فإن الكتاب أود أن أنوه بدعم مالي من مؤسسة البحوث الألمانية (SFB / TRR57، وQ3 Q2). الكتاب أشكر ماركيه شولتز، باسكال Paschenda، وكلاوديا Warzecha لمساعدتهم في إعداد الصور.

ملاحظة: تمت الموافقة على جميع التجارب من قبل لجنة رعاية الحيوان واستخدام الدولة الرسمية (LANUV، ركلينغاوسين، ألمانيا). ويعيش الفئران في ظل ظروف معينة خالية من مسببات الأمراض وفقا للمبادئ التوجيهية للاتحاد للمختبر الحيوان جمعيات العلوم (FELASA). وأجريت جميع التجارب وفقا للقانون الاتحادي الألماني فيما يتعلق بحماية الحيوانات و&quot;دليل لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية&quot; (المعاهد الوطنية للصحة المنشور 8 الطبعة، 2011). 1. قبل الجراحة إعداد ملاحظة: القيام بجميع الإجراءات في ظل ظروف نظيفة ولكن غير معقمة. جميع الأجهزة والمعدات التي يمكن إعادة استخدامها أخرى مثل ملقط الجراحة، مقص، وكوليبري ضام التي تستخدم لإجراء عمليات جراحية ويجب تعقيمها قبل استخدامها وفقا لبروتوكولات التي هي في الامتثال الصارم للمبادئ التوجيهية المؤسسية لإجراء جراحات في الحيوانات.؛ للحصول على قائمة مفصلة من الكواشف اللازمة والمواد والمعدات، يرجى الرجوع إلى قائمة من المواد المحددة / المعدات. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خلال التجريب كامل، والحفاظ على الحيوانات على لوحة ظاهرة الاحتباس عند درجة حرارة 37 ° C، متصلا بشكل دائم إلى نظام التخدير، وغطاء منطقة العمليات بشكل عام مع وستائر ذاتية اللصق-السائل غير منفذة. صحيح ترتيب جميع أدوات القياس والحلول التي يتم استخدامها أثناء التجريب قبل الجراحة (الشكل 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الفأر مع استنشاق 4 المجلد٪ الأيزوفلورين في 100٪ الأكسجين بمعدل تدفق من 4 لتر / دقيقة لتحريض التخدير. عمق التخدير كافية عند الوصول إلى المعايير الحيوية التالية: التنفس المنتظم عفوية، لا ارادي بعد وضع المحفزات الألم بين أصابع القدم، وليس استجابة للألم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حلق الفراء البطن من الفأرة مع ماكينة حلاقة كهربائية الفراء وحماية العينين من الجفاف عن طريق استخدام العين ونبيئة نظام التشغيل مرهم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع الماوس على 37 درجة مئوية ساخنة لوحة الساخنة، وإدراج خطم الماوس في قناع Fluovac من نظام التخدير Fluovac، وإصلاح أرجل الحيوان مع خطوط من الشريط الحرير. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحفاظ على التخدير من الفأرة عن طريق الاستنشاق من 1.5-3٪ الأيزوفلورين المجلد في 100٪ الأكسجين بمعدل تدفق من 1 لتر / دقيقة وجند تسكين المحيطة بالجراحة عن طريق الحقن داخل الصفاق من الحل البوبرينورفين (0.1 ملغ / كغ BW حل في 0.9٪ كلوريد الصوديوم الحل) . </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعقيم الجلد في البطن حلق مع مسحة الشاش أن هو مبلل مع معيار مطهر، وعلى استعداد لاستخدام محلول كحولي لتلقي العلاج قبل العملية من الجلد. ملاحظة: في بروتوكولات لدينا نحن نستخدم بولي الكحول antisepticum الجلد. هذا هو بما يتفق تماما مع القانون الاتحادي الألماني فيما يتعلق بحماية الحيوانات والمبادئ التوجيهية للاتحاد للمختبر الحيوان جمعيات العلوم. يحتوي هذا مطهر 70٪ (ت / ت) 2-بروبانول، butan-1،3.diol وآثار الكينولين الصفراء، وبايوته. </li></ol> 2. العمليات الجراحية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح البطن مع البطن خط الوسط بطول حوالي 2 سم عن طريق قطع ترهل بالإضافة إلى رباط في نفس الوقت مع مقص جراحي 11.5 سم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشريح النسيج الضام على رأس الصفاق باستخدام مقص بمثابة رش. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع الصفاق على طول الخط ألبا لفتح التجويف البريتوني. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توسيع تجويف عن طريق إدخال خياطة عقد في القص، ورفع خيوط من الخيط، وتحديد ذلك على رأس قناع Fluovac. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنتشر في منطقة العملية عن طريق إدراج ضام كوليبري في التجويف البريتوني (الشكل 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رفع الكبد مع رطب (0.9٪ كلوريد الصوديوم الحل) مسحة القطن بحيث الجانب البطني منه العصي على الحجاب الحاجز ونقير واضحة للعيان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فضح القناة الصفراوية عن طريق حركة الذيلية للامعاء (الشكل 3). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فصل بعناية القناة الصفراوية منالمرافقة الوريد البابي والشريان الكبدي باستخدام ملقط التسنين الصغيرة (الشكل 4A). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع خياطة 5-0 حول القناة الصفراوية وضمان الحصول عليها مع اثنين من عقدة الجراحية. عندما ربط عقدة تزيد من قوة الجر باستمرار لضمان عرقلة فعالة دون قطع القناة الصفراوية (الشكل 4B). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة ربط الجمجمة الثاني بنفس الطريقة ولكن لا تشريح القناة الصفراوية في ما بين (الشكل 4C). وإلا فسيكون هناك خطر كبير من أن التسريبات الصفراء إذا عقدة واحدة غير آمن، والحيوانات لا تعاني من الركود الصفراوي لكن تطور التهاب الصفاق الحاد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع نهايات الخيوط الجراحية (الشكل 4D)، وانخفاض القص، وإزالة ضام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شطف التجويف البريتوني مع 0.9٪ كلوريد الصوديوم حل واستبدال أعضاء البطن لمواقف الفسيولوجية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وثيقة سواء البطن طبقات (البريتوني وترهل بالإضافة بها أمام) مع الغرز تشغيل منفصلة مع 6-0 Mersilk. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع هNDS من الغرز وتعقيم المنطقة بالتعاون مع مسحة شاش مبلل بمحلول مطهر. ملاحظة: عند إجراء عملية جراحية للمرة الأولى، أداء جميع الإجراءات تحت المجهر الجراحي في التكبير من 16X 20X-. وهذا يسمح اعتراف أفضل من القناة الصفراوية وبوضوح يميزها عن الوريد البابي والشريان الكبدي (الأرقام 5 و 6). بعض المختبرات يوصي تشريح القناة الصفراوية في بين الحروف المركبة اثنين. ترك القناة الصفراوية سليمة بسبب التسريبات المحتملة في واحدة من عقدة سوف يؤدي إلى التهاب الصفاق الحاد الوخيم، استسقاء، وendotoxemia النظامية عندما يتم تشريح القناة الصفراوية. </li></ol> 3. علاج ما بعد الجراحة والمتابعة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح الماوس لاسترداد في قفص استعد بواسطة مصباح الأشعة تحت الحمراء حتى الماوس مستيقظا تماما ونشطة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد ذلك، حرك الماوس إلى قفص العادي وتوفير libitum الإعلانية الحصول على الماء والغذاء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> After الجراحة، ومراقبة الحيوانات على فترات منتظمة وتنفيذ متابعة العلاج بعد العملية الجراحية مع تسكين مناسب (على سبيل المثال، حل البوبرينورفين) بناء على توصية المحلية للرعاية الحيوان الداخلية واستخدام اللجان. ملاحظة: إجراء العلاج مسكن لمدة 3 أيام. قد يشير أي سلوك غير طبيعي المضاعفات النادرة مثل التهاب الصفاق، وتعفن الدم أو نزيف داخلي وينبغي التعامل مع مثل نقطة النهاية الإنسان لإنهاء التجربة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يتم الاحتفاظ الحيوانات مع حرية الوصول إلى الغذاء والمياه الإعلانية libitum حتى نهاية التجربة. ليست هناك حاجة للرسم الدم منذ يشار تكون الألياف مستمرة من قبل اليرقان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عندما يتم التضحية الحيوانات، ويتم جمع الدم لقياس المعلمات السريرية الكيمياء (AST، ALT، البيليروبين الخ) ويتم استرداد الكبد لتحليل النسيجية والكيميائية الحيوية. </li></ol>

