This work was funded by the German Ministry of Defense (Grant No. M-SAB1-6-A009).

يصف بروتوكول التالية تقنيات التحقيق في وقت مبكر من هجرة الخلايا البطانية. زراعة السليم للخلايا بطانة الأوعية الدموية تتطلب قبل طلاء قوارير زراعة الخلايا مع الجيلاتين لضمان الانتشار السليم والمحافظة على النمط الظاهري البطانية. 1. قبل طلاء قوارير خلية ثقافة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حل الجيلاتين في 0.1 M PBS إلى تركيز النهائي من 0.1٪. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الأوتوكلاف الحل مع المعلمات من أجل التعقيم السائل (لمزيد من التفاصيل انظر تعليمات الأوتوكلاف معين). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة كمية كافية من محلول الجيلاتين تعقيمها إلى قارورة معقمة ثقافة الخلية (على سبيل المثال، لا يقل عن 5 مل للثقافة قارورة خلية T25). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل قوارير في حاضنة (37 ° C، 5٪ CO 2 غير مطلوب ولكن لا تتدخل) لمدة 30 دقيقة على الأقل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة حل الجيلاتين المتبقية. استخدام قوارير المغلفة مسبقا في وقت لاحق (انظر زراعة الخلية) أو الصورةمزق تحت ظروف معقمة حتى الاستخدام. </li></ol> 2. زراعة خلية من الخلايا البطانية في وقت مبكر ملاحظة: تم الحصول على الخلايا الجذعية الجنينية المستمدة الخلايا البطانية في وقت مبكر (EEC) من الهيئات مضغي الفئران متباينة من قبل المغناطيسي تنشيط فرز الخلايا من جزء الخلية إيجابي PECAM-1 كما هو موضح سابقا 10،11. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثقافة EEC على أطباق زراعة الخلايا المغلفة الجيلاتين في DMEM تستكمل مع 15٪ FCS، 50 U / البنسلين مل، 50 U / مل الستربتومايسين، و 200 ميكرومتر L-الجلوتامين، و 100 ميكرومتر ß المركابتويثانول و 1٪ الأحماض الأمينية غير الأساسية. التعامل مع الخلايا تحت ظروف معقمة. زراعة الخلايا مع CO 2 5٪ عند 37 درجة مئوية والرطوبة 95٪ حتى-التقاء الفرعية (بحد أقصى 80٪). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في التقاء الفرعي، وتقسيم الخلايا في نسبة 1: 5. ملاحظة: المفرزة من الخلايا البطانية هو خطوة حاسمة. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حصاد الخلايا مع RT accutase. إزالة وسائل الإعلام، وشطف مع برنامج تلفزيوني وإضافة 1 مل من accutase في 25 سم <sup&gt; 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان القارورة في RT ل10/02 دقيقة حتى فصل الخلايا. تفريق الخلايا ونقلها إلى التطبيق المطلوب. ملاحظة: لا حاجة لتحييد الكيميائي للaccutase كما يحدث عندما يتم تخزين الخلايا المصنفة في الحاضنة عند 37 درجة مئوية. ومع ذلك، يمكن أيضا أن انخفض accutase النشاط من خلال إضافة DMEM تحتوي على FCS. </li></ol></li></ol> 3. بويدن غرفة ملاحظة: يتم إجراء فحوصات غرفة بويدن باستخدام أنظمة ضوئية مبهمة إدراج البولي ايثلين مع 8 ميكرون حجم المسام. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل معطف إدراج مرشح (التي تناسب داخل الآبار زراعة الخلايا وبالتالي خلق غرفة بويدن) وذلك بإضافة 500 ميكرولتر من 0.1٪ الجيلاتين المذاب في 0.1 M PBS لمدة 30 دقيقة على الأقل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا الخلايا هي أن تتعرض لمواد كيميائية سامة، فضح وفقا لتصميم تجريبي معين قبل الحصاد الخلية. خلايا تعرضت إلى 12.5 ميكروغرام الكلوراميوسيل / مل DMEM: مذكرةلمدة 24 ساعة. وفيما يتعلق التصميم التجريبي معين، قد تختلف التعليمات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حصاد EEC وتحديد عدد الخلايا باستخدام غرفة خلية العد. ملاحظة: أجهزة الفرز الآلي يمكن استخدامها، ولكن يجب استخدامها بحذر: دليل العد الخلية هو أكثر دقة وينصح بشدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 500 ميكرولتر مستنبت الخلية إلى انخفاض حجرة غرفة لغرفة بويدن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة بالضبط 10 4 EEC في 500 ميكرولتر مستنبت الخلية في إدراج مرشح في الدائرة المقصورة العليا. القضاء على الفقاعات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان إدراج مرشح في الحاضنة لمدة 8 ساعات بالضبط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> شطف مع PBS مرة واحدة واستبدال المتوسطة مع 0.5 مل بارافورمالدهيد 4٪ في كل من المقصورات لمدة 25 دقيقة لتثبيت الخلية. غسل المرشح على نطاق واسع ولكن على الأقل 3 مرات مع 0.1 M PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استئصال الأغشية مع مشرط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جبل الغشاء بين اثنين من زلات غطاء زجاجي مع تصاعد المتوسط ​​تحتوي على دابي لstainin النوويةز. الالتفات إلى التوجه. تأكد من أن الخلايا الوحيدة التي هاجروا نحو الجانب مقصورة السفلي من الغشاء تحسب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عدد الخلايا التي هاجرت نحو الجانب مقصورة السفلي من الغشاء مع المجهر مضان في 400X التكبير. لا تخلط بين مسام الغشاء مع خلايا هاجر (الشكل 1A، 1B). التحقيق في عدد معقول من مكررات البيولوجية (على الأقل 3 مكررات البيولوجية في حالة). </li></ol> 4. التئام الجروح الفحص <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اعتمادا على المعدات المتاحة، تختار بعناية أطباق زراعة الخلايا أو لوحات: عند استخدام DIC المجهر، وتجنب الأطباق الثقافة القائمة على سطح البلاستيك أو لوحات جيدة ولكن استخدام الأجهزة القائمة على الزجاج بدلا من ذلك. ملاحظة: إذا كنت تستخدم على النقيض من المرحلة المجهري، والأطباق البلاستيكية أساس يمكن أن تستخدم أيضا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> زراعة EEC في جهاز ثقافة الخلية المناسبة (على سبيل المثال، 4 سم