وأيد هذا العمل من قبل المعهد الوطني للاضطرابات العصبية والسكتة الدماغية منح NS081333 (لCMT)، الزهايمر منحة جمعية NIRG-10-171721 والمعهد الوطني للصحة النفسية منحة MH096702 (لUH)، والمعهد الوطني لبحوث الشيخوخة الممولة من مرض الزهايمر مركز جامعة كولومبيا AG008702 منح الطيار (لYYJ وJB).

ملاحظة: لجميع التجارب على الحيوانات، تم اتباع المؤسسية والمبادئ التوجيهية الوطنية لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية. 1. إعداد أدوات وحلول جراحية لجراحة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الأوتوكلاف جميع الأدوات الجراحية الفولاذ المقاوم للصدأ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد 70٪ من الإيثانول عن طريق تمييع 200 دليل الايثانول المطلق مع الصف الجزيئية منزوع الأيونات الماء المعقم المقطر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إرفاق G إبرة 29 إلى حقنة هاملتون. تنظيف المناطق الداخلية من هاميلتون المحاقن والإبر عن طريق وضع والمياه إخراج nanopure مرارا وتكرارا لمدة 1 دقيقة. كرر هذا الإجراء مع 70٪ من الإيثانول. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة المكبس وإبرة من حقنة هاملتون. الهواء الجاف الأجزاء في تدفق الصفحي هود O / N. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أشرق في الإبر والمحاقن مع ضوء الأشعة فوق البنفسجية لمدة 30 دقيقة قبل الاستخدام. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد محلول ملحي عن طريق إذابة كلوريد الصوديوم في الماء الصف الجزيئية إلى الوزن النهائي لتركيز حجم 0.9٪. تعقيم المنتجات السازي الحل من خلال تصفية من خلال 0.2 ميكرون فلتر المسام. </li></ol> 2. إعداد بلازميدة قليلة القسيمات Aβ 1-42 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Monomerize و resuspend المؤتلف الإنسان Aβ 1-42 في DMSO إلى 5 ملي بالضبط كما هو موضح في نشر فا &quot;وغيرهم (13). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تمييع 5 ملي Aβ 1-42 مع معقم (1X) PBS إلى 100 ​​ميكرومتر في اليوم قبل الجراحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مزيج الحل بشكل جيد من قبل سحن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان Aβ 1-42 حل لمدة 12 ساعة على 4C. ملاحظة: الحلول تحكم مثل تمييع DMSO في برنامج تلفزيوني أو مشوشة / عكس ينبغي إعداد Aβ 1-42 الببتيد بنفس طريقة Aβ 1-42. </li></ol> 3. تحديد الاحداثيات حقن <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام الكبار أطلس مخ الفأر لتحديد بالضبط الأمامي الخلفي (AP)، وسطي الاطراف (ML)، وظهري بطني (DV) الإحداثيات للمنطقة الدماغ التي تهم 14. لاالشركة المصرية للاتصالات: لتوضيح تقنية اخترنا التلفيف المسنن من الحصين كهدف مع الإحداثيات التالية من bregma: AP، -2.00 مم؛ ML، ± 1.3 مم؛ DV، -2.2 مم. الإشارة السلبية التي سبقت قيمة AP يدل على أنه 2،00 ملم الخلفي من bregma. علامة ± السابقة قيمة ML يشير الاتجاه الأيمن والأيسر من وسط المدينة. وأخيرا، فإن الإشارة السلبية التي سبقت DV تشير الى انها تتحرك من الناحية البطنية من سطح الدماغ. </li></ol> 4. إعداد الإطار التجسيمي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ارتداء قناع جراحي الوجه، ومعطف مختبر نظيفة، والقفازات الجراحية المعقمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مسح أسفل أداة التجسيمي ومحول الفأر مع الايثانول 70٪. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الستارة الجراحية المعقمة على العداد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع أداة التجسيمي مع محول الماوس على الجزء العلوي من الستارة الجراحية المعقمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مسح لوحة الماوس التدفئة مع 70٪ من الإيثانول. وضع وسادة التدفئة على السرير إطار التجسيمي. استخدام مختبر للأغراض العامةحزب المحافظين الشريط وضع العلامات على الشريط أسفل وسادة التدفئة على السرير محول الماوس. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إرفاق سادة التدفئة إلى الحارة مضخة recirculator المياه وفقا لتوجيهات المصنع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدوره على مضخة الحارة recirculator المياه وضبط درجة الحرارة إلى 37 درجة مئوية، ثم انتظر حتى تصل درجة الحرارة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يلصق 50 ميكرولتر هاميلتون المحاقن مع إبرة 29 G على الإطار التجسيمي قبل الشد وضعها على الآلية الرأسي رمح الحقن وفقا لتوجيهات المصنع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشغيل جهاز التعقيم حبة وانتظر حتى تصل درجة الحرارة مسبقا الشركة المصنعة. ملاحظة: يستخدم هذا لتعقيم الأدوات الفولاذ المقاوم للصدأ بين الحيوانات. يستغرق أدوات و 20 ثانية من الاتصال مع حبات لتعقيم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدوره على طبق ساخن وتعيينها إلى 42 درجة مئوية، ووضع قفص فارغ نظيفة فوق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بينما يتم إصلاح حقنة هاميلتون على الإطار التجسيمي استخدام التجسيمي ط بمحركاتnjector لوضع Aβ 1-42 حل. ملاحظة: رسم ما يزيد على 4 ميكرولتر من الحل في حقنة ثم استخدام محقن التجسيمي لضبط حجم عن طريق الحقن. تشغيل حاقن وفقا لتعليمات الشركة الصانعة. </li></ol> 5. إعداد الحيوان <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد وزن الماوس باستخدام تزن الحجم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الفأر مع الكيتامين / زيلازين الكوكتيل في 100 ملغم / كغم من الكيتامين و 10 ملغ / كغ زيلازين عن طريق حقن داخل الصفاق (IP). رصد عمق التخدير عن فقدان قرصة أخمص قدميه لا ارادي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد مخدرا الماوس اتخاذ قص الشعر وحلاقة رأسه لفضح الجلد فوق الجمجمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع الماوس على رأس وسادة التدفئة على رأس السرير التجسيمي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام ملعقة لفتح الفم ووضع القواطع داخل الحرس الأسنان. تأمين الأنفية على وجه الماوس. تضييق عليه بلطف وليس ضيق جدا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> POSIنشوئها والعارضتين الأذن الثنائية إلى الصماخ السمعي لتأمين الرأس. نقل كل العارضة في حين كان يضرب الجمجمة، ثم تتحول المسمار لقفله. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> للتأكد من تأمين رأس استخدام السبابة لدفع برفق على رأسه. إذا تم تأمين رأس صحيح أنها لن نعطيه أو تحرك عند الضغط عليه. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق قطرة من كريم العين أو قطرة العين للعين للحفاظ عليها رطبة. تأكد من أن العيون هي رطبة طوال العملية الجراحية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتطهير الموقع الجراحي استخدام قطعة قطن معقمة لتطبيق حل betadine إلى الجلد فوق الجمجمة، تليها 70٪ من الإيثانول. أداء betadine بالتناوب و 70٪ من الإيثانول تنظيف 2 مرات أكثر. </li></ol> 6. جراحة والتسريب <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام مشرط لجعل 2-3 ملم شق في خط الوسط من فروة الرأس، ومن ثم استخدام مقص غرامة على التوالي لتمديد خط شق إلى 1،0-1،5 سم لفضح الدرز السهمي، bregma، وامدا من الجمجمة أو المعالمالصورة التي تقوم إحداثيات التجسيمي جرا. استخدام المشابك الصغيرة للحفاظ على بشرة على حدة. ملاحظة: يتم شرح مواقف bregma وامدا في الماوس أطلس المخ &quot;الفأر الدماغ في التجسيمي إحداثيات&quot; 14. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خذ قطعة من القطن، نقع في محلول ملحي، واستخدامه لتنظيف الجمجمة. ثم، استخدم نظيفة مسحة القطن الجاف لتجف الجمجمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام معقم غرامة نقطة القلم بمناسبة نقطة على bregma. استخدام micromanipulator التجسيمي لوضع حقنة هاميلتون بحيث غيض من الإبرة اللمسات مجرد نقطة على bregma. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسجيل DV بتنسيق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لمعرفة ما اذا كان محور AP الجمجمة هو مستوى نقل حقنة هاميلتون الخلف بحيث غيض من الإبرة يلمس نقطة لامدا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسجيل موقف DV. تأكد من تنسيق DV لbregma وامدا هي تقع ضمن نطاق 0.5 مم. ملاحظة: إن الهدف هو تقليل الفرق بين DV bregma وامدا. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدمهمicromanipulator للعودة هاميلتون إبرة حقنة طرف إلى bregma نقطة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسجيل موقف AP البدء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب موقف AP تنتهي بطرح 2.00 مم من AP بدء تنسيق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام micromanipulator لإعادة إبرة حقنة هاميلتون إلى AP النهائي تنسيق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسجيل ML الحالي تنسيق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب الجهة اليسرى وتنتهي الحق ML إحداثيات عن طريق إضافة أو طرح 1.3 ملم من بدء ML تنسيق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام micromanipulator لتحريك إبرة حقنة هاميلتون إما إلى ML إنهاء تنسيق. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لمس طرف الإبرة على سطح الجمجمة على حد سواء تنتهي إحداثيات ML وتسجيل إحداثيات DV وتأكد من أن القيم هي تقع ضمن نطاق 0.5 مم. ملاحظة: إن الهدف هو تقليل الفرق DV بينهما تنتهي تنسق ML. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وفي حال حدوث انتكاسة تنسيق سحب الإبرة حتى 0.5-1 سم فوق الجمجمة. اتخاذ العقيمة نقطة غرامة القلم للاحتفال نقطة على الالسطح (ه) من الجمجمة. كرر هذه الخطوة الجانب المقابل من الجمجمة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأرجح حقنة هاميلتون واضحة للخروج من الطريق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نعلق 0.8 ملم رأس الحفر إلى الحفر. اتخاذ حفر بكلتا يديه، ووضع مرفقيه على سطح الطاولة من أجل الاستقرار، ووضع رأس الحفر قليلا فوق نقطة sharpie سواء على اليسار أو اليمين ML تنسيق. تفعيل الحفر، وانخفاض رأس الحفر على سطح الجمجمة لإدخال ثقب في الجمجمة. كرر هذه الخطوة الجانب المقابل. ملاحظة: قد يحدث بعض النزيف من الثقوب التي أدخلت حديثا. إذا كان هناك نزيف ثم استخدام قطعة من القطن نظيفة جافة لربت الدم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل حقنة هاميلتون العودة الى الموقف على أي من الثقوب ML التي أدخلت حديثا. خفض الإبرة هاميلتون الماضي فقط الجمجمة. عند هذه النقطة يجب الحرص على عدم ثقب الدماغ. للتأكد من أن الإبرة قد مرت الجمجمة تأخذ السبابة وبلطف دفع الإبرة ضد الجمجمة لجعل سوره لا خروج الإبرة في ثقب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسجيل DV بدء تنسيق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب DV إنهاء تنسيق عن طريق طرح 2.2 ملم من DV بدء تنسيق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خفض الإبرة وصولا الى انهاء DV تنسيق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تفعيل مضخة حقن التجسيمي لضخ 4 ميكرولتر من Aβ 1-42 في التلفيف المسنن بمعدل 0.5 ميكرولتر / دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عندما ضخ اكتمال السماح تبقى الإبرة في المكان لمدة 1 دقيقة إضافية لتقليل ارتداد الحل للخروج من موقع الحقن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحريك الإبرة إلى الجانب الآخر من الدماغ وكرر الخطوات 6،13-6،18. </li></ol> 7. إزالة الحيوان والعناية بعد العملية الجراحية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فك قضبان الأذن والحرس الوجه / الأنف. إزالة الماوس من الجهاز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام ملقط الطالب نمط القياسية لسحب إغلاق فروة الرأس ثم ختم الجرح مع خياطة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن 1 مل من محلول ملحي في الماوس عن طريق IP لترطيب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فيالبوبرينورفين ject (0.1 ملغ / كلغ) تحت الجلد لتخفيف الألم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحفاظ على الماوس في قفص فارغ نظيف تعيين على أعلى من 42 ° C صفيحة ساخنة حتى يستيقظ، ثم إعادته إلى القفص الإسكان مع الغذاء وافرة والمياه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدارة البوبرينورفين عن طريق الحقن تحت الجلد كل 12 ساعة لمدة 3 أيام لتخفيف الألم. </li></ol> إزالة 8. خياطة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الفأر مع الكيتامين / زيلازين الكوكتيل في 100 ملغم / كغم من الكيتامين و 10 ملغ / كغ xlyazine بواسطة IP. ملاحظة: يتم ذلك بعد 7-10 أيام من الجراحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام ملقط الطالب نمط القياسية ومقص غرامة على التوالي لإزالة خياطة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن 1 مل من محلول ملحي في الماوس عن طريق IP لترطيب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحفاظ على الماوس في قفص فارغ نظيف تعيين على أعلى من 42 ° C صفيحة ساخنة حتى يستيقظ، ومن ثم إعادته إلى القفص الإسكان مع الغذاء وافرة والمياه. </li></ol> النحر والأنسجة الحيوانية 9. معالجة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الماوس وصerfuse مع امتصاص العرق 15 4٪، وإزالة المخ، وبمعالجة ذلك cryosectioning 16. ملاحظة: توقيت التضحية بالحيوانات يعتمد على المجرب. ومع ذلك، لدراستنا اخترنا 7 و 14 أيام بعد الجراحة. </li></ol>

