Nicole Vella (Macquarie University) for providing reagents; Alexia Saunder (Bionics Institute; BI), Michelle McPhedran (BI), Chris Williams (BI) for experimental support; the Royal Victorian Eye and Ear Hospital (RVEEH) Biological Research Centre staff for animal care; Sue Pierce (RVEEH) for veterinary advice; Anthony Burkitt (Bionic Vision Australia; BVA), Tamara Brawn (BVA) and the BVA staff for administrative support. 
This research was supported by the Australian Research Council (ARC) through its Special Research Initiative (SRI) in Bionic Vision Science and Technology grant to Bionic Vision Australia (BVA). The Bionics Institute receives Operational Infrastructure Support from the Victorian Government and also acknowledges support from the Bertalli Family Trust and the J T Reid Charitable Trust. The funders had no role in study design, data collection and analysis, decision to publish, or preparation of the manuscript.
The Bionic Vision Australia Consortia authors for this manuscript are (a-z): 
Penelope J. Allen, Owen Burns, Kate E. Fox, Kumaravelu Ganesan, David J. Garret, Hamish Meffin, Joel Villalobos, and Jonathan Yeoh.

ملاحظة: تمت الموافقة على جميع الإجراءات التي كتبها الملكي الفيكتوري العين والأذن جنة مستشفى الحيوانية البحوث وعلم الأخلاق (RVEEH AEC؛ # 10-199AB). وعولج الموضوعات وفقا لالوطني للصحة و&quot;مدونة الاسترالي ممارسات للرعاية واستخدام الحيوانات لأغراض علمية&quot; مجلس الأبحاث الطبية (2013) و &quot;منع القسوة ضد الحيوانات قانون&quot; (1986؛ والتعديلات). تم تنفيذ جميع إجراءات التقييم والكهربية الجراحية والسريرية تحت التخدير، وقدمت كل الجهود للحد من المعاناة. 1. قلع والتثبيت ملاحظة: اتبع الإجراء استئصال والتثبيت بالتفصيل في المخطوطة رفيق 16، مع الحرص اضافية حول الكابلات الجهاز أو الموانئ استئصال الزجاجية، إذا كان موجودا. لفترة وجيزة، وهذا ينطوي: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Transcardially يروي هذا الموضوع مع المياه المالحة الدافئة تليها العازله محايد الباردالفورمالين الأحمر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ربط الغرز لمقلة العين لتكون بمثابة المعالم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استأصل العين 16، والحفاظ على كبلات الجهاز وأي مرفق بقع / علامات التبويب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد إصلاح العين في حل ديفيدسون ل18 - 36 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل 50٪ من الإيثانول ل6-8 ساعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل 70٪ من الإيثانول وبردت (4 ° C) حتى تشريح. </li></ol> 2. إزالة الكهربائي وتشريح. ملاحظة: ليست كل يزرع فوق الشبكي لديها شكل عامل نفسه، ولكن بصفة عامة سيكون هناك مجموعة القطب وشكلا من أشكال مرنة ومطابق المواد الناقل. الأجهزة التي تم علق على شبكية العين تحتوي على ثقب تك تك حيث تخترق المعدن مجموعة والجزء الخلفي من العين، وحفظ هذه معا. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتصور الزرع ونقطة حيث يتم تأمين إلى شبكية العين. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام شفرة 15 درجة جعل شق العابر للالقرنية كفافي وإزالة الغطاء القرنية لإكسببيئة نظام التشغيل القزحية والعدسة الأساسية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام شفرة 15 درجة، disinsert الألياف النطيقي العدسة وإزالة عدسة جملة وتفصيلا، وفضح الغرفة الخلفية مع عملية الزرع فوق الشبكي وتك معدنية في الموقع. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اعتمادا على الزرع والدراسة التي يؤديها، وإزالة مكونات غريبة قبل مزيد من تشريح. ملاحظة: في المثال الحالي، ومجموعة فوق الشبكي يجري تقييمها تتألف من المحكم القطب الماس والالكترونيات حزمة النموذج مقرها داخل حاملة امتثالي سيليكون (المنتجة في المنزل، ارجع إلى 20). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> هنا، واستخراج بعناية حزمة القطب الماس عن طريق تشريح غرامة مع مشرط. ترك الجسم سيليكون للزرع جنبا إلى جنب مع تك شبكية العين وبقايا الأسلاك البلاتين (الشكل 2). إذا مصفوفة جزءا لا يتجزأ / السكن ليس جزءا من تصميم جهاز قيد التحقيق، ثم حذف هذه الخطوة (2.2). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعنايةتشريح عينة تشمل تك والأنسجة المحيطة بها في الاتجاه المطلوب. استخدام مقص تشريح غرامة لقطع شرائح سمك كامل من الجزء الخلفي من العين، بما في ذلك الصلبة، المشيمية والشبكية. أخذ عينة، والذي يعطي المقطع العرضي الطولي للمعلمة، والتي تبين كل طبقات الشبكية المتاخمة للتك (الشكل 2) ملاحظة: قد تختلف الاتجاه المطلوب للعينة اعتمادا على نتيجة معينة المطلوب. على سبيل المثال، إذا كان أحد يرغب في دراسة القرب من الضرر تك إلى القرص البصري ثم ينبغي إدراج القرص البصري ضمن العينة. </li></ol> 3. الجفاف، التضمين، تركيب، طحن، وتلطيخ، والتصوير <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يذوى العينة على مدى ثلاثة أيام في مراحل الإيثانول التقدمية: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يذوى العينة في 70٪ من الإيثانول لمدة 2 ساعة مرتين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يذوى العينة في 80٪ من الإيثانول لمدة 2 ساعة مرتين ثم O / N. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يذوى العينة في 90٪ من الإيثانول لمدة 2 ساعة تويكه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يذوى العينة في الإيثانول بنسبة 100٪ لمدة 2 ساعة مرتين ثم O / N. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يذوى العينة في 100 الأسيتون٪ لمدة 2 ساعة مرتين. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة عينة من الأسيتون والالتزام به تحت المجهر الخفيفة لأنها-يجف الهواء في RT. نقل العينة إلى الايبوكسي (يرجى الرجوع إلى الخطوة 3.4) فقط قبل أن يبدأ حليقة / الانهيار. ملاحظة: إزالة السائل من نتائج الأنسجة الرخوة في الخلايا انهارت والانكماش. تم تطوير تقدير عند حدوث الشباك الأنسجة / انهيار ذوي الخبرة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحضير الصف الطبية راتنجات الايبوكسي وفقا لتوجيهات المصنع. لعلاج الراتنج، استخدام إما 55 درجة مئوية لمدة 1 ساعة أو 24 ساعة على RT. ضع في فراغ الغرفة ل~ 5 دقائق في ~ 50 م بار لإزالة فقاعات الهواء. تنظيم الفراغ يدويا كما فراغ المفرط سوف يتسبب في مزيج الايبوكسي ليغلي، وسوف التفريغ لا يحدث على نحو فعال ملاحظة: نفذ الخطوة 3.3 بالتزامن مع خطوة 3.2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تضمين عصيدةلو في راتنجات الايبوكسي واضح. تزج أنسجة العين في الايبوكسي نزع الغاز في وعاء قابل للغلق المناسبة وترك O / N في RT لعلاج. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحرص على تضمين العينة في الاتجاه المطلوب (الشكل 2) عن طريق تغيير حجم وإعادة تضمينها-كتلة الايبوكسي الشفاء. إعادة تضمين كتلة حجمها تحتوي على أنسجة العين مثل أن المحور الطويل للمعلمة وموجهة بالتوازي مع الجزء السفلي من القالب (كوب الصفراء - الشكل 3A). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جبل الراتنج في حامل العينة طحن وطحن العينة (230-250 دورة في الدقيقة مع الماء على، طحن اليدوي) باستخدام ورقة كربيد السيليكون (بدءا من 800 شبكة، أرقام 3C و3E). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتلطيخ، وتراجع سطح الأرض في بقعة زرقاء طولويدين عن 3-5 دقائق، أو حتى تتطور وصمة عار (الشكل 3F). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شطف مع ماء الصنبور (الشكل 3G). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> صورة سطح الأرض من العينة مع نطاق تشريح عالية الطاقة لتصور الطبقات الخلوية للشبكية العين (الشكل 3H). تطبيق قطرة من الماء المقطر على السطح العلوي للالايبوكسي فوق العينة لضمان سلاسة الحيود في واجهة الهواء الايبوكسي. استخدام الألياف &quot;معقوفة&quot; مصدر الضوء البصرية لإلقاء الضوء على العينة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> كرر الخطوات من 3،6-3،9، في كل مرة طحن بعيدا سمك محدد مسبقا من عينة (الحد الأدنى دقيقة وقابلة للتكرار الزيادة طحن صاحب العينة هو 20 ميكرون). </li></ol>