الزجاج طبق بتري أسفل مناسبة لتصوير الخلايا الحية) حتى 80٪ التقاء. هام: لا زراعة الخلايا لاستكمال التقاء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خدش الطبقات الوحيدة العقيمة مع 10 نصائح ميكرولتر ماصة. دفع غيض بلطف دون الكثير من الضغط على سطح الطبق وتحريكه في خط مستقيم على نحو سلس من جانب واحد على other.Wash الخلايا مرتين مع 0.1 M PBS لإزالة خلايا منفصلة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة كمية كافية من المتوسط ​​إلى الطبق الثقافة. إذا كان ذلك ممكنا، إضافة المركبات التي ينبغي التحقيق فيها. ملاحظة: 1.5 مل المتوسطة التي تحتوي على 15 نانوغرام / مل ألفا تمت إضافة حمض اللينولينيك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تركيب الطبق الثقافة تحت المجهر قادرة على تصوير الخلايا الحية. ضمان 5٪ CO 2، 37 ° C وجو مرطب. ملاحظة: الترطيب مهم بشكل خاص لتجنب التبخر المتوسط. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحصول على صور مرور الزمن أكثر من 24 ساعة على 10 فترات دقيقة. خطة لأحجام الملفات الكبيرة. ملاحظة: القرار 512 X 512 بكسل وعادة ما يكفي. ومع ذلك، فإننا نوصي باستخدام صور من 1024 س 1،0 على الأقل24. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس عرض الفجوة في تي = 0 ساعة وعند t = 24 ساعة باستخدام أداة طول البرامج المقدمة مع المجهر أو استخدام البرمجيات مفتوحة المصدر (على سبيل المثال، يماغيج). ملاحظة: في عام معين الحصول على الصور وتحليل البرامج يتم توفيرها من قبل الشركة المصنعة. لذلك، للحصول على التفاصيل التقنية المتعلقة باستخدام البرنامج، الرجوع إلى دليل. </li></ol> تتبع 5. خلية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اعتمادا على المعدات المتاحة، تختار بعناية أطباق زراعة الخلايا أو لوحات: عند استخدام DIC المجهر، وتجنب الأطباق الثقافة القائمة على سطح البلاستيك أو لوحات جيدة ولكن استخدام الأجهزة القائمة على الزجاج بدلا من ذلك. ملاحظة: إذا كنت تستخدم على النقيض من المرحلة المجهري، والأطباق البلاستيكية أساس يمكن أن تستخدم أيضا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> البذور 5 × 10 4 EEC في استكمال DMEM في جهاز ثقافة الخلية المناسبة (على سبيل المثال، 24 لوحة multiwell) وزراعة الخلايا مع CO 2 5٪ عند 37 درجة مئوية والرطوبة 95٪ لمدة 1-2 أيام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عندما نمت الخلايا تصل الى 80٪ التقاء، وإزالة وسائل الإعلام والثقافة الخلايا مع وسائل الإعلام الجديدة في وجود مواد الاختبار منها (على سبيل المثال، 12.5 ميكروغرام الكلوراميوسيل / مل DMEM). تتضمن دائما خلايا التحكم (تعامل مع المذيب، على سبيل المثال، والإيثانول) في 37 ° C لفترة معينة من الزمن (24 ساعة، اعتمادا على نظام فحص فردي). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تركيب الطبق الثقافة تحت المجهر قادرة على التصوير الحي الخلية (37 ° C، 5٪ CO 2 و 95٪ الرطوبة). الحصول على صور مرور الزمن أكثر من 24 ساعة على فترات محددة سلفا. الحصول على صور في 10 دقيقة فترات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أداء تتبع يدويا من EEC عن طريق استخدام البرنامج المساعد يماغيج MTrackJ. اختيار 10 الخلايا عشوائيا من مجال الرؤية وتتبع تحركاتهم عن طريق إضافة نقطة بيانات في وقت من الأوقات باستخدام &quot;إضافة&quot; قيادة MTrackJ. </li></ol> ملاحظة: MTrackJ متاح مجانا في ويماغيج هو التواجد [Meijering، Mtrackj &quot;http://www.imagescience.org/meijering/software/mtrackj/&quot;.]لو في [Rasband، يماغيج. &quot;http://rsbweb.nih.gov/ij/&quot;]. دليل مفصل حول البرنامج المساعد MTrackJ يتوفر في &quot;http://www.imagescience.org&quot;. 6. يعيش التصوير خلية / تقييم الميتوكوندريا غشاء المحتملة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> زراعة EEC في جهاز ثقافة الخلية المناسبة (على سبيل المثال، 4 سم الزجاج طبق بتري أسفل مناسبة لتصوير الخلايا الحية) تصل إلى نقطة التقاء 80٪. هام: لا تقم زراعة الخلايا لاستكمال التقاء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا كان ذلك ممكنا، وتعريض الخلايا للمواد الكيميائية. تعرض الخلايا إلى 12.5 ميكروغرام / مل الكلوراميوسيل لمدة 24 ساعة: مذكرة. وفيما يتعلق التصميم التجريبي معين، قد تختلف التعليمات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يعد حل 10 ملم الأوراق المالية من tetramethylrhodamine (TMRM) في DMSO. يحفظ بعيدا عن الضوء. ملاحظة: يمكن تخزين الحل السهم عند -20 درجة مئوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تمييع الحل الأسهم في مستنبت الخلية إلى حل العاملة مع تركيز من 10 ميكرومتر (1: 1000 تمييع). يحفظ بعيدا عن الضوءواستخدم في أقرب وقت ممكن. ملاحظة: يمكن أن تظل الحل العاملين في RT لبعض الوقت (&gt; 1 ساعة)، ومع ذلك، ينصح بشدة إعداد حل عمل جديدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 2 ميكرولتر من حل العاملة إلى 1 مل مستنبت الخلية (حل التحميل) جديدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحميل الخلايا عن طريق استبدال مستنبت الخلية مع الحل التحميل. احتضان لمدة 15 دقيقة عند 37 درجة مئوية، و 5٪ CO 2 والجو مرطب (الحاضنة). ويتم تصدير معظم المؤشرات مضان من قبل خلايا الحية على مر الزمن؛: الحذر ولتجنب تحميل لفترات طويلة أو تأخير التحليل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> دون غسل، ووضع طبق تحت المجهر مناسبة لتصوير الخلايا الحية. هام: مؤشرات مضان شديدة الحساسية للضوء، وبالتالي، وتجنب التعرض للضوء لزوم لها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحصول على صور دون تغيير المعلمات اقتناء لضمان إمكانية المقارنة بين الصور المختلفة. </li></ol>

