وأيد هذا العمل من قبل المعهد الوطني للاضطرابات العصبية والسكتة الدماغية منح NS081333 (لCMT)، الزهايمر منحة جمعية NIRG-10-171721 والمعهد الوطني للصحة النفسية منحة MH096702 (لUH)، والمعهد الوطني لبحوث الشيخوخة الممولة من مرض الزهايمر مركز جامعة كولومبيا AG008702 منح الطيار (لYYJ وJB).

ملاحظة: لجميع التجارب على الحيوانات، تم اتباع المؤسسية والمبادئ التوجيهية الوطنية لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية. 1. إعداد أدوات وحلول جراحية لجراحة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الأوتوكلاف جميع الأدوات الجراحية الفولاذ المقاوم للصدأ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد 70٪ من الإيثانول عن طريق تمييع 200 دليل الايثانول المطلق مع الصف الجزيئية منزوع الأيونات الماء المعقم المقطر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إرفاق G إبرة 29 إلى حقنة هاملتون. تنظيف المناطق الداخلية من هاميلتون المحاقن والإبر عن طريق وضع والمياه إخراج nanopure مرارا وتكرارا لمدة 1 دقيقة. كرر هذا الإجراء مع 70٪ من الإيثانول. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة المكبس وإبرة من حقنة هاملتون. الهواء الجاف الأجزاء في تدفق الصفحي هود O / N. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أشرق في الإبر والمحاقن مع ضوء الأشعة فوق البنفسجية لمدة 30 دقيقة قبل الاستخدام. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد محلول ملحي عن طريق إذابة كلوريد الصوديوم في الماء الصف الجزيئية إلى الوزن النهائي لتركيز حجم 0.9٪. تعقيم المنتجات السازي الحل من خلال تصفية من خلال 0.2 ميكرون فلتر المسام. </li></ol> 2. إعداد بلازميدة قليلة القسيمات Aβ 1-42 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Monomerize و resuspend المؤتلف الإنسان Aβ 1-42 في DMSO إلى 5 ملي بالضبط كما هو موضح في نشر فا &quot;وغيرهم (13). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تمييع 5 ملي Aβ 1-42 مع معقم (1X) PBS إلى 100 ​​ميكرومتر في اليوم قبل الجراحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مزيج الحل بشكل جيد من قبل سحن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان Aβ 1-42 حل لمدة 12 ساعة على 4C. ملاحظة: الحلول تحكم مثل تمييع DMSO في برنامج تلفزيوني أو مشوشة / عكس ينبغي إعداد Aβ 1-42 الببتيد بنفس طريقة Aβ 1-42. </li></ol> 3. تحديد الاحداثيات حقن <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام الكبار أطلس مخ الفأر لتحديد بالضبط الأمامي الخلفي (AP)، وسطي الاطراف (ML)، وظهري بطني (DV) الإحداثيات للمنطقة الدماغ التي تهم 14. لاالشركة المصرية للاتصالات: لتوضيح تقنية اخترنا التلفيف المسنن من الحصين كهدف مع الإحداثيات التالية من bregma: AP، -2.00 مم؛ ML، ± 1.3 مم؛ DV، -2.2 مم. الإشارة السلبية التي سبقت قيمة AP يدل على أنه 2،00 ملم الخلفي من bregma. علامة ± السابقة قيمة ML يشير الاتجاه الأيمن والأيسر من وسط المدينة. وأخيرا، فإن الإشارة السلبية التي سبقت DV تشير الى انها تتحرك من الناحية البطنية من سطح الدماغ. </li></ol> 4. إعداد الإطار التجسيمي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ارتداء قناع جراحي الوجه، ومعطف مختبر نظيفة، والقفازات الجراحية المعقمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مسح أسفل أداة التجسيمي ومحول الفأر مع الايثانول 70٪. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الستارة الجراحية المعقمة على العداد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع أداة التجسيمي مع محول الماوس على الجزء العلوي من الستارة الجراحية المعقمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مسح لوحة الماوس التدفئة مع 70٪ من الإيثانول. وضع وسادة التدفئة على السرير إطار التجسيمي. استخدام مختبر للأغراض العامةحزب المحافظين الشريط وضع العلامات على الشريط أسفل وسادة التدفئة على السرير محول الماوس. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إرفاق سادة التدفئة إلى الحارة مضخة recirculator المياه وفقا لتوجيهات المصنع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدوره على مضخة الحارة recirculator المياه وضبط درجة الحرارة إلى 37 درجة مئوية، ثم انتظر حتى تصل درجة الحرارة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يلصق 50 ميكرولتر هاميلتون المحاقن مع إبرة 29 G على الإطار التجسيمي قبل الشد وضعها على الآلية الرأسي رمح الحقن وفقا لتوجيهات المصنع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشغيل جهاز التعقيم حبة وانتظر حتى تصل درجة الحرارة مسبقا الشركة المصنعة. ملاحظة: يستخدم هذا لتعقيم الأدوات الفولاذ المقاوم للصدأ بين الحيوانات. يستغرق أدوات و 20 ثانية من الاتصال مع حبات لتعقيم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدوره على طبق ساخن وتعيينها إلى 42 درجة مئوية، ووضع قفص فارغ نظيفة فوق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بينما يتم إصلاح حقنة هاميلتون على الإطار التجسيمي استخدام التجسيمي ط بمحركاتnjector لوضع Aβ 1-42 حل. ملاحظة: رسم ما يزيد على 4 ميكرولتر من الحل في حقنة ثم استخدام محقن التجسيمي لضبط حجم عن طريق الحقن. تشغيل حاقن وفقا لتعليمات الشركة الصانعة. </li></ol> 5. إعداد الحيوان <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحديد وزن الماوس باستخدام تزن الحجم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الفأر مع الكيتامين / زيلازين الكوكتيل في 100 ملغم / كغم من الكيتامين و 10 ملغ / كغ زيلازين عن طريق حقن داخل الصفاق (IP). رصد عمق التخدير عن فقدان قرصة أخمص قدميه لا ارادي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد مخدرا الماوس اتخاذ قص الشعر وحلاقة رأسه لفضح الجلد فوق الجمجمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع الماوس على رأس وسادة التدفئة على رأس السرير التجسيمي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام ملعقة لفتح الفم ووضع القواطع داخل الحرس الأسنان. تأمين الأنفية على وجه الماوس. تضييق عليه بلطف وليس ضيق جدا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> POSIنشوئها والعارضتين الأذن الثنائية إلى الصماخ السمعي لتأمين الرأس. نقل كل العارضة في حين كان يضرب الجمجمة، ثم تتحول المسمار لقفله. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> للتأكد من تأمين رأس استخدام السبابة لدفع برفق على رأسه. إذا تم تأمين رأس صحيح أنها لن نعطيه أو تحرك عند الضغط عليه. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تطبيق قطرة من كريم العين أو قطرة العين للعين للحفاظ عليها رطبة. تأكد من أن العيون هي رطبة طوال العملية الجراحية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتطهير الموقع الجراحي استخدام قطعة قطن معقمة لتطبيق حل betadine إلى الجلد فوق الجمجمة، تليها 70٪ من الإيثانول. أداء betadine بالتناوب و 70٪ من الإيثانول تنظيف 2 مرات أكثر. </li></ol> 6. جراحة والتسريب <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام مشرط لجعل 2-3 ملم شق في خط الوسط من فروة الرأس، ومن ثم استخدام مقص غرامة على التوالي لتمديد خط شق إلى 1،0-1،5 سم لفضح الدرز السهمي، bregma، وامدا من الجمجمة أو المعالمالصورة التي تقوم إحداثيات التجسيمي جرا. استخدام المشابك الصغيرة للحفاظ على بشرة على حدة. ملاحظة: يتم شرح مواقف bregma وامدا في الماوس أطلس المخ &quot;الفأر الدماغ في التجسيمي إحداثيات&quot; 14. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خذ قطعة من القطن، نقع في محلول ملحي، واستخدامه لتنظيف الجمجمة. ثم، استخدم نظيفة مسحة القطن الجاف لتجف الجمجمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام معقم غرامة نقطة القلم بمناسبة نقطة على bregma. استخدام micromanipulator التجسيمي لوضع حقنة هاميلتون بحيث غيض من الإبرة اللمسات مجرد نقطة على bregma. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسجيل DV بتنسيق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لمعرفة ما اذا كان محور AP الجمجمة هو مستوى نقل حقنة هاميلتون الخلف بحيث غيض من الإبرة يلمس نقطة لامدا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسجيل موقف DV. تأكد من تنسيق DV لbregma وامدا هي تقع ضمن نطاق 0.5 مم. ملاحظة: إن الهدف هو تقليل الفرق بين DV bregma وامدا. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدمهمicromanipulator للعودة هاميلتون إبرة حقنة طرف إلى bregma نقطة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسجيل موقف AP البدء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب موقف AP تنتهي بطرح 2.00 مم من AP بدء تنسيق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام micromanipulator لإعادة إبرة حقنة هاميلتون إلى AP النهائي تنسيق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسجيل ML الحالي تنسيق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب الجهة اليسرى وتنتهي الحق ML إحداثيات عن طريق إضافة أو طرح 1.3 ملم من بدء ML تنسيق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام micromanipulator لتحريك إبرة حقنة هاميلتون إما إلى ML إنهاء تنسيق. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لمس طرف الإبرة على سطح الجمجمة على حد سواء تنتهي إحداثيات ML وتسجيل إحداثيات DV وتأكد من أن القيم هي تقع ضمن نطاق 0.5 مم. ملاحظة: إن الهدف هو تقليل الفرق DV بينهما تنتهي تنسق ML. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وفي حال حدوث انتكاسة تنسيق سحب الإبرة حتى 0.5-1 سم فوق الجمجمة. اتخاذ العقيمة نقطة غرامة القلم للاحتفال نقطة على الالسطح (ه) من الجمجمة. كرر هذه الخطوة الجانب المقابل من الجمجمة. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأرجح حقنة هاميلتون واضحة للخروج من الطريق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نعلق 0.8 ملم رأس الحفر إلى الحفر. اتخاذ حفر بكلتا يديه، ووضع مرفقيه على سطح الطاولة من أجل الاستقرار، ووضع رأس الحفر قليلا فوق نقطة sharpie سواء على اليسار أو اليمين ML تنسيق. تفعيل الحفر، وانخفاض رأس الحفر على سطح الجمجمة لإدخال ثقب في الجمجمة. كرر هذه الخطوة الجانب المقابل. ملاحظة: قد يحدث بعض النزيف من الثقوب التي أدخلت حديثا. إذا كان هناك نزيف ثم استخدام قطعة من القطن نظيفة جافة لربت الدم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقل حقنة هاميلتون العودة الى الموقف على أي من الثقوب ML التي أدخلت حديثا. خفض الإبرة هاميلتون الماضي فقط الجمجمة. عند هذه النقطة يجب الحرص على عدم ثقب الدماغ. للتأكد من أن الإبرة قد مرت الجمجمة تأخذ السبابة وبلطف دفع الإبرة ضد الجمجمة لجعل سوره لا خروج الإبرة في ثقب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسجيل DV بدء تنسيق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حساب DV إنهاء تنسيق عن طريق طرح 2.2 ملم من DV بدء تنسيق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خفض الإبرة وصولا الى انهاء DV تنسيق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تفعيل مضخة حقن التجسيمي لضخ 4 ميكرولتر من Aβ 1-42 في التلفيف المسنن بمعدل 0.5 ميكرولتر / دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عندما ضخ اكتمال السماح تبقى الإبرة في المكان لمدة 1 دقيقة إضافية لتقليل ارتداد الحل للخروج من موقع الحقن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحريك الإبرة إلى الجانب الآخر من الدماغ وكرر الخطوات 6،13-6،18. </li></ol> 7. إزالة الحيوان والعناية بعد العملية الجراحية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فك قضبان الأذن والحرس الوجه / الأنف. إزالة الماوس من الجهاز. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام ملقط الطالب نمط القياسية لسحب إغلاق فروة الرأس ثم ختم الجرح مع خياطة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن 1 مل من محلول ملحي في الماوس عن طريق IP لترطيب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فيالبوبرينورفين ject (0.1 ملغ / كلغ) تحت الجلد لتخفيف الألم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحفاظ على الماوس في قفص فارغ نظيف تعيين على أعلى من 42 ° C صفيحة ساخنة حتى يستيقظ، ثم إعادته إلى القفص الإسكان مع الغذاء وافرة والمياه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إدارة البوبرينورفين عن طريق الحقن تحت الجلد كل 12 ساعة لمدة 3 أيام لتخفيف الألم. </li></ol> إزالة 8. خياطة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الفأر مع الكيتامين / زيلازين الكوكتيل في 100 ملغم / كغم من الكيتامين و 10 ملغ / كغ xlyazine بواسطة IP. ملاحظة: يتم ذلك بعد 7-10 أيام من الجراحة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام ملقط الطالب نمط القياسية ومقص غرامة على التوالي لإزالة خياطة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن 1 مل من محلول ملحي في الماوس عن طريق IP لترطيب. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحفاظ على الماوس في قفص فارغ نظيف تعيين على أعلى من 42 ° C صفيحة ساخنة حتى يستيقظ، ومن ثم إعادته إلى القفص الإسكان مع الغذاء وافرة والمياه. </li></ol> النحر والأنسجة الحيوانية 9. معالجة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الماوس وصerfuse مع امتصاص العرق 15 4٪، وإزالة المخ، وبمعالجة ذلك cryosectioning 16. ملاحظة: توقيت التضحية بالحيوانات يعتمد على المجرب. ومع ذلك، لدراستنا اخترنا 7 و 14 أيام بعد الجراحة. </li></ol>