<ol>
	<li>Baleriola, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axonally+Synthesized+ATF4+Transmits+a+Neurodegenerative+Signal+across+Brain+Regions.">Axonally Synthesized ATF4 Transmits a Neurodegenerative Signal across Brain Regions.</a> Cell. 158 (5), 1159-1172 (2014).</li><li>Haass, C., Selkoe, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Soluble+protein+oligomers+in+neurodegeneration:+lessons+from+the+Alzheimer's+amyloid+beta-peptide.+Nature+reviews.">Soluble protein oligomers in neurodegeneration: lessons from the Alzheimer's amyloid beta-peptide. Nature reviews.</a> Molecular cell biology. 8 (2), 101-112 (2007).</li><li>Knowles, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+p75+neurotrophin+receptor+promotes+amyloid-beta(1-42)-induced+neuritic+dystrophy+in+vitro+and+in+vivo.">The p75 neurotrophin receptor promotes amyloid-beta(1-42)-induced neuritic dystrophy in vitro and in vivo.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 29 (34), 10627-10637 (2009).</li><li>Troy, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=beta-Amyloid-induced+neuronal+apoptosis+requires+c-Jun+N-terminal+kinase+activation.">beta-Amyloid-induced neuronal apoptosis requires c-Jun N-terminal kinase activation.</a> Journal of neurochemistry. 77 (1), 157-164 (2001).</li><li>Crews, L., Rockenstein, E., Masliah, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=APP+transgenic+modeling+of+Alzheimer's+disease:+mechanisms+of+neurodegeneration+and+aberrant+neurogenesis.">APP transgenic modeling of Alzheimer's disease: mechanisms of neurodegeneration and aberrant neurogenesis.</a> Brain structure &amp; function. 214 (2-3), 111-126 (2010).</li><li>Gotz, J., Ittner, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+Alzheimer's+disease+and+frontotemporal+dementia.">Animal models of Alzheimer's disease and frontotemporal dementia.</a> Nature reviews. Neuroscience. 9 (7), 532-544 (2008).</li><li>Calhoun, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuron+loss+in+APP+transgenic+mice.">Neuron loss in APP transgenic mice.</a> Nature. 395 (6704), 755-756 (1998).</li><li>Oakley, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraneuronal+beta-amyloid+aggregates,+neurodegeneration,+and+neuron+loss+in+transgenic+mice+with+five+familial+Alzheimer's+disease+mutations:+potential+factors+in+amyloid+plaque+formation.">Intraneuronal beta-amyloid aggregates, neurodegeneration, and neuron loss in transgenic mice with five familial Alzheimer's disease mutations: potential factors in amyloid plaque formation.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 26 (40), 10129-10140 (2006).</li><li>Jean, Y. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caspase-2+is+essential+for+c-Jun+transcriptional+activation+and+Bim+induction+in+neuron+death.">Caspase-2 is essential for c-Jun transcriptional activation and Bim induction in neuron death.</a> The Biochemical journal. 455 (1), 15-25 (2013).</li><li>Sotthibundhu, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beta-amyloid(1-42)+induces+neuronal+death+through+the+p75+neurotrophin+receptor.">Beta-amyloid(1-42) induces neuronal death through the p75 neurotrophin receptor.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 28 (15), 3941-3946 (2008).</li><li>Kar, S., Quirion, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amyloid+beta+peptides+and+central+cholinergic+neurons:+functional+interrelationship+and+relevance+to+Alzheimer's+disease+pathology.">Amyloid beta peptides and central cholinergic neurons: functional interrelationship and relevance to Alzheimer's disease pathology.</a> Progress in brain research. 145, 261-274 (2004).</li><li>Leranth, C., Frotscher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organization+of+the+septal+region+in+the+rat+brain:+cholinergic-GABAergic+interconnections+and+the+termination+of+hippocampo-septal+fibers.">Organization of the septal region in the rat brain: cholinergic-GABAergic interconnections and the termination of hippocampo-septal fibers.</a> The Journal of comparative neurology. 289 (2), 304-314 (1989).</li><li>Fa, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+oligomeric+beta-amyloid+1-42+and+induction+of+synaptic+plasticity+impairment+on+hippocampal+slices.">Preparation of oligomeric beta-amyloid 1-42 and induction of synaptic plasticity impairment on hippocampal slices.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. (41), (2010).</li><li>Paxinos, G., Franklin, K. B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. , (2001).</li><li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+animal+perfusion+fixation+for+rodents.">Whole animal perfusion fixation for rodents.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. (65), (2012).</li><li>Currle, D. S., Monuki, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flash+freezing+and+cryosectioning+E12.5+mouse+brain.">Flash freezing and cryosectioning E12.5 mouse brain.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. (4), (2007).</li><li>Jin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Soluble+amyloid+beta-protein+dimers+isolated+from+Alzheimer+cortex+directly+induce+Tau+hyperphosphorylation+and+neuritic+degeneration.">Soluble amyloid beta-protein dimers isolated from Alzheimer cortex directly induce Tau hyperphosphorylation and neuritic degeneration.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (14), 5819-5824 (2011).</li><li>Lambert, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diffusible,+nonfibrillar+ligands+derived+from+Abeta1-42+are+potent+central+nervous+system+neurotoxins.">Diffusible, nonfibrillar ligands derived from Abeta1-42 are potent central nervous system neurotoxins.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 95 (11), 6448-6453 (1998).</li><li>Masters, C. L., Selkoe, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemistry+of+amyloid+beta-protein+and+amyloid+deposits+in+Alzheimer+disease.">Biochemistry of amyloid beta-protein and amyloid deposits in Alzheimer disease.</a> Cold Spring Harbor perspectives in medicine. 2 (6), a006262 (2012).</li><li>Chakrabarti, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen+receptor+agonists+for+attenuation+of+neuroinflammation+and+neurodegeneration.">Estrogen receptor agonists for attenuation of neuroinflammation and neurodegeneration.</a> Brain research bulletin. 109C, 22-31 (2014).</li><li>Cirrito, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+assessment+of+brain+interstitial+fluid+with+microdialysis+reveals+plaque-associated+changes+in+amyloid-beta+metabolism+and+half-life.">In vivo assessment of brain interstitial fluid with microdialysis reveals plaque-associated changes in amyloid-beta metabolism and half-life.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 23 (26), 8844-8853 (2003).</li><li>Puzzo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Picomolar+amyloid-beta+positively+modulates+synaptic+plasticity+and+memory+in+hippocampus.">Picomolar amyloid-beta positively modulates synaptic plasticity and memory in hippocampus.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 28 (53), 14537-14545 (2008).</li><li>Puzzo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endogenous+amyloid-beta+is+necessary+for+hippocampal+synaptic+plasticity+and+memory.">Endogenous amyloid-beta is necessary for hippocampal synaptic plasticity and memory.</a> Annals of. 69 (5), 819-830 (2011).</li><li>Akpan, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intranasal+delivery+of+caspase-9+inhibitor+reduces+caspase-6-dependent+axon/neuron+loss+and+improves+neurological+function+after+stroke.">Intranasal delivery of caspase-9 inhibitor reduces caspase-6-dependent axon/neuron loss and improves neurological function after stroke.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 31 (24), 8894-8904 (2011).</li><li>Fulmer, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocyte-derived+BDNF+supports+myelin+protein+synthesis+after+cuprizone-induced+demyelination.">Astrocyte-derived BDNF supports myelin protein synthesis after cuprizone-induced demyelination.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 34 (24), 8186-8196 (2014).</li><li>Thakker-Varia, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+neuropeptide+VGF+is+reduced+in+human+bipolar+postmortem+brain+and+contributes+to+some+of+the+behavioral+and+molecular+effects+of+lithium.">The neuropeptide VGF is reduced in human bipolar postmortem brain and contributes to some of the behavioral and molecular effects of lithium.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 30 (28), 9368-9380 (2010).</li><li>Greferath, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enlarged+cholinergic+forebrain+neurons+and+improved+spatial+learning+in+p75+knockout+mice.">Enlarged cholinergic forebrain neurons and improved spatial learning in p75 knockout mice.</a> The European journal of neuroscience. 12 (3), 885-893 (2000).</li><li>Brashear, H. R., Zaborszky, L., Heimer, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+of+GABAergic+and+cholinergic+neurons+in+the+rat+diagonal+band.">Distribution of GABAergic and cholinergic neurons in the rat diagonal band.</a> Neuroscience. 17 (2), 439-451 (1986).</li><li>Clarke, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cholinergic+innervation+of+the+rat+dentate+gyrus:+an+immunocytochemical+and+electron+microscopical+study.">Cholinergic innervation of the rat dentate gyrus: an immunocytochemical and electron microscopical study.</a> Brain research. 360 (1-2), 349-354 (1985).</li><li>Garcia-Osta, A., Alberini, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amyloid+beta+mediates+memory+formation.">Amyloid beta mediates memory formation.</a> Learning &amp; memory. 16 (4), 267-272 (2009).</li></ol>