<ol>
	<li>Liedtke, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+liver+fibrosis+research:+update+on+animal+models,+legal+issues+and+translational+aspects.">Experimental liver fibrosis research: update on animal models, legal issues and translational aspects.</a> Fibrogenesis Tissue Repair. 6 (1), 19 (2013).</li><li>Aller, M. A., Arias, J. L., Garc&#237;a-Dom&#237;nguez, J., Arias, J. I., Dur&#225;n, M., Arias, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+obstructive+cholestasis:+the+wound-like+inflammatory+liver+response.">Experimental obstructive cholestasis: the wound-like inflammatory liver response.</a> Fibrogenesis Tissue Repair. 1 (1), 6 (2008).</li><li>Tacke, F., Weiskirchen, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Update+on+hepatic+stellate+cells:+pathogenic+role+in+liver+fibrosis+and+novel+isolation+techniques.">Update on hepatic stellate cells: pathogenic role in liver fibrosis and novel isolation techniques.</a> Expert Rev Gastroenterol Hepatol. 6 (1), 67-80 (2012).</li><li>Weiler-Normann, C., Herkel, J., Lohse, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+liver+fibrosis.">Mouse models of liver fibrosis.</a> Z. Gastroenterol. 45 (1), 43-50 (2007).</li><li>Cameron, G. R., Oakley, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ligation+of+the+common+bile+duct.">Ligation of the common bile duct.</a> J. Pathol. 35 (5), 769-798 (1932).</li><li>Cameron, G. R., Hasan, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disturbances+of+structure+and+function+in+the+liver+as+the+result+of+biliary+obstruction.">Disturbances of structure and function in the liver as the result of biliary obstruction.</a> J. Pathol. 75 (2), 333-349 (1958).</li><li>Accatino, L., Contreras, A., Ferna&#324;dez, S., Quintana, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+complete+biliary+obstruction+on+bile+flow+and+bile+acid+excretion:+postcholestatic+choleresis+in+the+rat.">The effect of complete biliary obstruction on bile flow and bile acid excretion: postcholestatic choleresis in the rat.</a> J Lab Clin Med. 93 (5), 706-717 (1979).</li><li>Accatino, L., Contreras, A., Berdichevsky, E., Quintana, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+complete+biliary+obstruction+on+bile+secretion.+Studies+on+the+mechanisms+of+postcholestatic+choleresis+in+the+rat.">The effect of complete biliary obstruction on bile secretion. Studies on the mechanisms of postcholestatic choleresis in the rat.</a> J Lab Clin Med. 97 (4), 525-534 (1981).</li><li>Kountouras, J., Billing, B. H., Scheuer, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prolonged+bile+duct+obstruction:+a+new+experimental+model+for+cirrhosis+in+the+rat.">Prolonged bile duct obstruction: a new experimental model for cirrhosis in the rat.</a> Br J Exp Pathol. 65 (3), 305-311 (1984).</li><li>Tuchweber, B., Desmouli&#232;re, A., Bochaton-Piallat, M. L., Rubbia-Brandt, L., Gabbiani, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proliferation+and+phenotypic+modulation+of+portal+fibroblasts+in+the+early+stages+of+cholestatic+fibrosis+in+the+rat.">Proliferation and phenotypic modulation of portal fibroblasts in the early stages of cholestatic fibrosis in the rat.</a> Lab Invest. 74 (1), 265-278 (1996).</li><li>Desmouli&#232;re, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+matrix+deposition,+lysyl+oxidase+expression,+and+myofibroblastic+differentiation+during+the+initial+stages+of+cholestatic+fibrosis+in+the+rat.">Extracellular matrix deposition, lysyl oxidase expression, and myofibroblastic differentiation during the initial stages of cholestatic fibrosis in the rat.</a> Lab Invest. 76 (6), 765-778 (1997).</li><li>Arias, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenoviral+expression+of+a+transforming+growth+factor-&#946;1+antisense+mRNA+is+effective+in+preventing+liver+fibrosis+in+bile-duct+ligated+rats.">Adenoviral expression of a transforming growth factor-&#946;1 antisense mRNA is effective in preventing liver fibrosis in bile-duct ligated rats.</a> BMC Gastroenterol. 3 (29), (2003).</li><li>Borkham-Kamphorst, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dominant-negative+soluble+PDGF-&#946;+receptor+inhibits+hepatic+stellate+cell+activation+and+attenuates+liver+fibrosis.">Dominant-negative soluble PDGF-&#946; receptor inhibits hepatic stellate cell activation and attenuates liver fibrosis.</a> Lab. Invest. 84 (6), 766-777 (2004).</li><li>Borkham-Kamphorst, E., Huss, S., Van de Leur, E., Haas, U., Weiskirchen, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenoviral+CCN3/NOV+gene+transfer+fails+to+mitigate+liver+fibrosis+in+an+experimental+bile+duct+ligation+model+because+of+hepatocyte+apoptosis.">Adenoviral CCN3/NOV gene transfer fails to mitigate liver fibrosis in an experimental bile duct ligation model because of hepatocyte apoptosis.</a> Liver Int. 32 (9), 1342-1353 (2012).</li><li>Borkham-Kamphorst, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+anti-fibrotic+effects+of+CCN1/CYR61+in+primary+portal+myofibroblasts+are+mediated+through+induction+of+reactive+oxygen+species+resulting+in+cellular+senescence,+apoptosis+and+attenuated+TGF-&#946;+signaling.">The anti-fibrotic effects of CCN1/CYR61 in primary portal myofibroblasts are mediated through induction of reactive oxygen species resulting in cellular senescence, apoptosis and attenuated TGF-&#946; signaling.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1843 (5), 902-914 (2014).</li><li>Huss, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+evaluation+of+an+open+source+Delphi-based+software+for+morphometric+quantification+of+liver+fibrosis.">Development and evaluation of an open source Delphi-based software for morphometric quantification of liver fibrosis.</a> Fibrogenesis Tissue Repair. 3 (1), 10 (2010).</li><li>Borkham-Kamphorst, E., Drews, F., Weiskirchen, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+lipocalin-2+expression+in+acute+and+chronic+experimental+liver+injury+moderated+by+pro-inflammatory+cytokines+interleukin-1&#946;+through+nuclear+factor-&#954;B+activation.">Induction of lipocalin-2 expression in acute and chronic experimental liver injury moderated by pro-inflammatory cytokines interleukin-1&#946; through nuclear factor-&#954;B activation.</a> Liver Int. 31 (5), 656-665 (2011).</li><li>Karlmark, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+fractalkine+receptor+CX3CR1+protects+against+liver+fibrosis+by+controlling+differentiation+and+survival+of+infiltrating+hepatic+monocytes.">The fractalkine receptor CX3CR1 protects against liver fibrosis by controlling differentiation and survival of infiltrating hepatic monocytes.</a> Hepatology. 52 (5), 1769-1782 (2010).</li><li>Tarcin, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+course+of+collagen+peak+in+bile+duct-ligated+rats.">Time course of collagen peak in bile duct-ligated rats.</a> BMC Gastroenterol. 11, 45 (2011).</li><li>Takase, S., Leo, M. A., Nouchi, T., Lieber, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Desmin+distinguishes+cultured+fat-storing+cells+from+myofibroblasts,+smooth+muscle+cells+and+fibroblasts+in+the+rat.">Desmin distinguishes cultured fat-storing cells from myofibroblasts, smooth muscle cells and fibroblasts in the rat.</a> J. Hepatol. 6 (3), 267-276 (1988).</li><li>Borkham-Kamphorst, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effects+of+lipocalin-2+(LCN2)+in+acute+liver+injury+suggest+a+novel+function+in+liver+homeostasis.">Protective effects of lipocalin-2 (LCN2) in acute liver injury suggest a novel function in liver homeostasis.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1832 (5), 660-673 (2013).</li><li>Labbus, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomic+profiling+in+Lipocalin+2+deficient+mice+under+normal+and+inflammatory+conditions.">Proteomic profiling in Lipocalin 2 deficient mice under normal and inflammatory conditions.</a> J Proteomics. 78, 188-196 (2013).</li><li>Kirkland, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+surgical+model+of+biliary+inflammation+and+obstructive+jaundice+in+mice.">Reversible surgical model of biliary inflammation and obstructive jaundice in mice.</a> J. Surg. Res. 164 (2), 221-227 (2010).</li><li>Heinrich, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Partial+bile+duct+ligation+in+mice:+a+novel+model+of+acute+cholestasis.">Partial bile duct ligation in mice: a novel model of acute cholestasis.</a> Surgery. 149 (3), 445-451 (2011).</li><li>Scholten, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+labeling+does+not+detect+epithelial-to-mesenchymal+transition+of+cholangiocytes+in+liver+fibrosis+in+mice.">Genetic labeling does not detect epithelial-to-mesenchymal transition of cholangiocytes in liver fibrosis in mice.</a> Gastroenterology. 139 (3), 987-998 (2010).</li><li>Aller, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+half+century+(1961-2011)+of+applying+microsurgery+to+experimental+liver+research.">A half century (1961-2011) of applying microsurgery to experimental liver research.</a> World J Hepatol. 4 (7), 199-208 (2012).</li><li>Russell, W. M. S., Burch, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Principles of Humane Experimental Technique. , (1959).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

