, 349-361 (2012).</li><li>Frese, K. K., Tuveson, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maximizing+mouse+cancer+models.">Maximizing mouse cancer models.</a> Nature reviews. Cancer. 7, 645-658 (2007).</li><li>Corbett, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+and+chemotherapeutic+response+of+two+transplantable+ductal+adenocarcinomas+of+the+pancreas+in+C57BL/6+mice.">Induction and chemotherapeutic response of two transplantable ductal adenocarcinomas of the pancreas in C57BL/6 mice.</a> Cancer research. 44, 717-726 (1984).</li><li>Leao, I. C., Ganesan, P., Armstrong, T. D., Jaffee, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effective+depletion+of+regulatory+T+cells+allows+the+recruitment+of+mesothelin-specific+CD8+T+cells+to+the+antitumor+immune+response+against+a+mesothelin-expressing+mouse+pancreatic+adenocarcinoma.">Effective depletion of regulatory T cells allows the recruitment of mesothelin-specific CD8 T cells to the antitumor immune response against a mesothelin-expressing mouse pancreatic adenocarcinoma.</a> Clinical and translational science. 1, 228-239 (2008).</li><li>Jain, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergistic+effect+of+a+granulocyte-macrophage+colony-stimulating+factor-transduced+tumor+vaccine+and+systemic+interleukin-2+in+the+treatment+of+murine+colorectal+cancer+hepatic+metastases.">Synergistic effect of a granulocyte-macrophage colony-stimulating factor-transduced tumor vaccine and systemic interleukin-2 in the treatment of murine colorectal cancer hepatic metastases.</a> Annals of surgical oncology. 10, 810-820 (2003).</li><li>Yoshimura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+targeting+of+antitumor+immune+responses+with+engineered+live-attenuated+Listeria+monocytogenes.">Selective targeting of antitumor immune responses with engineered live-attenuated Listeria monocytogenes.</a> Cancer research. 66, 1096-1104 (2006).</li><li>Yoshimura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+attenuated+Listeria+monocytogenes+effectively+treats+hepatic+colorectal+cancer+metastases+and+is+strongly+enhanced+by+depletion+of+regulatory+T+cells.">Live attenuated Listeria monocytogenes effectively treats hepatic colorectal cancer metastases and is strongly enhanced by depletion of regulatory T cells.</a> Cancer research. 67, 10058-10066 (2007).</li><li>Olino, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor-associated+antigen+expressing+Listeria+monocytogenes+induces+effective+primary+and+memory+T-cell+responses+against+hepatic+colorectal+cancer+metastases.">Tumor-associated antigen expressing Listeria monocytogenes induces effective primary and memory T-cell responses against hepatic colorectal cancer metastases.</a> Annals of surgical oncology. 19, 597-607 (2012).</li><li>Hingorani, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trp53R172H+and+KrasG12D+cooperate+to+promote+chromosomal+instability+and+widely+metastatic+pancreatic+ductal+adenocarcinoma+in+mice.">Trp53R172H and KrasG12D cooperate to promote chromosomal instability and widely metastatic pancreatic ductal adenocarcinoma in mice.</a> Cancer cell. 7, 469-483 (2005).</li><li>Marion, A., Aoudi, W., Basarab, A., Delachartre, P., Vray, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+flow+evaluation+in+high-frequency,+40+MHz+imaging:+a+comparative+study+of+four+vector+velocity+estimation+methods.">Blood flow evaluation in high-frequency, 40 MHz imaging: a comparative study of four vector velocity estimation methods.</a> Ultrasonics. 50, 683-690 (2010).</li><li>Zheng, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tyrosine+23+phosphorylation-dependent+cell-surface+localization+of+annexin+A2+is+required+for+invasion+and+metastases+of+pancreatic+cancer.">Tyrosine 23 phosphorylation-dependent cell-surface localization of annexin A2 is required for invasion and metastases of pancreatic cancer.</a> PloS one. 6, e19390 (2011).</li></ol>

Die Autoren haben keine relevanten Interessenkonflikte offen zu legen.

