We thank Ellen Ytebrouck for her valuable information regarding method application in rat. This work was supported by the Research Council of the KU Leuven (OT09/22) and the Fund for Scientific Research-Flanders (FWO Vlaanderen). Jeroen Aerts is supported by a Ph.D. fellowship of the Agency for Innovation through Science and Technology Flanders (IWT Vlaanderen) and Julie Nys by a Ph.D. grant from FWO Flanders.

تمت الموافقة على جميع التجارب من قبل لجنة الأبحاث الأخلاقية من جامعة الكويت لوفين و كان بما يتفق بدقة مع توجيه مجلس الجماعات الأوروبية في 22 سبتمبر 2010 (2010/63 / الاتحاد الأوروبي) ومع التشريع البلجيكي (KB من 29 مايو 2013). تم بذل كل جهد ممكن لتقليل معاناة الحيوانات وتقليل عدد الحيوانات. 1. العلاج والتخدير الحيوان <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الفأر مع حقنة داخل الصفاق من خليط من هيدروكلوريد الكيتامين (75 ملغ / مل)، وهيدروكلوريد medetomidine (1 ملغ / كلغ) في المياه المالحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحقق من ردود الفعل من قبل معسر أصابع القدم مع ملقط لضمان ومخدرا الماوس تماما. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق 70٪ من الإيثانول لتطهير الجفون والمنطقة المحيطة بالعين باستخدام تلميح القطن. تحقق منعكس الجفن بالإضافة إلى تقييم درجة التخدير. </li></ol> 2. إزالة العين <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأكد من يقيم الحيوان على شقة، جافة وسطح أملس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعقيم الملقط مع المنحني، الحافة مسننة (يفضل حجم غيض: 0.5 X 0.4 ملم). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اضغط بلطف على لحاظ (زاوية العين) مع ملقط حتى يتم النازحين مقلة العين من مأخذ والعصب البصري قابلة للوصول. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توجيه ملقط وراء العين. اضغط مع الاستمرار على العصب البصري بقوة، ويفضل مع بداية منحنى وليس غيض جدا من الملقط. وهذا سوف يساعد على رفع العالم من مأخذ وكبح العصب البصري الكامل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل حركات دائرية مع يد تمسك الملقط في الاتجاه مع أقل قدر من المقاومة بينما يبقى الماوس على سطح مستو. سوف الماوس تتأرجح على طول السطح وفقا لاتجاه حركة اليد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنفيذ هذا الإجراء مع تزايد سرعة تدريجيا حتى يتم مقيدة العصب البصري في اثنين (عادة ما بين 7 إلى 15 حركات دائرية، ما يقرب من نصف إلى واحد بدوره الكامل في الثانية الواحدة). وبالتالي، فإن مقلة العين هي منفصلةإزالتها. </li></ol> العناية 3. بعد المنطوق <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في حالة النزيف (نادرة)، وملء المدار مع تخثر لزج وكيل مرقئ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عكس تخدير عن طريق حقن 1 ملغ / كغ من هيدروكلوريد atipamezol في المياه المالحة داخل الصفاق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدارة 1 ملغ / كغ من ميلوكسيكام البريتونى كل 24 ساعة لتخفيف الألم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق مرهم العين للعين المتبقية لمنع جفاف القرنية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح للحيوان استرداد على لوحة التسخين أو التفاف الحيوان في المواد العازلة في قفص منفصل للسيطرة على درجة حرارة الجسم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس وزن الماوس كل يوم لمدة 2 أيام على الأقل. فقدان الوزن يمكن أن تشير إلى معاناة وفي هذه الحالة، يستمر العلاج ميلوكسيكام حتى يتم استرداد الحيوان بالكامل. </li></ol>