<ol>
	<li>Baleriola, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axonally+Synthesized+ATF4+Transmits+a+Neurodegenerative+Signal+across+Brain+Regions.">Axonally Synthesized ATF4 Transmits a Neurodegenerative Signal across Brain Regions.</a> Cell. 158 (5), 1159-1172 (2014).</li><li>Haass, C., Selkoe, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Soluble+protein+oligomers+in+neurodegeneration:+lessons+from+the+Alzheimer's+amyloid+beta-peptide.+Nature+reviews.">Soluble protein oligomers in neurodegeneration: lessons from the Alzheimer's amyloid beta-peptide. Nature reviews.</a> Molecular cell biology. 8 (2), 101-112 (2007).</li><li>Knowles, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+p75+neurotrophin+receptor+promotes+amyloid-beta(1-42)-induced+neuritic+dystrophy+in+vitro+and+in+vivo.">The p75 neurotrophin receptor promotes amyloid-beta(1-42)-induced neuritic dystrophy in vitro and in vivo.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 29 (34), 10627-10637 (2009).</li><li>Troy, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=beta-Amyloid-induced+neuronal+apoptosis+requires+c-Jun+N-terminal+kinase+activation.">beta-Amyloid-induced neuronal apoptosis requires c-Jun N-terminal kinase activation.</a> Journal of neurochemistry. 77 (1), 157-164 (2001).</li><li>Crews, L., Rockenstein, E., Masliah, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=APP+transgenic+modeling+of+Alzheimer's+disease:+mechanisms+of+neurodegeneration+and+aberrant+neurogenesis.">APP transgenic modeling of Alzheimer's disease: mechanisms of neurodegeneration and aberrant neurogenesis.</a> Brain structure &amp; function. 214 (2-3), 111-126 (2010).</li><li>Gotz, J., Ittner, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+Alzheimer's+disease+and+frontotemporal+dementia.">Animal models of Alzheimer's disease and frontotemporal dementia.</a> Nature reviews. Neuroscience. 9 (7), 532-544 (2008).</li><li>Calhoun, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuron+loss+in+APP+transgenic+mice.">Neuron loss in APP transgenic mice.</a> Nature. 395 (6704), 755-756 (1998).</li><li>Oakley, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraneuronal+beta-amyloid+aggregates,+neurodegeneration,+and+neuron+loss+in+transgenic+mice+with+five+familial+Alzheimer's+disease+mutations:+potential+factors+in+amyloid+plaque+formation.">Intraneuronal beta-amyloid aggregates, neurodegeneration, and neuron loss in transgenic mice with five familial Alzheimer's disease mutations: potential factors in amyloid plaque formation.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 26 (40), 10129-10140 (2006).</li><li>Jean, Y. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caspase-2+is+essential+for+c-Jun+transcriptional+activation+and+Bim+induction+in+neuron+death.">Caspase-2 is essential for c-Jun transcriptional activation and Bim induction in neuron death.</a> The Biochemical journal. 455 (1), 15-25 (2013).</li><li>Sotthibundhu, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beta-amyloid(1-42)+induces+neuronal+death+through+the+p75+neurotrophin+receptor.">Beta-amyloid(1-42) induces neuronal death through the p75 neurotrophin receptor.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 28 (15), 3941-3946 (2008).</li><li>Kar, S., Quirion, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amyloid+beta+peptides+and+central+cholinergic+neurons:+functional+interrelationship+and+relevance+to+Alzheimer's+disease+pathology.">Amyloid beta peptides and central cholinergic neurons: functional interrelationship and relevance to Alzheimer's disease pathology.</a> Progress in brain research. 145, 261-274 (2004).</li><li>Leranth, C., Frotscher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organization+of+the+septal+region+in+the+rat+brain:+cholinergic-GABAergic+interconnections+and+the+termination+of+hippocampo-septal+fibers.">Organization of the septal region in the rat brain: cholinergic-GABAergic interconnections and the termination of hippocampo-septal fibers.</a> The Journal of comparative neurology. 289 (2), 304-314 (1989).</li><li>Fa, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+oligomeric+beta-amyloid+1-42+and+induction+of+synaptic+plasticity+impairment+on+hippocampal+slices.">Preparation of oligomeric beta-amyloid 1-42 and induction of synaptic plasticity impairment on hippocampal slices.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. (41), (2010).</li><li>Paxinos, G., Franklin, K. B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. , (2001).</li><li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+animal+perfusion+fixation+for+rodents.">Whole animal perfusion fixation for rodents.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. (65), (2012).</li><li>Currle, D. S., Monuki, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flash+freezing+and+cryosectioning+E12.5+mouse+brain.">Flash freezing and cryosectioning E12.5 mouse brain.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. (4), (2007).</li><li>Jin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Soluble+amyloid+beta-protein+dimers+isolated+from+Alzheimer+cortex+directly+induce+Tau+hyperphosphorylation+and+neuritic+degeneration.">Soluble amyloid beta-protein dimers isolated from Alzheimer cortex directly induce Tau hyperphosphorylation and neuritic degeneration.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (14), 5819-5824 (2011).</li><li>Lambert, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diffusible,+nonfibrillar+ligands+derived+from+Abeta1-42+are+potent+central+nervous+system+neurotoxins.">Diffusible, nonfibrillar ligands derived from Abeta1-42 are potent central nervous system neurotoxins.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 95 (11), 6448-6453 (1998).</li><li>Masters, C. L., Selkoe, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemistry+of+amyloid+beta-protein+and+amyloid+deposits+in+Alzheimer+disease.">Biochemistry of amyloid beta-protein and amyloid deposits in Alzheimer disease.</a> Cold Spring Harbor perspectives in medicine. 2 (6), a006262 (2012).</li><li>Chakrabarti, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen+receptor+agonists+for+attenuation+of+neuroinflammation+and+neurodegeneration.">Estrogen receptor agonists for attenuation of neuroinflammation and neurodegeneration.</a> Brain research bulletin. 109C, 22-31 (2014).</li><li>Cirrito, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+assessment+of+brain+interstitial+fluid+with+microdialysis+reveals+plaque-associated+changes+in+amyloid-beta+metabolism+and+half-life.">In vivo assessment of brain interstitial fluid with microdialysis reveals plaque-associated changes in amyloid-beta metabolism and half-life.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 23 (26), 8844-8853 (2003).</li><li>Puzzo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Picomolar+amyloid-beta+positively+modulates+synaptic+plasticity+and+memory+in+hippocampus.">Picomolar amyloid-beta positively modulates synaptic plasticity and memory in hippocampus.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 28 (53), 14537-14545 (2008).</li><li>Puzzo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endogenous+amyloid-beta+is+necessary+for+hippocampal+synaptic+plasticity+and+memory.">Endogenous amyloid-beta is necessary for hippocampal synaptic plasticity and memory.</a> Annals of. 69 (5), 819-830 (2011).</li><li>Akpan, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intranasal+delivery+of+caspase-9+inhibitor+reduces+caspase-6-dependent+axon/neuron+loss+and+improves+neurological+function+after+stroke.">Intranasal delivery of caspase-9 inhibitor reduces caspase-6-dependent axon/neuron loss and improves neurological function after stroke.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 31 (24), 8894-8904 (2011).</li><li>Fulmer, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astrocyte-derived+BDNF+supports+myelin+protein+synthesis+after+cuprizone-induced+demyelination.">Astrocyte-derived BDNF supports myelin protein synthesis after cuprizone-induced demyelination.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 34 (24), 8186-8196 (2014).</li><li>Thakker-Varia, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+neuropeptide+VGF+is+reduced+in+human+bipolar+postmortem+brain+and+contributes+to+some+of+the+behavioral+and+molecular+effects+of+lithium.">The neuropeptide VGF is reduced in human bipolar postmortem brain and contributes to some of the behavioral and molecular effects of lithium.</a> The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience. 30 (28), 9368-9380 (2010).</li><li>Greferath, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enlarged+cholinergic+forebrain+neurons+and+improved+spatial+learning+in+p75+knockout+mice.">Enlarged cholinergic forebrain neurons and improved spatial learning in p75 knockout mice.</a> The European journal of neuroscience. 12 (3), 885-893 (2000).</li><li>Brashear, H. R., Zaborszky, L., Heimer, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+of+GABAergic+and+cholinergic+neurons+in+the+rat+diagonal+band.">Distribution of GABAergic and cholinergic neurons in the rat diagonal band.</a> Neuroscience. 17 (2), 439-451 (1986).</li><li>Clarke, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cholinergic+innervation+of+the+rat+dentate+gyrus:+an+immunocytochemical+and+electron+microscopical+study.">Cholinergic innervation of the rat dentate gyrus: an immunocytochemical and electron microscopical study.</a> Brain research. 360 (1-2), 349-354 (1985).</li><li>Garcia-Osta, A., Alberini, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amyloid+beta+mediates+memory+formation.">Amyloid beta mediates memory formation.</a> Learning &amp; memory. 16 (4), 267-272 (2009).</li></ol>