<ol>
	<li>Shepherd, R. K., Shivdasani, M. N., Nayagam, D. A., Williams, C. E., Blamey, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visual+prostheses+for+the+blind.">Visual prostheses for the blind.</a> Trends Biotechnol. 31, 562-571 (2013).</li><li>Santos, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preservation+of+the+inner+retina+in+retinitis+pigmentosa.">Preservation of the inner retina in retinitis pigmentosa.</a> Arch Ophthalmol. 115, 511-515 (1997).</li><li>Humayun, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visual+perception+in+a+blind+subject+with+a+chronic+microelectronic+retinal+prosthesis.">Visual perception in a blind subject with a chronic microelectronic retinal prosthesis.</a> Vision Res. 43, 2573-2581 (2003).</li><li>Roessler, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiographic+findings+folowing+tack+fixation+of+a+wireless+epiretinal+retina+implant+device+in+blind+RP+patients.">Angiographic findings folowing tack fixation of a wireless epiretinal retina implant device in blind RP patients.</a> Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 249, 1281-1286 (2011).</li><li>Chow, A. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+artificial+silicon+retina+microchip+for+the+treatment+of+vision+loss+from+retinitis+pigmentosa.">The artificial silicon retina microchip for the treatment of vision loss from retinitis pigmentosa.</a> Arch Ophthalmol. 122, 460-469 (2004).</li><li>Zrenner, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subretinal+electronic+chips+allow+blind+patients+to+read+letters+and+combine+them+to+words.">Subretinal electronic chips allow blind patients to read letters and combine them to words.</a> Proc Biol Sci. 278, 1489-1497 (2011).</li><li>Fujikado, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Testing+of+semichronically+implanted+retinal+prosthesis+by+suprachoroidal-transretinal+stimulation+in+patients+with+retinitis+pigmentosa.">Testing of semichronically implanted retinal prosthesis by suprachoroidal-transretinal stimulation in patients with retinitis pigmentosa.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 52, 4726-4733 (2011).</li><li>Saunders, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+surgical+procedure+for+implantation+of+a+prototype+suprachoroidal+retinal+prosthesis.">Development of a surgical procedure for implantation of a prototype suprachoroidal retinal prosthesis.</a> Clin Experiment Ophthalmol. , (2013).</li><li>Lee, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+microelectrode+arrays+for+artificial+retinal+implants+using+liquid+crystal+polymers.">Development of microelectrode arrays for artificial retinal implants using liquid crystal polymers.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 50, 5859-5866 (2009).</li><li>Sakaguchi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transretinal+electrical+stimulation+with+a+suprachoroidal+multichannel+electrode+in+rabbit+eyes.">Transretinal electrical stimulation with a suprachoroidal multichannel electrode in rabbit eyes.</a> Jpn J Ophthalmol. 48, 256-261 (2004).</li><li>Majji, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+histological+and+electrophysiological+results+of+an+inactive+epiretinal+electrode+array+implantation+in+dogs.">Long-term histological and electrophysiological results of an inactive epiretinal electrode array implantation in dogs.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 40, 2073-2081 (1999).</li><li>Walter, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+long-term+implantation+of+electrically+inactive+epiretinal+microelectrode+arrays+in+rabbits.">Successful long-term implantation of electrically inactive epiretinal microelectrode arrays in rabbits.</a> Retina. 19, 546-552 (1999).</li><li>Ray, A., Chan, L., Thomas, B., Weiland, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+prolonged+stimulation+at+the+electrode-retina+interface.">Effects of prolonged stimulation at the electrode-retina interface.</a> Conf Proc IEEE Eng Med Biol Soc. 1, 1285-1287 (2006).</li><li>Colodetti, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathology+of+damaging+electrical+stimulation+in+the+retina.">Pathology of damaging electrical stimulation in the retina.</a> Experimental eye research. 85, 23-33 (2007).</li><li>Nayagam, D. A. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+Electrical+Stimulation+with+a+Suprachoroidal+Retinal+Prosthesis:+A+Preclinical+Safety+and+Efficacy+Study.">Chronic Electrical Stimulation with a Suprachoroidal Retinal Prosthesis: A Preclinical Safety and Efficacy Study.</a> PLoS One. 9, e97182 (2014).</li><li>Nayagam, D. A. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Techniques+for+Processing+Eyes+Implanted+With+a+Retinal+Prosthesis+for+Localized+Histopathological+Analysis.">Techniques for Processing Eyes Implanted With a Retinal Prosthesis for Localized Histopathological Analysis.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , e50411 (2013).</li><li>Laube, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+surgical+techniques+for+implantation+of+a+wireless+intraocular+epiretinal+retina+implant+in+Gottingen+minipigs.">Development of surgical techniques for implantation of a wireless intraocular epiretinal retina implant in Gottingen minipigs.</a> Graefe's Archive For Clinical And Experimental Ophthalmology = Albrecht von Graefes Archiv fur klinische und experimentelle Ophthalmologie. 250, 51-59 (2012).</li><li>Gerding, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+long-term+evaluation+of+intraocular+titanium+tacks+for+the+mechanical+stabilization+of+posterior+segment+ocular+implants.">Successful long-term evaluation of intraocular titanium tacks for the mechanical stabilization of posterior segment ocular implants.</a> Mat.-wiss. u. Werkstofftech. 32, 903-912 (2001).</li><li>Seo, J. -. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silicon+retinal+tack+for+the+epiretinal+&#64257;xation+of+the+polyimide+electrode+array.">Silicon retinal tack for the epiretinal &#64257;xation of the polyimide electrode array.</a> Current Applied Physics. 6, 649-653 (2006).</li><li>Hadjinicolaou, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrical+stimulation+of+retinal+ganglion+cells+with+diamond+and+the+development+of+an+all+diamond+retinal+prosthesis.">Electrical stimulation of retinal ganglion cells with diamond and the development of an all diamond retinal prosthesis.</a> Biomaterials. 33, 5812-5820 (2012).</li><li>Briggs, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+round+window+and+cochleostomy+approaches+with+a+prototype+hearing+preservation+electrode.">Comparison of round window and cochleostomy approaches with a prototype hearing preservation electrode.</a> Audiol Neurootol. 11, 42-48 (2006).</li><li>Shepherd, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+cochlear+implant+electrode+array+for+use+in+experimental+studies.">An improved cochlear implant electrode array for use in experimental studies.</a> Hear Res. 277, 20-27 (2011).</li><li>Tykocinski, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+electrode+position+in+the+human+cochlea+using+various+perimodiolar+electrode+arrays.">Comparison of electrode position in the human cochlea using various perimodiolar electrode arrays.</a> Am J Otol. 21, 205-211 (2000).</li><li>Hardie, N. A., MacDonald, G., Rubel, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+method+for+imaging+and+3D+reconstruction+of+mammalian+cochlea+by+fluorescent+confocal+microscopy.">A new method for imaging and 3D reconstruction of mammalian cochlea by fluorescent confocal microscopy.</a> Brain Res. 1000, 200-210 (2004).</li></ol>