<ol>
	<li>Bauer, S. M., Bauer, R. J., Velazquez, O. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiogenesis,+vasculogenesis,+and+induction+of+healing+in+chronic+wounds.">Angiogenesis, vasculogenesis, and induction of healing in chronic wounds.</a> Vascular and Endovascular Surgery. 39, 293-306 (2005).</li><li>Reinke, J. M., Sorg, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+repair+and+regeneration.">Wound repair and regeneration.</a> European Surgical Research. Europaische Chirurgische Forschung. Recherches Chirurgicales Europeennes. 49, 35-43 (2012).</li><li>Hart, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation.+1:+Its+role+in+the+healing+of+acute+wounds.">Inflammation. 1: Its role in the healing of acute wounds.</a> Journal of Wound Care. 11, 205-209 (2002).</li><li>Liu, Z. J., Hyperoxia Velazquez, O. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=endothelial+progenitor+cell+mobilization,+and+diabetic+wound+healing.">endothelial progenitor cell mobilization, and diabetic wound healing.</a> Antioxidants &amp; Redox Signaling. 10, 1869-1882 (2008).</li><li>Gallagher, K. A., Goldstein, L. J., Thom, S. R., Velazquez, O. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperbaric+oxygen+and+bone+marrow-derived+endothelial+progenitor+cells+in+diabetic+wound+healing.">Hyperbaric oxygen and bone marrow-derived endothelial progenitor cells in diabetic wound healing.</a> Vascular. 14, 328-337 (2006).</li><li>Kehe, K., Balszuweit, F., Steinritz, D., Thiermann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+toxicology+of+sulfur+mustard-induced+cutaneous+inflammation+and+blistering.">Molecular toxicology of sulfur mustard-induced cutaneous inflammation and blistering.</a> Toxicology. 263, 12-19 (2009).</li><li>Schmidt, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitrogen+mustard+(Chlorambucil)+has+a+negative+influence+on+early+vascular+development.">Nitrogen mustard (Chlorambucil) has a negative influence on early vascular development.</a> Toxicology. 263, 32-40 (2009).</li><li>Steinritz, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+N-acetyl+cysteine+and+alpha-linolenic+acid+on+sulfur+mustard+caused+impairment+of+in+vitro+endothelial+tube+formation.">Effect of N-acetyl cysteine and alpha-linolenic acid on sulfur mustard caused impairment of in vitro endothelial tube formation.</a> Toxicological Sciences. 118, 521-529 (2010).</li><li>Steinritz, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chlorambucil+(nitrogen+mustard)+induced+impairment+of+early+vascular+endothelial+cell+migration+-+Effects+of+alpha-linolenic+acid+and+N-acetylcysteine.">Chlorambucil (nitrogen mustard) induced impairment of early vascular endothelial cell migration - Effects of alpha-linolenic acid and N-acetylcysteine.</a> Chemico-biological Interactions. 219C, 143-150 (2014).</li><li>Schmidt, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+endostatin+on+embryonic+vasculo-+and+angiogenesis.">Influence of endostatin on embryonic vasculo- and angiogenesis.</a> Developmental Dynamics : an Official Publication of the American Association of Anatomists. 230, 468-480 (2004).</li><li>Dainiak, M. B., Kumar, A., Galaev, I. Y., Mattiasson, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+in+cell+separations.">Methods in cell separations.</a> Advances in Biochemical Engineering/Biotechnology. 106, 1-18 (2007).</li><li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+VEGF-induced+endothelial+cell+migration+by+mitochondrial+reactive+oxygen+species.">Regulation of VEGF-induced endothelial cell migration by mitochondrial reactive oxygen species.</a> American Journal of Physiology. Cell physiology. 301, C695-C704 (2011).</li><li>Boyden, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chemotactic+effect+of+mixtures+of+antibody+and+antigen+on+polymorphonuclear+leucocytes.">The chemotactic effect of mixtures of antibody and antigen on polymorphonuclear leucocytes.</a> The Journal of Experimental Medicine. 115, 453-466 (1962).</li><li>Relou, I. A., Damen, C. A., van der Schaft, D. W., Groenewegen, G., Griffioen, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+culture+conditions+on+endothelial+cell+growth+and+responsiveness.">Effect of culture conditions on endothelial cell growth and responsiveness.</a> Tissue &amp; Cell. 30, 525-530 (1998).</li><li>Smeets, E. F., von Asmuth, E. J., vander Linden, C. J., Leeuwenberg, J. F., Buurman, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+substrates+for+human+umbilical+vein+endothelial+cell+culture.">A comparison of substrates for human umbilical vein endothelial cell culture.</a> Biotechnic &amp; Histochemistry : Official Publication of the Biological Stain Commission. 67, 241-250 (1992).</li><li>Perry, S. W., Norman, J. P., Barbieri, J., Brown, E. B., Gelbard, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+membrane+potential+probes+and+the+proton+gradient:+a+practical+usage+guide.">Mitochondrial membrane potential probes and the proton gradient: a practical usage guide.</a> BioTechniques. 50, 98-115 (2011).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