تعلن الكتاب أنه ليس لديهم المصالح المالية المتنافسة.

لتحقيق النجاح Aβ 1-42 حقن المجرب أو الجراح أن: 1) استخدام تقنية العقيم؛ 2) تحديد منطقة في الدماغ بشكل صحيح في المصالح مع إحداثيات دقيقة. 3) أن يكون قادرا على تأمين الماوس بشكل صحيح في إطار التجسيمي مع الدماغ وتعادل في محور AP وML؛ 4) لديها القدرة على تشغيل micromanipulator بدقة. 5...

الودائع ترسبات الأميلويد، التي تتكون من بيتا اميلويد (Aβ 1-42)، هي سمة رئيسية من أمراض الزهايمر (AD). وقد أظهرت العديد من الدراسات أن مستويات عالية أو سامة المؤتلف بلازميدة قليلة القسيمات Aβ 1-42 حصول وفاة الخلايا العصبية، ضمور متشابك، وفقدان وخلل وظيفي. فضلا عن التعلم والذاكرة العجز 1-4. وتشمل مناطق الدماغ أثرت على الحصين، القشرة، وهياكل تحت القشرية مثل الدماغ الأمامي القاعدية و5،6 اللوزة. حتى الآن، وهناك عدة نماذج الماوس المعدلة وراثيا التي تحاول محاكاة Aβ 1-42 أمراض AD. اعتمادا على سلالة هذه الحيوانات تثبت أن تكون مفيدة في دراسة الخصائص المرضية مختارة من AD. للأسف، مع استثناء من 2 خطوط المعدلة وراثيا، APP23 و5XFAD، هذه الفئران أبدا تكرار بالكامل فقدان الخلايا العصبية، جانبا رئيسيا من جوانب AD. حتى مع فقدان الخلايا العصبية التي لوحظت في APP23 و5XFAD، وobser موت الخلايا العصبيةكان فيد خفية، سن المعالين، ومعزولة لقلة مختارة المناطق 7،8. ضخ مباشر للبلازميدة قليلة القسيمات Aβ 1-42 في البرية من نوع مخ الفأر يوفر ممتازة في نموذج الجسم الحي الذي يعيد الجانب موت الخلايا العصبية من amyloidopathy 1،9،10. خلافا للنماذج الماوس المعدلة وراثيا المستخدمة عادة في بلازميدة قليلة القسيمات Aβ 1-42 نموذج ضخ مثالية لرفع مستويات حادة Aβ 1-42 بطريقة المكانية والزمانية. وميزة استخدام البرية من نوع الفئران لهذا النموذج يغني التعويض أو الآثار الجانبية المحتملة من الطفرات التي أدخلت في خطوط الماوس المعدلة وراثيا. وقد أظهرت دراسات سابقة أن غرس مستويات سامة من Aβ 1-42 في الحصين يتسبب موت الخلايا العصبية في المناطق القريبة من موقع الحقن ضمن 1 أسبوع 1. وعلاوة على ذلك، بما يتفق مع ملاحظة أن Aβ 1-42 سامة للخلايا العصبية الكوليني 11 الدماغ الأمامي القاعديةوانخفض الكوليني الخلايا العصبية (BFCN) السكان المشاريع التي لالحصين 20-50٪ في غضون 7-14 أيام التالية بيتا اميلويد ضخ 1،10 في الفئران، مما يسمح فعال للامتحانات من الدوائر العصبية معزولة في الدماغ. منذ مشروع BFCN ipsilaterally إلى التلفيف المسنن من الحصين 12، لمعظم تحكم جزء / مركبة وبلازميدة قليلة القسيمات Aβ 1-42 الحلول التي يمكن أن تحقن على جانبي الدماغ مما يتيح إجراء مقارنات بين اليسار واليمين نصفي الكرة الأرضية 1. في هذا التقرير سوف نقدم منهجية مفصلة الجراحية وحقن للبالغين من النوع البري C57BL / 6J الفئران. تم اختيار هذه السلالة الماوس بسبب استخدامها على نطاق واسع في مجال البحوث. من الناحية الفنية، يمكن استهداف أي منطقة في الدماغ للتسريب، ولكن هنا سوف نستخدم التلفيف المسنن من الحصين كهدف لتوضيح هذه التقنية.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Ketamine HCl (100mg/ml)</td>
			<td>Henry Schein Medical</td>
			<td>1049007</td>
			<td>100 mg ketamine per 1 kg animal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine (20mg/ml)</td>
			<td>Henry Schein Medical</td>
			<td>not available</td>
			<td>10 mg xylazine per 1 kg animal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenex (0.3mg/ml)</td>
			<td>Henry Schein Medical</td>
			<td>1217793</td>
			<td>0.1 mg buprenex per 1 kg animal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A&#946;1-42</td>
			<td>David Teplow/UCLA</td>
			<td>not available</td>
			<td>100 &#956;M; This amyloid was used in the paper</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A&#946;1-42</td>
			<td>Bachem</td>
			<td>H-1368</td>
			<td>Can be used in place of amyloid from the Teplow lab</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A&#946;1-42</td>
			<td>American Peptide</td>
			<td>62-0-80B</td>
			<td>Can be used in place of amyloid from the Teplow lab</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scrambled A&#946;1-42</td>
			<td>American Peptide</td>
			<td>62-0-46B</td>
			<td>Can be used as control peptide for comparing A&#946;1-42</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NU4 Antibody (Oligomeric Amyloid Antibody)</td>
			<td>Gift from William Klein/Northwestern U.</td>
			<td>not available</td>
			<td>1:2000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Amyloid Oligomeric Antibody&#160; (Polyclonal Rabbit)</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>AB9234</td>
			<td>May be used in place of Nu4; needs to&#160; be tested by the end user</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6E10 Antibody (Monoclonal Mouse) (Amyloid Antibody)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>sig-39320</td>
			<td>1:1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ChAT Antibody (Polyclonal Goat)</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>AB144P</td>
			<td>1:100 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DeadEnd Fluorometric TUNEL system</td>
			<td>Promega</td>
			<td>G3250</td>
			<td>Follow manufacturer&#39;s directions for use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prolong Gold Antifade Reagent with DAPI</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>P36935</td>
			<td>Use when coverslipping slides</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorogold</td>
			<td>Fluorochrome, LLC</td>
			<td>not available</td>
			<td>2% solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absolute Ethanol (200 proof)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP2818-4</td>
			<td>For making 70% ethanol for sanitizing and disinfecting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Novex 10-20% Tricine gel</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>EC6625BOX</td>
			<td>For separating A&#946;1-42</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Novex Tricine SDS Running Buffer (10X)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>LC1675</td>
			<td>For running 10-20% Tricine gels</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Novex Tris-Glycine Transfer Buffer (25X)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>LC3675</td>
			<td>For transferring 10-20% Tricine gels</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SuperSignal Western Blot Enhancer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>46640</td>
			<td>For enhancing A&#946;1-42 signal; follow manufacturer&#39;s protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protran BA79 Nitrocellulose Blotting Membrane, 0.1 &#956;m</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>10402088</td>