تعلن الكتاب أنه ليس لديهم المصالح المالية المتنافسة.

لتحقيق النجاح Aβ 1-42 حقن المجرب أو الجراح أن: 1) استخدام تقنية العقيم؛ 2) تحديد منطقة في الدماغ بشكل صحيح في المصالح مع إحداثيات دقيقة. 3) أن يكون قادرا على تأمين الماوس بشكل صحيح في إطار التجسيمي مع الدماغ وتعادل في محور AP وML؛ 4) لديها القدرة على تشغيل micromanipulator بدقة. 5) ضمان الرعاية المناسبة بعد العملية. إذا اتبعت هذه الخطوات الرئيسية الماوس يجب البقاء على قيد الحياة لعملية جراحية مع أي عدوى يمكن ملاحظتها. في اتفاق مع الدراسات في المختبر، نحن وغيرنا قد أظهرت أن Aβ 1-42 غرست مباشرة في قرن آمون يتسبب موت الخلايا العصبية 1،4،9،10، والتي تصور واحدة من السمات الرئيسية من AD. انحطاط هو واضح بشكل واضح في المناطق القريبة من موقع الحقن كما يتضح من انخفاض في حجم التلفيف المسنن أن يكمله الزيادات في علامات للانحطاط 1. وعلاوة على ذلك، رانه الكوليني الخلايا العصبية التي المشروع إلى الحصين يموت بطريقة الوراء كما يتضح من انخفاض في وضع العلامات الكوليني وزيادة في تلطيخ TUNEL إيجابية في BF 1،10. وبالتالي، ويقدم نموذجا في الجسم الحي نموذجا ممتازا للتحقيق في آثار شبه الحادة من Aβ 1-42 محليا. إن الميزة الأساسية لهذا النموذج الحقن هي طبيعته الحيوية: قد تكون مستهدفة أي منطقة في الدماغ، ويمكن استخدامه الحيوانات الذين تتراوح أعمارهم بين مختلف. وقد تم اختيار 9 أشهر ذكور الفئران القديمة في تجاربنا لأننا نؤمن زيادة مستويات Aβ 1-42 في الفئران الأكبر سنا أفضل يحاكي المرض الذي يحدث في كبار السن. وعلاوة على ذلك، ونحن نهدف إلى الحفاظ على هذه التجارب بما يتفق باستخدام الفئران من نفس الفئة العمرية. ومع ذلك، يمكن أن تستخدم الفئران في أي عمر للحقن. في الماضي كنا قد جربت على الفئران التي كانت 16 شهرا من العمر وغيرها قد استخدمت الفئران التي كانت 2 شهرا 9،10. ذكور الفئران يجب أن يستعمل فقط في الدراسات كما إناث الفئران المعرض ESTROومن المعروف جنرال تقلبات مستوى الاستروجين وأن يكون لها تأثيرات اعصاب 20. على الرغم من أن المركز العديد من الاهتمامات البحثية حول الآثار المرضية للAβ 1-42، وهناك أيضا أدلة على أن انخفاض أو الفسيولوجية مستويات Aβ 1-42 مطلوبة من أجل الوظائف الطبيعية للتعلم والذاكرة 21،22. في هذه الدراسات خفضت المحققين تركيز Aβ 1-42 حقن والتي غرست في الحصين 22،23، وكشف عن فعالية مثال آخر على الطبيعة الديناميكية لفائدة هذا النموذج. المركبات الأخرى التي تم غرست بنجاح stereotaxically تشمل المخدرات، والفيروسات، وسيرنا، والأجسام المضادة، والببتيدات 1،22-26 للتحقيق تأثيرات مختلفة تتراوح بين زنزانة الموت / البقاء على قيد الحياة لسلوك الحيوان. وبالتالي، هناك تطبيقات عديدة لاستخدام هذا التسريب النموذج. منهجية ضخ وصفها، في حين نستعرض مختلف الإمكانيات لفي الخامسايفو الدراسات التي تستخدم هذه التقنية، كما يأتي مع القيود المتأصلة. أولا، هذا النموذج يحاول فقط لإعادة إنتاج آثار Aβ 1-42 في منطقة الدماغ معزولة. ثانيا، تلف في موقع الحقن من إدخال إبرة في الدماغ. هذا يساهم في موت الخلايا إضافي ودباق. ولذلك، لابد من تحليل أداء بعيدا عن المسالك الحقن. مع السيطرة على السيارة المناسبة على الجانب المقابل من نفس الدماغ هذا لا ينبغي أن يكون مشكلة باعتبارها وسيلة حقن وAβ 1-42 الحلول انتشار الأنسجة المحيطة. ثالثا، لأن الخلايا العصبية BF الكوليني مشروع لقرن آمون، والأضرار المادية للحصين ويتضح من انهيار DG بواسطة إبرة (الشكل 1B) قد قتل عن غير قصد بعض BFCNs. لحسن الحظ، ودراسة الدوائر العصبية في المدى القصير - ضمن 1 أسبوع من ضخ احد بالرصاص - لا يشكل مشكلة منذ تشير البيانات المتوفرة لدينا أن زيادةالموت الكوليني في الدماغ الأمامي القاعدية هو نتيجة Aβ 1-42 وليس من صدمة الإبرة؛ توفر الحقن سيطرة التحليل المناسب. وتشير البيانات إلى أن انحطاط DG ضروري أيضا لفقدان الخلايا العصبية BF الكوليني كما تفقد هذه الخلايا العصبية أهداف متشابك بهم (الشكل 2B). للأسف، للحيوانات على قيد الحياة لتصل إلى 2 أسابيع يظهر حقن جانب السيارة الارتفاع الكبير الموت BFCN أكثر من 1 في الاسبوع بعد السيارة الحيوانات المحقونة الذي يظهر أن ذلك يعود في جزء منه إلى انحطاط وترقق التلفيف المسنن الناتجة عن الصدمات الجسدية لل إبرة. ولكن، حتى في هذه المرحلة تشير البيانات هناك ما هو أكثر بكثير الموت في المماثل BF إلى الموقع -injected Aβ 1-42. رابعا، تحديد الحدود التشريحية خفية قد يكون من الصعب تحقيقه. على سبيل المثال، الحد الفاصل بين الحاجز وسطي والفرقة قطري تم تحديدها استنادا إلى موقع الأماميالصوار، وهي تقنية التي تم وصفها سابقا 27. وعلاوة على ذلك، بسبب المماثل BF الإسقاط الخلايا العصبية كوليني - أساسا من الحاجز وسطي والطرف الرأسي للالفرقة قطري (MS / DB) - إلى التلفيف المسنن من الحصين 12،28،29 قررنا أن حقن نصف الكرة احدة مع Aβ 1-42 واستخدام نصف الكرة الآخر عن السيطرة للمقارنة. ومن المرجح أن يكون مصدر قلق لهذا النموذج سيكون التحديد السليم من الحدود التي تفصل بين اليسار واليمين MS / DB. في حين أن MS في منطقة خط الوسط، وقواعد بيانات أكثر الجانبية. لهذا العمل الحالي ونحن المنشور الأخير 1 استطعنا أن نميز بشكل مريح DB اليسار واليمين. لدينا الكمي يكشف الدردشة (+) الخلايا العصبية انخفاض بنحو 25٪ في DB في الجانب -injected Aβ 1-42. ومع ذلك، فإننا لم يكشف عن أي تغييرات كبيرة في الدردشة (+) الخلايا العصبية في MS 1. بسبب الموضع الأفقيأوجه من قواعد بيانات والتغيرات الملحوظة شعرنا أننا كنا مبرر لاستخدام السيارة وAβ 1-42 الحقن داخل نفس الحيوان. وعلاوة على ذلك، واختبار 2 ظروف تجريبية مختلفة داخل نفس الحيوان يزيد ليس فقط استخدام الحيوان ولكن أيضا يقلل التقلبات المحتملة حيوان إلى حيوان. في حين لدينا تصميم تجريبي يسمح لنا مقارنة نصفي الكرة اليمين واليسار فمن المتصور هذه التقنية مقارنة قد لا يكون ممكنا في الدراسات المستقبلية، أي إذا كان الحاجز وسطي هو المحور الرئيسي لهذه الدراسة. في مثل هذه الحالة كل حيوان سيكون لتكون بمثابة حالة تجريبية. وبالتالي، فإن استخدام الحيوانات هو في السلطة التقديرية للالمجربون. خامسا، يمكن استخدام النموذج الحالي لحقن أخرى للقراءة عموميات مثل هذا السلوك؟ كان هدفنا في توظيف Aβ 1-42 نموذج حقن الحالي لتقييم آثار عصبية مرضية من Aβ 1-42 في الجسم الحي وذلك لمقارنة في المختبر النتائج 1 </suP&gt;. تحقيقا لهذه الغاية، فإنه يخدم الغرض منه. AD هو المرض الذي يؤثر على وظائف الذاكرة والسلوك للفرد. وبالتالي، فمن الطبيعي أن نتساءل عما إذا كان النموذج الحالي يمكن أن تستخدم للدراسات السلوك. لتوسيع النموذج الحالي في دراسات السلوك المجربون سيكون لتوصيف نموذج أبعد من ذلك ويمكن أن يكون لضبط استراتيجية الحقن. على سبيل المثال، منذ لاحظنا DG انحطاط (الشكل 1B و2B) عندما نستهدف إبرة الحقن داخل أو بالقرب من DG في 7 أيام من تدمير DG قد تؤدي إلى الانحرافات السلوكية غير مقصودة. وبالتالي، إذا تتطلب دراسة تبحث في تأثير Aβ 1-42 على السلوك تعتمد على الحصين، ثم قد يكون الهدف الحقن لتعديل أوضاعها قرب الحصين وليس مباشرة في ذلك، وتسمح Aβ 1-42 لنزع فتيل في قرن آمون. ومع ذلك، فإن استخدام النموذج حقن الحالي لاختبار السلوك هو ممكن ولكن يتطلب المزيد من الاختباروسيتم تحديد استراتيجية التجريبية النهائية جي والتوصيف، وقبل المستخدم النهائي. ومن المثير للاهتمام، كانت هناك دراسات سلوك القوارض السابقة التي تنطوي على تسليم الخارجية من Aβ 1-42 مباشرة إلى الدماغ. 22،30 مجتمعة، تحتاج هذه القيود لأخذها في الاعتبار عند تصميم في الدراسات المجراة الماوس يعمل هذا النموذج. منذ يوجد نموذج ماوس واحدة في وجود يلتقط الآثار المرضية الكاملة للAD تقدم التجسيمي Aβ 1-42 تقنية ضخ المجربون ببديل في الجسم الحي Aβ نموذج 1-42 الماوس. عندما يؤديها الفرد المدربين تدريبا جيدا هذا النموذج هو الانسب للدراسات قصيرة المدى تركز على آثار Aβ 1-42 على منطقة محددة في الدماغ أو الدوائر.