<ol>
	<li>Toldi, J., Feh&#233;r, O., Wolff, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+plasticity+induced+by+neonatal+monocular+(and+binocular)+enucleation.">Neuronal plasticity induced by neonatal monocular (and binocular) enucleation.</a> Progress in Neurobiology. 48 (3), 191-218 (1996).</li><li>Steeves, J. K. E., Gonz&#225;lez, E. G., Steinbach, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vision+with+one+eye:+a+review+of+visual+function+following+unilateral+enucleation.">Vision with one eye: a review of visual function following unilateral enucleation.</a> Spatial vision. 21 (6), 509-529 (2008).</li><li>Van Brussel, L., Gerits, A., Arckens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+cross-modal+plasticity+in+adult+mouse+visual+cortex+following+monocular+enucleation.">Evidence for cross-modal plasticity in adult mouse visual cortex following monocular enucleation.</a> Cerebral Cortex. 21 (9), 2133-2146 (2011).</li><li>Nys, J., Aerts, J., Ytebrouck, E., Vreysen, S., Laeremans, A., Arckens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cross-modal+aspect+of+mouse+visual+cortex+plasticity+induced+by+monocular+enucleation+is+age-dependent.">The cross-modal aspect of mouse visual cortex plasticity induced by monocular enucleation is age-dependent.</a> Journal of Comparative Neurology. 522 (4), 950-970 (2014).</li><li>Mahajan, V. B., Skeie, J. M., Assefnia, A. H., Mahajan, M., Tsang, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+eye+enucleation+for+remote+high-throughput+phenotyping.">Mouse eye enucleation for remote high-throughput phenotyping.</a> Journal of Visualized Experiments. (57), e57 (2011).</li><li>Morales, B., Choi, S. -. Y., Kirkwood, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dark+rearing+alters+the+development+of+GABAergic+transmission+in+visual+cortex.">Dark rearing alters the development of GABAergic transmission in visual cortex.</a> Journal of Neuroscience. 22 (18), 8084-8090 (2002).</li><li>Chen, X. J., Rasch, M. J., Chen, G., Ye, C. Q., Wu, S., Zhang, X. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Binocular+input+coincidence+mediates+critical+period+plasticity+in+the+mouse+primary+visual+cortex.">Binocular input coincidence mediates critical period plasticity in the mouse primary visual cortex.</a> Journal of Neuroscience. 34 (8), 2940-2955 (2014).</li><li>Konur, S., Yuste, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+regulation+of+spine+and+filopodial+motility+in+primary+visual+cortex:+Reduced+effects+of+activity+and+sensory+deprivation.">Developmental regulation of spine and filopodial motility in primary visual cortex: Reduced effects of activity and sensory deprivation.</a> Journal of Neurobiology. 59 (2), 236-246 (2004).</li><li>Parrilla-Reverter, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time-course+of+the+retinal+nerve+fibre+layer+degeneration+after+complete+intra-orbital+optic+nerve+transection+or+crush:+A+comparative+study.">Time-course of the retinal nerve fibre layer degeneration after complete intra-orbital optic nerve transection or crush: A comparative study.</a> Vision Research. 49 (23), 2808-2825 (2009).</li><li>Galindo-Romero, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axotomy-induced+retinal+ganglion+cell+death+in+adult+mice:+Quantitative+and+topographic+time+course+analyses.">Axotomy-induced retinal ganglion cell death in adult mice: Quantitative and topographic time course analyses.</a> Experimental Eye Research. 92 (5), 377-387 (2011).</li><li>Kanold, P. O., Kim, Y. A., GrandPre, T., Shatz, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-regulation+of+ocular+dominance+plasticity+and+NMDA+receptor+subunit+expression+in+glutamic+acid+decarboxylase-65+knock-out+mice.">Co-regulation of ocular dominance plasticity and NMDA receptor subunit expression in glutamic acid decarboxylase-65 knock-out mice.</a> The Journal of Physiology. 587 (12), 2857-2867 (2009).</li><li>Van Brussel, L., Gerits, A., Arckens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+localization+of+functional+subdivisions+in+the+visual+cortex+of+the+adult+mouse.">Identification and localization of functional subdivisions in the visual cortex of the adult mouse.</a> Journal of Comparative Neurology. 514 (1), 107-116 (2009).</li><li>Avwenagha, O., Bird, M. M., Lieberman, A. R., Yan, Q., Campbell, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+expression+of+brain-derived+neurotrophic+factor+and+tyrosine+kinase+B+mRNAs+and+distribution+and+ultrastructural+localization+of+their+proteins+in+the+visual+pathway+of+the+adult+rat.">Patterns of expression of brain-derived neurotrophic factor and tyrosine kinase B mRNAs and distribution and ultrastructural localization of their proteins in the visual pathway of the adult rat.</a> Neuroscience. 140 (3), 913-928 (2006).</li><li>Hernandes, M. S., Britto, L. R. G., Real, C. C., Martins, D. O., Lopes, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactive+oxygen+species+and+the+structural+remodeling+of+the+visual+system+after+ocular+enucleation.">Reactive oxygen species and the structural remodeling of the visual system after ocular enucleation.</a> Neuroscience. 170 (4), 1249-1260 (2010).</li><li>Cuyvers, A., Paulussen, M., Smolders, K., Hu, T. -. T., Arckens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+cell+proliferation+upon+enucleation+in+direct+retinal+brain+targets+in+the+visual+system+of+the+adult+mouse.">Local cell proliferation upon enucleation in direct retinal brain targets in the visual system of the adult mouse.</a> Journal of Experimental Neuroscience. 4, 1-15 (2010).</li><li>Smith, S. L., Trachtenberg, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experience-dependent+binocular+competition+in+the+visual+cortex+begins+at+eye+opening.">Experience-dependent binocular competition in the visual cortex begins at eye opening.</a> Nature Neuroscience. 10 (3), 370-375 (2007).</li><li>Toldi, J., Farkas, T., V&#246;lgyi, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+enucleation+induces+cross-modal+changes+in+the+barrel+cortex+of+rat.+A+behavioural+and+electrophysiological+study.">Neonatal enucleation induces cross-modal changes in the barrel cortex of rat. A behavioural and electrophysiological study.</a> Neuroscience Letters. 167 (1-2), 1-4 (1994).</li><li>Newton, J. R., Sikes, R. W., Skavenski, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-modal+plasticity+after+monocular+enucleation+of+the+adult+rabbit.">Cross-modal plasticity after monocular enucleation of the adult rabbit.</a> Experimental Brain Research. 144 (4), 423-429 (2002).</li><li>Lalonde, J., Chaudhuri, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+changes+in+CREB+phosphorylation+and+neuroadaptive+gene+expression+in+area+V1+of+adult+monkeys+after+monocular+enucleation.">Dynamic changes in CREB phosphorylation and neuroadaptive gene expression in area V1 of adult monkeys after monocular enucleation.</a> Molecular and Cellular Neuroscience. 35 (1), 24-37 (2007).</li><li>You, Y., Gupta, V. K., Graham, S. L., Klistorner, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anterograde+degeneration+along+the+visual+pathway+after+optic+nerve+injury.">Anterograde degeneration along the visual pathway after optic nerve injury.</a> PLoS ONE. 7 (12), e52061 (2012).</li><li>Kelly, K. R., McKetton, L., Schneider, K. A., Gallie, B. L., Steeves, J. K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+anterior+visual+system+development+following+early+monocular+enucleation.">Altered anterior visual system development following early monocular enucleation.</a> NeuroImage: Clinical. 4, 72-81 (2014).</li><li>Chow, A. M., Zhou, I. Y., Fan, S. J., Chan, K. W. Y., Chan, K. C., Wu, E. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+changes+in+visual+cortex+of+neonatal+monocular+enucleated+rat:+a+proton+magnetic+resonance+spectroscopy+study.">Metabolic changes in visual cortex of neonatal monocular enucleated rat: a proton magnetic resonance spectroscopy study.</a> International Journal of Developmental Neuroscience. 29 (1), 25-30 (2011).</li><li>Dyer, R. S., Hammond, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+enucleation+in+retinal+degenerate+mice.">Effects of enucleation in retinal degenerate mice.</a> Physiology &amp; behavior. 14 (2), 207-210 (1975).</li><li>Smith, S. A., Bedi, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unilateral+eye+enucleation+in+adult+rats+causes+neuronal+loss+in+the+contralateral+superior+colliculus.">Unilateral eye enucleation in adult rats causes neuronal loss in the contralateral superior colliculus.</a> Journal of Anatomy. 190 (4), 481-490 (1997).</li><li>Gonzalez, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+monocular+enucleation+on+calbindin-D+28k+and+c-Fos+expression+in+the+lateral+geniculate+nucleus+in+rats.">Effects of monocular enucleation on calbindin-D 28k and c-Fos expression in the lateral geniculate nucleus in rats.</a> Okajimas folia anatomica Japonica. 82 (1), 9-18 (2005).</li><li>Faguet, J., Maranhao, B., Smith, S. L., Trachtenberg, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ipsilateral+eye+cortical+maps+are+uniquely+sensitive+to+binocular+plasticity.">Ipsilateral eye cortical maps are uniquely sensitive to binocular plasticity.</a> Journal of Neurophysiology. 101 (2), 855-861 (2008).</li><li>Van der Gucht, E., Hof, P. R., Van Brussel, L., Burnat, K., Arckens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurofilament+protein+and+neuronal+activity+markers+define+regional+architectonic+parcellation+in+the+mouse+visual+cortex.">Neurofilament protein and neuronal activity markers define regional architectonic parcellation in the mouse visual cortex.</a> Cerebral Cortex. 17 (12), 2805-2819 (2007).</li><li>Chaudhuri, A., Matsubara, J. A., Cynader, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+activity+in+primate+visual+cortex+assessed+by+immunostaining+for+the+transcription+factor+Zif268.">Neuronal activity in primate visual cortex assessed by immunostaining for the transcription factor Zif268.</a> Visual Neuroscience. 12 (1), 35-50 (1995).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

