Biz işbirlikçileri, Francois Delori, Tomas Burke ve Tobias Duncker teşekkür etmek istiyorum. Araştırma Destek: NIH / NEI R01 EY015520 (RTS, JPG), ve Research sınırsız fonlar Körlük (GZT) Önlemek için.

Etik Beyanı: Bu çalışmalarda kayıtlı tüm hastalar Tıp New York Üniversitesi Okulu&#39;nda onaylanan kurumsal inceleme kurulu gözetim uyarınca bu yüzden yapılmıştır. 1. Hasta Seçimi ve Görüntüleme için ilk hazırlık Not: Aşağıdaki malzemeler gereklidir:% 0.5 tropikamid oftalmik solüsyon,% 2.5 fenilefrin oftalmik solüsyon, cSLO spektral domain optik koherens tomografi (SD-OCT) ve iç floresan referans ile donatılmıştır. <ol><li> görüntüleme önce, uygun bir şekilde, üretici talimatlarına uygun olarak veri toplama için cSLO ayarlayın. </li><li> cSLO bir iç floresan referansı monte edin. Not: üreticiden satın gibi iç floresan referans, bir metal halkaya yer almaktadır ve kamera lensi arkasında yerleştirilir. Başka bir üretici bir cSLO kullanılırsa, anlatılan daha başka bir konfigürasyon olabilirBu protokol. <ol><li> , CSLO içine referans eklemek çıkarmak için merceği büküm için, makinenin metal halka sökün ve referans içeren yeni metal halka ile değiştirin. Not: lazer gücü ve detektör duyarlılığı / kazanç varyasyonu için düzeltme sağlar iç floresan referans QAF tekniği için gereklidir. </li></ol></li><li> görüntüleme için işe hastalar rutin dilate göz muayenesi ve geçmiş göz tarih ve göz bulguları ile ortaya çıkabilir altta yatan tıbbi durumlar ile ilgili temel bilgileri elde var. </li><li> % 0.5 tropikamid ve% 2.5 fenilefrin ile öğrencileri dilate. KRİTİK ADIM: en az 6 mm pupili genişletmek. Not: Bu ışığın kesintisiz geçişi için gerekli ve böylece fundus optimal görselleştirme ve ölçüm içindir. </li><li> görüntüleme öncesinde, çene çenelik dayayarak, cSLO düzgün hastayı konumlandırmak, alın forehea karşı yerleştirilird dinlenme ve yanal canthi düzgün göstergeleri ile uyumlu. </li></ol> Göz Fundus 2. Baseline Görüntüleme <ol><li> İlk olarak, görüntü kaba odak makula üzerinde kamera merkezileştirme ve elde etmek için yakın kızılötesi yansıma (IR) ışık (820 nm dalga boyu) ile fundus. <ol><li> Hasta düzgün yerleştirilmiş olan IR görüntüleme modu için kontrol panelindeki donanım ayarını değiştirmek, fundus pozisyon kamera tam odak ve bir görüntü almak elle kadar </li><li> Altta yatan hastalığın maküler değerlendirmek için IR görüntüleme ile birlikte spektral domain optik koherens tomografi (SD-OCT) kullanan kontrol paneline &quot;IR-Ekim&quot;, ayarı ayarlayın. </li><li> görüntüleme penceresi mevcut kılavuzlar fundus IR görüntü OCT yönlendirmek doğru kullanın. Optimal SD-OCT kalitesi elde Ekim görüntünün görüntüleme penceresinin üst üçte birinde olacak şekilde kamerayı konumlandırın. en az bir yatay çizgi sc Edinmefovea aracılığıyla ve tüm görüntüleme alanını kapsayan. </li></ol></li></ol> 3. Kaf Görüntüleme kurma <ol><li> &quot;Yüksek hızlı&quot; görüntü elde etme kullanın. Not: Bu ayar sayesinde hasta hareketi ve iris veya göz kapaklarının ışığın ortaya çıkan tıkanıklık sinyal kaybı riskini azaltır hızlı görüntü elde etmek için izin verir. </li><li> kare &quot;9 ortalama&quot; kullanın. Not: Bu ayar sonradan olabilir 9 görüntü kareleri, hızlı, sıralı yakalama sağlar (aşağıya bakınız) gürültü ve paraziti azaltmak için &quot;ortalama&quot;. </li><li> &quot;30 x 30 derece&quot; alanını kullanın. Not: Bu görüntü alımı sırasında yakalanan retina alanının dereceye karşılık gelir. </li><li> Bu ilk başta endişe verici olabilir gibi görüntüleme öncesinde, mavi ışık ile ilgili hastayı uyarmak. </li><li> AF modunu açın ve ekran maksimum fundus AF (taraf ve görüntünün köşelerinde