ونود أن نشكر المتعاونين لدينا، فرانسوا Delori، توماس بورك، وتوبياس Duncker. دعم البحوث: المعاهد الوطنية للصحة / نيى R01 EY015520 (RTS، JPG)، والأموال غير المقيدة من البحوث للوقاية من العمى (RTB).

أخلاقيات الإعلان: تم القيام به جميع المرضى المسجلين في هذه الدراسات ذلك وفقا افق مجلس الرقابة المراجعة المؤسسية في جامعة نيويورك كلية الطب. 1. اختيار المريض والتحضير الأولي للتصوير ملاحظة: يطلب من المواد التالية: 0.5٪ تروبيكاميد حل العيون، و 2.5٪ فينيليفرين حل العيون، cSLO مجهزة نطاق الطيفي الضوئي المقطعي التماسك (SD-أكتوبر)، وإشارة مضان الداخلية. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل التصوير، حددت بشكل مناسب حتى cSLO للحصول على البيانات وفقا لتعليمات الشركة الصانعة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جبل إشارة الفلورسنت الداخلية في cSLO. ملاحظة: إشارة الفلورسنت الداخلية، كما تم شراؤها من الشركة المصنعة، وتقع في حلقة معدنية ويتم وضعها مباشرة وراء عدسة الكاميرا. إذا تم استخدام cSLO من مصنع آخر، قد يكون هناك تكوين مختلف من تلك التي وصفت فيهذا البروتوكول. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> من أجل إدراج إشارة إلى cSLO، تحريف عدسة لإزالته، فك حلقة معدنية على الجهاز، والاستعاضة عنها مع حلقة معدنية جديدة تحتوي على إشارة. ملاحظة: الإشارة الفلورسنت الداخلية أمر ضروري لتقنية ق، لأنها تتيح تصحيح التباين في قوة الليزر وكشف عن حساسية / ربح. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لدينا مرضى معينين للتصوير الخضوع لفحص العين المتوسعة الروتيني والحصول على معلومات أساسية تتعلق بتاريخ العين الماضي والحالات الطبية الأساسية التي قد تظهر مع نتائج العين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تمدد التلاميذ مع 0.5٪ و 2.5٪ تروبيكاميد فينيليفرين. خطوة حاسمة: تمدد التلاميذ إلى 6 مم على الأقل. ملاحظة: هذا أمر ضروري لمرور دون انقطاع الضوء، وبالتالي لرؤية الأمثل وقياس قاع العين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل التصوير، وضع المريض بشكل صحيح على cSLO، مع الذقن يستريح على chinrest، وضعت الجبهة ضد foreheaد الراحة، وحاظان الجانبي محاذاة بشكل صحيح مع مؤشرات. </li></ol> 2. الأساس التصوير لقاع العين بصري <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أولا، صورة قاع العين مع قرب انعكاس الأشعة تحت الحمراء (IR) ضوء (الطول الموجي 820 نانومتر) من أجل تركيز الكاميرا على البقعة والحصول على تركيز الخام. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مع المريض في وضع صحيح، تبديل الإعداد الأجهزة على لوحة التحكم لوضع الأشعة تحت الحمراء والتصوير، وكاميرا الموقع يدويا حتى قاع العين هو في التركيز الكامل، وتأخذ صورة </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضبط الإعداد على لوحة التحكم ل&quot;IR-أكتوبر&quot;، والذي يستخدم الطيفي المجال البصري المقطعي التماسك (SD-أكتوبر) بالتزامن مع التصوير الأشعة تحت الحمراء لتقييم البقعة لمرض كامن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام الأدلة الموجودة في نافذة التصوير لتوجيه أكتوبر إلى صورة الأشعة تحت الحمراء من قاع بشكل صحيح. لتحقيق أفضل-أكتوبر SD الجودة، ضع الكاميرا مثل أن الصورة أكتوبر هي في الثلث العلوي من نافذة التصوير فيها. الحصول على واحد على الأقل الشوري خط أفقيوخلال النقرة والتي تغطي مجال التصوير بأكمله. </li></ol></li></ol> 3. إعداد ق التصوير <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام &quot;عالية السرعة&quot; الحصول على الصور. ملاحظة: هذا الإعداد يسمح لسرعة الحصول على الصور، مما يقلل خطر فقدان إشارة بسبب حركة المريض وأدى انسداد للضوء عن طريق قزحية العين أو الجفون. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام &quot;يعني من 9&quot; الإطارات. ملاحظة: هذا الإعداد يسمح للالسريع، التقاط متتابع من 9 إطارات الصور، التي يمكن أن تكون في وقت لاحق &quot;المتوسط&quot; للحد من الضوضاء والقطع الأثرية (أنظر أدناه). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام الحقل &quot;30 × 30 درجة&quot;. ملاحظة: هذا يشير إلى درجة من منطقة الشبكية استولي عليه خلال الحصول على الصور. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قبل التصوير، تحذير المريض حول الضوء الأزرق، وهذا يمكن أن تكون مثيرة للقلق في البداية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشغيل وضع AF ومواءمة محور الكاميرا مثل أن الشاشة هي الحد الأقصى &quot;ملأ&quot; مع AF قاع (الحد الأدنى من سواد من جوانب وزوايا الصورة). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا كان المرضى حصعوبة افي التسامح ضوء زرقاء لامعة، يبدأ التصوير مع الكاميرا بعيدا عن العين ومن ثم جلب الكاميرا ببطء نحو المريض حتى قاع هو على مرأى ومسمع. خطوة حاسمة: إذا ضوء دخول إلى أو الخروج من العين وإعاقة، وانخفاض سوف إشارة ينتج. انخفاض المترجمة مرئيا كما سواد غير المتماثلة من جانب صورة أو زاوية. ويعتبر فقدان معممة من إشارة عندما حركات العين عرقلة وحده مرور الضوء. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> محاذاة الكاميرا بحيث إشارة AF هي في أعلى مستوى له في جميع أنحاء الميدان. تهدف للإشارة القصوى بدلا من صورة حادة، إلا أنها ترتبط تقريبا. ضبط التركيز الكاميرا عن طريق تحريك cSLO لإعادة الكاميرا إما يدويا أو باستخدام عصا التحكم منظار العين. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضبط حساسية / ربح بحيث قاع AF مرئيا بسهولة، ولكن تجنب الإفراط في التشبع. خلال الحصول على الصور، بكسل ملونة واضحة سواء في المرجعية الداخلية (الموجود في الجزء العلوي منالصورة) أو قاع تشير الإفراط في التشبع وبالتالي فقدان الإشارة. </li></ol> 4. الحصول على الصور ملاحظة: خطوة حاسمة: إن الهدف في الحصول على الصور يجب أن تكون الحصول 2 جودة عالية 9 الإطار مداخن صورة في كل دورة للسيطرة على التباين بين الصور في جلسة واحدة. بعد اعادة تموضع المريض والكاميرا، للحصول على الدورة الثانية من الصورتين لتقييم ومراقبة للتقلب. في نهاية المطاف سوف تكون محسوبة جميع الصور إلى المرجعية الداخلية (هو موضح أدناه). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحصول على صور فقط بعد لا يقل عن 20 ثانية من &quot;تبيض&quot; (التعرض الكامل من شبكية العين للضوء AF) لتقليل امتصاص الضوء من رودوبسين في شبكية العين الحسية 9. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام هذه الفترة لتحسين المواءمة الكاميرا، والتركيز والحساسية. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> هل لديك الموضوعات وميض قبل كل الحصول على الصور كفيلم المسيل للدموع الطازج يحسن من جودة الإشارة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تجنب الجفون في الطائرة من الاستحواذ. ملاحظة: قد يكون من المفيد أن الجفون مفتوحة يدويا للمرضى أكثر تحديا. يوصي الباحثون إلى أن مساعد يؤدي هذه المهمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحسين التوافق قبل كل اقتناء الصور للتأكد من أن الضوء لا يتم عرقلة من قبل القزحية مما يؤدي إلى انخفاض إشارة. ملاحظة: كما على الأقل قاصر حركة شائعة جدا، يوصي الكتاب إعادة غرامة اللازمة كما كان من قبل كل الحصول على الصور. توجيه وتشجيع المريض أثناء التصوير يساعد حركة الانخفاض. يوصي الكتاب أيضا استخدام الجهاز دواسة القدم باسم &quot;زر الاستحواذ&quot; وذلك للتقليل عامل الهاء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تنفيذ معالجة مرحلة ما بعد الصورة عن طريق حساب &quot;يعني&quot; المكدس 9 الإطار إلى زيادة نسبة الإشارة إلى الضوضاء. حساب متوسط ​​كومة باستخدام برنامج cSLO عن طريق اختيار الخيار لحساب الوسط. ملاحظة: قد يكون هناك أكوام حيث بعض إطارات ليست ذات نوعية أفضل (أي، وموضعية أو معممة انخفضت الاشتراكيةgnal بالنسبة إلى الأطر المثلى)، لذلك تفتيش بعناية كل كومة وإلغاء تحديد الأطر دون المستوى الأمثل قبل احتساب المتوسط. ملاحظة: الصور متوسط ​​مع نسب الإشارة إلى الضوضاء مقبولة يمكن معالجتها من لا يقل عن 3 الإطارات. فمن الطبيعي للجوانب وزوايا كل صورة أن يكون إشارة أقل من 20 درجة المركزية بسبب القيود داخل cSLO نفسها. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا كان البرنامج يسأل ما إذا كان المشغل يرغب في تطبيع مستويات الرمادي (أي، وتمتد الرسم البياني) بين 0 و 255، حدد &quot;لا&quot;. هذا يحافظ على مستويات الرمادي دون تغيير لتحليلها. </li></ol></li></ol> تحليل 5. صورة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحليل الصور AF كما سبق وصفها باستخدام برمجيات تحليل الصور المتقدمة لتقنية ق (ايغور، 9). ويرد وصف موجز لتحليل صورة نموذجية باستخدام هذا البرنامج أدناه. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحميل برنامج ق في ايغور واستيراد الصور (في شكل .BMP) المصدرة منبرنامج cSLO مع نسبة البيكسل 768 × 768 (إخراج المعلمة الافتراضية). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حدد الصورة في القائمة المنسدلة والشروع في التحليل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعادة المؤشرات المعايرة على الصورة بحيث &quot;مرمى&quot; علا النقرة و &quot;قوس&quot; يتاخم القرص البصري (تستخدم هذه المؤشرات على نطاق ووضع رويس). عند وضعه بشكل صحيح، واستخدام البرمجيات مطالبات ثم ملء الصورة مع رويس كفافي المحيطة النقرة (أنظر الشكلين 1 و 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حدد الخيار في ايغور لمعايرة مستويات الرمادي الشاملة لكل صورة لتلك المستويات الحالية في إشارة الفلورسنت الداخلية. ملاحظة: هذه الخطوة تتيح للمعايرة من العوامل المرتبطة بالآلات، بما في ذلك مستوى الإلكترونية الصفر من كل صورة والداخلي للعامل المعايرة المرجعية لكل آلة، وكذلك العوامل ذات الصلة المريض، بما في ذلك السن، والانكسار وانحناء القرنية. ملاحظة: برامج التحليل ثم يعرض ص الثابتةويتجلى egions على الصورة الناتجة وقيمة ق داخل كل منطقة. كما دخلت القيم ق تلقائيا إلى تنسيق البيانات في نافذة منفصلة &quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توليد ق &quot;خرائط الحرارة&quot; عن طريق تحديد الخيار ضمن المطالبات الأوامر. كل الصور والبيانات يمكن تصديرها من برنامج ايغور في جداول اكسل عن طريق تحديد الخيارات المناسبة. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Strauss, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+retinal+pigment+epithelium+in+visual+function.">The retinal pigment epithelium in visual function.</a> Physiological reviews. 85, 845-881 (2005).</li><li>Ach, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+autofluorescence+and+cell+density+maps+of+the+human+retinal+pigment+epithelium.">Quantitative autofluorescence and cell density maps of the human retinal pigment epithelium.</a> Investigative ophthalmology &amp; visual science. 55, 4832-4841 (2014).</li><li>Ach, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipofuscin+redistribution+and+loss+accompanied+by+cytoskeletal+stress+in+retinal+pigment+epithelium+of+eyes+with+age-related+macular+degeneration.">Lipofuscin redistribution and loss accompanied by cytoskeletal stress in retinal pigment epithelium of eyes with age-related macular degeneration.