اصابة الكبد الركودي هي واحدة من العوامل المسببة الرئيسية لتطوير تليف الكبد وتليف الكبد في المرضى الذين يعانون من مرض الكبد المزمن. استنادا إلى حقيقة أن هذه الأمراض تنتج تكاليف الرعاية الصحية لا يمكن التكهن بعواقبها، فمن مفهومة أن العديد من الباحثين يحاولون فهم الآليات المسببة للأمراض التليف الكبدي مستمر. ولذلك، تم إنشاء نماذج تجريبية تحاكي جوانب مختلفة من الآليات المعقدة التي تؤدي إلى التهاب الكبد، والتليف والتشمع 1. الجراحية BDL هي واحدة من النماذج التجريبية الأكثر انتشارا التي تستخدم للحث على إصابة الركودي معرقلة في الفئران والجرذان 4،23،24. في معظم البروتوكولات، يتم تخدير الحيوانات ويتم تنفيذ عملية فتح البطن القسم الوسطي. وفي وقت لاحق، وكشفت القناة الصفراوية من تجويف البطن وو ligated مرتين باستخدام خيوط جراحية. ونتيجة لذلك، فإن الفئران والجرذان التي تلقت هذه الجراحة دevelop رد فعل متليفة قوية على أن تنشأ في البداية من حقول حول الأوعية البابية 25. خلال السنوات وقد وصفت العديد من التقنيات والتعديلات الجراحية المختلفة. حتى تسمح الإجراءات الخاصة لإعادة الاتصال أو إعادة المفاغرة بعد BDL 23. وتعتمد تقنيات أخرى على BDL جزئي مما أدى إلى تشكيل نخر أقل بكثير، وبالتالي انتشار الكبدية 24. BDL جزئي في تركيبة مع إزالة لاحقة من المرارة (استئصال المرارة) الذي يمنع تشكيل التهاب المرارة أيضا يمثل نموذج تجريبي ممتاز للركود صفراوي الحاد. واقترح أن تكون نموذجا أقرب إلى الوضع البشري 24. وبالفعل، أثناء إنشاء هذا النموذج، وقد تجلى ذلك بالفعل أنه يتسبب بتكاثر ركود صفراوي مع الحد الأدنى من إصابة الأنسجة النسيجية فقط ولا تشرع في ركود صفراوي المزمن 25. ولذلك، اقترح أن هذا النموذج هو المثالي لدراسة خطوط الطول(ه) من آثار ركود صفراوي عكس 24. وتستند حتى أساليب أكثر تطورا على المجهرية وتسمح طريقة سريعة وقابلة للتكرار لإيقاع إصابات الكبد الركودي فقط في أجزاء مختارة من الكبد 26. على الرغم من أن هذه التعديلات متطورة من بروتوكول BDL الأصلي وقد ثبت مفيدة جدا في التحقيق الأسئلة بحثية محددة، العديد من المختبرات في جميع أنحاء العالم تهدف أساسا في توظيف نموذج BDL نموذجا استنساخه للغاية ويمكن الاعتماد عليها لتليف الكبد الصفراوي. ومع ذلك، يمكن أن تحدث العديد من المضاعفات التي يمكن أن يغير بشكل كبير من استنساخ وموثوقية النتائج التي حصل عليها هذا النموذج، إذا لم يتم تجنب أخطاء فنية. على سبيل المثال، والنزيف مضاعفات تتعلق إصابة الأوعية الدموية المصاحبة القناة الصفراوية (أنظر الشكلين 3-4) قد تحدث أثناء أو بسرعة بعد الجراحة. جرعة زائدة من التخدير مع cardiodepression أو ص لاحقافشل espiratory أيضا مضاعفات يمكن تجنبها من الإجراء. التهابات شديدة، بدءا من التهاب الصفاق إلى تعفن الدم، قد تحدث طوال فترة التجربة، إن لم يكن يتم تنفيذ الغرز بدقة وتسرب العصارة الصفراوية في التجويف البريتوني. الإصابات العرضية إلى الأمعاء أثناء الجراحة يمكن أن يؤدي أيضا إلى التهاب الصفاق. ولذلك، فمن الواضح أن بروتوكولات موحدة والتي هي في الامتثال لمبادئ توجيهية صارمة معالجة مطلوبة بشدة. كما كان يطالب هذا النص مؤخرا داخل دول الاتحاد الأوروبي، والتي تنفذ قواعد الرفق بالحيوان جديدة في عام 2013 1، ومتطلبات كل منها التي ترتبط مع هذه اللائحة ليست جديدة واقترحت بالفعل في عام 1959، عندما اقترح راسل وبورتش أخلاقية إطار لإجراء التجارب العلمية مع الحيوانات التي تقوم أساسا على بديل، والصقل والحد من (3R) المبدأ 27. عند اتباع outlinبروتوكول إد لا يوجد سوى عدد قليل من المضاعفات التي قد تنشأ عن أخطاء فنية. قد تحدث ثلاث قضايا محددة في التردد المنخفض إلى حد ما. كما هو الحال مع جميع العمليات الجراحية، وجرعة زائدة من مخدر هي مصدر محتمل للخطر على الحيوانات وخاصة في تركيبة مع انخفاض حرارة الجسم. إذا أثناء الجراحة تحدث مضاعفات القلب والأوعية الدموية، يجب أن تتوقف إمدادات التخدير فورا والمشغل يجب أن تحاول لتوفير اكبر قدر ممكن من الأكسجين إلى الماوس. ويمكن القيام بذلك عن طريق حقنة بلاستيكية صغيرة ومملوءة بالهواء وضخها في فم الحيوان ضعاف. بدلا من ذلك، استخدام Peleusball صغيرة للتهوية من الحيوان المصاب هو مفيد في كثير من الأحيان لعملية التنشيط. مشاكل في التئام الجروح بعد الجراحة BDL، قد الفئران دغة طبقات من قرحة الخاصة أو مصالح غيرها من الحيوانات. إذا حدث هذا، وينبغي أن تكون الفئران كل منها على حدةفي قفص. يجب تخدير الحيوانات مع الجروح المفتوحة، منطقة حول الجرح تعقيم بلطف مع معيار مطهر، وينبغي مخيط الجرح من جديد. خلال 3 أيام المقبلة، يجب أن يتم فحص الجرح من هذه الحيوانات بشكل منتظم (مرتين إلى ثلاث مرات في اليوم). الإنتفاخات من البطن أو تشكيل استسقاء تدل على الالتهابات البكتيرية. قد تحدث هذه نتيجة لعمل غير معقمة أثناء الجراحة. وينبغي التعامل مع كل نوع من العدوى دون استثناء باعتبارها نقطة النهاية إنسانية ويجب التضحية الحيوانات المصابة. قدمنا ​​سيلة سهلة لمتابعة البروتوكول الذي يسمح للأداء BDL في الفئران التي هي بسيطة لتنفيذ وتثير نفوق الحيوانات منخفضة فقط جنبا إلى جنب مع استنساخ عالية. كافة البروتوكولات الجراحية يمكن القبض بسرعة من قبل العلماء المهرة. خلال التجريب كاملة، يتم الاحتفاظ الحيوانات على لوحة ظاهرة الاحتباس عند 37 درجة مئوية ومتصلا بشكل دائمإلى نظام التخدير تقليل الألم والضيق. لإجراء عملية جراحية، يتم فتح البطن مع البطن خط الوسط والقناة الصفراوية و ligated المزدوج دون تشريح ذلك. وتظهر نتائج تمثيلية التي تمت مناقشتها هنا إلى أن التعديلات المظهرية فيما يتعلق مورفولوجيا الكبد (التهاب، والتليف، تليف الكبد) هي استنساخه للغاية وتسمح لدراسة جوانب مختلفة من تكون الألياف (على سبيل المثال، بدء، التهاب، التقدم، نهاية مرحلة المرض) في تعريف نقاط الوقت. نأمل أن ملخص بروتوكول لدينا سوف تساعد على تقصير منحنى التعلم ما هو ضروري لإنشاء بنجاح هذا النموذج التليف في غيرها من المختبرات وضمان نتائج موثوقة وقابلة للتكرار في مواقع مختلفة. وبالتالي نعتقد أن البروتوكول المقدمة تؤيد مبدأ 3R التي كان من المفترض من قبل راسيل وبورتش في عام 1959 ويمثل أساس قواعد الرفق بالحيوان الجديدة التي يتم تنفيذها حاليا في العديد من البلدان وايرقيقة الإطار الأوروبي.