تعرض البشرة للمواد الكيميائية السامة غالبا ما يؤدي إلى اضطراب شديد التئام الجروح. الآليات الكامنة غير معروفة إلى حد كبير. التئام الجروح هو عملية معقدة تتكون من مراحل مختلفة (الارقاء، والتهاب، وانتشار وإعادة عرض). وتشارك الهجرة خلية في كل مرحلة، ومع ذلك، فإنه من الأهم...

هجرة الخلايا مهمة في العديد من العمليات الفسيولوجية والمرضية بما في ذلك تطوير والأمراض المختلفة، والتئام الجروح بعد إصابة الجلد. بعد إصابة الجلد، التهاب الأنسجة ويزيل تحبيب محركات الأقراص التالفة أو الميتة إغلاق الجرح الأولي ويسمح تشكيل شبكة من الشعيرات الدموية الجديدة من خلال تكون الأوعية (تشكيل رواية) أو الأوعية الدموية (تبرعم الحويصلات الموجودة) 1-3. كلا vasculo- والأوعية الدموية تتطلب هجرة الخلايا البطانية. شبكة متنامية من الأوعية الدموية أمر ضروري لنقل الأكسجين والمواد المغذية إلى الخلايا الكيراتينية المتكاثرة التي تخضع في نهاية المطاف التقرن، تشكيل ظهارة جديدة وتوفير إغلاق الجرح. الهجرة ضعف الخلايا البطانية هو السبب الكامن وراء الجرح اضطراب 4،5 الشفاء. ويلزم بذلك، وأساليب تقييم هجرة الخلايا البطانية في وقت مبكر لاستكشاف pathophysiolتتبناها من اضطرابات الهجرة الخلية وتحديد استراتيجيات جديدة للتدخل العلاجي. تعرض البشرة للعوامل مؤلكل (على سبيل المثال، والكبريت والنيتروجين الخردل) يسبب الجرح اضطراب 6 الشفاء. واستخدمت هذه المركبات كما عوامل الحرب الكيميائية في العديد من الصراعات في القرن 20 ويبقى سبب قلق شديد بسبب المخزونات الموجودة في المناطق غير المستقرة سياسيا وتركيب بسيط نسبيا. على الرغم من خردل الكبريت تم تصنيعه لأول مرة في عام 1822، ليست مفهومة علم الأمراض الجزيئية والسريرية التعرض SM في التفاصيل، ويتم تحديد أي ترياق للتعرض SM. وقد أجريت العديد من الدراسات لفهم ونمذجة ضعف التئام الجروح بعد التعرض SM واختبار المركبات المرشحة المحتملة قادرة على الاحتفاظ بهذا المعنى. شميت وآخرون (2009) اختبار تأثير الكلوراميوسيل، وهو مركب مؤلكل مع خصائص مشابهة لSM في مذكرة التفاهمحد ذاتها نماذج الجسم مضغي وجدت مثيرة، وأحيانا للحد من أكثر من 99٪ في تكوين الاوعية 7. كان هذا تأثير سلبي أكثر وضوحا في مرحلة التنمية التي، في ظل الظروف الفسيولوجية، يهيمن عليها انتشار وهجرة الخلايا السلائف بطانة الأوعية الدموية. وهكذا، تم تحديد هذه الخلايا لتكون حساسة بشكل خاص لمؤلكل الوكلاء. Steinritz وآخرون (2010) اختبار الزبالين من أنواع الاكسجين التفاعلية (ROS)، ولا سيما، N أسيتيل (NAC) وحمض اللينولينيك ألفا (ALA) لقدرتها على تقليل SM سمية في الماوس مضغي نماذج الجسم وعلى وجه الخصوص، ل استعادة تكوين الاوعية 8. وقد لوحظت آثار وقائية مؤقتة، مشيرا إلى أن تشكيل ROS المفرط على الأرجح تساهم في الآثار السلبية لSM على التئام الجروح. وكانت هذه الآثار يست دائمة وربما لا تكون المركبات مرشح اثنين قادرة على استعادة تكوين الاوعية والتئام الجروح على المدى الطويل 8. Howeveص، أجريت تلك التجارب في نموذج 3D المعقدة التي لم تسمح التحقيق في الهجرة الخلية. وبالتالي، نحن اختبار في وقت لاحق NAC وALA للآثار مفيدة على هجرة الخلايا من EEC التي لها دور أساسي في عملية تكوين الاوعية 9. وعلاوة على ذلك، هناك أدلة على أن الخلية القطبية مطلوب للهجرة الخلية. وقد أظهرت ضعف الميتوكوندريا مما يؤدي إلى تشكيل ROS مخلا قطبية الخلية وبالتالي قد تؤثر سلبا على الهجرة الخلية. لذلك، تم إجراء تصوير الخلايا الحية فيما يتعلق ظيفة الميتوكوندريا وتم فحص آثار الزبالين ROS. يصف بروتوكول التالية المتطلبات العامة للزراعة EEC، وغرفة فحص بويدن، والتئام الجروح مقايسة بما في ذلك تحليل تتبع الخلية واستخدام TMRM لتقييم وظيفة الميتوكوندريا في التفاصيل. ويسلط الضوء على جوانب هامة من البروتوكولات التجريبية لزراعة الجماعة الاقتصادية الأوروبية والهجرة.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Boyden Chamber&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning FluoroBlok Tissue Culture (TC)-treated Inserts, 24 well - 3 &#181;m</td>
			<td>Corning Incorporated</td>
			<td>#351151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning FluoroBlok Tissue Culture (TC)-treated Inserts, 24 well - 8 &#181;m</td>
			<td>Life Sciences</td>
			<td>#351152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(for use with Falcon Insert 24 well Companion Plate (353504)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wound&#160; healing assay</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass bottom dishes</td>
			<td>Word Precision Instruments, Inc.</td>
			<td>#FD35-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Assessment of mitochondrial potential</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TMRM (tetramethylrhodamine methyl ester)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>#T669</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accutase</td>
			<td>PAA, Pasching, Austria</td>
			<td># L11-007</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#945;-Linolenic acid</td>
			<td>Fluka (Sigma), Steinheim, Germany</td>
			<td>&#160;# L2376</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorambucil</td>
			<td>Fluka (Sigma), Steinheim, Germany</td>
			<td># 23125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelatin</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Steinheim, Germany</td>
			<td># G2500-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessment of endothelial cell migration after exposure to toxic chemicals