minimal koyulaşması) ile &quot;dolu&quot; şekilde kamera ekseni hizalayın. <ol><li> Hastalar h EğerParlak mavi ışık tolere ave zorluk, daha uzağa göz kamera ile görüntüleme başlatın ve sonra fundus tam görünümünde olduğu kadar hastanın doğru yavaşça kamera getirmek. KRİTİK ADIM: Işık engellendiğinde giren veya göz çıktıktan, sinyal neden olur azalmıştır. Lokalize düşüş bir görüntü yan veya köşe asimetrik koyulaşması olarak görülebilir. göz hareketleri yalnız ışık geçişini engellemeye zaman sinyal Genelleştirilmiş kaybı görülür. </li></ol></li><li> AF sinyal alanı boyunca en yüksek seviyede olacak şekilde kamerayı aynı hizaya getirin. ancak onlar kabaca korelasyon, maksimum sinyal ziyade keskin görüntü için hedefleyin. elle veya oftalmoskop kamerayı joystick ile yeniden konumlandırmak için cSLO hareket ettirerek kamera odağı ayarlayın. </li><li> fundus AF kolayca görülebilir şekilde hassasiyet / kazanç ayarlayın, ancak aşırı doygunluk kaçının. görüntü alımı sırasında, iç referans ya görünür renkli piksel (üst kısmında bulunangörüntü) ya da fundus sinyalinin doygunluk aşırı ve dolayısıyla kaybı gösterir. </li></ol> 4. Görüntü Alma Not: KRİTİK ADIM: görüntü alımı amaç bir oturum içinde görüntüler arasında değişkenlik kontrol etmek için seans başına 2 yüksek kalite 9-kare görüntü yığınları elde etmek olmalıdır. Hastayı ve kamerayı yeniden konumlandırmak sonra, değişkenliği ikinci değerlendirmek için iki görüntü oturumu ve kontrolünü sağlamak. Tüm görüntüler sonuçta iç referans (aşağıda tarif edilmiştir) kalibre edilir. <ol><li> Sadece duyusal retinanın 9 rodopsin ışığın emilimini en aza indirmek için &quot;ağartma&quot; (AF ışık retinanın tam maruz kalma) en az 20 saniye sonra görüntü kazanır. <ol><li> Kamera hizalama, odak ve hassasiyetini optimize etmek için bu süreyi kullanın. </li></ol></li><li> taze gözyaşı filmi sinyal kalitesini artırır her görüntü alımı öncesinde yanıp konuları var. </li><li> edinimi düzlemde göz kapaklarını kaçının. Not: daha zorlu hastalar için el açık göz kapaklarının yararlı olabilir. Yazarlar asistan bu görevi yerine öneririz. </li><li> o ışık azalmış sinyal sonuçlanan iris ile tıkalı olmadığından emin olmak için her görüntü alımı öncesinde hizalama Optimize. Not: As, en azından küçük bir hareket çok yaygındır, yazarlar her görüntü alımı öncesinde gerekli ince yeniden düzenlenmesi önerilmektedir. Rehberlik ve görüntüleme azalma hareketini yardımcı olur hastayı teşvik etmek. Operatör oyalama en aza indirecek şekilde yazarlar da &quot;satın alma düğmesi&quot; olarak makinenin ayak pedalı kullanmanızı öneririz. </li><li> sinyal-gürültü oranını artırmak için 9 kare yığının &quot;ortalama&quot; bilgisayar post-görüntü işleme gerçekleştirin. ortalamasını hesaplamak seçeneğini seçerek cSLO yazılımını kullanarak bir yığın ortalamasını hesaplayın. Not: Bazı kareler optimum kalitede olmayan yığınları olabilir (yani, lokalize veya yaygın si azalmıştırOptimal kareye kadar gnal göreceli), bu nedenle dikkatli bir şekilde her yığını incelemek ve ortalama hesaplama önce optimal çerçeveleri kaldırın. Not: olarak kabul edilebilir bir sinyal-gürültü oranına sahip ortalama görüntüler en aşağı 3 çerçeve arasında işlenebilir. taraf ve her görüntünün köşeleri cSLO kendi içinde sınırlamaları nedeniyle santral 20 derece daha düşük sinyal için normaldir. <ol><li> Yazılım operatörü gri düzeylerini normale isteyip istemediğinizi sorarsa, &quot;Hayır&quot; ı seçin 0 ile 255 arasında (yani, histogram germek). Bu analiz için değişmeden gri düzeylerini korumaktadır. </li></ol></li></ol> 5. Görüntü Analizi <ol><li> Daha önce Kaf tekniği için geliştirilmiş görüntü