الودائع ترسبات الأميلويد، التي تتكون من بيتا اميلويد (Aβ 1-42)، هي سمة رئيسية من أمراض الزهايمر (AD). وقد أظهرت العديد من الدراسات أن مستويات عالية أو سامة المؤتلف بلازميدة قليلة القسيمات Aβ 1-42 حصول وفاة الخلايا العصبية، ضمور متشابك، وفقدان وخلل وظيفي. فضلا عن التعلم والذاكرة العجز 1-4. وتشمل مناطق الدماغ أثرت على الحصين، القشرة، وهياكل تحت القشرية مثل الدماغ الأمامي القاعدية و5،6 اللوزة. حتى الآن، وهناك عدة نماذج الماوس المعدلة وراثيا التي تحاول محاكاة Aβ 1-42 أمراض AD. اعتمادا على سلالة هذه الحيوانات تثبت أن تكون مفيدة في دراسة الخصائص المرضية مختارة من AD. للأسف، مع استثناء من 2 خطوط المعدلة وراثيا، APP23 و5XFAD، هذه الفئران أبدا تكرار بالكامل فقدان الخلايا العصبية، جانبا رئيسيا من جوانب AD. حتى مع فقدان الخلايا العصبية التي لوحظت في APP23 و5XFAD، وobser موت الخلايا العصبيةكان فيد خفية، سن المعالين، ومعزولة لقلة مختارة المناطق 7،8. ضخ مباشر للبلازميدة قليلة القسيمات Aβ 1-42 في البرية من نوع مخ الفأر يوفر ممتازة في نموذج الجسم الحي الذي يعيد الجانب موت الخلايا العصبية من amyloidopathy 1،9،10. خلافا للنماذج الماوس المعدلة وراثيا المستخدمة عادة في بلازميدة قليلة القسيمات Aβ 1-42 نموذج ضخ مثالية لرفع مستويات حادة Aβ 1-42 بطريقة المكانية والزمانية. وميزة استخدام البرية من نوع الفئران لهذا النموذج يغني التعويض أو الآثار الجانبية المحتملة من الطفرات التي أدخلت في خطوط الماوس المعدلة وراثيا. وقد أظهرت دراسات سابقة أن غرس مستويات سامة من Aβ 1-42 في الحصين يتسبب موت الخلايا العصبية في المناطق القريبة من موقع الحقن ضمن 1 أسبوع 1. وعلاوة على ذلك، بما يتفق مع ملاحظة أن Aβ 1-42 سامة للخلايا العصبية الكوليني 11 الدماغ الأمامي القاعديةوانخفض الكوليني الخلايا العصبية (BFCN) السكان المشاريع التي لالحصين 20-50٪ في غضون 7-14 أيام التالية بيتا اميلويد ضخ 1،10 في الفئران، مما يسمح فعال للامتحانات من الدوائر العصبية معزولة في الدماغ. منذ مشروع BFCN ipsilaterally إلى التلفيف المسنن من الحصين 12، لمعظم تحكم جزء / مركبة وبلازميدة قليلة القسيمات Aβ 1-42 الحلول التي يمكن أن تحقن على جانبي الدماغ مما يتيح إجراء مقارنات بين اليسار واليمين نصفي الكرة الأرضية 1. في هذا التقرير سوف نقدم منهجية مفصلة الجراحية وحقن للبالغين من النوع البري C57BL / 6J الفئران. تم اختيار هذه السلالة الماوس بسبب استخدامها على نطاق واسع في مجال البحوث. من الناحية الفنية، يمكن استهداف أي منطقة في الدماغ للتسريب، ولكن هنا سوف نستخدم التلفيف المسنن من الحصين كهدف لتوضيح هذه التقنية.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Ketamine HCl (100mg/ml)</td>
			<td>Henry Schein Medical</td>
			<td>1049007</td>
			<td>100 mg ketamine per 1 kg animal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine (20mg/ml)</td>
			<td>Henry Schein Medical</td>
			<td>not available</td>
			<td>10 mg xylazine per 1 kg animal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenex (0.3mg/ml)</td>
			<td>Henry Schein Medical</td>
			<td>1217793</td>
			<td>0.1 mg buprenex per 1 kg animal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A&#946;1-42</td>
			<td>David Teplow/UCLA</td>
			<td>not available</td>
			<td>100 &#956;M; This amyloid was used in the paper</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A&#946;1-42</td>
			<td>Bachem</td>
			<td>H-1368</td>
			<td>Can be used in place of amyloid from the Teplow lab</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A&#946;1-42</td>
			<td>American Peptide</td>
			<td>62-0-80B</td>
			<td>Can be used in place of amyloid from the Teplow lab</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scrambled A&#946;1-42</td>
			<td>American Peptide</td>
			<td>62-0-46B</td>
			<td>Can be used as control peptide for comparing A&#946;1-42</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NU4 Antibody (Oligomeric Amyloid Antibody)</td>
			<td>Gift from William Klein/Northwestern U.</td>
			<td>not available</td>
			<td>1:2000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Amyloid Oligomeric Antibody&#160; (Polyclonal Rabbit)</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>AB9234</td>
			<td>May be used in place of Nu4; needs to&#160; be tested by the end user</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6E10 Antibody (Monoclonal Mouse) (Amyloid Antibody)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>sig-39320</td>
			<td>1:1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ChAT Antibody (Polyclonal Goat)</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>AB144P</td>
			<td>1:100 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DeadEnd Fluorometric TUNEL system</td>
			<td>Promega</td>
			<td>G3250</td>
			<td>Follow manufacturer&#39;s directions for use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prolong Gold Antifade Reagent with DAPI</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>P36935</td>
			<td>Use when coverslipping slides</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorogold</td>
			<td>Fluorochrome, LLC</td>
			<td>not available</td>
			<td>2% solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absolute Ethanol (200 proof)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP2818-4</td>
			<td>For making 70% ethanol for sanitizing and disinfecting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Novex 10-20% Tricine gel</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>EC6625BOX</td>
			<td>For separating A&#946;1-42</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Novex Tricine SDS Running Buffer (10X)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>LC1675</td>
			<td>For running 10-20% Tricine gels</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Novex Tris-Glycine Transfer Buffer (25X)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>LC3675</td>
			<td>For transferring 10-20% Tricine gels</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SuperSignal Western Blot Enhancer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>46640</td>
			<td>For enhancing A&#946;1-42 signal; follow manufacturer&#39;s protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protran BA79 Nitrocellulose Blotting Membrane, 0.1 &#956;m</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>10402088</td>
			<td>For transferring 10-20% Tricine gels</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xcell SureLock Mini-Cell</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>EI0001</td>
			<td>Electrophoresis aparatus for running 10-20% Tricine gels</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GenTeal Lubricant Eye Gel</td>
			<td>Novartis</td>
			<td>not available</td>
			<td>For keeping the mouse eyes moist during surgery; can be found in local pharmacy stores</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refresh Optive Lubricant Eye Drops</td>
			<td>Allergan</td>
			<td>not available</td>
			<td>For keeping the mouse eyes moist during surgery; can be found in local pharmacy stores; Can be used in place of GenTeal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>50998</td>
			<td>For sanitizing and disinfecting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round/Tapered Spatula&#160;</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82027-490</td>
			<td>For opening animal mouth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bulldog Serrefines Clamps (Jaw Dims. 9X1.6mm; Length 28mm)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18050-28</td>
			<td>Optional; For keeping scalp skin apart during injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight Fine Scissors (Cutting edge 25mm; Length 11.5cm)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14060-11</td>
			<td>For cutting scalp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>#3 Scalpel Handle</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10003-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>#11 Surgical Blade</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10011-00</td>
			<td>For making scalp incision</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Student Standard Pattern Forcep (Tip Dims. 2.5x1.5mm; Length 11.5cm)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>91100-12</td>
			<td>For holding scalp closed during suturing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trimmer Combo Kit</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>CL9990-1201</td>
			<td>For shaving hair</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T/Pump Warm Water Recirculator&#160;</td>
			<td>Kent Scientific&#160;</td>
			<td>TP-700</td>
			<td>For warming animal during surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Resusable Warmining Pad (5&#34; x 10&#34;)</td>
			<td>Kent Scientific&#160;</td>
			<td>TPZ-0510FEA</td>
			<td>For attaching it to the T/Pump warm water recirculator to warm the animal during surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cordless Micro Drill</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>58610</td>
			<td>Use 0.8mm steel burrs to drill holes in the skull</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Standard Stereotaxic Instrument with Mouse &#38; Neonatal Rat Adaptor</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>51615</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Just for Mouse Stereotaxic Instrument</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>51730</td>
			<td>Can use this in place of Stoelting Cat. #51615</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quintessential Stereotaxic Injector</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>53311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dry Glass Bead Sterilizer</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>50287</td>
			<td>For sterilizing stainless steel instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Surgical Drape (18&#34; x 26&#34;)</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>50981</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton Syringe 50 ml, Model 705 RN SYR, NDL</td>
			<td>Hamilton Company</td>
			<td>7637-01</td>
			<td>For brain injection; use different syringes for different solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>29 Gauge Needle, Small Hub RN NDL</td>
			<td>Hamilton Company</td>
			<td>7803-06</td>
			<td>For attaching to the Hamilton syringe for brain injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 ml BD Tuberculin Syringes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BD309659</td>
			<td>For administering anesthesia and saline</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 Gauge Needle (0.5&#34;)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BD305106</td>
			<td>For administering anesthesia and saline</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Portable Electronic CS Series Scale (Ohaus)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>65500-202</td>
			<td>For weighing animals to determine anesthesia dose</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot plate (Top Plate Dims. 7.25x7.25in)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>47751-148</td>
			<td>For warming animals post-surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sofsilk Silk Suture C-1 Cutting 3/8, 12 mm</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>S1173</td>
			<td>For closing wound</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vetbond Tissue Adhesive (3M)</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td>sc-361931</td>
			<td>Optional: for aiding in wound closure; Use with suture.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton-Tipped Wooden-Shaft Sterile Applicators</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>22-029-488</td>
			<td>For cleaning and drying surgical wound</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Superfrost Plus Microscope Slides</td>
			<td>Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>12-550-15</td>
			<td>For collecting brain sections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VWR Micro Cover Glass 24 X 50 mm</td>
			<td>VWR</td>
			<td>48393241</td>
			<td>For mounting microscope slides</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Scientific Nalgene Syringe Filter 0.2 &#956;m</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>194-2520</td>
			<td>For sterilizing saline solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile dual tip skin markers by Viscot Medical</td>
			<td>Medline</td>
			<td>VIS1422SRL91</td>
			<td>For marking coordinates on the skull</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

stereotaxic infusion of oligomeric amyloid-beta into the mouse hippocampus

مرض الزهايمر هو مرض الاعصاب التي تؤثر على شيخوخة السكان. وهناك ميزة عصبية مرضية الرئيسية لهذا المرض هو الإفراط في إنتاج اميلويد بيتا وترسب لويحات أميلويد بيتا في مناطق الدماغ للأفراد المصابين. على مر السنين العلماء قد ولدت العديد من نماذج الماوس مرض الزهايمر التي تحاول تكرار أمراض اميلويد بيتا. وللأسف، فإن نماذج الماوس فقط بشكل انتقائي تحاكي ملامح المرض. موت الخلايا العصبية، ولها تأثير بارز في أدمغة مرضى الزهايمر، تفتقر بشكل ملحوظ في هذه الفئران. وبالتالي، نحن وغيرنا قد استخدمت وسيلة لغرس مباشرة الأنواع القابلة للذوبان بلازميدة قليلة القسيمات من اميلويد بيتا - أشكال اميلويد بيتا التي ثبت أن يكون أكثر سمية للخلايا العصبية - stereotaxically في الدماغ. في هذا التقرير ونحن الاستفادة من الذكور C57BL / 6J الفئران لتوثيق هذه التقنية الجراحية لزيادة مستويات اميلويد بيتا في منطقة الدماغ محددة. الالهدف هو ضخ التلفيف المسنن من الحصين لهذا بنية الدماغ، جنبا إلى جنب مع الدماغ الأمامي القاعدية التي يتم توصيلها عن طريق الدائرة كوليني، يمثل واحدا من مجالات انحطاط في هذا المرض. نتائج رفع اميلويد بيتا في التلفيف المسنن عبر ضخ التجسيمي تكشف عن زيادة في فقدان الخلايا العصبية في التلفيف المسنن في حدود 1 في الاسبوع، في حين أن يصاحب ذلك زيادة في موت الخلايا وفقدان الخلايا العصبية كوليني في الطرف الرأسي للالفرقة قطري من بروكا من الدماغ الأمامي القاعدية. ولوحظت هذه التأثيرات لتصل إلى 2 أسابيع. وتشير البيانات المتوفرة لدينا أن اميلويد بيتا نموذج ضخ الحالي يوفر نموذج الفأر بديلة لمعالجة موت الخلايا العصبية منطقة محددة في فترة قصيرة. وميزة هذا النموذج هو أن اميلويد بيتا يمكن أن تكون مرتفعة بطريقة المكانية والزمانية.