التعرض للمواد الكيميائية (بما في ذلك مؤلكل عوامل الحرب الكيميائية مثل الكبريت والنيتروجين الخردل) يسبب عدد كبير من الأعراض السريرية بما في ذلك الجرح اضطراب الشفاء. عملية فسيولوجية التئام الجروح معقدة للغاية. تشكيل النسيج الحبيبي هو خطوة أساسية في هذه العملية مما أدى إلى إغلاق الجرح الأولي وتوفير شبكة من الأوعية الدموية الشعرية الجديدة - إما عن طريق تكون الأوعية (تشكيل رواية) أو الأوعية الدموية (تنتشر السفن الموجودة). كلا vasculo- والأوعية الدموية تتطلب وظيفية، والهجرة الموجهة من الخلايا البطانية. وهكذا، والتحقيق في وقت مبكر من الخلايا البطانية (EEC) الهجرة غير المهم أن نفهم الفيزيولوجيا المرضية من المواد الكيميائية الناجمة عن التئام الجروح الاضطرابات ويحتمل أن تحديد استراتيجيات جديدة للتدخل العلاجي. قمنا بتقييم ضعف التئام الجروح بعد مؤلكل التعرض لعامل واختبار المركبات المرشحة المحتملة للجراراتeatment. كنا مجموعة من التقنيات الواردة في هذا البروتوكول. A غرفة بويدن المعدلة للتحقيق من الناحية الكمية يوصف تنشيط كيميائي من EEC. وعلاوة على ذلك، ويتضح استخدام التئام الجروح فحص في تركيبة مع تحليل المسار لتقييم نوعيا الهجرة. أخيرا، علينا أن نظهر استخدام TMRM صبغة الفلورسنت للتحقيق في احتمال غشاء الميتوكوندريا إلى تحديد الآليات الكامنة وراء هجرة الخلايا المضطربة. يصف بروتوكول التالية التقنيات الأساسية التي تم تكييفها للتحقيق في EEC.

تعرض البشرة للعوامل مؤلكل يثير حمامي، تشكيل نفطة وتقرح الجلد الذي يقترن اضطراب التئام الجروح. التئام الجروح يتطلب تكون الأوعية angio- والتي تقوم على هجرة الخلايا البطانية. ويمكن تقييم الهجرة الكمية عن طريق استخدام غرفة الفحص بويدن. كما هو مبين في الشكل 1C تعرض E...

Watch this Scientific Journal Video about Assessment of Endothelial Cell Migration After Exposure to Toxic Chemicals at JoVE.com

Assessment of Endothelial Cell Migration After Exposure to Toxic Chemicals

Investigation of early endothelial cell (EEC) migration is important to understand the pathophysiology of certain illnesses and to potentially identify novel strategies for therapeutic intervention. The following protocol describes techniques to assess cell migration that have been adapted for the investigation of EEC.

تقييم البطانية هجرة الخلايا بعد التعرض للمواد الكيميائية السامة

Exposure to chemical substances (including alkylating chemical warfare agents like sulfur and nitrogen mustards) cause a plethora of clinical symptoms ...

assessment-endothelial-cell-migration-after-exposure-to-toxic

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

8.6K Views.  Bundeswehr Institute of Pharmacology and Toxicology. Investigation of early endothelial cell (EEC) migration is important to understand the pathophysiology of certain illnesses and to potentially identify novel strategies for therapeutic intervention. The following protocol describes techniques to assess cell migration that have been adapted for the investigation of EEC.