analiz yazılımı kullanarak tarif edildiği gibi AF görüntüleri analiz (Igor; 9). Bu yazılımı kullanarak tipik bir görüntü analizinin kısa bir açıklaması aşağıda yer almaktadır. <ol><li> ihraç Igor içinde Kaf program ve (.bmp formatında) ithalat görüntüleri yüklemekpiksel en boy oranı 768 x 768 (varsayılan çıkış parametresi) ile cSLO yazılımı. </li><li> Açılır menüde görüntüyü seçin ve analizi başlatmak. </li><li> &quot;Crosshair&#39;i&quot; foveayı ve &quot;dirsek&quot; optik diski (bu göstergeler İB&#39;leri ölçek ve konumlandırmak için kullanılır) dayanması örten şekilde resmin üzerine kalibrasyon göstergelerini yerleştirin. Doğru bir şekilde yerleştirildiğinde, kullanım yazılımı daha sonra foveayı çevreleyen çevresel ROI (bkz Şekil 1, 2) ile görüntüyü doldurmak istemleri. </li><li> iç floresan referans bulunanların seviyelere her görüntünün genel gri düzeyleri kalibre Igor seçeneği seçin. Not: Bu adım her görüntünün elektronik sıfır düzeyine ve her makinenin dahili referans kalibrasyon faktörü yanı sıra yaş, kırılma ve kornea eğrilik dahil hasta ile ilgili faktörler de dahil olmak üzere makine-ilişkili faktörler, kalibrasyonu için izin verir. Not: analiz yazılımı daha sonra sabit r görüntülerElde edilen görüntü ve QAF değerine egions her bölgede gösterilmiştir. Kaf değerleri otomatik olarak ayrı bir pencerede bir tablo biçiminde girilir. &quot; </li><li> komut istemleri dahilinde seçeneği seçerek Kaf &quot;ısı haritaları&quot; oluşturun. Tüm resimler ve veriler uygun seçenekleri seçerek bir excel elektronik tablodaki IGOR yazılım ihraç edilebilir. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Strauss, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+retinal+pigment+epithelium+in+visual+function.">The retinal pigment epithelium in visual function.</a> Physiological reviews. 85, 845-881 (2005).</li><li>Ach, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+autofluorescence+and+cell+density+maps+of+the+human+retinal+pigment+epithelium.">Quantitative autofluorescence and cell density maps of the human retinal pigment epithelium.</a> Investigative ophthalmology &amp; visual science. 55, 4832-4841 (2014).</li><li>Ach, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipofuscin+redistribution+and+loss+accompanied+by+cytoskeletal+stress+in+retinal+pigment+epithelium+of+eyes+with+age-related+macular+degeneration.">Lipofuscin redistribution and loss accompanied by cytoskeletal stress in retinal pigment epithelium of eyes with age-related macular degeneration.</a> Investigative ophthalmology &amp; visual science. 56, 3242-3252 (2015).</li><li>Schmitz-Valckenberg, S., Jorzik, J., Unnebrink, K., Holz, F. G., Group, F. A. M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+digital+scanning+laser+ophthalmoscopy+fundus+autofluorescence+images+of+geographic+atrophy+in+advanced+age-related+macular+degeneration.">Analysis of digital scanning laser ophthalmoscopy fundus autofluorescence images of geographic atrophy in advanced age-related macular degeneration.</a> Graefe's archive for clinical and experimental ophthalmology = Albrecht von Graefes Archiv fur klinische und experimentelle Ophthalmologie. 240, 73-78 (2002).</li><li>Weng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insights+into+the+function+of+Rim+protein+in+photoreceptors+and+etiology+of+Stargardt's+disease+from+the+phenotype+in+abcr+knockout+mice.">Insights into the function of Rim protein in photoreceptors and etiology of Stargardt's disease from the phenotype in abcr knockout mice.</a> Cell. 98, 13-23 (1999).</li><li>Holz, F. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+lysosomal+degradative+functions+in+RPE+cells+by+a+retinoid+component+of+lipofuscin.">Inhibition of lysosomal degradative functions in RPE cells by a retinoid component of lipofuscin.</a> Investigative ophthalmology &amp; visual science. 40, 737-743 (1999).</li><li>Sparrow, J. R., Nakanishi, K., Parish, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+lipofuscin+fluorophore+A2E+mediates+blue+light-induced+damage+to+retinal+pigmented+epithelial+cells.">The lipofuscin fluorophore A2E mediates blue light-induced damage to retinal pigmented epithelial cells.</a> Investigative ophthalmology &amp; visual science. 41, 1981-1989 (2000).</li><li>Smith, R. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipofuscin+and+autofluorescence+metrics+in+progressive+STGD.">Lipofuscin and autofluorescence metrics in progressive STGD.</a> Investigative ophthalmology &amp; visual science. 50, 3907-3914 (2009).</li><li>Delori, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+measurements+of+autofluorescence+with+the+scanning+laser+ophthalmoscope.">Quantitative measurements of autofluorescence with the scanning laser ophthalmoscope.</a> Investigative ophthalmology &amp; visual science. 52, 9379-9390 (2011).</li><li>Burke, T. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+fundus+autofluorescence+in+recessive+Stargardt+disease.">Quantitative fundus autofluorescence in recessive Stargardt disease.</a> Investigative ophthalmology &amp; visual science. 55, 2841-2852 (2014).</li><li>Duncker, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+fundus+autofluorescence+and+optical+coherence+tomography+in+best+vitelliform+macular+dystrophy.">Quantitative fundus autofluorescence and optical coherence tomography in best vitelliform macular dystrophy.</a> Investigative ophthalmology &amp; visual science. 55, 1471-1482 (2014).</li><li>Duncker, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+fundus+autofluorescence+distinguishes+ABCA4-associated+and+non-ABCA4-associated+bull's-eye+maculopathy.">Quantitative fundus autofluorescence distinguishes ABCA4-associated and non-ABCA4-associated bull's-eye maculopathy.</a> Ophthalmology. 122, 345-355 (2015).</li><li>Greenberg, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+fundus+autofluorescence+in+healthy+eyes.">Quantitative fundus autofluorescence in healthy eyes.</a> Investigative ophthalmology &amp; visual science. 54, 5684-5693 (2013).</li><li>Delori, F. C., Goger, D. G., Dorey, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-related+accumulation+and+spatial+distribution+of+lipofuscin+in+RPE+of+normal+subjects.">Age-related accumulation and spatial distribution of lipofuscin in RPE of normal subjects.</a> Investigative ophthalmology &amp; visual science. 42, 1855-1866 (2001).</li><li>Sparrow, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+fundus+autofluorescence+in+mice:+correlation+with+HPLC+quantitation+of+RPE+lipofuscin+and+measurement+of+retina+outer+nuclear+layer+thickness.">Quantitative fundus autofluorescence in mice: correlation with HPLC quantitation of RPE lipofuscin and measurement of retina outer nuclear layer thickness.</a> Investigative ophthalmology &amp; visual science. 54, 2812-2820 (2013).</li><li>Delori, F. C., Webb, R. H., Sliney, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maximum+permissible+exposures+for+ocular+safety+(ANSI+2000),+with+emphasis+on+ophthalmic+devices.">Maximum permissible exposures for ocular safety (ANSI 2000), with emphasis on ophthalmic devices.</a> Journal of the Optical Society of America. A, Optics, image science, and vision. 24, 1250-1265 (2007).</li></ol>