لإجراء استئصال ناجحة وفقا لأسلوبنا، الخطوات الأكثر أهمية للنظر هي: 1) باستخدام ملقط مع طرف المنحني ومسننة من الحجم المناسب. 2) إجراء استئصال على سطح أملس وجاف. و3) مسرعة تدريجيا حركات دائرية في الاتجاه مع أقل احتكاك. للحصول على نتائج فعالة من الضروري استخدام ملقط المناسبة التي تتميز تلميح منحنية ومسننة (يفضل حجم غيض: الفأر: 0.5 X 0.4 مم؛ الفئران: 2.15 X 1.3 ملم). انحناء يسمح لسهولة الوصول إلى العصب البصري بعد مقلة العين التشرد وضروري لوضع اليد الصحيح عند أداء حركات دائرية. لا ينصح نصائح السلس لأنها تفتقر إلى قبضة اللازمة عندما عقد العصب البصري. الفشل في عقد العصب البصري بشكل صحيح أثناء حركات دائرية النتائج في تمزق الشريان العيني، وسوء مفرزة من العين وبالتالي ضعف التكاثر.لذا فمن المستحسن أن الممارسة الأولى هذه التقنية على الحيوانات الموت الرحيم لتعظيم الاستفادة من التعامل مع ملقط لضمان الرفق بالحيوان القصوى نقيبا الأسلوب في الجسم الحي. ومؤخرا أيضا تم تنفيذ الناجح استئصال العين في الفئران في المختبر باستخدام نفس التقنية باستثناء تحول جسم الحيوان يدويا وحفظ ثابتة ملقط. واحد الحد من هذه التقنية هو أنه ربما يمكن أن يؤدي إلى تلف شبكية العين. ولهذا الأسلوب هو أقل ملاءمة لجمع شبكية العين لأداء الأنسجة 5. وعلاوة على ذلك، فإن أسلوبنا يقتصر على وظيفة العين فتح العصور منذ مقلة العين يحتاج إلى النازحين من المقبس دون إزالة أو قطع الجفون. استئصال العين في الأنواع المختلفة، بما في ذلك القوارض، يتم إجراء روتيني باستخدام الطرق البديلة، والتي غالبا ما تنطوي على إزالة الجفون وقطع العصب البصري 18،23-25. هذه methoس تميل إلى أن تكون أكثر الغازية ويكون لها منحنى التعلم أعلى من تقنية الموضحة هنا. دون الحاجة إلى إزالة أو خياطة الجفون، يتم تصغير وقت الانتعاش بعد الجراحة، مما أدى إلى ارتفاع الرفق بالحيوان والنتائج أكثر استنساخه.

إزالة العين وبالتالي التدمير لا رجعة فيه سطح مستقبلات حسية (الشبكية)، يفرض خسارة كبيرة من المدخلات الحسية على طول المسار البصري. وقد أثبت هذا النموذج في استئصال النظام البصري الأحداث والبالغين لتكون ذات قيمة في فهم التنمية، اللدونة وظيفة المراكز البصرية المختلفة 1-4. يمكن للعواقب الجزيئية الخلوية والفسيولوجية لهذا الحرمان الحسي توفر نظرة ثاقبة كيف تطور طبيعي وينظم وكيف أنشئت الدوائر القشرية مواجهة وتغيير بنيتها ووظيفتها في استجابة لذلك تغيير واسعة النطاق في التجربة. أساليب مختلفة من الحرمان البصرية موجودة وأنهم جميعا لديهم مزايا محددة في البحوث المتعلقة الرؤية. على سبيل المثال تربية الظلام على وجه التحديد يلغي النشاط مدفوعة بصريا إلا أنه لا يؤثر على النشاط العفوي في شبكية العين. visua بالمثل، الغرز غطاء أو بقع العين إزالة منقوشةل إدخال دون إزعاج النشاط العفوي كنها تسمح تغلغل ضوء مشتتة من خلال عيون مغلقة. هذه الأساليب هي انعكاس ولقد ثبت أن تكون ذات قيمة في فهم دور نمط الرؤية وعلى مستوى منخفض ارتباط المدخلات مجهر النحت في الدوائر القشرية خلال تطوير 6-8. في مجال البحوث الزرق، والعصب البصري نموذج سحق في الحيوانات البالغة وقد استخدم على نطاق واسع لأنه يضع الفقدان التدريجي لشبكية العين المدخلات الخلايا العقدية التي تشكل العصب البصري 9،10. على الجهة الأخرى، استئصال، حيث العين وبالتالي تتم إزالة الشبكية تماما وعلى الفور، هو الخيار المناسب من الحرمان عندما يكون الهدف هو إزالة لا رجعة فيه رؤية كل من العفوية ومنقوشة في وقت واحد. أنه يدفع أيضا اختلال النشاط العين القوي التي يمكن أن تعزز إشارة إلى نسبة الضوضاء في دراسات الخرائط النشاط 11،12. مقارنة التغييرات الوظيفية والهيكلية استجابة لاستئصال مع البيئة نظام التشغيل بعد الحرمان بطرق أقل جذرية مثل خياطة غطاء على سبيل المثال، قد فضح أيضا رؤى جديدة في دور النشاط العفوي الشبكية في كلا النوعين التماثل الساكن ومتشابك من اللدونة. استئصال يتسبب في فقدان التأثيرات الغذائية في أهداف الشبكية مباشرة. على سبيل المثال، يتم downregulated مستويات عامل التغذية العصبية بشكل كبير في النواة الركبية الجانبية (LGN) وأكيمة متفوقة من الكبار الفئران منزوعة النواة 13. أنواع الاكسجين التفاعلية، والتي تعمل بوصفها جزيئات رسول التوسط إعادة الهيكلي، تم الكشف أيضا في هياكل تحت القشرية من الفئران الكبار النظام البصري 14. وعلاوة على ذلك، دبيقي وتفعيل astroglial عبر مختلف هياكل تحت القشرية الهدف البصرية في الماوس تحدث في فترة زمنية محددة بعد استئصال أسبوع واحد 15. معا، نتائج إزالة التدفعات الواردة في الاستجابات البصرية تحت القشرية مختلفة في الدبقية، المستوى الهيكلي والجزيئي. على الرغم من هذه تحت القشرةآثار، فإنه لا توريط بالضرورة آثار على مستوى القشرية 16. الجدير بالذكر، اللدونة القشرية عبر الوسائط، بما في ذلك التعديلات في المناطق الحسية الأخرى إلى جانب تعزيز المدخلات غير البصرية إلى القشرة البصرية المحرومة تحدث بعد كل من أحادي (ME) 3،4،17،18 ومجهر (BE) 1،17 استئصال. وبصرف النظر عن المساهمة في علم الأعصاب البصرية، استئصال كنوع من إزالة التدفعات الواردة يمكن استخدامها لدراسة التوازن بين 19 اعصاب والاعصاب 20-22 خصائص الجهاز العصبي المركزي. ووصف إجراءات مختلفة لأداء استئصال بالفعل في الأدب. منهجيات معينة في الجسم الحي ME في الجرذان والفئران هي أقل وضوحا بسبب باجتزاء غير الضروري للعضلات والأنسجة المدارية 23-25. منشورات أخرى مثل ماهاجان وآخرون (2011) 5 توفر بروتوكول مفصل باستخدام<html> تشريح حادة لمجموعة عالية الإنتاجية من العيون لدراسة الارتباط الوراثي، النمط الظاهري، من المحتمل بعد الوفاة. لهذا الغرض، وطريقة مريحة وسريعة. ومع ذلك، وهذه الطريقة أقل ملاءمة لفي الجسم الحي استئصال عندما يختار واحدة لدراسة مسار البصري وارد بعد استئصال (في الحيوانات الحية) بدلا من العين نفسها. في مثل هذا الوضع، وبقاء بعد استئصال هو من أهمية كبيرة. أيضا، الحد الأدنى من الضرر في الجسم الحي والمحافظة على العصب البصري والنسيج المدارية غير مواتية. هنا، نقدم طريقة استئصال بديل، أكثر مماثلة لتلك التي وصفها Faguet وآخرون (2008) 26، التي توفر خصائص معينة مفيدة: أنه يرتبط مع انتعاش سريع بعد الجراحة ويتميز التعلم عتبة منخفضة جدا للباحثين. بشكل عام، أساليب مختلفة مكملة اعتمادا على محور البحوث اللاحقة: مورفولوجيا العين أو المسار البصري البحوث. ve_content &quot;&gt; باختصار، قلع يمكن تطبيقها من البحوث التحقيقات في الرؤية نحو التماثل الساكن وعبر الوسائط اللدونة الدماغ، والخصائص استجابة الدبقية، والاستقرار محور عصبي. في هذه المقالة تصور، علينا أن نظهر وسيلة عملية وموثوق بها لفي الجسم الحي في استئصال العين الماوس.