Video: Assessment of Endothelial Cell Migration After Exposure to Toxic Chemicals

Zebrafish Keratocyte Explants to Study Collective Cell Migration and Reepithelialization in Cutaneous Wound Healing

Due to their unique motile properties, fish keratocytes dissociated from explant cultures have long been used to study the mechanisms of single cell migration. However, when explants are established, these cells also move collectively, maintaining many of the features which make individual keratocytes an attractive model to study migration: rapid rates of motility, extensive actin-rich lamellae with a perpendicular actin cable, and relatively constant speed and direction of migration. In early explants, the rapid interconversion of cells migrating individually with those migrating collectively allows the study of the role of cell-cell adhesions in determining the mode of migration, and emphasizes the molecular links between the two modes of migration. Cells in later explants lose their ability to migrate rapidly and collectively as an epithelial to mesenchymal transition occurs and genes associated with wound healing and inflammation are differentially expressed. Thus, keratocyte explants can serve as an in vitro model for the reepithelialization that occurs during cutaneous wound healing and can represent a unique system to study mechanisms of collective cell migration in the context of a defined program of gene expression changes. A variety of mutant and transgenic zebrafish lines are available, which allows explants to be established from fish with different genetic backgrounds. This allows the role of different proteins within these processes to be uniquely addressed. The protocols outlined here describe an easy and effective method for establishing these explant cultures for use in a variety of assays related to collective cell migration.

Zebrafish keratocytes migrate in cell sheets from explants and provide an in vitro model for the study of the mechanisms of collective cell migration in the context of epithelial wound healing. These protocols detail an effective way to establish primary explant cultures for use in collective cell migration assays.

الزرد خلية قرنية إإكسبلنتس لدراسة الهجرة الجماعية خلية وعودة التظهرن في شفاء الجروح الجلدية

Due to their unique motile properties, fish keratocytes dissociated from explant cultures have long been used to study the mechanisms of single cell ...

Optimization of the Wound Scratch Assay to Detect Changes in Murine Mesenchymal Stromal Cell Migration After Damage by Soluble Cigarette Smoke Extract

Cell migration is vital to many physiological and pathological processes including tissue development, repair, and regeneration, cancer metastasis, and inflammatory responses. Given the current interest in the role of mesenchymal stromal cells in mediating tissue repair, we are interested in quantifying the migratory capacity of these cells, and understanding how migratory capacity may be altered after damage. Optimization of a rigorously quantitative migration assay that is both easy to customize and cost-effective to perform is key to answering questions concerning alterations in cell migration in response to various stimuli. Current methods for quantifying cell migration, including scratch assays, trans-well migration assays (Boyden chambers), micropillar arrays, and cell exclusion zone assays, possess a range of limitations in reproducibility, customizability, quantification, and cost-effectiveness. Despite its prominent use, the scratch assay is confounded by issues with reproducibility related to damage of the cell microenvironment, impediments to cell migration, influence of neighboring senescent cells, and cell proliferation, as well as lack of rigorous quantification. The optimized scratch assay described here demonstrates robust outcomes, quantifiable and image-based analysis capabilities, cost-effectiveness, and adaptability to other applications.

The capacity to migrate is a key function of many different cell types, including mesenchymal stromal cells (MSCs). However, quantifying alterations in migratory capacity after damage is challenging. This protocol describes an easily adaptable migration assay that uses rigorous statistics to quantify changes in MSC migratory capacity after damage.

تعظيم الاستفادة من الفحص الجرح خدش للكشف عن تغيرات في الفئران الوسيطة اللحمية الهجرة الخلية بعد الأضرار التي كتبها القابلة للذوبان استخراج دخان السجائر

Cell migration is vital to many physiological and pathological processes including tissue development, repair, and regeneration, cancer metastasis, and ...

Epicardial Outgrowth Culture Assay and Ex Vivo Assessment of Epicardial-derived Cell Migration

A single layer of epicardial cells lines the heart, providing paracrine factors that stimulate cardiomyocyte proliferation and directly contributing cardiovascular progenitors during development and disease. While a number of factors have been implicated in epicardium-derived cell (EPDC) mobilization, the mechanisms governing their subsequent migration and differentiation are poorly understood. Here, we present in vitro and ex vivo strategies to study EPDC motility and differentiation. First, we describe a method of obtaining primary epicardial cells by outgrowth culture from the embryonic mouse heart. We also introduce a detailed protocol to assess three-dimensional migration of labeled EPDC in an organ culture system. We provide evidence using these techniques that genetic deletion of myocardin-related transcription factors in the epicardium attenuates EPDC migration. This approach serves as a platform to evaluate candidate modifiers of EPDC biology and could be used to develop genetic or chemical screens to identify novel regulators of EPDC mobilization that might be useful for cardiac repair.

Epicardial Outgrowth Culture Assay and Ex Vivo Assessment of Epicardial-derived Cell Migration

Here, we describe methods for isolating primary mouse epicardial cells by an outgrowth culture assay and assessing the functional migration of epicardial-derived cells (EPDC) using an ex vivo heart culture system. These protocols are suitable for identifying genetic and chemical modulators of epicardial epithelial-to-mesenchymal transition (EMT) and motility.

النخابية ثمرة ثقافة الفحص و<em&gt; فيفو السابقين</em&gt; تقييم هجرة الخلايا المشتقة النخابية-

A single layer of epicardial cells lines the heart, providing paracrine factors that stimulate cardiomyocyte proliferation and directly contributing ...

Analyzing In Vivo Cell Migration using Cell Transplantations and Time-lapse Imaging in Zebrafish Embryos

Cell migration is key to many physiological and pathological conditions, including cancer metastasis. The cellular and molecular bases of cell migration have been thoroughly analyzed in vitro. However, in vivo cell migration somehow differs from in vitro migration, and has proven more difficult to analyze, being less accessible to direct observation and manipulation. This protocol uses the migration of the prospective prechordal plate in the early zebrafish embryo as a model system to study the function of candidate genes in cell migration. Prechordal plate progenitors form a group of cells which, during gastrulation, undergoes a directed migration from the embryonic organizer to the animal pole of the embryo. The proposed protocol uses cell transplantation to create mosaic embryos. This offers the combined advantages of labeling isolated cells, which is key to good imaging, and of limiting gain/loss of function effects to the observed cells, hence ensuring cell-autonomous effects. We describe here how we assessed the function of the TORC2 component Sin1 in cell migration, but the protocol can be used to analyze the function of any candidate gene in controlling cell migration in vivo.

