التهاب البنكرياس المزمن هو مرض معقد ينطوي على التهاب البنكرياس والتليف وآلام في البطن وغيرها من الأعراض. يكرر نموذج ضخ القناة الصفراوية TNBS الألم العصبي الملاحظ في مرضى التهاب البنكرياس المزمن. وقد تم تحسين هذا البروتوكول ضخ القناة الصفراوية TNBS للحث على توليد نموذج التهاب البنكرياس المزمن في الفئران.
كما الانصهار المخدرات القناة الصفراوية في الفئران هو التحدي من الناحية الفنية، والتصور لها سوف تكون مفيدة للباحثين جديدة على هذه الطريقة. قبل وبعد أسبوعين وثلاثة أسابيع من الجراحة، استخدم فون فراي monofilaments لتطبيق مستويات مختلفة من القوة في ترتيب تصاعدي إلى منطقة البطن العليا من ثمانية إلى 10 أسابيع من العمر، C57 أسود ستة الماوس، 10 مرات لمدة ثانية إلى ثانيتين لكل تطبيق. النظر في رفع التراجع أو لعق البطن كاستجابة إيجابية.
بعد ذلك ، قم بتحميل حقنة الأنسولين المجهزة بإبرة قياس 31 مع 50 ميكرولتر من محلول TNBS المعد حديثا بنسبة 0.75 في المائة. تحميل حقنة ثانية مع 50 ميكرولتر من الإيثانول 10 في المئة في المالحة كتحكم في السيارة ووضع كل من المحاقن على الجليد المحمية من الضوء. بعد التأكد من عدم وجود استجابة لرد الفعل دواسة، وإزالة الشعر من منطقة البطن من الماوس تخدير عن طريق حلق أو تطبيق كريم إزالة الشعر ووضع الماوس على وسادة جراحية ساخنة تحت المجهر تشريح.
تطبيق مرهم البيطرية على كل عين، وتطهير موقع الجراحية مع ثلاثة متتالية اثنين في المئة اليود وثلاثة مناديل الإيثانول 70 في المئة استخدام مقص صغير لجعل شق 0.5 إلى سنتيمتر واحد في حركة واحدة مستمرة واستخدام مسحات القطن لفضح بلطف الاثني عشر وتحديد القناة الصفراوية المشتركة. لمنع تدفق العلاج إلى الكبد والمرارة، استخدم المجهر لوضع hemoclip صغيرة مستقيمة على القناة المشتركة القريبة، وإدراج إبرة من حقنة TNBS تحميلها من خلال الحليمة من vater في قناة البنكرياس. استخدم الهيموكليب الدقيق المنحني لتأمين الإبرة، وغرس المحلول في قناة البنكرياس على مدار دقيقة واحدة.
عندما يتم تسليم كل من الحل، وإزالة بعناية المشابك الصغيرة والتأكد من أن الاثني عشر قد عاد إلى موقعه الأصلي. قبل إغلاق تجويف البطن، إضافة 500 ميكرولتر من 36 إلى 37 درجة مئوية المالحة المعقمة لمساعدة الاثني عشر العودة إلى وضعها الأصلي والمساعدة في استعادة التمعج. استخدم خياطة مستمرة مع غرزة خمسة-O لإغلاق الشق في طبقة العضلات، وإغلاق الجلد باستخدام خياطة متقطعة مع غرزة أربعة-O.
ثم ضع الماوس في قفص الانتعاش على وسادة التدفئة مع رصد حتى شغل كامل. مراقبة صحة الفأر وسلوكه يوميا خلال الأسبوع الأول بعد الجراحة بحثا عن علامات الضيق، مثل النطق، أو وضعية الظهر المنحنية أو تقليل الحركة وقياس وزن الجسم كل يومين. كما لوحظ، فإن حقن 50 ميكرولتر من الحبر كما أظهرت النتائج في تسلل البنكرياس بأكمله، مما يسمح بالتحريض على النمط الظاهري مرض أكثر تجانسا.
في هذا التحليل التمثيلي ، في الأيام الثلاثة الأولى بعد الجراحة ، فقدت الفئران في مجموعة التحكم حوالي ستة في المئة من وزن جسمها الأصلي قبل أن تتعافى تدريجيا وتكتسب أكثر من 100٪ من وزن جسمها الأصلي بحلول اليوم 21. في المقابل، فقدت الفئران التي تلقت TNBS حوالي 15 في المئة من وزن جسمها الأصلي خلال الأيام الخمسة الأولى بعد الجراحة واستعادت أقل بقليل من 100 في المئة من وزن جسمها الأصلي بحلول اليوم 21. بالمقارنة مع فئران التحكم ، أظهرت الحيوانات التي تحقنها TNBS زيادة فرط الحساسية الميكانيكية في البطن خلال الأسبوعين الثاني والثالث بعد الجراحة.
انخفض حجم ووزن كل وزن الجسم من البنكرياس، بشكل كبير في الفئران TNBS مقارنة مع البنكرياس حصادها من الحيوانات السيطرة، مما يشير إلى ضمور البنكرياس ملحوظ في الحيوانات المعالجة TNBS بما يتفق مع النتائج في البشر الذين يعانون من التهاب البنكرياس المزمن الشديد والطويل الأجل. أظهر التحليل النسيجي لأقسام أنسجة البنكرياس من الفئران المعالجة بالإيثانول التحكم مورفولوجيا طبيعية في حين أظهرت أقسام الأنسجة من الفئران المعالجة TNBS إدراكا خاليا مع فقدان هائل للخلايا الأسينارية التي تم استبدالها بتسلل الخلايا الدهنية والتليف. منع TNBS حقن من دخول المثانة غال والأمعاء مهم كما TNBS له آثار ضارة الأنسجة.
أثناء التسريب، والحفاظ على اليد مستقرة قدر الإمكان لتجنب ثقب المفعول أن القناة الصفراوية. بالإضافة إلى تحفيز تطور التهاب البنكرياس المزمن ، يمكن استخدام هذا الفن الفئران ضخ القناة الصفراوية لتطوير نماذج أمراض البنكرياس الأخرى. هذا TNBS المزمنة البنكرياس الماوس نموذج يمكن استخدامها لدراسة كل من الإمراض وعلاج التهاب البنكرياس المزمن، فضلا عن أمراض البنكرياس الأخرى.