Authors have nothing to disclose. Irfan Durmo is an employee of Cochlear Ltd.

التقنيات القياسية النسيجية غير قادرة على معالجة يزرع المعادن الصلبة في الموقع نظرا للقيود في قطع هذه الكائنات مع المعادن والزجاج أو حتى ريش الماس. في ورقتنا الرفيق 16، أظهرنا أن استخدام كلها العين تقنية تثبيت تعديل يمكن أن تقلل التبطين الشبكية مصطنعة. في المخطوطة الحالية، وهي المنشأة طحن وتلميع تقنية لتصور زراعة قوقعة تم تعديل 21-23 في الموقع لأطراف اصطناعية في شبكية العين. وتك التيتانيوم، وتستخدم لتأمين مجموعة الكهربائي لشبكية العين، epiretinally، كان جزءا لا يتجزأ من الايبوكسي جنبا إلى جنب مع أنسجة العين المحيطة بها. ثم تم الموجهة هذه الكتلة الراتنج مناسب والأرض تدريجيا / مصقول من أجل الكشف عن التشكل الأنسجة متاخم لتك المعدنية. واتخذت صورة من سطح مصقول من كتلة على أعماق مختلفة مع المجهر تشريح قوية. هذه التقنية مفيدة لل: تصور وevaluatجي استجابة الأنسجة المجاورة للزرع فوق الشبكي. لتقييم الصدمة الجراحية المرتبطة زرع الزرع. لتحديد رد الفعل البيولوجي إلى المكونات المعدنية الصلبة. وقياس المسافة بين الزرع وسطح الشبكية. هذه التقنية سوف يكون مفيدا في دراسات السلامة المستقبلية لتصور الوضع الطبيعي في المنطقة المجاورة لنقطة معلمة في شبكية العين أو صلبة أخرى (على سبيل المثال، لامع) الكائنات في العين في. وهذا له التطبيق المباشر في تقييم السلامة قبل السريرية الأطراف الصناعية علق على شبكية العين epiretinally. قد يكون من المفيد لتقييم تلف الأنسجة في مناطق الشبكية في اتصال مع يزرع تقع في الموقع الفرعي في شبكية العين أيضا. هناك عدة طرق للتحقق من أن قد تم تنفيذ هذه التقنية بشكل صحيح. في كل مرحلة، وشبكية العين يجب أن تظل تعلق على الطبقات الخارجية للعين. إذا كان هناك الجسيمة انفصال الشبكية مصطنعة، وهذا قد الهنديةأكلت مشكلة مع تثبيت. عندما يتم جزءا لا يتجزأ من العينة وإعادة الموجه في الراتنج النهائي منع الشبكية يجب أن تكون قريبة من متعامد مع وجه طحن من كتلة. هذا سيقلل القطع المائل. ومن المفيد للتأكد من أن عدد من الخطوات الإضافية طحن (من المعروف حجم الخطوة) المطلوبة لاجتياز كائن (مثل تك في شبكية العين) وفقا لذلك ترتبط مع أبعاد الكائن. يمكن أن يكون الأمثل للتقنية في عدة طرق. يمكن الحد من الخدوش على سطح كتلة الايبوكسي المرتبطة بعملية طحن مع تدريجية تلميع الصف الدقيقة. لهذه الدراسة، استخدمنا 800، 1000، 1200، 2400، و 4000 ورقة كربيد السيليكون الصف. ويمكن أيضا أن تستخدم معجون الماس لتحسين الانتهاء من السطح. والانتهاء من السطح أدق يعطي صورة ذات جودة أعلى ولكن على حساب من الزمن تلميع إضافية. وهناك اعتبار آخر بالغ الأهمية لتحسين نتائج هذه التقنية هو الخيار ونوعية أوبتيخدمات العملاء والإضاءة تستخدم لالتقاط الصور. غيرها من البقع النسيجية الأساسية - وخاصة البقع نيسل، ويمكن استخدامها في مكان طولويدين الأزرق، ولكن قد تحتاج إلى مزيد من التحسين. وبعض البقع وصمة عار الراتنج وكذلك الأنسجة (على سبيل المثال، يوزين)، لذلك البولندية الضحلة قد تكون هناك حاجة بعد تلطيخ لإزالة تغيير اللون الخلفية. البقع المتخصصة، والأصباغ الفلورية وتلطيخ المناعى لم يحاول، ولكن ما لم يكن هو المطلوب نتيجة محددة جدا، والوقت اللازم لتنفيذ هذه البقع في كل مستوى طحن من المرجح أن تكون باهظة. ومع ذلك، قد يكون من الممكن وصمة عار على الأنسجة ككل قبل الخطوة تضمينها (الخطوة 3.4) 24. القيد الرئيسي لهذا الأسلوب هو أنه بمجرد ارضيه المنطقة ذات الاهتمام بعيدا، فإنه لا يمكن استرجاع، وبالتالي، فإنه من الحكمة للقبض على العديد من (ربما زائدة عن الحاجة) الصور في مجموعة متنوعة من تكبير في كل مرحلة من طحن وتلميع. ومنأيضا من المهم أن تستخدم زيادات صغيرة لكل تعديل عمق طحن. الحد آخر من هذه التقنية هو أن من التكبير البصري وحل مقارنة مع الأنسجة التي شنت على شريحة زجاجية وعرضها مع معيار (انتقال) المجهر الضوئي. لأغراض النماذج وتقييم سلامة جهاز زرع الرواية، وتقييم المرضية الإجمالي هو من مصلحة الأولية. توفر هذه التقنية وسيلة فعالة لرصد الأضرار ذات الصلة سريريا المرتبطة تك في شبكية العين. مع الممارسة، والوقت الكلي المطلوب لجمع طحن، وتلميع وتصوير عينة معينة (مرة واحدة جزءا لا يتجزأ) مشابه للوقت الذي سيستغرقه القسم كتلة البارافين أو القسم المجمدة. وهناك أيضا إمكانية لتقنيات الحالية إلى أن تمتد إلى التطبيقات خارج نطاق زراعة شبكية العين. يناسب هذه التقنية لتقييم الأنسجة المجاورة لزرع الصلب، حيث استخراج زرع ليس feasibسوف جنيه أو تلف الواجهة. على سبيل المثال، هذه التقنية يمكن توسيعها لتقييم يزرع مصنوعة من المعدن (على سبيل المثال، البلاتين، الننتول، الخ) التي لا يمكن قطع مع التقنيات النسيجية التقليدية، مثل بعض الدماغ العميق أو أقطاب الأعصاب الطرفية، حقنة عادية لتسليم المخدرات، الدعامات الأوعية الدموية أو الاصطناعية العظام.