Analyzing In Vivo Cell Migration using Cell Transplantations and Time-lapse Imaging in Zebrafish Embryos

Combining cell transplantation, cytoskeletal labeling and loss/gain of function approaches, this protocol describes how the migrating zebrafish prospective prechordal plate can be used to analyze the function of a candidate gene in in vivo cell migration.

تحليل<em&gt; في فيفو</em&gt; الهجرة الخلية باستخدام الزرع خلية والتصوير الوقت الفاصل في الزرد الأجنة

Cell migration is key to many physiological and pathological conditions, including cancer metastasis. The cellular and molecular bases of cell migration ...

Isolation of Murine Embryonic Hemogenic Endothelial Cells

The specification of hemogenic endothelial cells from embryonic vascular endothelium occurs during brief developmental periods within distinct tissues, and is necessary for the emergence of definitive HSPC from the murine extra embryonic yolk sac, placenta, umbilical vessels, and the embryonic aorta-gonad-mesonephros (AGM) region. The transient nature and small size of this cell population renders its reproducible isolation for careful quantification and experimental applications technically difficult. We have established a fluorescence-activated cell sorting (FACS)-based protocol for simultaneous isolation of hemogenic endothelial cells and HSPC during their peak generation times in the yolk sac and AGM. We demonstrate methods for dissection of yolk sac and AGM tissues from mouse embryos, and we present optimized tissue digestion and antibody conjugation conditions for maximal cell survival prior to identification and retrieval via FACS. Representative FACS analysis plots are shown that identify the hemogenic endothelial cell and HSPC phenotypes, and describe a methylcellulose-based assay for evaluating their blood forming potential on a clonal level.

Hematopoietic stem and progenitor cells (HSPC) derive from specialized (hemogenic) endothelial cells during development, yet little is known about the process by which some endothelial cells specify to become blood forming. We demonstrate a flow-cytometry based method allowing simultaneous isolation of hemogenic endothelial cells and HSPC from murine embryonic tissues.

عزل خلايا الفئران الجنينية مكون للدم غشائي

The specification of hemogenic endothelial cells from embryonic vascular endothelium occurs during brief developmental periods within distinct tissues, ...

A Novel Mammary Fat Pad Transplantation Technique to Visualize the Vessel Generation of Vascular Endothelial Stem Cells

Endothelial cells (ECs) are the fundamental building blocks of the vascular architecture and mediate vascular growth and remodeling to ensure proper vessel development and homeostasis. However, studies on endothelial lineage hierarchy remain elusive due to the lack of tools to gain access as well as to directly evaluate their behavior in vivo. To address this shortcoming, a new tissue model to study angiogenesis using the mammary fat pad has been developed. The mammary gland develops mostly in the postnatal stages, including puberty and pregnancy, during which robust epithelium proliferation is accompanied by extensive vascular remodeling. Mammary fat pads provide space, matrix, and rich angiogenic stimuli from the growing mammary epithelium. Furthermore, mammary fat pads are located outside the peritoneal cavity, making them an easily accessible grafting site for assessing the angiogenic potential of exogenous cells. This work also describes an efficient tracing approach using fluorescent reporter mice to specifically label the targeted population of vascular endothelial stem cells (VESCs) in vivo. This lineage tracing method, coupled with subsequent tissue whole-mount microscopy, enable the direct visualization of targeted cells and their descendants, through which the proliferation capability can be quantified and the differentiation commitment can be fate-mapped. Using these methods, a population of bipotent protein C receptor (Procr) expressing VESCs has recently been identified in multiple vascular systems. Procr+ VESCs, giving rise to both new ECs and pericytes, actively contribute to angiogenesis during development, homeostasis, and injury repair. Overall, this manuscript describes a new mammary fat pad transplantation and in vivo lineage tracing techniques that can be used to evaluate the stem cell properties of VESCs.

This work demonstrates a novel approach to assess the proliferation, differentiation, and vessel-forming potential of vascular endothelial stem cells (VESCs) through mammary fat pad transplantation followed by whole-mount tissue preparation for microscopic observation. A lineage tracing strategy to investigate the behavior of VESCs in vivo is also presented.

تقنية زرع الثدي الثديية الرواية جديدة لتصور الجيل سفينة من الخلايا الجذعية البطانية الأوعية الدموية

Endothelial cells (ECs) are the fundamental building blocks of the vascular architecture and mediate vascular growth and remodeling to ensure proper ...

Incorporating Pericytes into an Endothelial Cell Bead Sprouting Assay

Angiogenesis is the growth of new vessels from pre-existing vasculature and is an important component of many biological processes, including embryogenesis and development, wound healing, tumor growth and metastasis, and ocular and cardiovascular diseases. Effective in vitro models that recapitulate the biology of angiogenesis are needed to appropriately study this process and identify mechanisms of regulation that can be ultimately targeted for novel therapeutic strategies. The bead angiogenesis assay has been previously demonstrated to recapitulate the multiple stages of endothelial sprouting in vitro. However, a limitation of this assay is a lack of endothelial &#8211; mural cell interactions, which are key to the molecular and phenotypic regulation of endothelial cell function in vivo. The protocol given here presents a methodology for the incorporation of mural cells into the bead angiogenesis assay and demonstrates a tight association of endothelial cells and pericytes during sprouting in vitro. The protocol also details a methodology for effective silencing of target genes using siRNA in endothelial cells for mechanistic studies. Altogether, this protocol provides an in vitro assay that more appropriately models the diverse cell types involved in sprouting angiogenesis, and provides a more physiologically-relevant platform for therapeutic assessment and novel discovery of mechanisms of angiogenesis regulation.