يتم تعريف تليف الكبد مثل الإنتاج المفرط وتراكم المصفوفة خارج الخلية (ECM) التي تنبع من شبكة معقدة من التفاعلات بين الخلايا النجمية الكبدية المنتجة للمصفوفة ومجموعة متنوعة واسعة من خلايا الدم في الكبد المقيمين والخلايا التسلل 1،2. وعلى الرغم من التليف الكبدي يمكن أن تسببها العديد من المحفزات المختلفة الآليات الجزيئية الكامنة التليف عادة ما تكون مشابهة جدا. وبعد الضرر الكبدي، يتم بدء برنامج مدبرة للغاية من التغيرات الجزيئية والخلوية. في هذا البرنامج التفاعل الوثيق بين الإشارات التهابات، وحيدات / الضامة والخلايا النجمية الكبدية يحدث ذلك في النتائج النهائية في تنشيط الخلايا النجمية وtransdifferentiation إلى myofibroblasts، ترسب ECM والتعديلات التشريحية والوظيفية متتالية من الكبد الأنسجة سلامة 3. هو الدافع وراء تنشيط الخلايا النجمية الكبدية خاصة من جانب إشارات التهابات والتفاعل مع الكبدالضامة السكنية (أي خلايا كوبفر). يتم التعرف على العوامل المسببة للأمراض أنماط الجزيئية يرتبط بها مستقبلات التعرف على نمط المتخصصة مثل مستقبلات تول مثل التي عند تفعيلها إشارة من خلال شبكة معقدة من الممرات المختلفة التي تؤدي الى التعبير وإفراز العديد من السيتوكينات و chemokines التهابات التي تدفع العملية الالتهابية 3. الاستجابة الالتهابية وإهانة الكبد شكلت مؤقتة فقط عند إزالة عامل المنتجة للمرض. في المقابل، إذا استمرت الإصابة، يتطور التهاب مزمن في الكبد والتعبير وتراكم الحشود ECM في المقدمة مما أدى إلى إحلال التدريجي لحمة الكبد طبيعية عن طريق تشكيل ندبا. منذ تكون الألياف الكبد لدى البشر هي مشكلة سريرية في جميع أنحاء العالم، تم إنشاء العديد من النماذج القوارض التجريبية من الفشل الكبدي الحاد والمزمن خلال العقود الماضية. في مونظام rine على سبيل المثال، والنماذج شيوعا هي إدارة مجموعة متنوعة من hepatotoxins مختلفة، وربط من القناة الصفراوية المشتركة، تحريض اصابة الكبد بوساطة جهاز المناعة، وإدخال المستهدفة من عيوب جينية أو العكس وoverexpression من الجينات المحورة التي تؤثر حرجة مسارات إشارات تشارك في التسبب في التليف في الكبد 4. وقد تم تنفيذ ربط من القناة الصفراوية المشتركة في القوارض خارج باعتباره الإجراء التجريبي في البحث لسنوات عديدة 5-8. وقد قدم أول بروتوكول استنساخه للغاية لقناة الصفراء طويلة ربط (BDL) في القوارض بالفعل الآن أكثر من ثلاثة عقود مضت 9. في هذا البروتوكول كل من القسطرة / إعاقة وربط يسببها ارتفاع العائد من تليف الكبد في الفئران مع التغيرات المورفولوجية التي كانت مماثلة لتلك التي لوحظت في التشمع الصفراوي البشري 9. بروتوكول منها هو بسيط، وإجراء العمليات الجراحية ينطبق بسرعة نسبيا، ومعدلات البقاء على قيد الحياة من الحيوانات عالية مع أكثر من 95٪. في الكلاسيكية بروتوكول الفئران القسطرة / إعاقة، يتم إجراء شق قصيرة من 2 سم فقط تحت عملية الخنجري. بعد ذلك، يتم إدخال قنية في الجزء القريب من القناة الصفراوية وثابتة في موقفها مع خيوط الحرير. في الخطوة التالية، وقطعت الطريق على الجزء الأعلى من قنية مع 3 عقدة، وطرح من خلال الطرف الأدنى من شق خط الوسط ودفن تحت الجلد في الربع السفلي الأيمن 9. في النهاية، يتم إغلاق البطن ويسمح الحيوانات في التعافي. في بروتوكول ربط، تتعرض الفئران لربط مزدوج من القناة الصفراوية المشتركة سواء مع أو بدون تشريح القناة الصفراوية بين الحروف المركبة 9. ومن المقبول أيضا هذا النموذج التجريبي وتستخدم في جميع أنحاء العالم في مئات من المختبرات للحث على ركود صفراوي الكبد والتليف. أنه يدفع الصفراوية داخل الكبد تكاثر الخلايا الظهارية، التمايز myofibroblasticن من الخلايا الليفية بوابة حول تكاثر الخلايا الظهارية الصفراوية، مما أدى إلى والتعبير الهائل تكرار للغاية وترسب ECM 10،11. ولذلك، فإن تطبيق هذا النموذج في الجرذان والفئران ويجري شعبية بين العلماء التي تهدف إلى فهم التسبب في التهاب الكبد والتليف. في المختبر لدينا، وقد استخدمنا هذا البروتوكول على نطاق واسع في الماضي في الفئران في العديد من الدراسات التجريبية التي تهدف إلى تحقيق الجوانب الجزيئية والخلوية الخاصة لتكون الألياف الكبدي واختبار المفاهيم والمخدرات 12-15 antifibrotic الرواية. مؤخرا، ونحن تتكيف هذه المنهجية لنظام الفئران وجدت أن جراحة ربط القناة الصفراوية هي أيضا يعني جاذبية للإقامة التليف تعتمد على الوقت مع انخفاض التباين وفيات في الفئران 16-18. نظرا لحجم أصغر من الحيوانات، ومع ذلك، بعض التعديلات الهامة فيما يتعلق التخدير، interv الجراحيةention والمراقبة بعد المعالجة ضرورية للحصول على نتائج موثوقة وقابلة للتكرار في هذا النموذج. ولخص التكيف الكامل في البروتوكول التالي في وثائق والفيديو المرفقة.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1185">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Name of Reagent/ Equipment</td>
			<td style="width:263px;">Company</td>
			<td style="width:219px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:293px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:263px;">Forene Abbott</td>
			<td style="width:219px;">B 506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Shaver Favorita II</td>
			<td style="width:263px;">Aeskulap</td>
			<td style="width:219px;">GT104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Cutter head</td>