			<td>For transferring 10-20% Tricine gels</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xcell SureLock Mini-Cell</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>EI0001</td>
			<td>Electrophoresis aparatus for running 10-20% Tricine gels</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GenTeal Lubricant Eye Gel</td>
			<td>Novartis</td>
			<td>not available</td>
			<td>For keeping the mouse eyes moist during surgery; can be found in local pharmacy stores</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refresh Optive Lubricant Eye Drops</td>
			<td>Allergan</td>
			<td>not available</td>
			<td>For keeping the mouse eyes moist during surgery; can be found in local pharmacy stores; Can be used in place of GenTeal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>50998</td>
			<td>For sanitizing and disinfecting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round/Tapered Spatula&#160;</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82027-490</td>
			<td>For opening animal mouth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bulldog Serrefines Clamps (Jaw Dims. 9X1.6mm; Length 28mm)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18050-28</td>
			<td>Optional; For keeping scalp skin apart during injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight Fine Scissors (Cutting edge 25mm; Length 11.5cm)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14060-11</td>
			<td>For cutting scalp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>#3 Scalpel Handle</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10003-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>#11 Surgical Blade</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10011-00</td>
			<td>For making scalp incision</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Student Standard Pattern Forcep (Tip Dims. 2.5x1.5mm; Length 11.5cm)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>91100-12</td>
			<td>For holding scalp closed during suturing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trimmer Combo Kit</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>CL9990-1201</td>
			<td>For shaving hair</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T/Pump Warm Water Recirculator&#160;</td>
			<td>Kent Scientific&#160;</td>
			<td>TP-700</td>
			<td>For warming animal during surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Resusable Warmining Pad (5&#34; x 10&#34;)</td>
			<td>Kent Scientific&#160;</td>
			<td>TPZ-0510FEA</td>
			<td>For attaching it to the T/Pump warm water recirculator to warm the animal during surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cordless Micro Drill</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>58610</td>
			<td>Use 0.8mm steel burrs to drill holes in the skull</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Standard Stereotaxic Instrument with Mouse &#38; Neonatal Rat Adaptor</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>51615</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Just for Mouse Stereotaxic Instrument</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>51730</td>
			<td>Can use this in place of Stoelting Cat. #51615</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quintessential Stereotaxic Injector</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>53311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dry Glass Bead Sterilizer</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>50287</td>
			<td>For sterilizing stainless steel instruments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Surgical Drape (18&#34; x 26&#34;)</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>50981</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton Syringe 50 ml, Model 705 RN SYR, NDL</td>
			<td>Hamilton Company</td>
			<td>7637-01</td>
			<td>For brain injection; use different syringes for different solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>29 Gauge Needle, Small Hub RN NDL</td>
			<td>Hamilton Company</td>
			<td>7803-06</td>
			<td>For attaching to the Hamilton syringe for brain injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 ml BD Tuberculin Syringes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BD309659</td>
			<td>For administering anesthesia and saline</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 Gauge Needle (0.5&#34;)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BD305106</td>
			<td>For administering anesthesia and saline</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Portable Electronic CS Series Scale (Ohaus)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>65500-202</td>
			<td>For weighing animals to determine anesthesia dose</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot plate (Top Plate Dims. 7.25x7.25in)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>47751-148</td>
			<td>For warming animals post-surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sofsilk Silk Suture C-1 Cutting 3/8, 12 mm</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>S1173</td>
			<td>For closing wound</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vetbond Tissue Adhesive (3M)</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td>sc-361931</td>
			<td>Optional: for aiding in wound closure; Use with suture.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton-Tipped Wooden-Shaft Sterile Applicators</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>22-029-488</td>
			<td>For cleaning and drying surgical wound</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Superfrost Plus Microscope Slides</td>
			<td>Fisher Scientific&#160;</td>
			<td>12-550-15</td>
			<td>For collecting brain sections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VWR Micro Cover Glass 24 X 50 mm</td>
			<td>VWR</td>
			<td>48393241</td>
			<td>For mounting microscope slides</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Scientific Nalgene Syringe Filter 0.2 &#956;m</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>194-2520</td>
			<td>For sterilizing saline solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile dual tip skin markers by Viscot Medical</td>
			<td>Medline</td>
			<td>VIS1422SRL91</td>
			<td>For marking coordinates on the skull</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