</a> Investigative ophthalmology &amp; visual science. 56, 3242-3252 (2015).</li><li>Schmitz-Valckenberg, S., Jorzik, J., Unnebrink, K., Holz, F. G., Group, F. A. M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+digital+scanning+laser+ophthalmoscopy+fundus+autofluorescence+images+of+geographic+atrophy+in+advanced+age-related+macular+degeneration.">Analysis of digital scanning laser ophthalmoscopy fundus autofluorescence images of geographic atrophy in advanced age-related macular degeneration.</a> Graefe's archive for clinical and experimental ophthalmology = Albrecht von Graefes Archiv fur klinische und experimentelle Ophthalmologie. 240, 73-78 (2002).</li><li>Weng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insights+into+the+function+of+Rim+protein+in+photoreceptors+and+etiology+of+Stargardt's+disease+from+the+phenotype+in+abcr+knockout+mice.">Insights into the function of Rim protein in photoreceptors and etiology of Stargardt's disease from the phenotype in abcr knockout mice.</a> Cell. 98, 13-23 (1999).</li><li>Holz, F. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+lysosomal+degradative+functions+in+RPE+cells+by+a+retinoid+component+of+lipofuscin.">Inhibition of lysosomal degradative functions in RPE cells by a retinoid component of lipofuscin.</a> Investigative ophthalmology &amp; visual science. 40, 737-743 (1999).</li><li>Sparrow, J. R., Nakanishi, K., Parish, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+lipofuscin+fluorophore+A2E+mediates+blue+light-induced+damage+to+retinal+pigmented+epithelial+cells.">The lipofuscin fluorophore A2E mediates blue light-induced damage to retinal pigmented epithelial cells.</a> Investigative ophthalmology &amp; visual science. 41, 1981-1989 (2000).</li><li>Smith, R. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipofuscin+and+autofluorescence+metrics+in+progressive+STGD.">Lipofuscin and autofluorescence metrics in progressive STGD.</a> Investigative ophthalmology &amp; visual science. 50, 3907-3914 (2009).</li><li>Delori, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+measurements+of+autofluorescence+with+the+scanning+laser+ophthalmoscope.">Quantitative measurements of autofluorescence with the scanning laser ophthalmoscope.</a> Investigative ophthalmology &amp; visual science. 52, 9379-9390 (2011).</li><li>Burke, T. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+fundus+autofluorescence+in+recessive+Stargardt+disease.">Quantitative fundus autofluorescence in recessive Stargardt disease.</a> Investigative ophthalmology &amp; visual science. 55, 2841-2852 (2014).</li><li>Duncker, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+fundus+autofluorescence+and+optical+coherence+tomography+in+best+vitelliform+macular+dystrophy.">Quantitative fundus autofluorescence and optical coherence tomography in best vitelliform macular dystrophy.</a> Investigative ophthalmology &amp; visual science. 55, 1471-1482 (2014).</li><li>Duncker, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+fundus+autofluorescence+distinguishes+ABCA4-associated+and+non-ABCA4-associated+bull's-eye+maculopathy.">Quantitative fundus autofluorescence distinguishes ABCA4-associated and non-ABCA4-associated bull's-eye maculopathy.</a> Ophthalmology. 122, 345-355 (2015).</li><li>Greenberg, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+fundus+autofluorescence+in+healthy+eyes.">Quantitative fundus autofluorescence in healthy eyes.</a> Investigative ophthalmology &amp; visual science. 54, 5684-5693 (2013).</li><li>Delori, F. C., Goger, D. G., Dorey, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-related+accumulation+and+spatial+distribution+of+lipofuscin+in+RPE+of+normal+subjects.">Age-related accumulation and spatial distribution of lipofuscin in RPE of normal subjects.</a> Investigative ophthalmology &amp; visual science. 42, 1855-1866 (2001).</li><li>Sparrow, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+fundus+autofluorescence+in+mice:+correlation+with+HPLC+quantitation+of+RPE+lipofuscin+and+measurement+of+retina+outer+nuclear+layer+thickness.">Quantitative fundus autofluorescence in mice: correlation with HPLC quantitation of RPE lipofuscin and measurement of retina outer nuclear layer thickness.</a> Investigative ophthalmology &amp; visual science. 54, 2812-2820 (2013).</li><li>Delori, F. C., Webb, R. H., Sliney, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maximum+permissible+exposures+for+ocular+safety+(ANSI+2000),+with+emphasis+on+ophthalmic+devices.">Maximum permissible exposures for ocular safety (ANSI 2000), with emphasis on ophthalmic devices.</a> Journal of the Optical Society of America. A, Optics, image science, and vision. 24, 1250-1265 (2007).</li></ol>