			<td style="width:263px;">Aeskulap</td>
			<td style="width:219px;">GT730</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Bepanthen eye and nose ointment</td>
			<td style="width:263px;">Bayer Vital GmbH</td>
			<td style="width:219px;">6029009.00.00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Warming plate and controller</td>
			<td style="width:263px;">Labotect</td>
			<td style="width:219px;">HP 062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Fluovac anesthesia system</td>
			<td style="width:263px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:219px;">34-1030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ISOFLO (Isoflurane Vapor) vaporiser</td>
			<td style="width:263px;">Eickemeyer</td>
			<td style="width:219px;">4802885</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Scotch Tape</td>
			<td style="width:263px;">commercially available</td>
			<td style="width:219px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Tissue paper</td>
			<td style="width:263px;">commercially available</td>
			<td style="width:219px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Durapore silk tape</td>
			<td style="width:263px;">3M</td>
			<td style="width:219px;">1538-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Cotton Gauze swabs</td>
			<td style="width:263px;">Fuhrmann GmbH</td>
			<td style="width:219px;">32014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Poly-Alcohol Haut&#8230;farblos Antisepticum</td>
			<td style="width:263px;">Antiseptica GmbH</td>
			<td style="width:219px;">72PAH200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Raucodrape OR adhesive drapes</td>
			<td style="width:263px;">Lohmann &#38; Rauscher GmbH</td>
			<td style="width:219px;">33013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Scissor</td>
			<td style="width:263px;">Fine Science Tools Inc.</td>
			<td style="width:219px;">14074-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Graefe forceps straight</td>
			<td style="width:263px;">Fine Science Tools Inc.</td>
			<td style="width:219px;">11050-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">6-0 Mersilk suture</td>
			<td style="width:263px;">Ethicon</td>
			<td style="width:219px;">K889H</td>
			<td>Silk, non-absorbable/Abdominal closure</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Needle holder Mathieu</td>
			<td style="width:263px;">Fine Science Tools Inc.</td>
			<td style="width:219px;">12010-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Colibri retractor</td>
			<td style="width:263px;">Fine Science Tools Inc.</td>
			<td style="width:219px;">17000-03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Cotton swabs</td>
			<td style="width:263px;">Noba Verbandmittel</td>
			<td style="width:219px;">974202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Cotton swabs</td>
			<td style="width:263px;">Heinz Herenz Medizinalbedarf GmbH</td>
			<td style="width:219px;">1032238</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">25mL beaker</td>
			<td style="width:263px;">Schott Duran</td>
			<td style="width:219px;">50-1150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Isotonic (0.9%) NaCl solution</td>
			<td style="width:263px;">DeltaSelect GmbH</td>
			<td style="width:219px;">PZN 00765145</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Micro-serrations forceps Moria MC31</td>
			<td style="width:263px;">Fine Science Tools Inc.</td>
			<td style="width:219px;">11370-31</td>
			<td>Bile duct separation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">5-0 Mersilene suture</td>
			<td style="width:263px;">Ethicon</td>
			<td style="width:219px;">EH6731H</td>
			<td>Polyester, non-absorbable/Bile duct ligation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">5mL syringe</td>
			<td style="width:263px;">BD Discardit II</td>
			<td style="width:219px;">300296</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">1mL syringe</td>
			<td style="width:263px;">BD Plastipak</td>
			<td style="width:219px;">300013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Sterican needle 26 G x 1</td>
			<td style="width:263px;">B. Braun</td>
			<td style="width:219px;">4657683</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Buprenorphine</td>
			<td style="width:263px;">Essex Pharma</td>
			<td style="width:219px;">997.00.00</td>
			<td>Analgeticum, 0.1 mg/kg</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:411px;">Infrared lamp</td>
			<td style="width:263px;">Petra Electric</td>
			<td style="width:219px;">IR 11</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