المنهج الحالي لإعداد البشري المؤتلف بلازميدة قليلة القسيمات Aβ 1-42 غلة الأنواع بلازميدة قليلة القسيمات القابلة للذوبان التي تتكون من أحادية، dimers، trimers، وtetramers (الشكل 1A). هذه منخفضة الوزن الجزيئي Aβ 1-42 الأنواع، ولكن ليس الألياف واللوحات، وقد ثبت في العديد من الإعدادات ليكون أكثر سمية للخلايا العصبية 1،4،9،17-19. لتحديد ما إذا كان أو لم بلازميدة قليلة القسيمات Aβ 1-42 يؤدي الى موت الخلايا العصبية في مخ الفأر Aβ 1-42 (4 ميكرولتر من 100 ميكرومتر حل الأسهم) وغرست في المديرية العامة للالحصين في نصف الكرة الأرضية واحدة من 9 أشهر من العمر من النوع البري C57BL / 6J الفئران. ويقدر وزن الحصين لC57BL / 6J أن يكون حوالي 0.018 غرام، وبالتالي كان تسليم Aβ 1-42 حوالي 100 ميكروغرام / غرام. وقد أكسب هذا DG المقابل من نفس مخ الفأر مع حل التحكم / مركبة - الذي يتألف من حجم مساو من DMSO المستخدمة في حل Aβ 1-42 المخفف في (1X) PBS - للمقارنة. كما ذكر سابقا المجمعة أو عكس Aβ 1-42 الببتيد يمكن استخدامها في السيطرة للمقارنة نظرا لأننا في السابق لا توجد أي تأثير على الخلايا العصبية قرن آمون 1. كما إدخال الإبرة في الدماغ يخلق تلف الأنسجة المحلية (الشكل 1B) ويسبب انهيار DG في نهاية المطاف اخترنا لأداء بعد الحقن يحلل المتاخمة للمجرى حقن الأنسجة حيث لا تزال سليمة. ضمن 1 أسبوع من Aβ 1-42 حقن المدير العام أظهرت ارتفاع مستويات Aβ 1-42 في طبقة الجزيئية وطبقة الخلايا متعددة الأشكال في محيط موقع الحقن (الشكل 2A). في 7 و 14 أيام أثارت Aβ 1-42 الزيادات في TUNEL إيجابية تلطيخ والنقصان في DG سمك، مؤكدا آثار العصبية من Aβ 1-42 (الشكل 2B). لأن الخلايا العصبية BF الكوليني المشروع إلى DGمن الحصين نحن مصممون المقبل اذا فقدان الخلايا العصبية في DG مشغلات انحطاط BF. لهذه الدراسة كان التتبع fluorogold الوراء (2٪ تعليق) شارك في حقن جنبا إلى جنب مع Aβ 1-42 في DG. 7 أيام بعد الحقن fluorogold تم الكشف في BF (الشكل 2C) مما يشير إلى النقل إلى الوراء التسمية عن طريق الخلايا العصبية كوليني. لذلك، لغرض التحديد الكمي في BF اخترنا الخلايا العصبية fluorogold إيجابية لأن هذا يدل على أن محطات العصبية تعرضوا لAβ 1-42 في DG. في كلا 1 و 2 أسابيع التالية DG Aβ 1-42 التسريب، نواة الفرقة قطري - منطقة فرعية من BF حيث تتوقع الخلايا العصبية كوليني إلى DG - المماثل إلى موقع -injected Aβ 1-42 أظهرت زيادة في النفق تلطيخ والنقصان في الخلايا العصبية كوليني (الشكل 2D). فقدان الخلايا العصبية التي لوحظت في BF تؤكد دراسات سابقة تربط مدمرةآثار Aβ 1-42 إلى BF الحصين مسار 1،10. ومن المهم أيضا أن نلاحظ أن من المقارنة من نقطة زمنية 2 أسبوع إلى 1 في الاسبوع نقطة زمنية على جانب نواة الفرقة قطري حيث تم حقن محلول التحكم / مركبة في DG كانت هناك زيادات أخرى في النفق تلطيخ و انخفاض في الخلايا العصبية كوليني (الشكل 2D، الجدول). هذه النتائج تعكس انخفاض كبير في سمك GCL والزيادات في وضع العلامات TUNEL إيجابية (الشكل 2B، الجدول) في DG الجانب السيارة حقن مقارنة بين آخر 2 نقطة زمنية حقن، مما يعني أن الصدمات الجسدية الناجمة عن إبرة تساهم في انحطاط مع مرور الوقت. حتى مع هذه الآثار الجانبية غير المرغوب فيها من الإبرة، والآثار العصبية من Aβ 1-42 لا تزال أكبر بكثير من تلك التي حل التحكم / مركبة (الشكل 2D). معا، ونموذج ضخ بفعاليه الحاليذ يستنسخ الآثار السامة للAβ 1-42 في مخ الفأر في غضون 7 ايام جعل هذا نموذجا جذابا لدراسة على المدى القصير Aβ 1-42 التحفيز. <img alt="الشكل 1" src="/files/ftp_upload/52805/52805fig1.jpg" /> تم فصل الشكل 1. بلازميدة قليلة القسيمات Aβ 1-42 إعداد ومخ الفأر حقن الجهاز التصور. (A) 2 ميكرومتر بلازميدة قليلة القسيمات Aβ 1-42 على 10-20٪ هلام tricine ونقل على غشاء النيتروسليلوز. وقد نشف الغشاء مع Aβ 1-42 الأجسام المضادة 6E10 (1: 1000). (B) Aβ 1-42 وقد أكسب (4 ميكرولتر من 100 ميكرومتر الحل) أو التحكم / مركبة في اليسار واليمين المدراء العامين للقرن آمون، على التوالي، من 9 أشهر من العمر C57BL / 6J الفئران. وقد نجا الفئران لمدة 7 أيام. تم مقطوع العقول متسلسل في 20 ميكرون في القسم. كانت ملطخة أقسام الحصين للدابي. علامات التجزئة تصورالجهاز الحقن. الأسهم تظهر انهار DG. ويمثل الشريط على نطاق 200 ميكرون. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52805/52805fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.</a> <img alt="الرقم 2" src="/files/ftp_upload/52805/52805fig2.jpg" /> الشكل 2. بلازميدة قليلة القسيمات Aβ 1-42 يؤدي الى موت الخلايا العصبية في DG وBF. التحكم / مركبة أو AΒ 1-42 وقد أكسب (4 ميكرولتر من 100 ميكرومتر الحل) إلى اليسار واليمين المدراء العامين للقرن آمون، على التوالي، من 9 الشهر القديمة C57BL / 6J الفئران. وقد نجا الفئران إما 7 أو 14 أيام. تم مقطوع العقول متسلسل في 20 ميكرون في القسم. (A) 7 آخر أيام أقسام حقن الحصين الملون لAβ 1-42 (NU4 الأجسام المضادة، 1: 2000). ML، طبقة الجزيئية. GCL، طبقة الخلايا العقدية. PCL، طبقة الخلايا متعددة الأشكال. ويمثل الشريط على نطاق و50 ميكرون. (B </strأونج&gt;) 7 أو 14 أيام وظيفة في أقسام الحصين حقن الملون للدابي أو النفق. * P &lt;0.05 مقارنة مع 1 أسبوع. *** P &lt;0.001 مقارنة ب 1 أسبوع. * P &lt;0.05 بالمقارنة مع السيارة. ** ف &lt;0.01 مقارنة مع السيارة. ويمثل الشريط على نطاق و50 ميكرون. (ن = 5 الفئران) (C) سيارة أو Aβ 1-42 شارك حقن مع fluorogold (حل 2٪). وضع العلامات Fluorogold تتحدد في BF 7 أيام بعد الحقن. وقد تم اختيار الشرائح التي تحتوي على BF عشوائيا. تم استخدام العلامات Fluorogold لتحديد المنطقة ذات الاهتمام. مرة واحدة وقد تم تحديد المنطقة ذات الاهتمام استخدمت شرائح المخ المجاورة وصمة عار للعلامات من الفائدة. والأشكال هي المناطق التي يتم اختيار الصور في (D). ويمثل الشريط على نطاق 200 ميكرون. (D) 7 أو 14 أيام وظيفة في أقسام BF حقن الملون للدردشة (1: 100، بولكلونل الماعز) أو النفق. *** P &lt;0.001 مقارنة ب 1 أسبوع. * P &lt;0.05 بالمقارنة مع السيارة. وقد تم تقدير على المنطقة بأسرهامن الفائدة. ويرسم الحدود بين الحاجز وسطي والفرقة قطري استنادا إلى موقع الصوار الأمامي. يمثل شريط مقياس 100 ميكرون. (ن = 5 الفئران). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52805/52805fig2large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Stereotaxic Infusion of Oligomeric Amyloid-beta into the Mouse Hippocampus at JoVE.com

Stereotaxic Infusion of Oligomeric Amyloid-beta into the Mouse Hippocampus

Here, we present a protocol for direct stereotaxic brain infusion of amyloid-beta. This methodology provides an alternative in vivo mouse model to address the short-term effects of amyloid-beta on brain neurons.