<table><tbody><tr><td>Ketamine hydrochloride (Anesketin)</td><td>Dechra Veterinary Products (Eurovet)</td><td>BE-V136516</td><td></td></tr><tr><td>Medetomidine hydrochloride (Domitor)</td><td>Orion Corporation (Janssen Animal Health)</td><td>BE-V151742</td><td></td></tr><tr><td>Atipamezol hydrochloride (Antisedan)</td><td>Orion Corporation (Elanco Animal Health)</td><td>BE-V153352</td><td></td></tr><tr><td>Antibiotics (cefazolin, Kefzol)</td><td>Eurocept Pharmaceuticals</td><td>BE 106267</td><td></td></tr><tr><td>Eye ointment (Fucithalmic)</td><td>Leo Pharma nv-sa</td><td>BE 144654</td><td></td></tr><tr><td>Moria MC31 Forceps - Serrated Curved</td><td>Fine Science Tools</td><td>11370-31</td><td>For application in the mouse. Any forceps with similar dimensions can be used as long as the tip is curved and serrated.</td></tr><tr><td>Narrow Pattern Forceps - curved</td><td>Fine Science Tools</td><td>11003-13</td><td>For application in the rat. Any forceps with similar dimensions can be used as long as the tip is curved and serrated.</td></tr><tr><td>Hemostatic cotton wool</td><td>Qualiphar</td><td>N/A</td><td>Other hemostatic agents are equally suitable (&lt;em&gt;e.g.&lt;/em&gt;, Viscostat, #649, Ultradent Products)</td></tr></tbody></table>

a highly reproducible and straightforward method to perform in vivo ocular enucleation in the mouse after eye opening

استئصال أو الاستئصال الجراحي للعين عموما يمكن أن تعتبر نموذجا لإزالة التدفعات الواردة العصبية. أنه يوفر أداة قيمة لدراسة مختلف جوانب البصرية، عبر مشروط واللدونة التنموية إلى جانب النظام البصري الثدييات 1-4. هنا، علينا أن نظهر تقنية أنيقة وبسيطة لإزالة واحدة أو كلتا العينين في الماوس، والتي يتم التحقق من صحة في الفئران من 20 يوما من العمر تصل إلى البالغين. باختصار، يتم استخدام ملقط منحني تطهيرها لكبح العصب البصري وراء العين. بعد ذلك، يتم تنفيذ حركات دائرية لتقليص العصب البصري وإزالة مقلة العين. مزايا هذه التقنية هي استنساخ عالية، والحد الأدنى لعدم وجود نزيف، والانتعاش السريع بعد العمليات الجراحية والتعلم عتبة منخفضة للغاية بالنسبة للمجرب. وبالتالي، كمية كبيرة من الحيوانات يمكن التلاعب بها ومعالجتها مع الحد الأدنى من الجهد. طبيعة تقنية قد يحرض ضرر طفيف لشبكية العين أثناء العملية. هذه الآثار الجانبية يجعل هذه الطريقة مناسبة أقل بالمقارنة مع ماهاجان وآخرون (2011) 5 إذا كان الهدف هو جمع وتحليل أنسجة الشبكية. أيضا، لدينا وسيلة يقتصر على فتح بعد العين الأعمار (الماوس: P10 - 13 فصاعدا) منذ مقلة العين يحتاج إلى النازحين من المقبس دون إزالة الجفون. وقد تم مؤخرا تطبيق في الجسم الحي تقنية استئصال الموضحة في هذه المخطوطة بنجاح مع تعديلات طفيفة في الفئران ويبدو من المفيد دراسة المسار البصري وارد من القوارض بشكل عام.