STA: no disclosures, JPG: no disclosures, RTS: consultant, Ocata Therapeutics.

Anormal RPE lipofusin dağılımı, artmış ya da azalmış olup, retina hastalığı duyarlı bir göstergesidir ve genellikle duyu retina fonksiyonunun kaybı ile ilişkilidir. Burada, RPE lipofusin değerlendirilmesi için Kaf uygulanmasını açıklar. Bir iç floresan referans Ortaklığımızın standart görüntüleme tekniği yanında değişken lazer güç ve dedektör hassasiyeti 9 düzeltmek için AF seviyelerinin güvenilir kantitatif için izin verir. Bu yöntem, ilaç veya gen tedavisi gibi tı...

Retina pigment epiteli (RPE) sayısız süreçleri 1 ile duyusal retinanın işlevini destekler. Yaşa bağlı makula dejenerasyonu (YBMD) sanayileşmiş ülkelerde tedavi edilemez körlüğün en önemli nedenidir ve pigment kaybı, fonksiyon ve atrofi kaybı dahil RPE değişiklikleri ile karakterizedir. AMD ve normal yaşlanma, RPE lipofusin granül olarak anılacaktır fagosite fotoreseptör parçalarını içeren floresan, lizozom türevi organeller birikir. RPE lipofusin birikimi oksidatif disfonksiyonu 1 belirtmek için düşünülmüştür, ancak son çalışmalar RPE morfolojisi yüksek lipofusin seviyeleri 2 ile yaşlı gözlerde normal kaldığını göstermiştir. AMD ve AMD ilerlemesi Ancak, lipofusin dağılımı anormal desenler, lipofusin özellikle kaybına, belgelenen belirteçler, histolojik ve klinik 3,4 hem de arızalı süreçRPE lipofusin şarkı da belli kalıtsal retina dejenerasyonlar meydana geldiği görülmüştür. Stargardt hastalığı (STGH) muzdarip hastalar sonunda AMD 5 görülene benzer görme kaybına geliştirilmesi, genç yaşta RPE lipofusin birikir. Bu bulgular lipofusin birikimi kendisi toksik ve RPE disfonksiyonu 6,7 sürebileceği ileri sürdü. Ancak, zaman içinde STGH olan kişilerde ayrıntılı görüntüleme çalışması, odak lipofusin birikimi 8 sonraki RPE kaybına yol teyit etmedi. lipofusin anormallikler retina dejenerasyonlar için belirteçler olmasına rağmen Dolayısıyla, lipofusin doğrudan toksisitesi için bir rol kanıtlanmamış kalır. RPE retinanın en arka hücre tabakası, ancak oküler fundus floresan sinyal çoğunluğunu oluşturur. RPE türetilen üretimi ve otofloresansı (AF) tespit vi sağlar konfokal tarama laser oftalmoskopi (cSLO) kullanılarak yapılabilirfundus AF mekansal dağılımı sualization. Bazı retina dejenerasyonlar bu durumların tanı ve takibinde ayırt edici fundus AF desenleri, ve AF görüntüleme yardımcıları göstermektedir. Standart AF görüntüleme klinik olarak önemli olmasına rağmen, kantitatif AF (Kaf) RPE sağlığını değerlendirmek önemli bir araç haline gelmiştir. Biz ve diğerleri güvenilir belirli retina yerlerde 9 at Kaf düzeylerini belirlemek için standart bir yaklaşım geliştirdik. Kaf potansiyel tanı uygulamaları ve retina durumlarının izlenmesini sahiptir ve aynı zamanda prognoz ve risk fayda olabilir. Buna ek olarak, QAF tanısal özellikleri, belirli retina bozukluklarının 10-12 için tarif edilmiştir. Burada, sağlıklı ve hastalıklı gözlerde değerlendirilmesinde uygulanması bir görsel gösteri eşliğinde bizim teknik gerçekleştirmek için adım adım ayrıntıları.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="671">
	<tbody>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:243px;">Spectralis HRA + OCT</td>
			<td style="width:143px;">Heidelberg Engineering</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">0.5% tropicamide ophthalmic solution</td>
			<td style="width:143px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td>Any brand can be used</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">2.5% phenylephrine ophthalmic solution</td>
			<td style="width:143px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td>Any brand can be used</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:243px;">Internal fluorescent reference</td>
			<td style="width:143px;">Heidelberg Engineering</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">IGOR Pro software</td>
			<td style="width:143px;">WaveMetrics</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantitative fundus autofluorescence for the evaluation of retinal diseases