التهاب الشبكية الصباغي (RP) هو اضطراب وراثي يسبب فقدان واسعة النطاق من المستقبلات الضوئية، وهي الخلايا في الطبقة الخارجية للشبكية المسؤولة عن transducing الضوء، في شكل فوتونات، في النشاط العصبي. الأهم من ذلك، المرضى الذين يعانون من RP وعادة ما يكون الخلايا العصبية المتبقية في طبقات أخرى من الشبكية الخاصة بهم والتي لا تزال وظيفية. الاصطناعية الشبكية قادرة على استعادة بعض الرؤية المحدودة لهؤلاء المرضى من خلال استهداف هذه الخلايا العصبية على قيد الحياة مع التحفيز الكهربائي لتنشيط لهم طريقا 1،2 البصري. نتائج الإدراك الحسي من التجارب السريرية قد أظهرت نتائج واعدة في وقت مبكر، ومؤخرا وقد تمت الموافقة على بعض الأجهزة للاستخدام التجاري. حاليا، هناك ثلاثة مواقع رئيسية التشريحية التي تم فيها وضع الاصطناعية الشبكية السريرية: epiretinally 3،4، 5،6 subretinally وsuprachoroidally 7،8. أجهزة مختلفة تستخدم مواد مختلفة وتخصيصها شكلهاإلى الموقع الذي يتم فيه زرع فيها. ومع ذلك، وأنهم جميعا خلق التعاليم البصرية من خلال تفعيل الخلايا العصبية المتبقية من شبكية العين مع النبضات الكهربائية. هناك احتمال لأي بدلة طبي لتلف الأنسجة المحيطة بسبب الآثار الميكانيكية للوضع الأولي أو قوات الجارية لاحقة. في حالة التحفيز والتشجيع التي تزرع في الجسم، مثل الأطراف الاصطناعية في شبكية العين، وهناك اعتبار آخر ينبغي أن يكون المعلمات الكهربائية ضمن حدود آمنة. سلامة المرضى أمر بالغ الأهمية، لذلك يجب أن تكون الأجهزة اختبارات صارمة في الدراسات قبل السريرية قبل التقدم إلى وضع السريرية 9-15. في المادة مصاحب لدينا، وصفنا طريقة لتقييم التشريح المرضي المترجمة من العين المحيطة زرع المتمركزة في الفضاء suprachoroidal 16. في هذا المخطوط، وصفنا تقنية لتصور الأنسجة المحيطة بالعين مجموعة القطب علق على شبكية العين epiretinally، في ما قبل السريرية (FEالخط) نموذج (الشكل 1). الموقع فوق الشبكي هو الموقف الأكثر استخداما عادة لتحديد مكان بدلة البصرية. وعادة ما تلصق صفائف الكهربائي تقع هنا لشبكية العين مع تك المعدنية التي تخترق جميع طبقات العين 17-20. قبل الأساليب المذكورة في المخطوطة الحالية، كان من الصعب إجراء تقييم دقيق لشبكية العين والأنسجة الأخرى المحيطة بها على الفور تك. أدى تثبيت العين قياسي باستخدام الفورمالين محايدة مخزنة في الضرر الشبكية مصطنعة بسبب الحركة التفاضلية للشبكية العين والصلبة ضد نقطة ثابتة من نقطة معلمة. لذلك أي ضرر الفعلي الناجم عن معلمة ومجموعة فوق الشبكي لا يمكن مراعاته بدقة. وبالإضافة إلى ذلك، باجتزاء الأنسجة العين لا يمكن أن يؤديها مع تك الشبكية في الموقع كما أجسام معدنية لا يمكن أن تقطع بسهولة مع جهاز النسيجي التقليدي؛ إزالة تك قبل أن معالجة النسيجي أيضاغير مرغوب فيه لأن هذا أدى أيضا إلى تلف شبكية العين مصطنعة. وكان الهدف من هذه الدراسة ذات شقين: 1) للحد من انفصال الشبكية الحرفية بحيث أن أي الأضرار الناجمة عن تك ومجموعة زرع فوق الشبكي يمكن تقييم موثوقة. و2) لتصور بنية شبكية العين المجاورة لنقطة معلمة دون إزالته. من أجل تحقيق الهدف 1، وقد استخدمت تقنية التثبيت الجديدة (كما هو موضح في المادة رفيق 16)، مما يقلل من التبطين الشبكية مصطنعة. من أجل تحقيق الهدف 2، وتعديل والتضمين، وطحن، وتلميع التقنية، وضعت أصلا لمراقبة الموقع من الأقطاب الكهربائية زرع قوقعة 21-23 في. الطرق الموضحة في هذه المخطوطة تسمح التصور من شبكية العين المحيطة والمجاورة لنقطة معلمة في الموقع مع تقليل الضرر الشبكية مصطنعة وبالتالي السماح للتقييم دقيق من أي ضرر محتمل قد يسببها تك ومجموعة فوق الشبكي.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="853">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:337px;">Name of the reagent / equipment</td>
			<td style="width:191px;">Company</td>
			<td style="width:176px;">Catalogue number</td>
			<td style="width:151px;">Comments (optional)</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:337px;">Acetone</td>
			<td style="width:191px;">Chem-Supply</td>
			<td style="width:176px;">AA008</td>
			<td style="width:151px;">Propanone BHD Medical grade</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:337px;">Epo-Tek 301 Epoxy</td>
			<td style="width:191px;">Epoxy Technology</td>
			<td style="width:176px;">Part A 1675-54-3 Part B 9046-10-0</td>
			<td style="width:151px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:337px;">Ethanol 70-75% v/v</td>
			<td style="width:191px;">Merck PTY LTD</td>
			<td style="width:176px;">4.10261</td>
			<td style="width:151px;">Alcohol</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:337px;">Ethanol</td>
			<td style="width:191px;">Merck PTY LTD</td>
			<td style="width:176px;">90143</td>
			<td style="width:151px;">Alcohol</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:337px;">Toluidine blue O</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:176px;">T3260</td>
			<td style="width:151px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:337px;">Ethylenediamine Tetraacetic Acid</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:176px;"></td>
			<td style="width:151px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">TegraPol grinding/polishing machine</td>
			<td>Struers</td>
			<td>TegraPol-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:337px;">AccuStop specimen holder</td>
			<td style="width:191px;">Struers</td>
			<td style="width:176px;">Accustop</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Light microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>MZ16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Objective lens</td>
			<td>Leica</td>
			<td>2.0x Planapo Objective</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Digital Microscope Camera</td>
			<td>Leica</td>
			<td>DFC-420C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microscope Software</td>
			<td>Leica&#160;</td>
			<td>Application Suite v4.1.0</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

techniques for processing eyes implanted with a retinal prosthesis for localized histopathological analysis: part 2 epiretinal implants with retinal tacks