ويوضح الشكل 1 إزالة ناجحة من العين باستخدام بروتوكول صفها ويتميز عدم وجود نزيف أو أي ضرر مادي واضح للأنسجة المدارية أو محجر العين (أرقام 1A، 1B). وعلاوة على ذلك، العين إزالة القرنية لديها على نحو سلس، المشيمية والأقراص الضوئية، إرشادية لكرة سليمة تماما (الشكل 1C). منذ بروتوكول لدينا يشمل لقط من العصب البصري وراء العين وتحول الميكانيكي، العصب البصري للعين إزالتها هو ضيق في قاعدة شبكية العين (الشكل 1D). أداء نتائج الإجراء الموضح في العصب البصري نظيف قطع دون أي ضرر للمنطقة المحيطة الدماغ (الشكل 1E). استئصال أحادي، إلى جانب رسم الخرائط النشاط (الشكل 2)، ويسمح احد لتحديد بحدة المناطق المدخلات وظيفية أو العين المحددة في المقابل visuaلتر من القشرة الماوس 12،27 أو الأعمدة هيمنة حتى العين في الثدييات العليا مثل القردة 28. في التجارب على الفئران، وإزالة واحد (ME) أو كلتا العينين (BE) جنبا إلى جنب مع التحفيز البصري المستهدفة والكشف عن zif268 مرنا أو ج فو مستويات التعبير البروتين تم تطبيق لكشف تنشيط الخلايا العصبية الإقليمي في القشرة البصرية 12،27 . على النقيض من الضوابط حفز بصريا (الشكل 2A)، أظهرت الفئران BE النشاط القاعدي في القشرة البصرية بسبب استكمال نقص المدخلات البصرية (الشكل 2B). على هذا النحو، تم الكشف عن الحدود بين القشرة البصرية مع غير المرئية (أي القشرة الحسية الجسدية في مزيد من الفروع الأمامية والقشرة السمعية في أكثر أقسام الخلفي). نتائج ME الفئران مع فترة بقاء أسبوع واحد تصور المناطق العين مدخلات معينة في القشرة البصرية المقابل. كانت المنطقتين مدفوعة monocularly قاصر النشاط وتقع ميدي<html> القاعدة والجانبية للمنطقة المركزية مجهر (الشكل 2C). <img alt="الشكل 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51936/51936fig1highres.jpg" width="500" /> الرقم 1. التقييم النوعي للدولة بعد استئصال للمحجر العين، والعين وإزالة العصب البصري. بعد إزالة العين مع ملقط المنحنية (A) لوحظ عدم وجود نزيف أو تلف في محجر العين (B). العين إزالتها سليمة تماما كما يتجلى في مظهر طبيعي من القرنية والمشيمية (C، D). مقيدة العصب البصري في القرص البصري حيث يترك العين (D). فحص الجزء البطني من الدماغ يكشف العصب البصري قطع نظيفة (النجمة) وضرر واضح لهياكل أخرى (E). أشرطة النطاق في C، D: 1 مم. شريط النطاق في E: 5 ملم. A: الأمامية. L: الأيسر. P: الخلفية. R: الحق. &quot;jove_content&quot; FO: المحافظة على together.within الصفحات = &quot;دائما&quot;&gt; <img alt="الشكل 2" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51936/51936fig2highres.jpg" width="500" /> الشكل 2. التقسيمات محددة العين المدخلات وظيفية في الماوس القشرة البصرية كما يتضح من استئصال. الخطوط السوداء والرمادية التي تربط بين العيون والقشرة تمثل المعبر من خلال afferents شبكية العين والمناطق مدخلات محددة. هو تصور النشاط العصبي في أقسام الاكليلية السيطرة (A)، BE (B)، وME (C) الفئران عن طريق المشعة الموقع التهجين (ISH) في لzif268 (مقياس الرمادية) حول مستوى Bregma -3.40 ملم. في الحيوانات التحكم (A)، القشرة البصرية في كل من نصفي الكرة الأرضية تعبر عن النشاط المرتفع التالية التحفيز البصري. عندما يتم اجتثاث أحدهما أو كلاهما العين (ق)، انخفاضا واضحا في إشارة النشاط مرئيا في المناطق القشرية حرم المقابلة. Monocularly منزوعة النواة (C) الفئران تظهر منطقة تشغيل إشارات عاليةvity في منطقة مجهر من القشرة البصرية محاطة إشارة انخفضت في المناطق أحادي المقابل للعين التي تمت إزالتها. شريط النطاق: 2 مم. أعيد طبعها بإذن من بروكسل فان وآخرون 12.

Watch this Scientific Journal Video about A Highly Reproducible and Straightforward Method to Perform In Vivo Ocular Enucleation in the Mouse after Eye Opening at JoVE.com

A Highly Reproducible and Straightforward Method to Perform In Vivo Ocular Enucleation in the Mouse after Eye Opening

توفر إزالة العيون، وتسمى أيضا استئصال، استراتيجية مفيدة لدراسة جوانب البصرية، عبر مشروط، واللدونة التنموية على طول الجهاز البصري الثدييات لأنه يدفع رجعة فيه جزئي (أحادي) أو كاملة (مجهر) فقدان البصر. نحن هنا وصف نهج تكرار للغاية ومباشر على أداء في الجسم الحي استئصال.

وهناك طريقة استنساخه للغاية ومباشرة إلى تنفيذ<em&gt; في فيفو</em&gt; قلع العين في الفأر بعد فتح العين

Enucleation or the surgical removal of an eye can generally be considered as a model for nerve deafferentation. It provides a valuable tool to study the ...

a-highly-reproducible-straightforward-method-to-perform-vivo-ocular

Research

JoVE Journal

Biology

A Highly Reproducible and Straightforward Method to Perform In Vivo Ocular Enucleation in the Mouse after Eye Opening

23.2K Views.  KU Leuven - University of Leuven.  توفر إزالة العيون، وتسمى أيضا استئصال، استراتيجية مفيدة لدراسة جوانب البصرية، عبر مشروط، واللدونة التنموية على طول الجهاز البصري الثدييات لأنه يدفع رجعة فيه جزئي (أحادي) أو كاملة (مجهر) فقدان البصر. نحن هنا وصف نهج تكرار للغاية ومباشر على ?...