STA: no disclosures, JPG: no disclosures, RTS: consultant, Ocata Therapeutics.

غير طبيعي توزيع يبوفوسين RPE، سواء زيادة أو نقصان، هو علامة الحساسة من مرض شبكية العين ويترافق عادة مع فقدان وظيفة شبكية العين الحسية. هنا، نحن تصف تطبيق ق لتقييم يبوفوسين RPE. إدراج إشارة الفلورسنت الداخلية لتصحيح متغير قوة الليزر وكشف عن حساسية 9 جنبا إلى جنب مع ?...

الظهارة الصبغية الشبكية (RPE) تدعم وظيفة شبكية العين الحسية من خلال العديد من العمليات 1. ، الضمور البقعي المرتبط بالعمر (AMD) هو أهم سبب للعمى غير قابل للعلاج في الدول الصناعية ويتميز بالتغيرات التي تطرأ على RPE، بما في ذلك فقدان الصباغ، وفقدان الوظيفة وضمور. في أيه إم دي وفي الشيخوخة الطبيعية، وRPE يتراكم الفلورسنت، والعضيات المستمدة يحلول تحتوي على شظايا مبصرة المبتلعة، ويشار إلى حبيبات يبوفوسين. وقد ظن تراكم يبوفوسين RPE للإشارة الأكسدة اختلال وظيفي 1، ولكن أظهرت الدراسات الحديثة أن التشكل RPE لا تزال طبيعية في عيون الذين تتراوح أعمارهم بين مع مستويات عالية يبوفوسين 2. علامات ومع ذلك، أنماط غير طبيعية من توزيع يبوفوسين، في خسارة معينة من يبوفوسين، موثقة لأيه إم دي وأيه إم دي تقدم، سواء تشريحيا وسريريا 3،4 بروسس المعيبةالغناء من يبوفوسين RPE كما ثبت أن يحدث في بعض الإنحطاط في شبكية العين الموروثة. المرضى الذين يعانون من مرض ستارغاردت (STGD) تتراكم يبوفوسين في RPE في سن مبكرة، في نهاية المطاف تطوير فقدان رؤية مماثلة لتلك التي شوهدت في AMD 5. وتشير هذه النتائج إلى أن تراكم يبوفوسين نفسها قد تكون سامة ودفع RPE ضعف 6،7. ومع ذلك، فإن دراسة التصوير مفصلة من الموضوعات مع STGD مع مرور الوقت لم يؤكد أن تراكم يبوفوسين التنسيق أدى إلى فقدان RPE اللاحقة 8. وبالتالي، على الرغم من تشوهات يبوفوسين هي علامات لالإنحطاط في شبكية العين، وهو دور لسمية مباشرة لليبوفوسين لا تزال غير مثبتة. وRPE هو معظم طبقة الخلايا الخلفي للشبكية، ولكن يولد غالبية إشارة الفلورسنت من قاع العين. جيل والكشف عن تألق ذاتي (AF) المستمدة من RPE يمكن القيام بها باستخدام متحد البؤر المسح بالليزر تنظير العين (cSLO)، والذي يسمح لالسادسsualization من التوزيع المكاني للAF قاع. بعض الإنحطاط الشبكية تظهر أنماط متميزة من قاع AF، وAF المساعدات التصوير في تشخيص ورصد هذه الظروف. على الرغم من أن معيار التصوير AF مهم سريريا، أصبح AF الكمي (ق) وسيلة هامة لمعرفة مدى صحة RPE. نحن وآخرون قد وضعت نهج موحد التي يمكن أن تحدد بشكل موثوق مستويات ق في مواقع شبكية محددة 9. ق لها تطبيقات محتملة في تشخيص ورصد الأوضاع في شبكية العين، وربما أيضا أداة في التشخيص وخطر التقسيم الطبقي. وبالإضافة إلى ذلك، كما تم وصفه القدرات التشخيصية للق لبعض اضطرابات الشبكية 10-12. هنا، ونحن نقدم تفاصيل تدريجي لأداء أسلوبنا يرافقه مظاهرة البصرية لتطبيقها في تقييم صحة العينين والمريضة.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="671">
	<tbody>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:243px;">Spectralis HRA + OCT</td>
			<td style="width:143px;">Heidelberg Engineering</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">0.5% tropicamide ophthalmic solution</td>
			<td style="width:143px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td>Any brand can be used</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">2.5% phenylephrine ophthalmic solution</td>
			<td style="width:143px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td>Any brand can be used</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:243px;">Internal fluorescent reference</td>
			<td style="width:143px;">Heidelberg Engineering</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">IGOR Pro software</td>
			<td style="width:143px;">WaveMetrics</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantitative fundus autofluorescence for the evaluation of retinal diseases