stereotaxic infusion of oligomeric amyloid-beta into the mouse hippocampus

مرض الزهايمر هو مرض الاعصاب التي تؤثر على شيخوخة السكان. وهناك ميزة عصبية مرضية الرئيسية لهذا المرض هو الإفراط في إنتاج اميلويد بيتا وترسب لويحات أميلويد بيتا في مناطق الدماغ للأفراد المصابين. على مر السنين العلماء قد ولدت العديد من نماذج الماوس مرض الزهايمر التي تحاول تكرار أمراض اميلويد بيتا. وللأسف، فإن نماذج الماوس فقط بشكل انتقائي تحاكي ملامح المرض. موت الخلايا العصبية، ولها تأثير بارز في أدمغة مرضى الزهايمر، تفتقر بشكل ملحوظ في هذه الفئران. وبالتالي، نحن وغيرنا قد استخدمت وسيلة لغرس مباشرة الأنواع القابلة للذوبان بلازميدة قليلة القسيمات من اميلويد بيتا - أشكال اميلويد بيتا التي ثبت أن يكون أكثر سمية للخلايا العصبية - stereotaxically في الدماغ. في هذا التقرير ونحن الاستفادة من الذكور C57BL / 6J الفئران لتوثيق هذه التقنية الجراحية لزيادة مستويات اميلويد بيتا في منطقة الدماغ محددة. الالهدف هو ضخ التلفيف المسنن من الحصين لهذا بنية الدماغ، جنبا إلى جنب مع الدماغ الأمامي القاعدية التي يتم توصيلها عن طريق الدائرة كوليني، يمثل واحدا من مجالات انحطاط في هذا المرض. نتائج رفع اميلويد بيتا في التلفيف المسنن عبر ضخ التجسيمي تكشف عن زيادة في فقدان الخلايا العصبية في التلفيف المسنن في حدود 1 في الاسبوع، في حين أن يصاحب ذلك زيادة في موت الخلايا وفقدان الخلايا العصبية كوليني في الطرف الرأسي للالفرقة قطري من بروكا من الدماغ الأمامي القاعدية. ولوحظت هذه التأثيرات لتصل إلى 2 أسابيع. وتشير البيانات المتوفرة لدينا أن اميلويد بيتا نموذج ضخ الحالي يوفر نموذج الفأر بديلة لمعالجة موت الخلايا العصبية منطقة محددة في فترة قصيرة. وميزة هذا النموذج هو أن اميلويد بيتا يمكن أن تكون مرتفعة بطريقة المكانية والزمانية.

المنهج الحالي لإعداد البشري المؤتلف بلازميدة قليلة القسيمات Aβ 1-42 غلة الأنواع بلازميدة قليلة القسيمات القابلة للذوبان التي تتكون من أحادية، dimers، trimers، وtetramers (الشكل 1A). هذه منخفضة الوزن الجزيئي Aβ 1-42 الأنواع، ولكن ليس الألياف واللوحات، وقد ثبت في...

Watch this Scientific Journal Video about Stereotaxic Infusion of Oligomeric Amyloid-beta into the Mouse Hippocampus at JoVE.com

Stereotaxic Infusion of Oligomeric Amyloid-beta into the Mouse Hippocampus

Here, we present a protocol for direct stereotaxic brain infusion of amyloid-beta. This methodology provides an alternative in vivo mouse model to address the short-term effects of amyloid-beta on brain neurons.

تسريب التجسيمي من بلازميدة قليلة القسيمات اميلويد بيتا في الحصين ماوس

Alzheimer&#8217;s disease is a neurodegenerative disease affecting the aging population. A key neuropathological feature of the disease is the ...

stereotaxic-infusion-oligomeric-amyloid-beta-into-mouse

Research

JoVE Journal

Neuroscience

18.0K Views.  Columbia University Medical Center. Here, we present a protocol for direct stereotaxic brain infusion of amyloid-beta. This methodology provides an alternative in vivo mouse model to address the short-term effects of amyloid-beta on brain neurons.

Video: Stereotaxic Infusion of Oligomeric Amyloid-beta into the Mouse Hippocampus

Visualization and Genetic Manipulation of Dendrites and Spines in the Mouse Cerebral Cortex and Hippocampus using In utero Electroporation

In utero electroporation (IUE) has become a powerful technique to study the development of different regions of the embryonic nervous system 1-5. To date this tool has been widely used to study the regulation of cellular proliferation, differentiation and neuronal migration especially in the developing cerebral cortex 6-8. Here we detail our protocol to electroporate in utero the cerebral cortex and the hippocampus and provide evidence that this approach can be used to study dendrites and spines in these two cerebral regions.
Visualization and manipulation of neurons in primary cultures have contributed to a better understanding of the processes involved in dendrite, spine and synapse development. However neurons growing in vitro are not exposed to all the physiological cues that can affect dendrite and/or spine formation and maintenance during normal development. Our knowledge of dendrite and spine structures in vivo in wild-type or mutant mice comes mostly from observations using the Golgi-Cox method 9. However, Golgi staining is considered to be unpredictable. Indeed, groups of nerve cells and fiber tracts are labeled randomly, with particular areas often appearing completely stained while adjacent areas are devoid of staining. Recent studies have shown that IUE of fluorescent constructs represents an attractive alternative method to study dendrites, spines as well as synapses in mutant / wild-type mice 10-11 (Figure 1A). Moreover in comparison to the generation of mouse knockouts, IUE represents a rapid approach to perform gain and loss of function studies in specific population of cells during a specific time window. In addition, IUE has been successfully used with inducible gene expression or inducible RNAi approaches to refine the temporal control over the expression of a gene or shRNA 12. These advantages of IUE have thus opened new dimensions to study the effect of gene expression/suppression on dendrites and spines not only in specific cerebral structures (Figure 1B) but also at a specific time point of development (Figure 1C).
Finally, IUE provides a useful tool to identify functional interactions between genes involved in dendrite, spine and/or synapse development. Indeed, in contrast to other gene transfer methods such as virus, it is straightforward to combine multiple RNAi or transgenes in the same population of cells. 
In summary, IUE is a powerful method that has already contributed to the characterization of molecular mechanisms underlying brain function and disease and it should also be useful in the study of dendrites and spines.

Visualization and Genetic Manipulation of Dendrites and Spines in the Mouse Cerebral Cortex and Hippocampus using In utero Electroporation

This article describes in detail a protocol to electroporate in utero the cerebral cortex and the hippocampus at E14.5 in mice. We also show that this is a valuable method to study dendrites and spines in these two cerebral regions.

التصور والتلاعب الجيني من التشعبات والاعمده الفقريه في قشرة الدماغ والحصين ماوس باستخدام<em&gt; في الرحم</em&gt; Electroporation

In utero electroporation (IUE) has become a powerful technique to study the development of different regions of the embryonic nervous system 1-5. To date ...

Stereotaxic Injection of a Viral Vector for Conditional Gene Manipulation in the Mouse Spinal Cord

Intraparenchymal injection of a viral vector enables conditional gene manipulation in distinct populations of neurons or particular regions of the central nervous system. We demonstrate a stereotaxic injection technique that allows targeted gene expression or silencing in the dorsal horn of the mouse spinal cord. The surgical procedure is brief. It requires laminectomy of a single vertebra, providing for quick recovery of the animal and unimpaired motility of the spine. Controlled injection of a small vector suspension volume at low speed and use of a microsyringe with beveled glass cannula minimize the tissue lesion. The local immune response to the vector depends on the intrinsic properties of the virus employed; in our experience, it is minor and short-lived when a recombinant adeno-associated virus is used. A reporter gene such as enhanced green fluorescent protein facilitates monitoring spatial distribution of the vector, and the efficacy and cellular specificity of the transfection.