The retinal pigment epithelium (RPE) is juxtaposed to the overlying sensory retina, and supports the function of the visual system. Among the tasks performed by the RPE are phagocytosis and processing of outer photoreceptor segments through lysosome-derived organelles. These degradation products, stored and referred to as lipofuscin granules, are composed partially of bisretinoids, which have broad fluorescence absorption and emission spectra that can be detected clinically as fundus autofluorescence with confocal scanning laser ophthalmoscopy (cSLO). Lipofuscin accumulation is associated with increasing age, but is also found in various patterns in both acquired and inherited degenerative diseases of the retina. Thus, studying its pattern of accumulation and correlating such patterns with changes in the overlying sensory retina are essential to understanding the pathophysiology and progression of retinal disease. Here, we describe a technique employed by our lab and others that uses cSLO in order to quantify the level of RPE lipofuscin in both healthy and diseased eyes.

Bu teknik, her iki sağlıklı 13 ve hastalık durumlarında 10-12&#39;de QAF incelemek için kullanılmıştır. Sağlıklı gözlerde (Şekil 1), RPE yayılan AF fundus (Şekil 1A) boyunca nispeten eşit olarak dağıtılır. Azaltılmış yoğunluğu nedeniyle maküler pigment ışığın bloke santral makula bölgesinde görülen ve iki tarafın ve görüntünün köşelerinde nedeniyle göz ve kamera optik etmektir. Gemiler koy...

Watch this Scientific Journal Video about Quantitative Fundus Autofluorescence for the Evaluation of Retinal Diseases at JoVE.com

Quantitative Fundus Autofluorescence for the Evaluation of Retinal Diseases

Retina Hastalıkları Değerlendirilmesi Nicel Otofloresans

The retinal pigment epithelium (RPE) supports the sensory retina through recycling visual cycle byproducts, which accumulate as lipofuscin. These products are autofluorescent and can be qualitatively imaged in vivo. Here, we describe a method to quantitatively image RPE lipofuscin using confocal scanning laser ophthalmoscopy.

The retinal pigment epithelium (RPE) is juxtaposed to the overlying sensory retina, and supports the function of the visual system. Among the tasks ...

quantitative-fundus-autofluorescence-for-evaluation-retinal

Research

JoVE Journal

Medicine

11.3K Görüntüleme.  NYU School of Medicine. The retinal pigment epithelium (RPE) supports the sensory retina through recycling visual cycle byproducts, which accumulate as lipofuscin. These products are autofluorescent and can be qualitatively imaged in vivo. Here, we describe a method to quantitatively image RPE lipofuscin using confocal scanning laser ophthalmoscopy. 

Video: Quantitative Fundus Autofluorescence for the Evaluation of Retinal Diseases

The Use of Primary Human Fibroblasts for Monitoring Mitochondrial Phenotypes in the Field of Parkinson's Disease

Parkinson's disease (PD) is the second most common movement disorder and affects 1% of people over the age of 60 1. Because ageing is the most important risk factor, cases of PD will increase during the next decades 2. Next to pathological protein folding and impaired protein degradation pathways, alterations of mitochondrial function and morphology were pointed out as further hallmark of neurodegeneration in PD 3-11.
After years of research in murine and human cancer cells as in vitro models to dissect molecular pathways of Parkinsonism, the use of human fibroblasts from patients and appropriate controls as ex vivo models has become a valuable research tool, if potential caveats are considered. Other than immortalized, rather artificial cell models, primary fibroblasts from patients carrying disease-associated mutations apparently reflect important pathological features of the human disease.
Here we delineate the procedure of taking skin biopsies, culturing human fibroblasts and using detailed protocols for essential microscopic techniques to define mitochondrial phenotypes. These were used to investigate different features associated with PD that are relevant to mitochondrial function and dynamics. Ex vivo, mitochondria can be analyzed in terms of their function, morphology, colocalization with lysosomes (the organelles degrading dysfunctional mitochondria) and degradation via the lysosomal pathway. These phenotypes are highly relevant for the identification of early signs of PD and may precede clinical motor symptoms in human disease-gene carriers. Hence, the assays presented here can be utilized as valuable tools to identify pathological features of neurodegeneration and help to define new therapeutic strategies in PD.