Video: A Highly Reproducible and Straightforward Method to Perform In Vivo Ocular Enucleation in the Mouse after Eye Opening

Mouse Eye Enucleation for Remote High-throughput Phenotyping

The mouse eye is an important genetic model for the translational study of human ophthalmic disease. Blinding diseases in humans, such as macular degeneration, photoreceptor degeneration, cataract, glaucoma, retinoblastoma, and diabetic retinopathy have been recapitulated in transgenic mice.1-5 Most transgenic and knockout mice have been generated by laboratories to study non-ophthalmic diseases, but genetic conservation between organ systems suggests that many of the same genes may also play a role in ocular development and disease. Hence, these mice represent an important resource for discovering new genotype-phenotype correlations in the eye. Because these mice are scattered across the globe, it is difficult to acquire, maintain, and phenotype them in an efficient, cost-effective manner. Thus, most high-throughput ophthalmic phenotyping screens are restricted to a few locations that require on-site, ophthalmic expertise to examine eyes in live mice. 6-9 An alternative approach developed by our laboratory is a method for remote tissue-acquisition that can be used in large or small-scale surveys of transgenic mouse eyes. Standardized procedures for video-based surgical skill transfer, tissue fixation, and shipping allow any lab to collect whole eyes from mutant animals and send them for molecular and morphological phenotyping. In this video article, we present techniques to enucleate and transfer both unfixed and perfusion fixed mouse eyes for remote phenotyping analyses.

The dissection technique illustrates enucleation of the mouse eye for tissue fixation to perform phenotyping in high-throughput screens.

سمل العيون الماوس لPhenotyping عالي الإنتاجية عن بعد

The mouse eye is an important genetic model for the translational study of human ophthalmic disease. Blinding diseases in humans, such as macular ...

Medicine

Video-oculography in Mice

Eye movements are very important in order to track an object or to stabilize an image on the retina during movement. Animals without a fovea, such as the mouse, have a limited capacity to lock their eyes onto a target. In contrast to these target directed eye movements, compensatory ocular eye movements are easily elicited in afoveate animals1,2,3,4. Compensatory ocular movements are generated by processing vestibular and optokinetic information into a command signal that will drive the eye muscles. The processing of the vestibular and optokinetic information can be investigated separately and together, allowing the specification of a deficit in the oculomotor system. The oculomotor system can be tested by evoking an optokinetic reflex (OKR), vestibulo-ocular reflex (VOR) or a visually-enhanced vestibulo-ocular reflex (VVOR). The OKR is a reflex movement that compensates for "full-field" image movements on the retina, whereas the VOR is a reflex eye movement that compensates head movements. The VVOR is a reflex eye movement that uses both vestibular as well as optokinetic information to make the appropriate compensation. The cerebellum monitors and is able to adjust these compensatory eye movements. Therefore, oculography is a very powerful tool to investigate brain-behavior relationship under normal as well as under pathological conditions (f.e. of vestibular, ocular and/or cerebellar origin).
Testing the oculomotor system, as a behavioral paradigm, is interesting for several reasons. First, the oculomotor system is a well understood neural system5. Second, the oculomotor system is relative simple6; the amount of possible eye movement is limited by its ball-in-socket architecture ("single joint") and the three pairs of extra-ocular muscles7. Third, the behavioral output and sensory input can easily be measured, which makes this a highly accessible system for quantitative analysis8. Many behavioral tests lack this high level of quantitative power. And finally, both performance as well as plasticity of the oculomotor system can be tested, allowing research on learning and memory processes9.
Genetically modified mice are nowadays widely available and they form an important source for the exploration of brain functions at various levels10. In addition, they can be used as models to mimic human diseases. Applying oculography on normal, pharmacologically-treated or genetically modified mice is a powerful research tool to explore the underlying physiology of motor behaviors under normal and pathological conditions. Here, we describe how to measure video-oculography in mice8.

Video-oculography is a very quantitative method to investigate ocular motor performance as well as motor learning. Here, we describe how to measure video-oculography in mice. Applying this technique on normal, pharmacologically-treated or genetically modified mice is a powerful research tool to explore the underlying physiology of motor behaviors.

الفيديو oculography في الفئران

Eye movements are very important in order to track an object or to stabilize an image on the retina during movement. Animals without a fovea, such as the ...

Neuroscience

In vivo-like Organotypic Murine Retinal Wholemount Culture

Targeted ablations of genes and analysis of animal models is the classical strategy for enrolling specific retinal gene function. However, transgenic, retina-specific or conditional knockout mouse models often display early lethality or suffer from severe malformations, preventing an analysis beyond embryonic or early postnatal stages.
Primary cell culture is an alternative to investigate the effects of exogenously applied recombinant factors, overexpression of genes or siRNA-mediated gene knockdown in a controlled environment. Dissociated cell culture has the advantage that the endogenous signals reaching the target cells are reduced, thereby facilitating the identification of exogenously triggered effects after pharmacological manipulation. However, important cell-cell interactions are initially destroyed by enzymatic digestion or mechanical dissociation, even if re-aggregated retinospheroid cultures1 are used.
By contrast, organotypic retinal wholemount cultures provide a system close to the physiological in vivo situation with neuronal interactions and connections still preserved2-5.
In this video article we provide a step by step demonstration of (1) the establishment of in vivo-like organotypic retinal wholemount cultures including dissection peculiarities of embryonic, postnatal and adult murine eyes and (2) a dissociation and cytospin procedure for analysis of neuronal apoptosis and retinal cell proliferation in organotypic wholemounts, e.g. after culture in the presence of exogenously applied recombinant factors.

In vivo-like Organotypic Murine Retinal Wholemount Culture

This video article demonstrates the establishment of organotypic retinal wholemount cultures and a cytospin procedure for analysis of exogenously induced effects. Organotypic retinal wholemount cultures mimic the in vivo situation and significantly facilitate the accessibility of murine retinas for experimental manipulations while circumventing the disadvantages of classical murine animal models.

في الجسم الحي مثل الفئران عضوي النمط الثقافة Wholemount الشبكية

Targeted ablations of genes and analysis of animal models is the classical strategy for enrolling specific retinal gene function. However, transgenic, ...

Monocular Visual Deprivation and Ocular Dominance Plasticity Measurement in the Mouse Primary Visual Cortex

Monocular visual deprivation is an excellent experimental paradigm to induce primary visual cortical response plasticity. In general, the response of the cortex to the contralateral eye to a stimulus is much stronger than the response of the ipsilateral eye in the binocular segment of the mouse primary visual cortex (V1). During the mammalian critical period, suturing the contralateral eye will result in a rapid loss of responsiveness of V1 cells to contralateral eye stimulation. With the continuing development of transgenic technologies, more and more studies are using transgenic mice as experimental models to examine the effects of specific genes on ocular dominance (OD) plasticity. In this study, we introduce detailed protocols for monocular visual deprivation and calculate the change in OD plasticity in mouse V1. After monocular deprivation (MD) for 4 days during the critical period, the orientation tuning curves of each neuron are measured, and the tuning curves of layer four neurons in V1 are compared between stimulation of the ipsilateral and contralateral eyes. The contralateral bias index (CBI) can be calculated using each cell&#39;s ocular OD score to indicate the degree of OD plasticity. This experimental technique is important for studying the neural mechanisms of OD plasticity during the critical period and for surveying the roles of specific genes in neural development. The major limitation is that the acute study cannot investigate the change in neural plasticity of the same mouse at a different time.