Viral vectors allow for targeted gene manipulation. We demonstrate a method for conditional gene expression or ablation in the mouse spinal cord, using stereotaxic injection of a viral vector into the dorsal horn, a prominent site of synaptic contact between primary somatosensory afferents and neurons of the central nervous system.

التجسيمي حقن ناقل للتلاعب الجيني الفيروسي شرطي في الحبل الشوكي ماوس

Intraparenchymal injection of a viral vector enables conditional gene manipulation in distinct populations of neurons or particular regions of the central ...

Building An Open-source Robotic Stereotaxic Instrument

This protocol includes the designs and software necessary to upgrade an existing stereotaxic instrument to a robotic (CNC) stereotaxic instrument for around $1,000 (excluding a drill), using industry standard stepper motors and CNC controlling software. Each axis has variable speed control and may be operated simultaneously or independently. The robot&#39;s flexibility and open coding system (g-code) make it capable of performing custom tasks that are not supported by commercial systems. Its applications include, but are not limited to, drilling holes, sharp edge craniotomies, skull thinning, and lowering electrodes or cannula. In order to expedite the writing of g-coding for simple surgeries, we have developed custom scripts that allow individuals to design a surgery with no knowledge of programming. However, for users to get the most out of the motorized stereotax, it would be beneficial to be knowledgeable in mathematical programming and G-Coding (simple programming for CNC machining).
The recommended drill speed is greater than 40,000 rpm. The stepper motor resolution is 1.8&#176;/Step, geared to 0.346&#176;/Step. A standard stereotax has a resolution of 2.88 &#956;m/step. The maximum recommended cutting speed is 500 &#956;m/sec. The maximum recommended jogging speed is 3,500 &#956;m/sec. The maximum recommended drill bit size is HP 2.

This protocol includes the designs and software necessary to upgrade an existing stereotaxic instrument to a robotic (computer numeric controlled; CNC) stereotaxic instrument for around $1,000 (excluding a drill).

بناء مفتوح المصدر الروبوتية التجسيمي الصك

This protocol includes the designs and software necessary to upgrade an existing stereotaxic instrument to a robotic (CNC) stereotaxic instrument for ...

Mouse Microsurgery Infusion Technique for Targeted Substance Delivery into the CNS via the Internal Carotid Artery

Animal models of central nervous system (CNS) diseases and, consequently, blood-brain barrier disruption diseases, require the delivery of exogenous substances into the brain. These exogenous substances may induce injurious impact or constitute therapeutic strategy. The most common delivery methods of exogenous substances into the brain are based on systemic deliveries, such as subcutaneous or intravenous routes. Although commonly used, these approaches have several limitations, including low delivery efficacy into the brain. In contrast, surgical methods that locally deliver substances into the CNS are more specific and prevent the uptake of the exogenous substances by other organs. Several surgical methods for CNS delivery are available; however, they tend to be very traumatic. Here, we describe a mouse infusion microsurgery technique, which effectively delivers substances into the brain via the internal carotid artery, with minimal trauma and no interference with normal CNS functionality.

Mouse Microsurgery Infusion Technique for Targeted Substance Delivery into the CNS via the Internal Carotid Artery

The present protocol describes a mouse microsurgery infusion technique, which effectively delivers substances directly into the brain via the internal carotid artery.

الماوس المجهرية تسريب تقنية لالمستهدفة المواد تسليم في الجهاز العصبي المركزي<i&gt; عبر</i&gt; في الشريان السباتي الداخلي

Animal models of central nervous system (CNS) diseases and, consequently, blood-brain barrier disruption diseases, require the delivery of exogenous ...

Stereotaxic Surgery for Genetic Manipulation in Striatal Cells of Neonatal Mouse Brains

Many genes are expressed in embryonic brains, and some of them are continuously expressed in the brain after birth. For such persistently expressed genes, they may function to regulate the developmental process and/or physiological function in neonatal brains. To investigate neurobiological functions of specific genes in the brain, it is essential to inactivate genes in the brain. Here, we describe a simple stereotaxic method to inactivate gene expression in the striatum of transgenic mice at neonatal time windows. AAV-eGFP-Cre viruses were microinjected into the striatum of Ai14 reporter gene mice at postnatal day (P) 2 by stereotaxic brain surgery. The tdTomato reporter gene expression was detected in P14 striatum, suggesting a successful Cre-loxP mediated DNA recombination in AAV-transduced striatal cells. We further validated this technique by microinjecting AAV-eGFP-Cre viruses into P2Foxp2fl/fl mice. Double labeling of GFP and Foxp2 showed that GFP-positive cells lacked Foxp2 immunoreactivity in P9 striatum, suggesting the loss of Foxp2 protein in AAV-eGFP-Cre transduced striatal cells. Taken together, these results demonstrate an effective genetic deletion by stereotaxically microinjected AAV-eGFP-Cre viruses in specific neuronal populations in the neonatal brains of floxed transgenic mice. In conclusion, our stereotaxic technique provides an easy and simple platform for genetic manipulation in neonatal mouse brains. The technique can not only be used to delete genes in specific regions of neonatal brains, but it also can be used to inject pharmacological drugs, neuronal tracers, genetically modified optogenetics and chemogenetics proteins, neuronal activity indicators and other reagents into the striatum of neonatal mouse brains.

We describe a protocol of stereotaxic surgery with a homemade head-fixed device for microinjecting reagents into the striatum of neonatal mouse brains. This technique allows genetic manipulation in neuronal cells of specific regions of neonatal mouse brains.

جراحة ستيريوتاكسيك للتلاعب بالجينات في خلايا أدمغة الفأر الولدان سترياتال

Many genes are expressed in embryonic brains, and some of them are continuously expressed in the brain after birth. For such persistently expressed genes, ...

Recording Spatially Restricted Oscillations in the Hippocampus of Behaving Mice

The local field potential (LFP) emerges from ion movements across neural membranes. Since the voltage recorded by LFP electrodes reflects the summed electrical field of a large volume of brain tissue, extracting information about local activity is challenging. Studying neuronal microcircuits, however, requires a reliable distinction between truly local events and volume-conducted signals originating in distant brain areas. Current source density (CSD) analysis offers a solution for this problem by providing information about current sinks and sources in the vicinity of the electrodes. In brain areas with laminar cytoarchitecture such as the hippocampus, one-dimensional CSD can be obtained by estimating the second spatial derivative of the LFP. Here, we describe a method to record multilaminar LFPs using linear silicon probes implanted into the dorsal hippocampus. CSD traces are computed along individual shanks of the probe. This protocol thus describes a procedure to resolve spatially restricted neuronal network oscillations in the hippocampus of freely moving mice.

This protocol describes the recording of local field potentials with multi-shank linear silicon probes. Conversion of the signals using current source density analysis allows the reconstruction of local electrical activity in the mouse hippocampus. With this technique, spatially restricted brain oscillations can be studied in freely moving mice.

تسجيل مكانياً مقيد التذبذبات في قرن آمون التصرف الفئران

The local field potential (LFP) emerges from ion movements across neural membranes. Since the voltage recorded by LFP electrodes reflects the summed ...