bile duct ligation in mice: induction of inflammatory liver injury and fibrosis by obstructive cholestasis

في معظم الفقاريات، فإن الكبد ينتج الصفراء ما هو ضروري لاستحلب الدهون الممتصة وتمكين هضم الدهون في الأمعاء الدقيقة وكذلك على إفراز البيليروبين والمنتجات الأيضية الأخرى. في الكبد، وانسداد التجريبي للنظام الصفراوي خارج الكبد يبدأ سلسلة معقدة من الأحداث المرضية التي تؤدي إلى ركود صفراوي والتهاب مما أدى إلى رد فعل قوي متليفة منشؤها من حقول حول الأوعية البابية. ولذلك، أصبح الربط الجراحي من القناة الصفراوية المشتركة نموذج الأكثر شيوعا للحث على إصابة الركودي معرقلة في القوارض ودراسة الأحداث الجزيئية والخلوية التي تكمن وراء هذه الآليات الفيزيولوجية المرضية التي تحدثها غير مناسب تدفق الصفراء. في السنوات الأخيرة، وقد وصفت التقنيات الجراحية المختلفة التي إما السماح إعادة الاتصال أو إعادة المفاغرة بعد ربط القناة الصفراوية (BDL)، على سبيل المثال، جزئي BDL، أو أساليب المجهرية الأخرى للأسئلة بحثية محددة. ومع ذلك، فإن النموذج الأكثر استخداما هو إعاقة كاملة من القناة الصفراوية المشتركة أن يؤدي الى استجابة التليف قوية بعد 21 إلى 28 يوما. معدل وفيات يمكن أن تكون عالية بسبب مضاعفات معدية أو أخطاء فنية. هنا نقدم إجراء العمليات الجراحية مفصل لنموذج BDL في الفئران التي تحفز استجابة تليفي استنساخه للغاية وفقا لحكم 3R لرعاية الحيوان المفترضة التي كتبها رسل وبورتش في عام 1959.

Watch this Scientific Journal Video about Bile Duct Ligation in Mice: Induction of Inflammatory Liver Injury and Fibrosis by Obstructive Cholestasis at JoVE.com

Bile Duct Ligation in Mice: Induction of Inflammatory Liver Injury and Fibrosis by Obstructive Cholestasis

Disruption of bile flow results in severe inflammatory cholestatic liver injury with a characteristic time-dependent sequence of morphological alterations. Here we present a protocol for the surgical ligation of the common bile duct in mice that allows to induce a strong fibrotic response after 21 to 28 days.

القناة الصفراوية ربط في الفئران: تحريض التهاب الكبد والتليف الإصابات التي كتبها الانسدادي ركود صفراوي

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well ...

bile-duct-ligation-mice-induction-inflammatory-liver-injury-fibrosis

Research

JoVE Journal

Medicine

51.4K Views.  RWTH Aachen University. Disruption of bile flow results in severe inflammatory cholestatic liver injury with a characteristic time-dependent sequence of morphological alterations. Here we present a protocol for the surgical ligation of the common bile duct in mice that allows to induce a strong fibrotic response after 21 to 28 days.

Video: Bile Duct Ligation in Mice: Induction of Inflammatory Liver Injury and Fibrosis by Obstructive Cholestasis

3-Dimensional Resin Casting and Imaging of Mouse Portal Vein or Intrahepatic Bile Duct System

In organs, the correct architecture of vascular and ductal structures is indispensable for proper physiological function, and the formation and maintenance of these structures is a highly regulated process. The analysis of these complex, 3-dimensional structures has greatly depended on either 2-dimensional examination in section or on dye injection studies. These techniques, however, are not able to provide a complete and quantifiable representation of the ductal or vascular structures they are intended to elucidate. Alternatively, the nature of 3-dimensional plastic resin casts generates a permanent snapshot of the system and is a novel and widely useful technique for visualizing and quantifying 3-dimensional structures and networks.
A crucial advantage of the resin casting system is the ability to determine the intact and connected, or communicating, structure of a blood vessel or duct. The structure of vascular and ductal networks are crucial for organ function, and this technique has the potential to aid study of vascular and ductal networks in several ways. Resin casting may be used to analyze normal morphology and functional architecture of a luminal structure, identify developmental morphogenetic changes, and uncover morphological differences in tissue architecture between normal and disease states. Previous work has utilized resin casting to study, for example, architectural and functional defects within the mouse intrahepatic bile duct system that were not reflected in 2-dimensional analysis of the structure1,2, alterations in brain vasculature of a Alzheimer's disease mouse model3, portal vein abnormalities in portal hypertensive and cirrhotic mice4, developmental steps in rat lymphatic maturation between immature and adult lungs5, immediate microvascular changes in the rat liver, pancreas, and kidney in response in to chemical injury6.
Here we present a method of generating a 3-dimensional resin cast of a mouse vascular or ductal network, focusing specifically on the portal vein and intrahepatic bile duct. These casts can be visualized by clearing or macerating the tissue and can then be analyzed. This technique can be applied to virtually any vascular or ductal system and would be directly applicable to any study inquiring into the development, function, maintenance, or injury of a 3-dimensional ductal or vascular structure.

A method of visualizing and quantifying the 3-dimensional structure of mouse hepatic portal vein or intrahepatic bile duct is described. This resin cast technique can also be applied to other ductal or vascular systems and allows for in situ visualization or quantification of a system's intact communicating architecture.

الأبعاد 3-صب الراتنج والتصوير من الوريد البابي داخل الكبد أو ماوس نظام القناة الصفراوية

In  organs, the correct architecture of vascular and ductal structures is  indispensable for proper physiological function, and the formation and  ...

Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often unreported mortality rates that may confound analyses. Bilateral renal pedicle clamping is commonly used to induce IR-AKI, but differences between effective clamp pressures and/or renal responses to ischemia between kidneys often lead to more variable results. In addition, shorter clamp times are known to induce more variable tubular injury, and while mice undergoing bilateral injury with longer clamp times develop more consistent tubular injury, they often die within the first 3 days after injury due to severe renal insufficiency. To improve post-injury survival and obtain more consistent and predictable results, we have developed two models of unilateral ischemia-reperfusion injury followed by contralateral nephrectomy. Both surgeries are performed using a dorsal approach, reducing surgical stress resulting from ventral laparotomy, commonly used for mouse IR-AKI surgeries. For induction of moderate injury BALB/c mice undergo unilateral clamping of the renal pedicle for 26 min and also undergo simultaneous contralateral nephrectomy. Using this approach, 50-60% of mice develop moderate AKI 24 hr after injury but 90-100% of mice survive. To induce more severe AKI, BALB/c mice undergo renal pedicle clamping for 30 min followed by contralateral nephrectomy 8 days after injury. This allows functional assessment of renal recovery after injury with 90-100% survival. Early post-injury tubular damage as well as post injury fibrosis are highly consistent using this model.

We describe models of moderate and severe ischemia-reperfusion-induced kidney injury in which the mice undergo unilateral renal pedicle clamping followed by simultaneous or delayed contralateral nephrectomy, respectively. These models consistently give rise to renal dysfunction and post-injury fibrosis, but injury severity and survival are dependent on mouse background, age and surgical equipment.

نقص التروية-ضخه نموذج من إصابة الكلى الحاد والتليف آخر الاصابات في الفئران

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often ...

Surgical Injury to the Mouse Pancreas through Ligation of the Pancreatic Duct as a Model for Endocrine and Exocrine Reprogramming and Proliferation

Expansion of pancreatic beta cells in vivo or ex vivo, or generation of beta cells by differentiation from an embryonic or adult stem cell, can provide new expandable sources of beta cells to alleviate the donor scarcity in human islet transplantation as therapy for diabetes. Although recent advances have been made towards this aim, mechanisms that regulate beta cell expansion and differentiation from a stem/progenitor cell remain to be characterized. Here, we describe a protocol for an injury model in the adult mouse pancreas that can function as a tool to study mechanisms of tissue remodeling and beta cell proliferation and differentiation. Partial duct ligation (PDL) is an experimentally induced injury of the rodent pancreas involving surgical ligation of the main pancreatic duct resulting in an obstruction of drainage of exocrine products out of the tail region of the pancreas. The inflicted damage induces acinar atrophy, immune cell infiltration and severe tissue remodeling. We have previously reported the activation of Neurogenin (Ngn) 3 expressing endogenous progenitor-like cells and an increase in beta cell proliferation after PDL. Therefore, PDL provides a basis to study signals involved in beta cell dynamics and the properties of an endocrine progenitor in adult pancreas. Since, it still remains largely unclear, which factors and pathways contribute to beta cell neogenesis and proliferation in PDL, a standardized protocol for PDL will allow for comparison across laboratories.

This protocol describes an injury model involving the surgical ligation of the pancreatic duct in the adult mouse pancreas, resulting in severe injury that establishes an environment that allows beta cell neogenesis and proliferation. This model can be used as a tool to study mechanisms involved in beta cell formation.

الإصابات الجراحية للماوس البنكرياس من خلال من ربط والبنكرياس القناة نموذجا للالغدد الصماء وخارجية الإفراز إعادة برمجة وانتشار

Expansion of pancreatic beta cells in vivo or ex vivo, or generation of beta cells by differentiation from an embryonic or adult stem cell, can provide ...

The Dimethylnitrosamine Induced Liver Fibrosis Model in the Rat

Four to six week old, male Wistar rats were used to produce animal models of liver fibrosis. The process requires four weeks of administration of 10 mg/kg dimethylnitrosamine (DMN), given intraperitoneally for three consecutive days per week. Intraperitoneal injections were performed in the fume hood as DMN is a known hepatoxin and carcinogen. The model has several advantages. Firstly, liver changes can be studied sequentially or at particular stages of interest. Secondly, the stage of liver disease can be monitored by measurement of serum alanine aminotransferase (ALT) and aspartate aminotransferase (AST) enzymes. Thirdly, the severity of liver damage at different stages can be confirmed by sacrifice of animals at designated time points, followed by histological examination of Masson&#39;s Trichome stained liver tissues. After four weeks of DMN dosing, the typical fibrosis score is 5 to 6 on the Ishak scale. The model can be reproduced consistently and has been widely used to assess the efficacy of potential anti-fibrotic agents.

We describe a method to produce an animal model of liver fibrosis in the rat, and assess the degree of fibrosis by histological examination of the liver. The model can be used to study the development of liver disease as well as to test the efficacy of potential anti-fibrotic agents.

وDimethylnitrosamine المستحثة الكبد تليف النموذجي في الجرذ

Four to six week old, male Wistar rats were used to produce animal models of liver fibrosis. The process requires four weeks of administration of 10 mg/kg ...

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The "Wire-Injury" Model

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. Moreover, by rupture of the defective vascular wall, atherosclerosis induces occlusive thrombus formation, which represents the main cause of myocardial infarction or stroke and the most frequent cause of death. Despite the advances in the cardiovascular field, many questions remain unanswered, and additional basic research is essential to improve our understanding of the molecular mechanisms during atherosclerosis and its effects. Due to limited clinical studies, there is a need for representative animal models recreating atherosclerotic conditions such as neointima formation after stent implantation, balloon angioplasty, or endarterectomy. Since the mouse presents many advantages and is the most frequently used model for studying molecular processes, the current study proposes an invasive procedure of endothelial denudation, also known as the wire-injury model, which is representative of the human condition of neointima formation in arteries after revascularization procedures.

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The &quot;Wire-Injury&quot; Model

This study describes an invasive procedure for the induction of accelerated atherosclerosis in mice. In comparison to other methods using electric- or cryo-induced injury, mechanical-induced injury mimics the human condition of restenosis after revascularization therapies and is ideal for the study of the molecular mechanisms involved.

تحريض تصلب الشرايين المتسارع في الفئران: نموذج "الأسلاك- إصابة"

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. ...

Generation of a Chronic Obstructive Pulmonary Disease Model in Mice by Repeated Ozone Exposure

Chronic obstructive pulmonary disease (COPD) is characterized by persistent airflow limitation and lung parenchymal destruction. It has a very high incidence in aging populations. The current conventional therapies for COPD focus mainly on symptom-modifying drugs; thus, the development of new therapies is urgently needed. Qualified animal models of COPD could help to characterize the underlying mechanisms and can be used for new drug screening. Current COPD models, such as lipopolysaccharide (LPS) or the porcine pancreatic elastase (PPE)-induced emphysema model, generate COPD-like lesions in the lungs and airways but do not otherwise resemble the pathogenesis of human COPD. A cigarette smoke (CS)-induced model remains one of the most popular because it not only simulates COPD-like lesions in the respiratory system, but it is also based on one of the main hazardous materials that causes COPD in humans. However, the time-consuming and labor-intensive aspects of the CS-induced model dramatically limit its application in new drug screening. In this study, we successfully generated a new COPD model by exposing mice to high levels of ozone. This model demonstrated the following: 1) decreased forced expiratory volume 25, 50, and 75/forced vital capacity (FEV25/FVC, FEV50/FVC, and FEV75/FVC), indicating the deterioration of lung function; 2) enlarged lung alveoli, with lung parenchymal destruction; 3) reduced fatigue time and distance; and 4) increased inflammation. Taken together, these data demonstrate that the ozone exposure (OE) model is a reliable animal model that is similar to humans because ozone overexposure is one of the etiological factors of COPD. Additionally, it only took 6 - 8 weeks, based on our previous work, to create an OE model, whereas it requires 3 - 12 months to induce the cigarette smoke model, indicating that the OE model might be a good choice for COPD research.