Retinal prostheses for the treatment of certain forms of blindness are gaining traction in clinical trials around the world with commercial devices currently entering the market. In order to evaluate the safety of these devices, in preclinical studies, reliable techniques are needed. However, the hard metal components utilised in some retinal implants are not compatible with traditional histological processes, particularly in consideration for the delicate nature of the surrounding tissue. Here we describe techniques for assessing the health of the eye directly adjacent to a retinal implant secured epiretinally with a metal tack.
Retinal prostheses feature electrode arrays in contact with eye tissue. The most commonly used location for implantation is the epiretinal location (posterior chamber of the eye), where the implant is secured to the retina with a metal tack that penetrates all the layers of the eye. Previous methods have not been able to assess the proximal ocular tissue with the tack in situ, due to the inability of traditional histological techniques to cut metal objects. Consequently, it has been difficult to assess localized damage, if present, caused by tack insertion.
Therefore, we developed a technique for visualizing the tissue around a retinal tack and implant. We have modified an established technique, used for processing and visualizing hard bony tissue around a cochlear implant, for the soft delicate tissues of the eye. We orientated and embedded the fixed eye tissue, including the implant and retinal tack, in epoxy resin, to stabilise and protect the structure of the sample. Embedded samples were then ground, polished, stained, and imaged under various magnifications at incremental depths through the sample. This technique allowed the reliable assessment of eye tissue integrity and cytoarchitecture adjacent to the metal tack.

بروتوكول تثبيت انخفاض كبير مفرزة مصطنعة والتبطين للشبكية 16. وقد تحقق التوجه للعينة داخل كتلة الايبوكسي باستمرار باستخدام صفه من خطوتين عملية التضمين. يتطلب الإجراء طحن تدريجي على مستوى معتدل من البراعة اليدوية لتحقيق أفضل النتائج، ولكن تم ساعد من قبل صاحب العينة قابل للتعديل التي وفرت دفع غرامة السيطرة على القرار زيادة. في جميع الحالات (ن = 5) كانت تقع في نقطة معلمة والأرض / مصقول مع النتائج المرجوة ومتسقة. وكانت الشبكية المتاخمة للالمسامير للحل وملطخة بشكل مناسب. تلميع سطح الايبوكسي كتلة راتنج مع الصف P # 800 ورقة كربيد السيليكون كان كافيا لصورة البنية الكلية الخلوي للأنسجة المضمنة. أعلى ورقة الصف، أو الماس الطين يمكن أن تستخدم لزيادة تلميع السطح في أي عمق معين عند الرغبة في ذلك. مجهر التشريح والألياف البصرية &quot;معقوفة&quot; من lighتم العثور على طن مصدر لتكون مناسبة لتصوير سطح كتلة الأرض وعينة الأنسجة المضمنة. وقد تنوعت الموقف من مصدر الضوء عن طريق التجربة والخطأ للعثور على مكان وزاوية التي أعطت أفضل إضاءة والتباين من خلال المجهر. إضافة قطرة من الماء المقطر على سطح الكتلة، فوق العينة، كانت مفيدة للحد من حيود مسار الضوء و / أو تشوهات السلس في واجهة الهواء الايبوكسي. ويبين الشكل 4 مثل الصور من أنسجة الشبكية تصور المتاخمة مباشرة إلى شبكية العين التيتانيوم تك باستخدام هذه التقنية. يمكن أن ينظر إليه انفصال الشبكية غير مصطنعة وقابلة للطي على جانبي السيليكون (الشكل 4A). رمح تك مرئيا جزءا لا يتجزأ من السيليكون. رئيس تك قد توغلت شبكية العين والصلبة. هناك انفصال الشبكية غير مصطنعة في شبكية العين غير ملوثين جانبي سيليكون (الشكل 4C). وقد أظهرت هذه التقنية، في هذا المثال، ذرالبريد هو الفوضى في شبكية العين المجاور لنقطة معلمة وضغط من شبكية العين في جانب واحد بسبب زاوية الإدراج منحرف. لاحظ أن الصور المعروضة هي مجرد أمثلة على نجاح هذه التقنية، وليس ممثل تك-الضرر التشريح المرضي بشكل عام. <img alt="الشكل (1)" src="/files/ftp_upload/52348/52348fig1highres.jpg" /> الشكل 1. الموضع من مجموعة القطب فوق الشبكي. (A) رسم تخطيطي للعين تظهر تضخيم المقطع العرضي للالخلفي الصلبة، المشيمية والشبكية المنحطة (التي تفتقر إلى خلايا مستقبلة للضوء). ويصور مجموعة القطب باللون الأزرق، الملصقة epiretinally. (B) بمساعدة الحاسوب الرسم من مجموعة القطب فوق الشبكي. لذلك، الدارات المتكاملة (&quot;رقاقة&quot;) وحزمة الكهربائي. ب، والتيتانيوم تك في شبكية العين. ج، الطبية الصف سيليكون الإسكان؛ د، نقطة الخروج الرصاص. لوحة والمعدلة من illustrati الأصليةعلى ما تقدم من باب المجاملة بيونيك الرؤية أستراليا وحقوق المؤلف بيت كروتش. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52348/52348fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الشكل 2" src="/files/ftp_upload/52348/52348fig2highres.jpg" /> الشكل 2. إزالة الكهربائي وتشريح العين. صورا الكلية مجموعة ديناميكية عالية من العين القطط منزوعة النواة مع تك فوق الشبكي في الموقع. (A) المشاركة التثبيت مع تثبيتي ديفيدسون للحفاظ على بنية شبكية العين 16، تم تشريح العين منزوعة النواة. تم إزالة حزمة مجموعة الكهربائي من الناقل سيليكون (متقطع مخطط مربع ويشير الموقع الأصلي من مجموعة الكهربائي) مع تك (السهم) والجسم سيليكون للزرع المتبقية. (B) تم تشريح العين مع المقطع العرضي الطولي المجاور ل مسمار(خط متقطع). تك لا تزال جزءا لا يتجزأ في الجدار الخلفي من فنجان العين (السهم)، استقرت في الغالب من قبل الصلبة. وقد أعد قسم الأنسجة التي تحتوي على معلمة لتضمين الراتنج وطحن (قطاع الأيمن)، في حين تم إعداد المقطع الذي يحتوي على شبكية العين تحت مجموعة الكهربائي إزالتها لمعالجة النسيجي معيار 16 (قطاع الأيسر). ويرد الحاكم مع الزيادات 0.5 ملم على الحافة السفلية من كل لوحة. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52348/52348fig2large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الشكل (3)" src="/files/ftp_upload/52348/52348fig3highres.jpg" /> الشكل 3. الغرز الايبوكسي وطحن تك والأنسجة الشبكية. صور للالايبوكسي جزءا لا يتجزأ من وعينة الأنسجة الانحياز، والطحن، وتلطيخ والتصوير من نقطة معلمة والأنسجة الشبكية. (A) ومعاهدة الصداقة والتعاون<html> كان جزءا لا يتجزأ ك عينة في كتلة راتنجات الايبوكسي. باستخدام القالب، كانت موجهة العينة بحيث الطائرة طولية موازية لأسفل القالب. (ب) كتلة الايبوكسي الشفاء تحتوي على عينة تك. (C) وجاءت كتلة الايبوكسي في حامل العينة طحن، وعلى استعداد لطحن (D) والموجه العينة أقسام المصورة جدا من الأنسجة الأرض تحتوي على طبقات الشبكية الخلوية والمحور الطولي للمعلمة. (E) وكانت عينة الأرض باستخدام ورقة كربيد السيليكون على طاحونة دوارة. (F) على سطح الأرض من كانت ملطخة كتلة مع الأزرق طولويدين لتحديد طبقات الشبكية. وتشطف (G) وكتلة فى ماء الصنبور لإزالة وصمة عار الزائدة. (H) وطولويدين تم تصوير طبقات الشبكية الملون الزرقاء وتك باستخدام رفيع المستوى نطاق تشريح. إعلان / 52348 / 52348fig4highres.jpg &quot;/&gt; واتخذت الشكل 4. الصور قوة عالية ومنخفضة من نقطة معلمة وشبكية العين. في نقاط مختلفة أثناء عملية الطحن الصور مع نطاق تشريح، والتي تبين المقاطع الطولية من تك (النجمة) اختراق من خلال العين والخروج الصلبة (&#39;S&#39; )، المجاورة سيليكون (التجزئة) وطولويدين الأزرق الملون وغير ملوثين شبكية العين (&#39;R&#39;). ملاحظة هذه هي سبيل المثال الصور فقط للتدليل على تقنية التصور الحالية، وليست ممثلة لجميع الزرع أو تك النتائج الإدراج الأنسجة فوق الشبكي. بقايا الأرضي من الأسلاك البلاتين واضحة في لوحات AD (&#39;W&#39;). (A) منخفضة الطاقة، صورة غير ملوثين من تك اختراق شبكية العين والصلبة. (B) صورة بالطاقة عالية من انفصال الشبكية وقابلة للطي في شبكية العين غير ملوثين المجاورة إلى الناقل سيليكون في صورة A. (C) منخفضة صورة السلطة في مركز رمح تك. <strاونج&gt; (D) صورة عالية قوة وسط تك في صورة C. (E) في عينة منفصلة، ​​مع عدم وجود الناقل السيليكون، ويظهر صورة بالطاقة عالية من طولويدين الزرقاء الشبكية الملون تحت مقبض تك، وعلى الفور قبل طحن رمح تك (F) طولويدين عادي الزرقاء الهندسة المعمارية الشبكية الملون (GCL: الشبكية طبقة الخلايا العقدية، INL: الطبقة النووية الداخلية، ONL: الطبقة النووية الخارجي؛ PR: خلايا مستقبلة للضوء، T: القطط البساط الشفاف). تصور باستخدام تقنية طحن نفس . الحانات النطاق في كل لوحة هي: A و C = 2 مم؛ B و D = 500 ميكرون. E = 200 ميكرون. F = 100 ميكرون.