Transplantation of Chemogenetically Engineered Cortical Interneuron Progenitors into Early Postnatal Mouse Brains

Neuronal development is regulated by a complex combination of environmental and genetic factors. Assessing the relative contribution of each component is a complicated task, which is particularly difficult in regards to the development of &#947;-aminobutyric acid (GABA)ergic cortical interneurons (CIs). CIs are the main inhibitory neurons in the cerebral cortex, and they play key roles in neuronal networks, by regulating both the activity of individual pyramidal neurons, as well as the oscillatory behavior of neuronal ensembles. They are generated in transient embryonic structures (medial and caudal ganglionic eminences -&#160;MGE and CGE) that are very difficult to efficiently target using in utero electroporation approaches. Interneuron progenitors migrate long distances during normal embryonic development, before they integrate in the cortical circuit. This remarkable ability to disperse and integrate into a developing network can be hijacked by transplanting embryonic interneuron precursors into early post-natal host cortices. Here, we present a protocol that allows genetic modification of embryonic interneuron progenitors using focal ex vivo electroporation. These engineered interneuron precursors are then transplanted into early post-natal host cortices, where they will mature into easily identifiable CIs. This protocol allows the use of multiple genetically encoded tools, or the ability to regulate the expression of specific genes in interneuron progenitors, in order to investigate the impact of either genetic or environmental variables on the maturation and integration of CIs.

Here we present a protocol, designed to use chemogenetic tools to manipulate the activity of cortical interneuron progenitors transplanted into the cortex of early postnatal mice.

زرع الذرية القشرية الهندسية كيميائياً في عقول الفئران المبكرة بعد الولادة

Neuronal development is regulated by a complex combination of environmental and genetic factors. Assessing the relative contribution of each component is ...

Microdissection of Mouse Brain into Functionally and Anatomically Different Regions

The brain is the command center for the mammalian nervous system and an organ with enormous structural complexity. Protected within the skull, the brain consists of an outer covering of grey matter over the hemispheres known as the cerebral cortex. Underneath this layer reside many other specialized structures that are essential for multiple phenomenon important for existence. Acquiring samples of specific gross brain regions requires quick and precise dissection steps.&#160;It is understood that at the microscopic level, many sub-regions exist and likely cross the arbitrary regional boundaries that we impose for the purpose of this dissection.
Mouse models are routinely used to study human brain functions and diseases. Changes in gene expression patterns may be confined to specific brain areas targeting a particular phenotype depending on the diseased state. Thus, it is of great importance to study regulation of transcription with respect to its well-defined structural organization. A complete understanding of the brain requires studying distinct brain regions, defining connections, and identifying key differences in the activities of each of these brain regions. A more comprehensive understanding of each of these distinct regions may pave the way for new and improved treatments in the field of neuroscience. Herein, we discuss a step-by-step methodology for dissecting the mouse brain into sixteen distinct regions. In this procedure, we have focused on male mouse C57Bl/6J (6-8 week old) brain removal and dissection into multiple regions using neuroanatomical landmarks to identify and sample discrete functionally-relevant and behaviorally-relevant&#160;brain regions. This work will help lay a strong foundation in the field of neuroscience, leading to more focused approaches in the deeper understanding of brain function.

We present a hands-on, step-by-step, rapid protocol for mouse brain removal and dissection of discrete regions from fresh brain tissue. Obtaining brain regions for molecular analysis has become routine in many neuroscience labs. These brain regions are immediately frozen to obtain high quality transcriptomic data for system level analysis.

التشريح المجهري لدماغ الفأر إلى مناطق مختلفة وظيفيا وتشريحيا

The brain is the command center for the mammalian nervous system and an organ with enormous structural complexity. Protected within the skull, the brain ...

Full- versus Sub-Regional Quantification of Amyloid-Beta Load on Mouse Brain Sections

Extracellular accumulation of amyloid-beta (A&#946;) plaques is one of the major pathological hallmarks of Alzheimer's disease (AD), and is the target of the only FDA-approved disease-modifying treatment for AD. Accordingly, the use of transgenic mouse models that overexpress the amyloid precursor protein and thereby accumulate cerebral A&#946; plaques are widely used to model human AD in mice. Therefore, immunoassays, including enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and immunostaining, commonly measure the A&#946; load in brain tissues derived from AD transgenic mice. Though the methods for A&#946; detection and quantification have been well established and documented, the impact of the size of the region of interest selected in the brain tissue on A&#946; load measurements following immunostaining has not been reported. Therefore, the current protocol aimed to compare the A&#946; load measurements across the full- and sub-regions of interest using an image analysis software. The steps involved in brain tissue preparation, free-floating brain section immunostaining, imaging, and quantification of A&#946; load in full- versus sub-regions of interest are described using brain sections derived from 13-month-old APP/PS1 double transgenic male mice. The current protocol and the results provide valuable information about the impact of the size of the region of interest on A&#946;-positive area quantification, and show a strong correlation between the A&#946;-positive area obtained using the full- and sub-regions of interest analyses for brain sections derived from 13-month-old male APP/PS1 mice that show widespread A&#946; deposition.

The present protocol describes and compares the procedure to perform a full-region or sub-region of interest analysis of sagittal mouse brain sections to quantify amyloid-beta load in the APP/PS1 transgenic mouse model of Alzheimer's disease.

القياس الكمي الكامل مقابل دون الإقليمي لحمل الأميلويد بيتا على أقسام دماغ الفأر

Extracellular accumulation of amyloid-beta (A&#946;) plaques is one of the major pathological hallmarks of Alzheimer's disease (AD), and is the target of ...

In Vivo Chronic Two-Photon Imaging of Microglia in the Mouse Hippocampus

Microglia, the only immune cells resident in the brain, actively participate in neural circuit maintenance by modifying synapses and neuronal excitability. Recent studies have revealed the differential gene expression and functional heterogeneity of microglia in different brain regions. The unique functions of the hippocampal neural network in learning and memory may be associated with the active roles of microglia in synapse remodeling. However, inflammatory responses induced by surgical procedures have been problematic in the two-photon microscopic analysis of hippocampal microglia. Here, a method is presented that enables the chronic observation of microglia in all layers of the hippocampal CA1 through an imaging window. This method allows the analysis of morphological changes in microglial processes for more than 1 month. Long-term and high-resolution imaging of the resting microglia requires minimally invasive surgical procedures, appropriate objective lens selection, and optimized imaging techniques. The transient inflammatory response of hippocampal microglia may prevent imaging immediately after surgery, but the microglia restore their quiescent morphology within a few weeks. Furthermore, imaging neurons simultaneously with microglia allows us to analyze the interactions of multiple cell types in the hippocampus. This technique may provide essential information about microglial function in the hippocampus.

In Vivo Chronic Two-Photon Imaging of Microglia in the Mouse Hippocampus

This paper describes a method for chronic in vivo observation of the resting microglia in the mouse hippocampal CA1 using precisely controlled surgery and two-photon microscopy.