Fibroblasts from patients carrying mutations in Parkinson's disease-causing genes represent an easily accessible ex vivo model to study disease-associated phenotypes. Live cell imaging gives the opportunity to study morphological and functional parameters in living cells. Here we describe the preparation of human fibroblasts and subsequent monitoring of mitochondrial phenotypes.

Parkinson Hastalığı Alanında Mitokondriyal Fenotiplerinin İzleme İlköğretim İnsan Fibroblast Kullanımı

Parkinson's disease (PD) is the second most  common movement disorder and affects 1% of people over the age of 60 1. Because ageing is  the most important ...

Tıp

Techniques for Processing Eyes Implanted with a Retinal Prosthesis for Localized Histopathological Analysis: Part 2 Epiretinal Implants with Retinal Tacks

Retinal prostheses for the treatment of certain forms of blindness are gaining traction in clinical trials around the world with commercial devices currently entering the market. In order to evaluate the safety of these devices, in preclinical studies, reliable techniques are needed. However, the hard metal components utilised in some retinal implants are not compatible with traditional histological processes, particularly in consideration for the delicate nature of the surrounding tissue. Here we describe techniques for assessing the health of the eye directly adjacent to a retinal implant secured epiretinally with a metal tack.
Retinal prostheses feature electrode arrays in contact with eye tissue. The most commonly used location for implantation is the epiretinal location (posterior chamber of the eye), where the implant is secured to the retina with a metal tack that penetrates all the layers of the eye. Previous methods have not been able to assess the proximal ocular tissue with the tack in situ, due to the inability of traditional histological techniques to cut metal objects. Consequently, it has been difficult to assess localized damage, if present, caused by tack insertion.
Therefore, we developed a technique for visualizing the tissue around a retinal tack and implant. We have modified an established technique, used for processing and visualizing hard bony tissue around a cochlear implant, for the soft delicate tissues of the eye. We orientated and embedded the fixed eye tissue, including the implant and retinal tack, in epoxy resin, to stabilise and protect the structure of the sample. Embedded samples were then ground, polished, stained, and imaged under various magnifications at incremental depths through the sample. This technique allowed the reliable assessment of eye tissue integrity and cytoarchitecture adjacent to the metal tack.

Here we describe histological techniques for visualising ocular tissue directly adjacent to a metal epiretinal tack and retinal prosthesis.

Lokalize Histopatolojik Analiz için bir Retina Protez ile implant İşleme Teknikleri Gözler için: Bölüm Retina Tacks ile 2 Epiretinal İmplantlar

Retinal prostheses for the treatment of certain forms of blindness are gaining traction in clinical trials around the world with commercial devices ...

Automated Radiochemical Synthesis of [18F]3F4AP: A Novel PET Tracer for Imaging Demyelinating Diseases

3-[18F]fluoro-4-aminopyridine, [18F]3F4AP, is a radiofluorinated analog of the FDA-approved drug for multiple sclerosis 4-aminopyridine (4AP). This compound is currently under investigation as a PET tracer for demyelination. We recently described a novel chemical reaction to produce metafluorinated pyridines consisting of direct fluorination of a pyridine N-oxide and the utilization of this reaction for the radiochemical synthesis of [18F]3F4AP. In this article, we demonstrate how to produce this tracer using an automated synthesizer and an in-house made flow hydrogenation reactor. We also show the standard quality control procedures performed before releasing the radiotracer for preclinical animal imaging studies. This semi-automated procedure may serve as the basis for future production of [18F]3F4AP for clinical studies.

Automated Radiochemical Synthesis of [18F]3F4AP: A Novel PET Tracer for Imaging Demyelinating Diseases

We demonstrate the semi-automated radiochemical synthesis of [18F]3F4AP and quality control procedures.