Watch this Scientific Journal Video about Techniques for Processing Eyes Implanted with a Retinal Prosthesis for Localized Histopathological Analysis: Part 2 Epiretinal Implants with Retinal Tacks at 

Techniques for Processing Eyes Implanted with a Retinal Prosthesis for Localized Histopathological Analysis: Part 2 Epiretinal Implants with Retinal Tacks

Here we describe histological techniques for visualising ocular tissue directly adjacent to a metal epiretinal tack and retinal prosthesis.

تقنيات لمعالجة عيون مزروع مع الشبكية الأطراف الاصطناعية للالمترجمة تحليل المرضية: الجزء 2 فوق الشبكي يزرع مع الشبكية المسامير

Retinal prostheses for the treatment of certain forms of blindness are gaining traction in clinical trials around the world with commercial devices ...

techniques-for-processing-eyes-implanted-with-retinal-prosthesis-for

Research

JoVE Journal

Medicine

11.4K Views.  Bionics Institute. Here we describe histological techniques for visualising ocular tissue directly adjacent to a metal epiretinal tack and retinal prosthesis. 

Video: Techniques for Processing Eyes Implanted with a Retinal Prosthesis for Localized Histopathological Analysis: Part 2 Epiretinal Implants with Retinal Tacks

Techniques for Processing Eyes Implanted With a Retinal Prosthesis for Localized Histopathological Analysis

With the recent development of retinal prostheses, it is important to develop reliable techniques for assessing the safety of these devices in preclinical studies. However, the standard fixation, preparation, and automated histology procedures are not ideal. Here we describe new procedures for evaluating the health of the retina directly adjacent to an implant. Retinal prostheses feature electrode arrays in contact with eye tissue. Previous methods have not been able to spatially localize the ocular tissue adjacent to individual electrodes within the array. In addition, standard histological processing often results in gross artifactual detachment of the retinal layers when assessing implanted eyes. Consequently, it has been difficult to assess localized damage, if present, caused by implantation and stimulation of an implanted electrode array. Therefore, we developed a method for identifying and localizing the ocular tissue adjacent to implanted electrodes using a (color-coded) dye marking scheme, and we modified an eye fixation technique to minimize artifactual retinal detachment. This method also rendered the sclera translucent, enabling localization of individual electrodes and specific parts of an implant. Finally, we used a matched control to increase the power of the histopathological assessments. In summary, this method enables reliable and efficient discrimination and assessment of the retinal cytoarchitecture in an implanted eye.

Techniques for visualizing retinal cytoarchitecture directly adjacent to individual electrodes within a retinal stimulator.

تقنيات لمعالجة العيون تزرع لهم تعويضات الشبكية لتحليل المرضية المترجمة

With  the recent development of retinal prostheses, it is important to develop  reliable techniques for assessing the safety of these devices in ...

Quantitative Fundus Autofluorescence for the Evaluation of Retinal Diseases

The retinal pigment epithelium (RPE) is juxtaposed to the overlying sensory retina, and supports the function of the visual system. Among the tasks performed by the RPE are phagocytosis and processing of outer photoreceptor segments through lysosome-derived organelles. These degradation products, stored and referred to as lipofuscin granules, are composed partially of bisretinoids, which have broad fluorescence absorption and emission spectra that can be detected clinically as fundus autofluorescence with confocal scanning laser ophthalmoscopy (cSLO). Lipofuscin accumulation is associated with increasing age, but is also found in various patterns in both acquired and inherited degenerative diseases of the retina. Thus, studying its pattern of accumulation and correlating such patterns with changes in the overlying sensory retina are essential to understanding the pathophysiology and progression of retinal disease. Here, we describe a technique employed by our lab and others that uses cSLO in order to quantify the level of RPE lipofuscin in both healthy and diseased eyes.

The retinal pigment epithelium (RPE) supports the sensory retina through recycling visual cycle byproducts, which accumulate as lipofuscin. These products are autofluorescent and can be qualitatively imaged in vivo. Here, we describe a method to quantitatively image RPE lipofuscin using confocal scanning laser ophthalmoscopy.