تسريب التجسيمي من بلازميدة قليلة القسيمات اميلويد بيتا في الحصين ماوس

Alzheimer&#8217;s disease is a neurodegenerative disease affecting the aging population. A key neuropathological feature of the disease is the ...

stereotaxic-infusion-oligomeric-amyloid-beta-into-mouse

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Neuroscience

18.1K Views.  Columbia University Medical Center. Here, we present a protocol for direct stereotaxic brain infusion of amyloid-beta. This methodology provides an alternative in vivo mouse model to address the short-term effects of amyloid-beta on brain neurons.

Video: Stereotaxic Infusion of Oligomeric Amyloid-beta into the Mouse Hippocampus

Ultrasound-Guided Microinjection into the Mouse Forebrain In Utero at E9.5

In utero survival surgery in mice permits the molecular manipulation of gene expression during development. However, because the uterine wall is opaque during early embryogenesis, the ability to target specific parts of the embryo for microinjection is greatly limited. Fortunately, high-frequency ultrasound imaging permits the generation of images that can be used in real time to guide a microinjection needle into the embryonic region of interest. Here we describe the use of such imaging to guide the injection of retroviral vectors into the ventricular system of the mouse forebrain at embryonic day (E) 9.5. This method uses a laparotomy to permit access to the uterine horns, and a specially designed plate that permits host embryos to be bathed in saline while they are imaged and injected. Successful surgeries often result in most or all of the injected embryos surviving to any subsequent time point of interest (embryonically or postnatally). The principles described here can be used with slight modifications to perform injections into the amnionic fluid of E8.5 embryos (thereby permitting infection along the anterior posterior extent of the neural tube, which has not yet closed), or into the ventricular system of the brain at E10.5/11.5. Furthermore, at mid-neurogenic ages (~E13.5), ultrasound imaging can be used direct injection into specific brain regions for viral infection or cell transplantation. The use of ultrasound imaging to guide in utero injections in mice is a very powerful technique that permits the molecular and cellular manipulation of mouse embryos in ways that would otherwise be exceptionally difficult if not impossible.

Ultrasound-Guided Microinjection into the Mouse Forebrain In Utero at E9.5

In utero survival surgery in mice permits the molecular manipulation of gene expression during development. Here we describe the use of high-frequency ultrasound imaging to guide the injection of retroviral vectors into the mouse brain at embryonic day (E) 9.5.

الموجات فوق الصوتية ، إذ تسترشد Microinjection في الدماغ المقدم ماوس في الرحم في E9.5

In utero survival surgery in mice permits the molecular manipulation of gene expression during development.  However, because the uterine wall is opaque ...

Stereotaxic Surgery for Excitotoxic Lesion of Specific Brain Areas in the Adult Rat

Many behavioral functions in mammals, including rodents and humans, are mediated principally by discrete brain regions. A common method for discerning the function of various brain regions for behavior or other experimental outcomes is to implement a localized ablation of function. In humans, patient populations with localized brain lesions are often studied for deficits, in hopes of revealing the underlying function of the damaged area. In rodents, one can experimentally induce lesions of specific brain regions.
Lesion can be accomplished in several ways. Electrolytic lesions can cause localized damage but will damage a variety of cell types as well as traversing fibers from other brain regions that happen to be near the lesion site. Inducible genetic techniques using cell-type specific promoters may also enable site-specific targeting. These techniques are complex and not always practical depending on the target brain area. Excitotoxic lesion using stereotaxic surgery, by contrast, is one of the most reliable and practical methods of lesioning excitatory neurons without damaging local glial cells or traversing fibers.
Here, we present a protocol for stereotaxic infusion of the excitotoxin, N-methyl-D-aspartate (NMDA), into the basolateral amygdala complex. Using anatomical indications, we apply stereotaxic coordinates to determine the location of our target brain region and lower an injection needle in place just above the target. We then infuse our excitotoxin into the brain, resulting in excitotoxic death of nearby neurons. While our experimental subject of choice is a rat, the same methods can be applied to other mammals, with the appropriate adjustments in equipment and coordinates.
This method can be used on a variety of brain regions, including the basolateral amygdala1-6, other amygdala nuclei6, 7, hippocampus8, entorhinal cortex9 and prefrontal cortex10. It can also be used to infuse biological compounds such as viral vectors1, 11. The basic stereotaxic technique could also be adapted for implantation of more permanent osmotic pumps, allowing more prolonged exposure to a compound of interest.

Targeted ablation of specific brain region(s) by infusion of an excitotoxin using stereotaxic coordinates is described. This technique could also be adapted for infusion of other chemicals into the rat brain.

التجسيمي جراحة الآفات Excitotoxic من مناطق محددة في الدماغ في الجرذ الكبار

Many behavioral functions in mammals, including rodents and humans, are mediated principally by discrete brain regions. A common method for discerning the ...

Visualization and Genetic Manipulation of Dendrites and Spines in the Mouse Cerebral Cortex and Hippocampus using In utero Electroporation

In utero electroporation (IUE) has become a powerful technique to study the development of different regions of the embryonic nervous system 1-5. To date this tool has been widely used to study the regulation of cellular proliferation, differentiation and neuronal migration especially in the developing cerebral cortex 6-8. Here we detail our protocol to electroporate in utero the cerebral cortex and the hippocampus and provide evidence that this approach can be used to study dendrites and spines in these two cerebral regions.
Visualization and manipulation of neurons in primary cultures have contributed to a better understanding of the processes involved in dendrite, spine and synapse development. However neurons growing in vitro are not exposed to all the physiological cues that can affect dendrite and/or spine formation and maintenance during normal development. Our knowledge of dendrite and spine structures in vivo in wild-type or mutant mice comes mostly from observations using the Golgi-Cox method 9. However, Golgi staining is considered to be unpredictable. Indeed, groups of nerve cells and fiber tracts are labeled randomly, with particular areas often appearing completely stained while adjacent areas are devoid of staining. Recent studies have shown that IUE of fluorescent constructs represents an attractive alternative method to study dendrites, spines as well as synapses in mutant / wild-type mice 10-11 (Figure 1A). Moreover in comparison to the generation of mouse knockouts, IUE represents a rapid approach to perform gain and loss of function studies in specific population of cells during a specific time window. In addition, IUE has been successfully used with inducible gene expression or inducible RNAi approaches to refine the temporal control over the expression of a gene or shRNA 12. These advantages of IUE have thus opened new dimensions to study the effect of gene expression/suppression on dendrites and spines not only in specific cerebral structures (Figure 1B) but also at a specific time point of development (Figure 1C).
Finally, IUE provides a useful tool to identify functional interactions between genes involved in dendrite, spine and/or synapse development. Indeed, in contrast to other gene transfer methods such as virus, it is straightforward to combine multiple RNAi or transgenes in the same population of cells. 
In summary, IUE is a powerful method that has already contributed to the characterization of molecular mechanisms underlying brain function and disease and it should also be useful in the study of dendrites and spines.

Visualization and Genetic Manipulation of Dendrites and Spines in the Mouse Cerebral Cortex and Hippocampus using In utero Electroporation

This article describes in detail a protocol to electroporate in utero the cerebral cortex and the hippocampus at E14.5 in mice. We also show that this is a valuable method to study dendrites and spines in these two cerebral regions.

التصور والتلاعب الجيني من التشعبات والاعمده الفقريه في قشرة الدماغ والحصين ماوس باستخدام<em&gt; في الرحم</em&gt; Electroporation

In utero electroporation (IUE) has become a powerful technique to study the development of different regions of the embryonic nervous system 1-5. To date ...

Stereotaxic Injection of a Viral Vector for Conditional Gene Manipulation in the Mouse Spinal Cord

Intraparenchymal injection of a viral vector enables conditional gene manipulation in distinct populations of neurons or particular regions of the central nervous system. We demonstrate a stereotaxic injection technique that allows targeted gene expression or silencing in the dorsal horn of the mouse spinal cord. The surgical procedure is brief. It requires laminectomy of a single vertebra, providing for quick recovery of the animal and unimpaired motility of the spine. Controlled injection of a small vector suspension volume at low speed and use of a microsyringe with beveled glass cannula minimize the tissue lesion. The local immune response to the vector depends on the intrinsic properties of the virus employed; in our experience, it is minor and short-lived when a recombinant adeno-associated virus is used. A reporter gene such as enhanced green fluorescent protein facilitates monitoring spatial distribution of the vector, and the efficacy and cellular specificity of the transfection.

Viral vectors allow for targeted gene manipulation. We demonstrate a method for conditional gene expression or ablation in the mouse spinal cord, using stereotaxic injection of a viral vector into the dorsal horn, a prominent site of synaptic contact between primary somatosensory afferents and neurons of the central nervous system.

التجسيمي حقن ناقل للتلاعب الجيني الفيروسي شرطي في الحبل الشوكي ماوس

Intraparenchymal injection of a viral vector enables conditional gene manipulation in distinct populations of neurons or particular regions of the central ...