Diese präklinischen Mausmodell für Bauchspeicheldrüsenkrebs Metastasierung in die Leber über eine hemispleen Injektionstechnik ist das erste Modell beschrieben, die viele der klinischen und immunologischen Bedingungen der Patienten mit metastatischer Erkrankung der Leber spiegelt. Dieses Modell bietet mehrere Vorteile gegenüber anderen Mausmodellen. Erstens, anders als transgene Modelle von Pankreaskrebs, bei dem nur 30% der Mäuse entwickeln Metastasen in der Leber und dem Zeitpunkt der Metastasenbildung ist sehr ...

Duktalen Adenokarzinom des Pankreas (PDA) ist die vierthäufigste Ursache von Krebs Todesfälle in den Vereinigten Staaten 1. Der fünfjährige Überlebensrate für Patienten mit metastasiertem PDA ist 2-12% 1. Obwohl Adjuvans und neoadjuvante Chemotherapie bei Bauchspeicheldrüsenkrebs ist heute effektiver als je zuvor, bleibt es immer noch einen verzweifelten Bedarf an neuen Therapien. Die Entwicklung neuartiger Therapeutika erfordert zuverlässige präklinischen Tiermodellen. Obwohl subkutanen Tumormodellen sind einfach zu bedienen, sind Nachteile, die Unfähigkeit dieser Tumoren, Metastasen zu bilden und imitieren die Tumorprogression und Mikroumgebungen in menschlichen Krebserkrankungen gesehen. Gentechnisch veränderte Modelle, wie der gentechnisch veränderte Maus enthalten, Kras und p53-Knock-in onkogene Mutationen (die KPC-Modell) 2 und die KPC-Modell mit einem YFP-Linie Tracer (die PKCY Modell) 3 ermöglichen die Untersuchung von natürlich vorkommenden Tumoren in immunocompetent Mäusen. Zusätzlich ist der Tumor-Mikroumgebung unverändert und ähnelt mehr der in menschlichen Tumorprogression angesehen. Leider ist die Zeitsteuerung der Tumorentwicklung Variable innerhalb dieser Modelle, was es schwierig experimentelle Therapien zu studieren. Zusätzlich Rückkreuzung dieser Mäuse erfordert eine erhebliche Menge an Zeit und finanziellen Engagement, das nicht machbar ist immer. Schließlich implantierten Xenograft PDA Mausmodelle erforderlich machen immungeschwächten Mäusen, die verändert wurden oder nicht vorhanden Tumormikroumgebungen. Als ein Ergebnis wird die Wirksamkeit von experimentellen Behandlungen in diesen Tiermodellen gezeigt werden oft in klinischen Studien am Menschen 4 nicht reproduzierbar. Diese Hemisplenektomie Mausmodell verwendet Panc02 Tumorzellen, die ein hoch tumorigenen, Methylcholanthren induzierten Pankreastumorzelllinie aus C57BL / 6 Mäusen, 5, 6 ableiten. Zusätzlich anderen murinen PDA Zelllinien aus der KPC mic abgeleitete kann in diesem Modell verwendet werden. Schulick et al. Zuvor entwickelte eine Technik Hemisplenektomie und schuf eine syngenen Mausmodell von Darmkrebs Metastasen 7. Diese Hemisplenektomie Modell (Abbildung 1) bietet konsistente und gleich Tumorimpfung bei immunkompetenten Mäusen Kredit sich auf die Untersuchung von neuen therapeutischen Mittel 7-10.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="713">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Cell culture media and components</td>
			<td style="width:197px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:181px;">will vary depending on cell line</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Phosphate Buffered Saline</td>
			<td style="width:197px;">Gibco by Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">10010-023</td>
			<td style="width:181px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">15 mL centrifigure tubes</td>
			<td style="width:197px;">Corning</td>
			<td style="width:119px;">430052</td>
			<td style="width:181px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Curved Operating Scissor</td>
			<td style="width:197px;">Roboz Surgical Store</td>
			<td style="width:119px;">RS-6835</td>
			<td style="width:181px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Micro dissecting Graefe Forceps</td>
			<td style="width:197px;">Roboz Surgical Store</td>
			<td style="width:119px;">RS-5130</td>
			<td style="width:181px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Needle holder (regular)</td>
			<td style="width:197px;">World Precision Instruments, Inc</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:181px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">3-0 or 4-0 suture</td>
			<td style="width:197px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:181px;">courtesy of dept of surgery, Johns Hopkins</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Weck Horizon Open Ligating Clip Applier, small, angled</td>
			<td style="width:197px;">Teleflex</td>
			<td style="width:119px;">137085</td>
			<td style="width:181px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Weck Horizon Open Ligating Clip Applier, medium, angled</td>
			<td style="width:197px;">Teleflex</td>
			<td style="width:119px;">237115</td>
			<td style="width:181px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Weck Horizon medium ligating clips</td>
			<td style="width:197px;">Teleflex</td>
			<td style="width:119px;">002200</td>
			<td style="width:181px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Weck Horizon small ligating clips</td>
			<td style="width:197px;">Teleflex</td>
			<td style="width:119px;">001200</td>
			<td style="width:181px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Syringe, 1 cc, tb syringe, 3/8&#34; slip tip</td>
			<td style="width:197px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:119px;">309625</td>
			<td style="width:181px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Syringe, 1 cc, tb syringe, 5/8&#34; slip tip</td>
			<td style="width:197px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:119px;">309597</td>
			<td style="width:181px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">9 mm Autoclip Applier</td>
			<td style="width:197px;">Mikron</td>
			<td style="width:119px;">427630</td>
			<td style="width:181px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">9 mm Autoclip</td>
			<td style="width:197px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:119px;">427631</td>
			<td style="width:181px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Heating pad</td>
			<td style="width:197px;">Sunbeam</td>
			<td style="width:119px;">CAT93</td>
			<td style="width:181px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">70% Ethanol</td>
			<td style="width:197px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:181px;">sold by numerous vendors</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ketamine Hydrochloride&#160;</td>
			<td style="width:197px;">Hospira</td>
			<td style="width:119px;">22395DD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Xylazine hydrochloride</td>
			<td style="width:197px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">X1251</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a preclinical murine model of hepatic metastases