الكمية قاع العين تألق ذاتي لتقييم أمراض الشبكية

The retinal pigment epithelium (RPE) is juxtaposed to the overlying sensory retina, and supports the function of the visual system. Among the tasks ...

A Step by Step Protocol for Subretinal Surgery in Rabbits

Age related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa, and other RPE related diseases are the most common causes for irreversible loss of vision in adults in industrially developed countries. RPE transplantation appears to be a promising therapy, as it may replace dysfunctional RPE, restore its function, and thereby vision.
Here we describe a method for transplanting a cultured RPE monolayer on a scaffold into the subretinal space (SRS) of rabbits. After vitrectomy xenotransplants were delivered into the SRS using a custom made shooter consisting of a 20-gauge metallic nozzle with a polytetrafluoroethylene (PTFE) coated plunger. The current technique evolved in over 150 rabbit surgeries over 6 years. Post-operative follow-up can be obtained using non-invasive and repetitive in vivo imaging such as spectral domain optical coherence tomography (SD-OCT) followed by perfusion-fixed histology.
The method has well-defined steps for easy learning and high success rate. Rabbits are considered a large eye animal model useful in preclinical studies for clinical translation. In this context rabbits are a cost-efficient and perhaps convenient alternative to other large eye animal models.

Retinal pigment epithelium (RPE) replacement strategies and gene-based therapy are considered for several retinal degenerative conditions. For clinical translation, large eye animal models are required to study surgical techniques applicable in patients. Here we present a rabbit model for subretinal surgery geared towards RPE transplantation, which is versatile and cost-efficient.

خطوة بالبروتوكول الخطوة لجراحة تحت الشبكية في الأرانب

Age related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa, and other RPE related diseases are the most common causes for irreversible loss of vision in ...

An Acute Retinal Model for Evaluating Blood Retinal Barrier Breach and Potential Drugs for Treatment

A low-cost, easy-to-use and powerful model system is established to evaluate potential treatments that could ameliorate blood retinal barrier breach. An inflammatory factor, histamine, is demonstrated to compromise vessel integrity in the cultured retina through positive staining of IgG outside of the blood vessels. The effects of histamine itself and those of candidate drugs for potential treatments, such as lipoxin A4, are assessed using three parameters: blood vessel leakage via IgG immunostaining, activation of M&#252;ller cells via GFAP staining and change in neuronal dendrites through staining for MAP2. Furthermore, the layered organization of the retina allows a detailed analysis of the processes of M&#252;ller and ganglion cells, such as changes in width and continuity. While the data presented is with swine retinal culture, the system is applicable to multiple species. Thus, the model provides a reliable tool to investigate the early effects of compromised retinal vessel integrity on different cell types and also to evaluate potential drug candidates for treatment.

A low-cost, easy-to-use and powerful system is established to evaluate potential treatments that could ameliorate blood retinal barrier breach induced by histamine. Blood vessel leakage, M&#252;ller cell activation and the continuity of neuronal processes are utilized to assess the damage response and its reversal with a potential drug, lipoxin A4.

نموذج الحاد الشبكية لتقييم الدم الشبكية الحاجز خرق والمحتملة أدوية لعلاج

A low-cost, easy-to-use and powerful model system is established to evaluate potential treatments that could ameliorate blood retinal barrier breach. An ...

Studying Diabetes Through the Eyes of a Fish: Microdissection, Visualization, and Analysis of the Adult tg(fli:EGFP) Zebrafish Retinal Vasculature

Diabetic retinopathy is the leading cause of blindness among middle-aged adults. The rising prevalence of diabetes worldwide will make the prevention of diabetic microvascular complications one of the key research fields of the next decades. Specialized, targeted therapy and novel therapeutic drugs are needed to manage the increasing number of patients at risk of vision-loss. The zebrafish is an established animal model for developmental research questions with increasing relevance for modeling metabolic multifactorial disease processes. The advantages of the species allow for optimal visualization and high throughput drug screening approaches, combined with the strong ability to knock out genes of interest. Here, we describe a protocol which will allow easy analysis of the adult tg(fli:EGFP) zebrafish retinal vasculature as a fast read-out in settings of long-term vascular pathologies linked to neoangiogenesis or vessel damage. This is achieved via dissection of the zebrafish retina and whole-mounting of the tissue. Visualization of the exposed vessels is then achieved via confocal microscopy of the green EGFP reporter expressed in the adult retinal vasculature. Correct handling of the tissue will lead to better outcomes and less internal vessel breakage to assure the visualization of the unaltered vascular structure. The method can be utilized in zebrafish models of retinal vasculopathy linked to changes in the vessel architecture as well as neoangiogenesis.

Studying Diabetes Through the Eyes of a Fish: Microdissection, Visualization, and Analysis of the Adult tgfli:EGFP Zebrafish Retinal Vasculature

Here, we discuss a method protocol which will allow an easy analysis of the adult tg(fli:EGFP) zebrafish retinal vasculature as a fast read-out in settings of long-term vascular pathologies linked to neoangiogenesis and structural changes.

دراسة "مرض السكر من خلال عيون" من الأسماك: ميكروديسيكتيون، والتصور، وتحليل tg(fli:EGFP) الكبار "الزرد الشبكية المفرج"

Diabetic retinopathy is the leading cause of blindness among middle-aged adults. The rising prevalence of diabetes worldwide will make the prevention of ...

Biotribological Testing and Analysis of Articular Cartilage Sliding against Metal for Implants

Osteochondral defects in middle-aged patients might be treated with focal metallic implants. First developed for defects in the knee joint, implants are now available for the shoulder, hip, ankle and the first metatarsalphalangeal joint. While providing pain reduction and clinical improvement, progressive degenerative changes of the opposing cartilage are observed in many patients. The mechanisms leading to this damage are not fully understood. This protocol describes a tribological experiment to simulate a metal-on-cartilage pairing and comprehensive analysis of the articular cartilage. Metal implant material is tested against bovine osteochondral cylinders as a model for human articular cartilage. By applying different loads and sliding speeds, physiological loading conditions can be imitated. To provide a comprehensive analysis of the effects on the articular cartilage, histology, metabolic activity and gene expression analysis are described in this protocol. The main advantage of tribological testing is that loading parameters can be adjusted freely to simulate in vivo conditions. Furthermore, different testing solutions might be used to investigate the influence of lubrication or pro-inflammatory agents. By using gene expression analysis for cartilage-specific genes and catabolic genes, early changes in the metabolism of articular chondrocytes in response to mechanical loading might be detected.

This protocol describes the preparation, biotribological testing, and analysis of osteochondral cylinders sliding against metal implant material. Outcome measures included in this protocol are metabolic activity, gene expression and histology.

اختبار وتحليل الغضاريف المفصلية ضد المعادن للزرع

Osteochondral defects in middle-aged patients might be treated with focal metallic implants. First developed for defects in the knee joint, implants are ...