The retinal pigment epithelium (RPE) is juxtaposed to the overlying sensory retina, and supports the function of the visual system. Among the tasks performed by the RPE are phagocytosis and processing of outer photoreceptor segments through lysosome-derived organelles. These degradation products, stored and referred to as lipofuscin granules, are composed partially of bisretinoids, which have broad fluorescence absorption and emission spectra that can be detected clinically as fundus autofluorescence with confocal scanning laser ophthalmoscopy (cSLO). Lipofuscin accumulation is associated with increasing age, but is also found in various patterns in both acquired and inherited degenerative diseases of the retina. Thus, studying its pattern of accumulation and correlating such patterns with changes in the overlying sensory retina are essential to understanding the pathophysiology and progression of retinal disease. Here, we describe a technique employed by our lab and others that uses cSLO in order to quantify the level of RPE lipofuscin in both healthy and diseased eyes.

وقد استخدمت هذه التقنية لدراسة ق في كلا صحية 13 والمرض الدول 10-12. في عيون صحية (الشكل 1)، وتوزع AF المنبعثة من RPE موحد نسبيا في جميع أنحاء قاع (الشكل 1A). ويعتبر انخفاض كثافة في منطقة البقعة المركزية بسبب حجب الضوء عن طريق الصب...

Watch this Scientific Journal Video about Quantitative Fundus Autofluorescence for the Evaluation of Retinal Diseases at JoVE.com

Quantitative Fundus Autofluorescence for the Evaluation of Retinal Diseases

الكمية قاع العين تألق ذاتي لتقييم أمراض الشبكية

The retinal pigment epithelium (RPE) supports the sensory retina through recycling visual cycle byproducts, which accumulate as lipofuscin. These products are autofluorescent and can be qualitatively imaged in vivo. Here, we describe a method to quantitatively image RPE lipofuscin using confocal scanning laser ophthalmoscopy.

The retinal pigment epithelium (RPE) is juxtaposed to the overlying sensory retina, and supports the function of the visual system. Among the tasks ...

quantitative-fundus-autofluorescence-for-evaluation-retinal

Research

JoVE Journal

Medicine

11.3K Views.  NYU School of Medicine. The retinal pigment epithelium (RPE) supports the sensory retina through recycling visual cycle byproducts, which accumulate as lipofuscin. These products are autofluorescent and can be qualitatively imaged in vivo. Here, we describe a method to quantitatively image RPE lipofuscin using confocal scanning laser ophthalmoscopy. 