Building An Open-source Robotic Stereotaxic Instrument

This protocol includes the designs and software necessary to upgrade an existing stereotaxic instrument to a robotic (CNC) stereotaxic instrument for around $1,000 (excluding a drill), using industry standard stepper motors and CNC controlling software. Each axis has variable speed control and may be operated simultaneously or independently. The robot&#39;s flexibility and open coding system (g-code) make it capable of performing custom tasks that are not supported by commercial systems. Its applications include, but are not limited to, drilling holes, sharp edge craniotomies, skull thinning, and lowering electrodes or cannula. In order to expedite the writing of g-coding for simple surgeries, we have developed custom scripts that allow individuals to design a surgery with no knowledge of programming. However, for users to get the most out of the motorized stereotax, it would be beneficial to be knowledgeable in mathematical programming and G-Coding (simple programming for CNC machining).
The recommended drill speed is greater than 40,000 rpm. The stepper motor resolution is 1.8&#176;/Step, geared to 0.346&#176;/Step. A standard stereotax has a resolution of 2.88 &#956;m/step. The maximum recommended cutting speed is 500 &#956;m/sec. The maximum recommended jogging speed is 3,500 &#956;m/sec. The maximum recommended drill bit size is HP 2.

This protocol includes the designs and software necessary to upgrade an existing stereotaxic instrument to a robotic (computer numeric controlled; CNC) stereotaxic instrument for around $1,000 (excluding a drill).

بناء مفتوح المصدر الروبوتية التجسيمي الصك

This protocol includes the designs and software necessary to upgrade an existing stereotaxic instrument to a robotic (CNC) stereotaxic instrument for ...

Mouse Microsurgery Infusion Technique for Targeted Substance Delivery into the CNS via the Internal Carotid Artery

Animal models of central nervous system (CNS) diseases and, consequently, blood-brain barrier disruption diseases, require the delivery of exogenous substances into the brain. These exogenous substances may induce injurious impact or constitute therapeutic strategy. The most common delivery methods of exogenous substances into the brain are based on systemic deliveries, such as subcutaneous or intravenous routes. Although commonly used, these approaches have several limitations, including low delivery efficacy into the brain. In contrast, surgical methods that locally deliver substances into the CNS are more specific and prevent the uptake of the exogenous substances by other organs. Several surgical methods for CNS delivery are available; however, they tend to be very traumatic. Here, we describe a mouse infusion microsurgery technique, which effectively delivers substances into the brain via the internal carotid artery, with minimal trauma and no interference with normal CNS functionality.

Mouse Microsurgery Infusion Technique for Targeted Substance Delivery into the CNS via the Internal Carotid Artery

The present protocol describes a mouse microsurgery infusion technique, which effectively delivers substances directly into the brain via the internal carotid artery.

الماوس المجهرية تسريب تقنية لالمستهدفة المواد تسليم في الجهاز العصبي المركزي<i&gt; عبر</i&gt; في الشريان السباتي الداخلي

Animal models of central nervous system (CNS) diseases and, consequently, blood-brain barrier disruption diseases, require the delivery of exogenous ...

Stereotaxic Surgery for Genetic Manipulation in Striatal Cells of Neonatal Mouse Brains

Many genes are expressed in embryonic brains, and some of them are continuously expressed in the brain after birth. For such persistently expressed genes, they may function to regulate the developmental process and/or physiological function in neonatal brains. To investigate neurobiological functions of specific genes in the brain, it is essential to inactivate genes in the brain. Here, we describe a simple stereotaxic method to inactivate gene expression in the striatum of transgenic mice at neonatal time windows. AAV-eGFP-Cre viruses were microinjected into the striatum of Ai14 reporter gene mice at postnatal day (P) 2 by stereotaxic brain surgery. The tdTomato reporter gene expression was detected in P14 striatum, suggesting a successful Cre-loxP mediated DNA recombination in AAV-transduced striatal cells. We further validated this technique by microinjecting AAV-eGFP-Cre viruses into P2Foxp2fl/fl mice. Double labeling of GFP and Foxp2 showed that GFP-positive cells lacked Foxp2 immunoreactivity in P9 striatum, suggesting the loss of Foxp2 protein in AAV-eGFP-Cre transduced striatal cells. Taken together, these results demonstrate an effective genetic deletion by stereotaxically microinjected AAV-eGFP-Cre viruses in specific neuronal populations in the neonatal brains of floxed transgenic mice. In conclusion, our stereotaxic technique provides an easy and simple platform for genetic manipulation in neonatal mouse brains. The technique can not only be used to delete genes in specific regions of neonatal brains, but it also can be used to inject pharmacological drugs, neuronal tracers, genetically modified optogenetics and chemogenetics proteins, neuronal activity indicators and other reagents into the striatum of neonatal mouse brains.

We describe a protocol of stereotaxic surgery with a homemade head-fixed device for microinjecting reagents into the striatum of neonatal mouse brains. This technique allows genetic manipulation in neuronal cells of specific regions of neonatal mouse brains.

جراحة ستيريوتاكسيك للتلاعب بالجينات في خلايا أدمغة الفأر الولدان سترياتال

Many genes are expressed in embryonic brains, and some of them are continuously expressed in the brain after birth. For such persistently expressed genes, ...

Recording Spatially Restricted Oscillations in the Hippocampus of Behaving Mice

The local field potential (LFP) emerges from ion movements across neural membranes. Since the voltage recorded by LFP electrodes reflects the summed electrical field of a large volume of brain tissue, extracting information about local activity is challenging. Studying neuronal microcircuits, however, requires a reliable distinction between truly local events and volume-conducted signals originating in distant brain areas. Current source density (CSD) analysis offers a solution for this problem by providing information about current sinks and sources in the vicinity of the electrodes. In brain areas with laminar cytoarchitecture such as the hippocampus, one-dimensional CSD can be obtained by estimating the second spatial derivative of the LFP. Here, we describe a method to record multilaminar LFPs using linear silicon probes implanted into the dorsal hippocampus. CSD traces are computed along individual shanks of the probe. This protocol thus describes a procedure to resolve spatially restricted neuronal network oscillations in the hippocampus of freely moving mice.

This protocol describes the recording of local field potentials with multi-shank linear silicon probes. Conversion of the signals using current source density analysis allows the reconstruction of local electrical activity in the mouse hippocampus. With this technique, spatially restricted brain oscillations can be studied in freely moving mice.

تسجيل مكانياً مقيد التذبذبات في قرن آمون التصرف الفئران

The local field potential (LFP) emerges from ion movements across neural membranes. Since the voltage recorded by LFP electrodes reflects the summed ...

Transplantation of Chemogenetically Engineered Cortical Interneuron Progenitors into Early Postnatal Mouse Brains

Neuronal development is regulated by a complex combination of environmental and genetic factors. Assessing the relative contribution of each component is a complicated task, which is particularly difficult in regards to the development of &#947;-aminobutyric acid (GABA)ergic cortical interneurons (CIs). CIs are the main inhibitory neurons in the cerebral cortex, and they play key roles in neuronal networks, by regulating both the activity of individual pyramidal neurons, as well as the oscillatory behavior of neuronal ensembles. They are generated in transient embryonic structures (medial and caudal ganglionic eminences -&#160;MGE and CGE) that are very difficult to efficiently target using in utero electroporation approaches. Interneuron progenitors migrate long distances during normal embryonic development, before they integrate in the cortical circuit. This remarkable ability to disperse and integrate into a developing network can be hijacked by transplanting embryonic interneuron precursors into early post-natal host cortices. Here, we present a protocol that allows genetic modification of embryonic interneuron progenitors using focal ex vivo electroporation. These engineered interneuron precursors are then transplanted into early post-natal host cortices, where they will mature into easily identifiable CIs. This protocol allows the use of multiple genetically encoded tools, or the ability to regulate the expression of specific genes in interneuron progenitors, in order to investigate the impact of either genetic or environmental variables on the maturation and integration of CIs.

Here we present a protocol, designed to use chemogenetic tools to manipulate the activity of cortical interneuron progenitors transplanted into the cortex of early postnatal mice.

زرع الذرية القشرية الهندسية كيميائياً في عقول الفئران المبكرة بعد الولادة

Neuronal development is regulated by a complex combination of environmental and genetic factors. Assessing the relative contribution of each component is ...

Stereotaxic Surgery for Implantation of Microelectrode Arrays in the Common Marmoset (Callithrix jacchus)

Marmosets (Callithrix jacchus) are small non-human primates that are gaining popularity in biomedical and preclinical research, including the neurosciences. Phylogenetically, these animals are much closer to humans than rodents. They also display complex behaviors, including a wide range of vocalizations and social interactions. Here, an effective stereotaxic neurosurgical procedure for implantation of recording electrode arrays in the common marmoset is described. This protocol also details the pre- and postoperative steps of animal care that are required to successfully perform such a surgery. Finally, this protocol shows an example of local field potential and spike activity recordings in a freely behaving marmoset 1 week after the surgical procedure. Overall, this method provides an opportunity to study the brain function in awake and freely behaving marmosets. The same protocol can be readily used by researchers working with other small primates. In addition, it can be easily modified to allow other studies requiring implants, such as stimulating electrodes, microinjections, implantation of optrodes or guide cannulas, or ablation of discrete tissue regions.

Stereotaxic Surgery for Implantation of Microelectrode Arrays in the Common Marmoset Callithrix jacchus

This work presents a protocol to perform a stereotaxic, neurosurgical implantation of&#160;microelectrode arrays in the common marmoset. This method specifically enables electrophysiological recordings in freely behaving animals but can be easily adapted to any other similar neurosurgical intervention in this species (e.g., cannula for drug administration or electrodes for brain stimulation).

تسريب التجسيمي من بلازميدة قليلة القسيمات اميلويد بيتا في الحصين ماوس

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video