Oxygen-Induced Retinopathy Model for Ischemic Retinal Diseases in Rodents

One of the commonly used models for ischemic retinopathies is the oxygen-induced retinopathy (OIR) model. Here we describe detailed protocols for the OIR model induction and its readouts in both mice and rats. Retinal neovascularization is induced in OIR by exposing rodent pups either to hyperoxia (mice) or alternating levels of hyperoxia and hypoxia (rats). The primary readouts of these models are the size of neovascular (NV) and avascular (AVA) areas in the retina. This preclinical in vivo model can be used to evaluate the efficacy of potential anti-angiogenic drugs or to address the role of specific genes in the retinal angiogenesis by using genetically manipulated animals. The model has some strain and vendor specific variation in the OIR induction which should be taken into consideration when designing the experiments.

Oxygen-induced retinopathy (OIR) can be used to model ischemic retinal diseases such as retinopathy of prematurity and proliferative diabetic retinopathy and to serve as a model for proof-of-concept studies in evaluating antiangiogenic drugs for neovascular diseases. OIR induces robust and reproducible neovascularization in the retina that can be quantified.

الأكسجين الناجم عن نموذج اعتلال الشبكية لأمراض الشبكية الإقفاري في القوارض

One of the commonly used models for ischemic retinopathies is the oxygen-induced retinopathy (OIR) model. Here we describe detailed protocols for the OIR ...

Induction and Analysis of Oxidative Stress in Sleeping Beauty Transposon-Transfected Human Retinal Pigment Epithelial Cells

Oxidative stress plays a critical role in several degenerative diseases, including age-related macular degeneration (AMD), a pathology that affects ~30 million patients worldwide. It leads to a decrease in retinal pigment epithelium (RPE)-synthesized neuroprotective factors, e.g., pigment epithelium-derived factor (PEDF) and granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF), followed by the loss of RPE cells, and eventually photoreceptor and retinal ganglion cell (RGC) death. We hypothesize that the reconstitution of the neuroprotective and neurogenic retinal environment by the subretinal transplantation of transfected RPE cells overexpressing PEDF and GM-CSF has the potential to prevent retinal degeneration by mitigating the effects of oxidative stress, inhibiting inflammation, and supporting cell survival. Using the Sleeping Beauty transposon system (SB100X) human RPE cells have been transfected with the PEDF and GM-CSF genes and shown stable gene integration, long-term gene expression, and protein secretion using qPCR, western blot, ELISA, and immunofluorescence. To confirm the functionality and the potency of the PEDF and GM-CSF secreted by the transfected RPE cells, we have developed an in vitro assay to quantify the reduction of H2O2-induced oxidative stress on RPE cells in culture. Cell protection was evaluated by analyzing cell morphology, density, intracellular level of glutathione, UCP2 gene expression, and cell viability. Both, transfected RPE cells overexpressing PEDF and/or GM-CSF and cells non-transfected but pretreated with PEDF and/or GM-CSF (commercially available or purified from transfected cells) showed significant antioxidant cell protection compared to non-treated controls. The present H2O2-model is a simple and effective approach to evaluate the antioxidant effect of factors that may be effective to treat AMD or similar neurodegenerative diseases.

Induction and Analysis of Oxidative Stress in Sleeping Beauty Transposon-Transfected Human Retinal Pigment Epithelial Cells

We present a protocol for the development and use ofan oxidative stress-model by treating retinal pigment epithelial cells with H2O2, analyzing cell morphology, viability, density, glutathione, and UCP-2 level. It is a useful model to investigate the antioxidant effect of proteins secreted by transposon-transfected cells to treat neuroretinal degeneration.

تحريض وتحليل الإجهاد التأكسدي في الجمال النائم Transposon-Transfected الخلايا الظهارية صبغة الشبكية البشرية

Oxidative stress plays a critical role in several degenerative diseases, including age-related macular degeneration (AMD), a pathology that affects ~30 ...

Retinal Organoid Induction System for Derivation of 3D Retinal Tissues from Human Pluripotent Stem Cells

Retinal degenerative diseases are the main causes of irreversible blindness without effective treatment. Pluripotent stem cells that have the potential to differentiate into all types of retinal cells, even mini-retinal tissues, hold huge promises for patients with these diseases and many opportunities in disease modeling and drug screening. However, the induction process from hPSCs to retinal cells is complicated and time-consuming. Here, we describe an optimized retinal induction protocol to generate retinal tissues with high reproducibility and efficiency, suitable for various human pluripotent stem cells. This protocol is performed without the addition of retinoic acid, which benefits the enrichment of cone photoreceptors. The advantage of this protocol is the quantification of EB size and plating density to significantly enhance the efficiency and repeatability of retinal induction. With this method, all major retinal cells sequentially appear and recapitulate the main steps of retinal development. It will facilitate downstream applications, such as disease modeling and cell therapy.

Here we describe an optimized retinal organoid induction system, which is suitable for various human pluripotent stem cell lines to generate retinal tissues with high reproducibility and efficiency.

نظام تحريض الشبكية Organoid لاستخلاص أنسجة الشبكية ثلاثية الأبعاد من الخلايا الجذعية البشرية متعددة القدرات

Retinal degenerative diseases are the main causes of irreversible blindness without effective treatment. Pluripotent stem cells that have the potential to ...

Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases

Retinal pigment epithelial (RPE) transplantation holds great promise for the treatment of inherited and acquired retinal degenerative diseases. These conditions include retinitis pigmentosa (RP) and advanced forms of age-related macular degeneration (AMD), such as geographic atrophy (GA). Together, these disorders represent a significant proportion of currently untreatable blindness globally. These unmet medical needs have generated heightened academic interest in developing methods of RPE replacement. Among the animal models commonly utilized for preclinical testing of therapeutics, the non-human primate (NHP) is the only animal model that has a macula. As it shares this anatomical similarity with the human eye, the NHP eye is an important and appropriate preclinical animal model for the development of advanced therapy medicinal products (ATMPs) such as RPE cell therapy.
This manuscript describes a method for the submacular transplantation of an RPE monolayer, cultured on a polyethylene terephthalate (PET) cell carrier, underneath the macula onto a surgically created RPE wound in immunosuppressed NHPs. The fovea-the central avascular portion of the macula-is the site of the greatest mechanical weakness during the transplantation. Foveal trauma will occur if the initial subretinal fluid injection generates an excessive force on the retina. Hence, slow injection under perfluorocarbon liquid (PFCL) vitreous tamponade is recommended with a dual-bore subretinal injection cannula at low intraocular pressure (IOP) settings to create a retinal bleb. 
Pretreatment with an intravitreal plasminogen injection to release parafoveal RPE-photoreceptor adhesions is also advised. These combined strategies can reduce the likelihood of foveal tears when compared to conventional techniques. The NHP is a key animal model in the preclinical phase of RPE cell therapy development. This protocol addresses the technical challenges associated with the delivery of RPE cellular therapy in the NHP eye.

The non-human primate (NHP) is an ideal model for studying human retinal cellular therapeutics due to the anatomical and genetic similarities. This manuscript describes a method for submacular transplantation of retinal pigment epithelial cells in the NHP eye and strategies to prevent intraoperative complications associated with macular manipulation.

زرع ظهارة صبغة الشبكية في نموذج الرئيسيات غير البشرية لأمراض الشبكية التنكسية

Retinal pigment epithelial (RPE) transplantation holds great promise for the treatment of inherited and acquired retinal degenerative diseases. These ...