Here, we present detailed protocols for monocular visual deprivation and ocular dominance plasticity analysis, which are important methods for studying the neural mechanisms of visual plasticity during the critical period and the effects of specific genes on visual development.

أحادي ة الحرمان البصري والبصري قياس الدونة الهيمنة في القشرة البصرية الابتدائية الماوس

Monocular visual deprivation is an excellent experimental paradigm to induce primary visual cortical response plasticity. In general, the response of the ...

Developmental Biology

In Vivo Multimodal Imaging and Analysis of Mouse Laser-Induced Choroidal Neovascularization Model

Laser-induced choroidal neovascularization (CNV) is a well-established model to mimic the wet form of age-related macular degeneration (AMD). In this protocol, we aim to guide the reader not simply through the technical considerations of generating laser-induced lesions to trigger neovascular processes, but rather focus on the powerful information that can be obtained from multimodal longitudinal in vivo imaging throughout the follow-up period.
The laser-induced mouse CNV model was generated by a diode laser administration. Multimodal in vivo imaging techniques were used to monitor CNV induction, progression and regression. First, spectral domain optical coherence tomography (SD-OCT) was performed immediately after the lasering to verify a break of Bruch&#39;s membrane. Subsequent in vivo imaging using fluorescein angiography (FA) confirmed successful damage of Bruch&#39;s membrane from serial images acquired at the choroidal level. Longitudinal follow-up of CNV proliferation and regression on days 5, 10, and 14 after the lasering was performed using both SD-OCT and FA. Simple and reliable grading of leaky CNV leasions from FA images is&#160;presented. Automated segmentation for measurement of total retinal thickness, combined with manual caliber application for measurement of retinal thickness at CNV sites, allow unbiased evaluation of the presence of edema. Finally, histological verification of CNV is performed using isolectin GS-IB4 staining on choroidal flatmounts. The staining is thresholded, and the isolectin-positive area is calculated with ImageJ.
This protocol is especially useful in therapeutics studies requiring high-throughput-like screening of CNV pathology as it allows fast, multimodal, and reliable classification of CNV pathology and retinal edema. In addition, high resolution SD-OCT enables the recording of other pathological hallmarks, such as the accumulation of subretinal or intraretinal fluid. However, this method does not provide a possibility to automate CNV volume analysis from SD-OCT images, which has to be performed manually.

In Vivo Multimodal Imaging and Analysis of Mouse Laser-Induced Choroidal Neovascularization Model

Here, we present the usefulness of longitudinal in vivo imaging in the follow-up of morphological changes of laser-induced choroidal neovascularization in mice.

في فيفو التصوير المتعدد الوسائط، وتحليل للماوس المستحثة بالليزر طراز نيوفاسكولاريزيشن تشورويدال

Laser-induced choroidal neovascularization (CNV) is a well-established model to mimic the wet form of age-related macular degeneration (AMD). In this ...

In Vivo Imaging of Cx3cr1gfp/gfp Reporter Mice with Spectral-domain Optical Coherence Tomography and Scanning Laser Ophthalmoscopy

Spectral domain optical coherence tomography (SD-OCT) and scanning laser ophthalmoscopy (SLO) are extensively used in experimental ophthalmology. In the present protocol, mice expressing green fluorescent protein (gfp) under the promoter of Cx3cr1 (BALB/c-Cx3cr1gfp/gfp) were used to image microglia cells in vivo in the retina. Microglia are resident macrophages of the retina and have been implicated in several retinal diseases1,2,3,4,5,6. This protocol provides a detailed approach for generation of retinal B-scans, with SD-OCT, and imaging of microglia cell distribution in Cx3cr1gfp/gfp mice with SLO in vivo, using an ophthalmic imaging platform system. The protocol can be used in several reporter mouse lines. However, there are some limitations to the protocol presented here. First, both SLO and SD-OCT, when used in the high-resolution mode, collect data with high axial resolution but the lateral resolution is lower (3.5 &#181;m and 6 &#181;m, respectively). Moreover, the focus and saturation level in SLO is highly dependent on parameter selection and correct alignment of the eye. Additionally, using devices designed for human patients in mice is challenging due to the higher total optical power of the mouse eye compared to the human eye; this can lead to lateral magnification inaccuracies7, which are also dependent on the magnification by the mouse lens among others. However, despite that the axial scan position is dependent upon lateral magnification, the axial SD-OCT measurements are accurate8.

In Vivo Imaging of Cx3cr1gfp/gfp Reporter Mice with Spectral-domain Optical Coherence Tomography and Scanning Laser Ophthalmoscopy

This protocol describes how high-resolution imaging techniques such as spectral domain optical coherence tomography and scanning laser ophthalmoscopy can be utilized in small rodents, using an ophthalmic imaging platform system, to obtain information on retinal thickness and microglial cell distribution, respectively.

في فيفو التصوير من "الفئران مراسل" Cx3cr1التجارة والنقل/التجارة والنقل مع المجالات الطيفية الضوئية التماسك التصوير المقطعي وفحص تنظير العين الليزر

Spectral domain optical coherence tomography (SD-OCT) and scanning laser ophthalmoscopy (SLO) are extensively used in experimental ophthalmology. In the ...

Puncture-Induced Iris Neovascularization as a Mouse Model of Rubeosis Iridis

We describe a model of puncture-induced iris neovascularization as a general model for noninvasive evaluation of angiogenesis. The model is also relevant for targeting neovascular glaucoma, a sight-threatening complication of diabetic retinopathy. This method is based on the induction of iris vascular response by a series of self-sealing uveal punctures on BALB/c mice and takes advantage of the postpartum maturation of mouse ocular vasculature. Mouse pups undergo uveal punctures from postnatal day 12.5, when the pups naturally open their eyes, until postnatal day 24.5. Due to the transparency of the cornea, iris vasculature can be analyzed easily through time by noninvasive in vivo methods. Furthermore, the semitransparent iris of BALB/c mice can be flatmounted for detailed immunohistologic analysis with minimal non-specific background staining. In this model, angiogenesis is mainly driven by the inflammatory and plasminogen activating systems. The puncture-induced model is the first to induce iris neovascularization in small rodents, and has the advantage of allowing direct noninvasive in vivo analysis of the angiogenic process. Moreover, the model can be combined with angiogenic modulating substances, which highlights its potential in the study of angiogenesis with an in vivo perspective.