This protocol presents a novel in vitro bead assay that more appropriately models the process of in vivo sprouting angiogenesis by incorporating pericytes. This modification enables the bead assay to more faithfully recapitulate the heterotypic cellular interactions between endothelial cells and mural cells that are critical for angiogenesis.

دمج بيريسيتيس حبة غشائي خلية نبتت الإنزيم

Angiogenesis is the growth of new vessels from pre-existing vasculature and is an important component of many biological processes, including ...

Visualization of Tangential Cell Migration in the Developing Chick Optic Tectum

Time-lapse imaging is a powerful method to analyze migrating cell behavior. After fluorescent cell labeling, the movement of the labeled cells in culture can be recorded under video microscopy. For analyzing cell migration in the developing brain, slice culture is commonly used to observe cell migration parallel to the slice section, such as radial cell migration. However, limited information can be obtained from the slice culture method to analyze cell migration perpendicular to the slice section, such as tangential cell migration. Here, we present the protocols for time-lapse imaging to visualize tangential cell migration in the developing chick optic tectum. A combination of cell labeling by electroporation in ovo and a subsequent flat-mount culture on the cell culture insert enables detection of migrating cell movement in the horizontal plane. Moreover, our method facilitates detection of both individual cell behavior and the collective action of a group of cells in the long term. This method can potentially be applied to detect the sequential change of the fluorescent-labeled micro-structure, including the axonal elongation in the neural tissue or cell displacement in the non-neural tissue.

We describe the methods for fluorescent labeling of tangentially migrating cells by electroporation, and for time-lapse imaging of the labeled cell movement in a flat-mount culture in order to visualize migrating cell behavior in the developing chick optic tectum.

التصور للهجرة الخلية عرضية في تيكتوم الألياف الضوئية النامية في الفرخ

Time-lapse imaging is a powerful method to analyze migrating cell behavior. After fluorescent cell labeling, the movement of the labeled cells in culture ...

Microfluidic Assay for the Assessment of Leukocyte Adhesion to Human Induced Pluripotent Stem Cell-derived Endothelial Cells (hiPSC-ECs)

Endothelial cells (ECs) are essential for the regulation of inflammatory responses by either limiting or facilitating leukocyte recruitment into affected tissues via a well-characterized cascade of pro-adhesive receptors which are upregulated on the leukocyte cell surface upon the inflammatory trigger. Inflammatory responses differ between individuals in the population and the genetic background can contribute to these differences. Human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) have been shown to be a reliable source of ECs (hiPSC-ECs), thus representing an unlimited source of cells that capture the genetic identity and any genetic variants or mutations of the donor. hiPSC-ECs can therefore be used for modeling inflammatory responses in donor-specific cells. Inflammatory responses can be modeled by determining leukocyte adhesion to the hiPSC-ECs under physiological flow. This step-by-step protocol provides a detailed description of the experimental setup and data analysis for the assessment of inflammatory responses in hiPSC-ECs and the analysis of leukocyte adhesion under physiological flow.

Microfluidic Assay for the Assessment of Leukocyte Adhesion to Human Induced Pluripotent Stem Cell-derived Endothelial Cells hiPSC-ECs

This step-by-step protocol provides a detailed description of the experimental setup and data analysis for the assessment of inflammatory responses in hiPSC-ECs and the analysis of leukocyte adhesion under physiological flow.

والرزن موائع جزيئية "تقييم التصاق الكريات البيض" إلى "خلايا بطانية" المستمدة من "الخلايا الجذعية Pluripotent التي يتسبب فيها الإنسان" (هيبسك-ECs)

Endothelial cells (ECs) are essential for the regulation of inflammatory responses by either limiting or facilitating leukocyte recruitment into affected ...

In Vitro Assays to Evaluate the Migration, Invasion, and Proliferation of Immortalized Human First-trimester Trophoblast Cell Lines

Cell movement is a critical property of trophoblasts during placental development and early pregnancy. The significance of proper trophoblast migration and invasion is demonstrated by pregnancy disorders such as pre-eclampsia and intrauterine growth restriction, which are associated with inadequate trophoblast invasion of the maternal vasculature. Unfortunately, our understanding of the mechanisms by which the placenta develops from migrating trophoblasts is limited. In vitro analysis of cell migration via the scratch assay is a useful tool in identifying factors that regulate trophoblast migratory capacity. However, this assay alone does not define the cellular changes that can result in altered cell migration. This protocol describes three different in vitro assays that are used collectively to evaluate trophoblast cell movement: the scratch assay, the invasion assay, and the proliferation assay. The protocols described here may also be modified for use in other cell lines to quantify cell movement in response to stimuli. These methods allow investigators to identify individual factors that contribute to the cell movement and provide a thorough examination of potential mechanisms underlying apparent changes in cell migration.

Here, we present a highly accessible protocol for evaluating the cell movement in human trophoblast cells using three in vitro assays: the scratch assay, the transwell invasion assay, and the cell proliferation assay.

في المختبر فحوصات تقييم الهجرة، والغزو، وانتشار خطوط الخلايا مخلدة تروفوبلست البشرية في الاثلوث الأول

Cell movement is a critical property of trophoblasts during placental development and early pregnancy. The significance of proper trophoblast migration ...