Video: Quantitative Fundus Autofluorescence for the Evaluation of Retinal Diseases

The Use of Primary Human Fibroblasts for Monitoring Mitochondrial Phenotypes in the Field of Parkinson's Disease

Parkinson's disease (PD) is the second most common movement disorder and affects 1% of people over the age of 60 1. Because ageing is the most important risk factor, cases of PD will increase during the next decades 2. Next to pathological protein folding and impaired protein degradation pathways, alterations of mitochondrial function and morphology were pointed out as further hallmark of neurodegeneration in PD 3-11.
After years of research in murine and human cancer cells as in vitro models to dissect molecular pathways of Parkinsonism, the use of human fibroblasts from patients and appropriate controls as ex vivo models has become a valuable research tool, if potential caveats are considered. Other than immortalized, rather artificial cell models, primary fibroblasts from patients carrying disease-associated mutations apparently reflect important pathological features of the human disease.
Here we delineate the procedure of taking skin biopsies, culturing human fibroblasts and using detailed protocols for essential microscopic techniques to define mitochondrial phenotypes. These were used to investigate different features associated with PD that are relevant to mitochondrial function and dynamics. Ex vivo, mitochondria can be analyzed in terms of their function, morphology, colocalization with lysosomes (the organelles degrading dysfunctional mitochondria) and degradation via the lysosomal pathway. These phenotypes are highly relevant for the identification of early signs of PD and may precede clinical motor symptoms in human disease-gene carriers. Hence, the assays presented here can be utilized as valuable tools to identify pathological features of neurodegeneration and help to define new therapeutic strategies in PD.

Fibroblasts from patients carrying mutations in Parkinson's disease-causing genes represent an easily accessible ex vivo model to study disease-associated phenotypes. Live cell imaging gives the opportunity to study morphological and functional parameters in living cells. Here we describe the preparation of human fibroblasts and subsequent monitoring of mitochondrial phenotypes.

استخدام الخلايا الليفية الإنسان الأساسية لرصد نمط ظاهري الميتوكوندريا في مجال مرض باركنسون

Parkinson's disease (PD) is the second most  common movement disorder and affects 1% of people over the age of 60 1. Because ageing is  the most important ...

Techniques for Processing Eyes Implanted with a Retinal Prosthesis for Localized Histopathological Analysis: Part 2 Epiretinal Implants with Retinal Tacks

Retinal prostheses for the treatment of certain forms of blindness are gaining traction in clinical trials around the world with commercial devices currently entering the market. In order to evaluate the safety of these devices, in preclinical studies, reliable techniques are needed. However, the hard metal components utilised in some retinal implants are not compatible with traditional histological processes, particularly in consideration for the delicate nature of the surrounding tissue. Here we describe techniques for assessing the health of the eye directly adjacent to a retinal implant secured epiretinally with a metal tack.
Retinal prostheses feature electrode arrays in contact with eye tissue. The most commonly used location for implantation is the epiretinal location (posterior chamber of the eye), where the implant is secured to the retina with a metal tack that penetrates all the layers of the eye. Previous methods have not been able to assess the proximal ocular tissue with the tack in situ, due to the inability of traditional histological techniques to cut metal objects. Consequently, it has been difficult to assess localized damage, if present, caused by tack insertion.
Therefore, we developed a technique for visualizing the tissue around a retinal tack and implant. We have modified an established technique, used for processing and visualizing hard bony tissue around a cochlear implant, for the soft delicate tissues of the eye. We orientated and embedded the fixed eye tissue, including the implant and retinal tack, in epoxy resin, to stabilise and protect the structure of the sample. Embedded samples were then ground, polished, stained, and imaged under various magnifications at incremental depths through the sample. This technique allowed the reliable assessment of eye tissue integrity and cytoarchitecture adjacent to the metal tack.

Here we describe histological techniques for visualising ocular tissue directly adjacent to a metal epiretinal tack and retinal prosthesis.

تقنيات لمعالجة عيون مزروع مع الشبكية الأطراف الاصطناعية للالمترجمة تحليل المرضية: الجزء 2 فوق الشبكي يزرع مع الشبكية المسامير

Retinal prostheses for the treatment of certain forms of blindness are gaining traction in clinical trials around the world with commercial devices ...

Automated Radiochemical Synthesis of [18F]3F4AP: A Novel PET Tracer for Imaging Demyelinating Diseases

3-[18F]fluoro-4-aminopyridine, [18F]3F4AP, is a radiofluorinated analog of the FDA-approved drug for multiple sclerosis 4-aminopyridine (4AP). This compound is currently under investigation as a PET tracer for demyelination. We recently described a novel chemical reaction to produce metafluorinated pyridines consisting of direct fluorination of a pyridine N-oxide and the utilization of this reaction for the radiochemical synthesis of [18F]3F4AP. In this article, we demonstrate how to produce this tracer using an automated synthesizer and an in-house made flow hydrogenation reactor. We also show the standard quality control procedures performed before releasing the radiotracer for preclinical animal imaging studies. This semi-automated procedure may serve as the basis for future production of [18F]3F4AP for clinical studies.

Automated Radiochemical Synthesis of [18F]3F4AP: A Novel PET Tracer for Imaging Demyelinating Diseases

We demonstrate the semi-automated radiochemical synthesis of [18F]3F4AP and quality control procedures.

الآلي التجميع الإشعاعي الكيميائي [<sup&gt; 18</sup&gt; F] 3F4AP: رواية بيت التصوير للتصوير الأمراض المزيلة

3-[18F]fluoro-4-aminopyridine, [18F]3F4AP, is a radiofluorinated analog of the FDA-approved drug for multiple sclerosis 4-aminopyridine (4AP). This ...