This study describes the successful generation of a new chronic obstructive pulmonary disease (COPD) animal model by repeatedly exposing mice to high concentrations of ozone.

جيل طراز انسداد الشعب الهوائية المزمن في الفئران بالتعرض للأوزون المتكررة

Chronic obstructive pulmonary disease (COPD) is characterized by persistent airflow limitation and lung parenchymal destruction. It has a very high ...

Inducing Acute Lung Injury in Mice by Direct Intratracheal Lipopolysaccharide Instillation

Airway administration of lipopolysaccharide (LPS) is a common way to study pulmonary inflammation and acute lung injury (ALI) in small animal models. Various approaches have been described, such as the inhalation of aerosolized LPS as well as nasal or intratracheal instillation. The presented protocol describes a detailed step-by-step procedure to induce ALI in mice by direct intratracheal LPS instillation and perform FACS analysis of blood samples, bronchoalveolar lavage (BAL) fluid, and lung tissue. After intraperitoneal sedation, the trachea is exposed and LPS is administered via a 22 G venous catheter. A robust and reproducible inflammatory reaction with leukocyte invasion, upregulation of proinflammatory cytokines, and disruption of the alveolo-capillary barrier is induced within hours to days, depending on the LPS dosage used. Collection of blood samples, BAL fluid, and lung harvesting, as well as the processing for FACS analysis, are described in detail in the protocol. Although the use of the sterile LPS is not suitable to study pharmacologic interventions in infectious diseases, the described approach offers minimal invasiveness, simple handling, and good reproducibility to answer mechanistic immunological questions. Furthermore, dose titration as well as the use of alternative LPS preparations or mouse strains allow modulation of the clinical effects, which can exhibit different degrees of ALI severity or early vs. late onset of disease symptoms.

Presented here is a step-by-step procedure to induce acute lung injury in mice by direct intratracheal lipopolysaccharide instillation and to perform FACS analysis of blood samples, bronchoalveolar lavage fluid, and lung tissue. Minimal invasiveness, simple handling, good reproducibility, and titration of disease severity are advantages of this approach.

إحداث إصابات الرئة الحادة في الفئران عن طريق التبيل المباشر للكيس الشحمي داخل الرغامى

Airway administration of lipopolysaccharide (LPS) is a common way to study pulmonary inflammation and acute lung injury (ALI) in small animal models. ...

Murine Precision-Cut Liver Slices as an Ex Vivo Model of Liver Biology

Understanding the mechanisms of liver injury, hepatic fibrosis, and cirrhosis that underlie chronic liver diseases (i.e., viral hepatitis, non-alcoholic fatty liver disease, metabolic liver disease, and liver cancer) requires experimental manipulation of animal models and in vitro cell cultures. Both techniques have limitations, such as the requirement of large numbers of animals for in vivo manipulation. However, in vitro cell cultures do not reproduce the structure and function of the multicellular hepatic environment. The use of precision-cut liver slices is a technique in which uniform slices of viable mouse liver are maintained in laboratory tissue culture for experimental manipulation. This technique occupies an experimental niche that exists between animal studies and in vitro cell culture methods. The presented protocol describes a straightforward and reliable method to isolate and culture precision-cut liver slices from mice. As an application of this technique, ex vivo liver slices are treated with bile acids to simulate cholestatic liver injury and ultimately assess the mechanisms of hepatic fibrogenesis.

This protocol provides a simple and reliable method for the production of viable precision-cut liver slices from mice. The ex vivo tissue samples can be maintained under laboratory tissue culture conditions for multiple days, providing a flexible model to examine liver pathobiology.

المورين الدقة قطع شرائح الكبد كنموذج السابق فيفو بيولوجيا الكبد

Understanding the mechanisms of liver injury, hepatic fibrosis, and cirrhosis that underlie chronic liver diseases (i.e., viral hepatitis, non-alcoholic ...

Organ Ischemia-Reperfusion Injury by Simulating Hemodynamic Changes in Rat Liver Transplant Model

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats is a tried and proven animal model used for preoperative, intraoperative, and postoperative studies, including ischemia-reperfusion injury (IRI) of extrahepatic organs. This model requires numerous experiments and devices. The duration of anhepatic phase is closely related to the time to develop IRI after transplantation. In this experiment, we used hemodynamic changes to induce extrahepatic organ damage in rats and determined the maximum tolerance time. The time until the most severe organ injury varied for different organs. This method can easily be replicated and can also be used to study IRI of the extrahepatic organs after liver transplantation.

This paper provides a detailed description of how to build an animal model of the anhepatic phase (liver ischemia) in rats to facilitate basic research into ischemia-reperfusion injury after liver transplantation.

إصابة الجهاز الإقصاب الإقفاري-Reperfusion عن طريق محاكاة التغيرات الديناميكية الدموية في نموذج زراعة كبد الفئران

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats is a tried and proven animal model used for preoperative, intraoperative, and postoperative studies, ...

A Mouse Model for Chronic Pancreatitis via Bile Duct TNBS Infusion

Chronic pancreatitis (CP) is a complex disease involving pancreatic inflammation and fibrosis, glandular atrophy, abdominal pain and other symptoms. Several rodent models have been developed to study CP, of which the bile duct 2,4,6 -trinitrobenzene sulfonic acid (TNBS) infusion model replicates the features of neuropathic pain seen in CP. However, bile duct drug infusion in mice is technically challenging. This protocol demonstrates the procedure of bile duct TNBS infusion for generation of a CP mouse model. TNBS was infused into the pancreas through the ampulla of Vater in the duodenum. This protocol optimized drug volume, surgical techniques, and drug handling during the procedure. TNBS-treated mice showed features of CP as reflected by bodyweight and pancreas weight reductions, changes in pain-associated behaviors, and abnormal pancreatic morphology. With these improvements, mortality associated with TNBS injection was minimal. This procedure is not only critical in generating pancreatic disease models but is also useful in local pancreatic drug delivery.

Chronic pancreatitis (CP) is a disease characterized by inflammation and fibrosis of the pancreas, often associated with intractable abdominal pain. This article focuses on refining the technique to generate a mouse model of CP via bile duct infusion with 2,4,6 -trinitrobenzene sulfonic acid (TNBS).

نموذج الماوس لالتهاب البنكرياس المزمن عن طريق ضخ القناة الصفراوية TNBS

Chronic pancreatitis (CP) is a complex disease involving pancreatic inflammation and fibrosis, glandular atrophy, abdominal pain and other symptoms. ...