Iris neovascularization, a common complication of ischemic retinal disease, may lead to sight-threatening neovascular glaucoma. Here, we describe a murine protocol for inducing experimental iris neovascularization that may be used for noninvasive evaluation of angiogenesis-modulating substances.

نيوفاسكولاريزيشن آيريس المستحثة بثقب كنموذج الفأر من إيريديس روبيوسيس

We describe a model of puncture-induced iris neovascularization as a general model for noninvasive evaluation of angiogenesis. The model is also relevant ...

Image-Guided Optical Coherence Tomography to Assess Structural Changes in Rodent Retinas

Ocular diseases, such as age-related macular degeneration, glaucoma, retinitis pigmentosa, and uveitis, are always accompanied by retinal structural changes. These diseases affecting the fundus always exhibit typical abnormalities in certain cell types in the retina, including photoreceptor cells, retinal ganglion cells, cells in the retinal blood vessels, and cells in the choroidal vascular cells. Noninvasive, highly efficient, and adaptable imaging techniques are required for both clinical practice and basic research. Image-guided optical coherence tomography (OCT) satisfies these requirements because it combines fundus photography and high-resolution OCT, providing an accurate diagnosis of tiny lesions as well as important changes in the retinal architecture. This study details the procedures of data collection and data analysis for image-guided OCT and demonstrates its application in rodent models of choroidal neovascularization (CNV), optic nerve crush (ONC), light-induced retinal degeneration, and experimental autoimmune uveitis (EAU). This technique helps researchers in the eye field to identify rodent retinal structural changes conveniently, reliably, and tractably.

The protocol presented here details the procedures of data collection and data analysis for image-guided optical coherence tomography (OCT) and demonstrates its application in multiple rodent models of ocular diseases.

Ocular diseases, such as age-related macular degeneration, glaucoma, retinitis pigmentosa, and uveitis, are always accompanied by retinal structural ...

Microdissection of the Rodent Eye

The ocular micro-dissection of the rodent eye involves the segmentation of the enucleated eyeball with the attached nictitating membrane, or third eyelid, to obtain the anterior and posterior eyecups. With this technique, the sub-parts of the eye, including the corneal tissue, neural tissue, retinal pigment epithelial (RPE) tissue, and lens, can be obtained for wholemounts, cryo-sectioning, and/or single-cell suspensions of a specific ocular tissue. The presence of the third eyelid presents unique and significant advantages, as it benefits the maintenance of the orientation of the eye, which is important for understanding eye physiology following any localized intervention or in studies involving ocular analysis relating to the eye&#39;s spatial topography.
In this method, we enucleated the eyeball at the socket along with the third eyelid by carefully and slowly cutting through the extraocular muscles and severing the optic nerve. The eyeball was pierced through the corneal limbus using a microblade.&#160;The incision was used as the point of entry, allowing for cutting along the corneal-scleral junction by inserting micro-scissors through the incision point. Small and continuous cuts along the circumference were made until the cups separated. These could be further dissected by gently peeling the translucent layer of the neural retina using Colibri suturing forceps to obtain the neural retina and RPE layers. Further, three/four equidistant cuts were made from the periphery perpendicularly to the optic center until the optic nerve was reached. This opened the hemispherical cups into a floret shape so that they fell flat and could be easily mounted. This technique has been used in our lab for corneal wholemounts and retinal sections. The presence of the third eyelid delineates the nasal-temporal orientation, which allows for the study of various cell therapy interventions post-transplantation and, thus, the targeted physiological validation vital for visualization and accurate representation in such studies.

This paper presents a protocol for ocular micro-dissection in rodents. The process involves the enucleation of the eyeball along with the nictitating membrane (i.e., the third eyelid). This is then followed by the separation of the posterior and anterior eye cups.

التشريح المجهري لعين القوارض

The ocular micro-dissection of the rodent eye involves the segmentation of the enucleated eyeball with the attached nictitating membrane, or third eyelid, ...

طريقة لكمة خزعة معدلة للحروق القلوية الدقيقة في الفئران

Corneal and Limbal Alkali Injury Induction Using a Punch-Trephine Technique in a Mouse Model

The cornea is critical for vision, and corneal healing after trauma is fundamental in maintaining its transparency and function. Through the study of corneal injury models, researchers aim to enhance their understanding of how the cornea heals and develop strategies to prevent and manage corneal opacities. Chemical injury is one of the most popular injury models that has extensively been studied on mice. Most previous investigators have used a flat paper soaked in sodium hydroxide to induce corneal injury. However, inducing corneal and limbal injury using flat filter paper is unreliable, since the mouse cornea is highly curved. Here, we present a new instrument, a modified biopsy punch, that enables the researchers to create a well-circumscribed, localized, and evenly distributed alkali injury to the murine cornea and limbus. This punch-trephine method enables researchers to induce an accurate and reproducible chemical burn to the entire murine cornea and limbus while leaving other structures, such as the eyelids, unaffected by the chemical. Moreover, this study introduces an enucleation technique that preserves the medial caruncle as a landmark for identifying the nasal side of the globe. The bulbar and palpebral conjunctiva, and lacrimal gland are also kept intact using this technique. Ophthalmologic examinations were performed via slit lamp biomicroscope and fluorescein staining on days 0, 1, 2, 6, 8, and 14 post-injury. Clinical, histological, and immunohistochemical findings confirmed limbal stem cell deficiency and ocular surface regeneration failure in all experimental mice. The presented alkali corneal injury model is ideal for studying limbal stem cell deficiency, corneal inflammation, and fibrosis. This method is also suitable for investigating pre-clinical and clinical efficacies of topical ophthalmologic medications on the murine corneal surface.

تسليط الضوء على المؤلف: تطوير البحث في علاج عتامة القرنية وتجديدها 

This protocol describes a method to induce an accurate and reproducible corneal and limbal alkali injury in a mouse model. The protocol is advantageous as it allows for an evenly distributed injury to the highly curved mouse cornea and limbus.

تحريض إصابة القرنية والقلوية الداكنة حول القزحية باستخدام تقنية الثقب في نموذج الفأر

The cornea is critical for vision, and corneal healing after trauma is fundamental in maintaining its transparency and function. Through the study of ...

وهناك طريقة استنساخه للغاية ومباشرة إلى تنفيذ

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video