Smartphone Fundus Photography

Smartphone fundus photography is a simple technique to obtain ocular fundus pictures using a smartphone camera and a conventional handheld indirect ophthalmoscopy lens. This technique is indispensable when picture documentation of optic nerve, retina, and retinal vessels is necessary but a fundus camera is not available. The main advantage of this technique is the widespread&#160;availability of smartphones that allows documentation of macula and optic nerve changes in many settings that was not previously possible. Following the well-defined steps detailed here, such as proper alignment of the phone camera, handheld lens, and the patient&#39;s pupil, is the key for obtaining a clear retina picture with no interfering light reflections and aberrations. In this paper, the optical principles of indirect ophthalmoscopy and fundus photography will be reviewed first. Then, the step-by-step method to record a good quality retinal image using a smartphone will be explained.

Fundus photography normally requires specialized fundus cameras that are not always available in all clinical settings.&#160;Here, a simple method to record ocular fundus images using a smartphone camera and a conventional high-plus handheld indirect ophthalmoscopy lens is described.

الهاتف الذكي قاع التصوير

Smartphone fundus photography is a simple technique to obtain ocular fundus pictures using a smartphone camera and a conventional handheld indirect ...

Using Retinal Imaging to Study Dementia

The retina offers a unique &#8220;window&#8221; to study pathophysiological processes of dementia in the brain, as it is an extension of the central nervous system (CNS) and shares prominent similarities with the brain in terms of embryological origin, anatomical features and physiological properties.&#160; The vascular and neuronal structure in the retina can now be visualized easily and non-invasively using retinal imaging techniques, including fundus photography and optical coherence tomography (OCT), and quantified semi-automatically using computer-assisted analysis programs. Studying the associations between vascular and neuronal changes in the retina and dementia could improve our understanding of dementia and, potentially, aid in diagnosis and risk assessment.&#160; This protocol aims to describe a method of quantifying and analyzing retinal vasculature and neuronal structure, which are potentially associated with dementia. This protocol also provides examples of retinal changes in subjects with dementia, and discusses technical issues and current limitations of retinal imaging.

The retina shares prominent similarities with the brain and thus represents a unique window to study vasculature and neuronal structure in the brain non-invasively. This protocol describes a method to study dementia using retinal imaging techniques. This method can potentially aid in diagnosis and risk assessment of dementia.

باستخدام تصوير الشبكية لدراسة الخرف

The retina offers a unique &#8220;window&#8221; to study pathophysiological processes of dementia in the brain, as it is an extension of the central ...

Invasive Hemodynamic Assessment for the Right Ventricular System and Hypoxia-Induced Pulmonary Arterial Hypertension in Mice

Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a chronic and severe cardiopulmonary disorder. Mice are a popular animal model used to mimic this disease. However, the evaluation of right ventricular pressure (RVP) and pulmonary artery pressure (PAP) remains technically challenging in mice. RVP and PAP are more difficult to measure than left ventricular pressure because of the anatomical differences between the left and right heart systems. In this paper, we describe a stable right heart hemodynamic measurement method and its validation using healthy and PAH mice. This method is based on open-chest surgery and mechanical ventilation support. It is a complicated procedure compared to closed chest procedures. While a well-trained surgeon is required for this surgery, the advantage of this procedure is that it can generate both RVP and PAP parameters at the same time, so it is a preferable procedure for the evaluation of PAH models.

Here, we present a protocol to perform an invasive hemodynamic assessment of the right ventricle and pulmonary artery in mice using an open-chest surgery approach.

تقييم الأورام الدموية الغازية لنظام البطين الأيمن وفرط ضغط الدم الرئوي الناجم عن نقص الأكسجين في الفئران

Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a chronic and severe cardiopulmonary disorder. Mice are a popular animal model used to mimic this disease. ...

Oxygen-Induced Retinopathy Model for Ischemic Retinal Diseases in Rodents

One of the commonly used models for ischemic retinopathies is the oxygen-induced retinopathy (OIR) model. Here we describe detailed protocols for the OIR model induction and its readouts in both mice and rats. Retinal neovascularization is induced in OIR by exposing rodent pups either to hyperoxia (mice) or alternating levels of hyperoxia and hypoxia (rats). The primary readouts of these models are the size of neovascular (NV) and avascular (AVA) areas in the retina. This preclinical in vivo model can be used to evaluate the efficacy of potential anti-angiogenic drugs or to address the role of specific genes in the retinal angiogenesis by using genetically manipulated animals. The model has some strain and vendor specific variation in the OIR induction which should be taken into consideration when designing the experiments.

Oxygen-induced retinopathy (OIR) can be used to model ischemic retinal diseases such as retinopathy of prematurity and proliferative diabetic retinopathy and to serve as a model for proof-of-concept studies in evaluating antiangiogenic drugs for neovascular diseases. OIR induces robust and reproducible neovascularization in the retina that can be quantified.

الأكسجين الناجم عن نموذج اعتلال الشبكية لأمراض الشبكية الإقفاري في القوارض

One of the commonly used models for ischemic retinopathies is the oxygen-induced retinopathy (OIR) model. Here we describe detailed protocols for the OIR ...

Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases

Retinal pigment epithelial (RPE) transplantation holds great promise for the treatment of inherited and acquired retinal degenerative diseases. These conditions include retinitis pigmentosa (RP) and advanced forms of age-related macular degeneration (AMD), such as geographic atrophy (GA). Together, these disorders represent a significant proportion of currently untreatable blindness globally. These unmet medical needs have generated heightened academic interest in developing methods of RPE replacement. Among the animal models commonly utilized for preclinical testing of therapeutics, the non-human primate (NHP) is the only animal model that has a macula. As it shares this anatomical similarity with the human eye, the NHP eye is an important and appropriate preclinical animal model for the development of advanced therapy medicinal products (ATMPs) such as RPE cell therapy.
This manuscript describes a method for the submacular transplantation of an RPE monolayer, cultured on a polyethylene terephthalate (PET) cell carrier, underneath the macula onto a surgically created RPE wound in immunosuppressed NHPs. The fovea-the central avascular portion of the macula-is the site of the greatest mechanical weakness during the transplantation. Foveal trauma will occur if the initial subretinal fluid injection generates an excessive force on the retina. Hence, slow injection under perfluorocarbon liquid (PFCL) vitreous tamponade is recommended with a dual-bore subretinal injection cannula at low intraocular pressure (IOP) settings to create a retinal bleb. 
Pretreatment with an intravitreal plasminogen injection to release parafoveal RPE-photoreceptor adhesions is also advised. These combined strategies can reduce the likelihood of foveal tears when compared to conventional techniques. The NHP is a key animal model in the preclinical phase of RPE cell therapy development. This protocol addresses the technical challenges associated with the delivery of RPE cellular therapy in the NHP eye.

The non-human primate (NHP) is an ideal model for studying human retinal cellular therapeutics due to the anatomical and genetic similarities. This manuscript describes a method for submacular transplantation of retinal pigment epithelial cells in the NHP eye and strategies to prevent intraoperative complications associated with macular manipulation.

زرع ظهارة صبغة الشبكية في نموذج الرئيسيات غير البشرية لأمراض الشبكية التنكسية

Retinal pigment epithelial (RPE) transplantation holds great promise for the treatment of inherited and acquired retinal degenerative diseases. These ...

Retinal Pathophysiological Evaluation in a Rat Model

A posterior segment eye disease like diabetic retinopathy alters the physiology of the retina. Diabetic retinopathy is characterized by a retinal detachment, breakdown of the blood-retinal barrier (BRB), and retinal angiogenesis. An in vivo rat model is a valuable experimental tool to examine the changes in the structure and function of the retina. We propose three different experimental techniques in the rat model to identify morphological changes of retinal cells, retinal vasculature, and compromised BRB. Retinal histology is used to study the morphology of various retinal cells. Also, quantitative measurement is performed by retinal cell count and thickness measurement of different retinal layers. A BRB breakdown assay is used to determine the leakage of extraocular proteins from the plasma to vitreous tissue due to the breakdown of BRB. Fluorescence angiography is used to study angiogenesis and leakage of blood vessels by visualizing retinal vasculature using FITC-dextran dye.

Diabetic retinopathy is one of the leading causes of blindness. Histology, blood-retinal barrier breakdown assay, and fluorescence angiography are valuable techniques to understand the pathophysiology of the retina, which could further enhance the efficient drug screening against diabetic retinopathy.

التقييم الفسيولوجي المرضي للشبكية في نموذج الفئران

A posterior segment eye disease like diabetic retinopathy alters the physiology of the retina. Diabetic retinopathy is characterized by a retinal ...

Repetitive Blood Sampling from the Subclavian Vein of Conscious Rat

Rats are widely used in pharmacokinetics (PK) and toxicokinetic (TK) studies that need to collect a certain amount of blood at specific time points to detect drug exposure. The rat blood sampling method determines the quality of the plasma and further affects the precision of the test results. The subclavian vein blood collection method described in this protocol collects blood samples repeatedly in the conscious state of animals to meet the needs of PK and TK tests. The skills of restraint handling and appropriate procedure of needle incision ensure the success rate of blood collection. It is easy to operate while ensuring the quality of plasma and at the same time catering to animal welfare. However, this method requires skilled operation, and an improper one may cause animal weakness, pain, lameness, and even mortality. The current method has been used in the testing facility for a 4-week oral toxicity study in Sprague Dawley (SD) rats with TK. The maximum amount of blood collected within 24 h did not exceed 20% of the animal's total blood. The animals' body weight was more than 200 g for males and females. The data showed that the animals' bodyweight increased steadily every week, and the clinical observation was normal after repetitive sample collection.

The present protocol describes a simple and efficient method for collecting blood from the subclavian vein in rats. It enables rapid, timely, and easily identifiable sampling without anesthesia and obtains high-quality blood through repetitive sample collection.

أخذ عينات الدم المتكررة من الوريد تحت الترقوة للفأر الواعي

Rats are widely used in pharmacokinetics (PK) and toxicokinetic (TK) studies that need to collect a certain amount of blood at specific time points to ...