Zahlreiche murine Modelle wurden entwickelt, um menschliche Karzinome zu studieren und zu fördern, das Verständnis der Krebsbehandlung und Entwicklung. Hier, ein präklinischer, murinen Pankreastumormodell von Lebermetastasen über eine Injektion von syngenen hemispleen murinen Pankreastumorzellen beschrieben. Dieses Modell imitiert viele der klinischen Bedingungen bei Patienten mit Metastasen in die Leber. Mäuse konsequent entwickeln Metastasen in der Leber so dass für die Untersuchung des metastatischen Prozess, experimentelle Therapie Testen und Tumorimmunologie Forschung.

Panc02 Tumorzellen in das hemispleen spritzt (Figur 1) bilden Lebermetastasen bei 100% der Mäuse, während die Lunge und Peritonealmetastasen werden nicht beobachtet, wenn das Verfahren vollständig durchgeführt wird. Diese Technik hat zu über einhundert Mäusen mit Panc02 Zellen in mehrere, unabhängige Experimente durchgeführt worden, und reproduzierbar, sterben alle unbehandelten Mäuse mit Lebermetastasen zwischen 30 und 60 Tagen nach der Hemisplenektomie Verfahren (Figur 2). Um...

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A Preclinical Murine Model of Hepatic Metastases

Eine präklinische, Mausmodell der Lebermetastasen über eine hemispleen Injektionstechnik durchgeführt.

Einer präklinischen Mausmodell der Lebermetastasen

Numerous murine models have been developed to study human cancers and advance the understanding of cancer treatment and development. Here, a preclinical, ...

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