Otomatik Radyokimyasal Sentez [<sup&gt; 18</sup&gt; F] 3F4AP: Demyelinizan Hastalıkların Görüntülenmesine Yönelik Yeni Bir PET İzleyici

3-[18F]fluoro-4-aminopyridine, [18F]3F4AP, is a radiofluorinated analog of the FDA-approved drug for multiple sclerosis 4-aminopyridine (4AP). This ...

Smartphone Fundus Photography

Smartphone fundus photography is a simple technique to obtain ocular fundus pictures using a smartphone camera and a conventional handheld indirect ophthalmoscopy lens. This technique is indispensable when picture documentation of optic nerve, retina, and retinal vessels is necessary but a fundus camera is not available. The main advantage of this technique is the widespread&#160;availability of smartphones that allows documentation of macula and optic nerve changes in many settings that was not previously possible. Following the well-defined steps detailed here, such as proper alignment of the phone camera, handheld lens, and the patient&#39;s pupil, is the key for obtaining a clear retina picture with no interfering light reflections and aberrations. In this paper, the optical principles of indirect ophthalmoscopy and fundus photography will be reviewed first. Then, the step-by-step method to record a good quality retinal image using a smartphone will be explained.

Fundus photography normally requires specialized fundus cameras that are not always available in all clinical settings.&#160;Here, a simple method to record ocular fundus images using a smartphone camera and a conventional high-plus handheld indirect ophthalmoscopy lens is described.

Smartphone Fundus Fotoğrafçılığı

Smartphone fundus photography is a simple technique to obtain ocular fundus pictures using a smartphone camera and a conventional handheld indirect ...

Using Retinal Imaging to Study Dementia

The retina offers a unique &#8220;window&#8221; to study pathophysiological processes of dementia in the brain, as it is an extension of the central nervous system (CNS) and shares prominent similarities with the brain in terms of embryological origin, anatomical features and physiological properties.&#160; The vascular and neuronal structure in the retina can now be visualized easily and non-invasively using retinal imaging techniques, including fundus photography and optical coherence tomography (OCT), and quantified semi-automatically using computer-assisted analysis programs. Studying the associations between vascular and neuronal changes in the retina and dementia could improve our understanding of dementia and, potentially, aid in diagnosis and risk assessment.&#160; This protocol aims to describe a method of quantifying and analyzing retinal vasculature and neuronal structure, which are potentially associated with dementia. This protocol also provides examples of retinal changes in subjects with dementia, and discusses technical issues and current limitations of retinal imaging.

The retina shares prominent similarities with the brain and thus represents a unique window to study vasculature and neuronal structure in the brain non-invasively. This protocol describes a method to study dementia using retinal imaging techniques. This method can potentially aid in diagnosis and risk assessment of dementia.

Demans çalışması için retina Imaging'i kullanma

The retina offers a unique &#8220;window&#8221; to study pathophysiological processes of dementia in the brain, as it is an extension of the central ...

Invasive Hemodynamic Assessment for the Right Ventricular System and Hypoxia-Induced Pulmonary Arterial Hypertension in Mice

Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a chronic and severe cardiopulmonary disorder. Mice are a popular animal model used to mimic this disease. However, the evaluation of right ventricular pressure (RVP) and pulmonary artery pressure (PAP) remains technically challenging in mice. RVP and PAP are more difficult to measure than left ventricular pressure because of the anatomical differences between the left and right heart systems. In this paper, we describe a stable right heart hemodynamic measurement method and its validation using healthy and PAH mice. This method is based on open-chest surgery and mechanical ventilation support. It is a complicated procedure compared to closed chest procedures. While a well-trained surgeon is required for this surgery, the advantage of this procedure is that it can generate both RVP and PAP parameters at the same time, so it is a preferable procedure for the evaluation of PAH models.

Here, we present a protocol to perform an invasive hemodynamic assessment of the right ventricle and pulmonary artery in mice using an open-chest surgery approach.

Farelerde Sağ Ventrikül Sistemi ve Hipoksiye Bağlı Pulmoner Arteriyel Hipertansiyon için İnvaziv Hemodinamik Değerlendirme

Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a chronic and severe cardiopulmonary disorder. Mice are a popular animal model used to mimic this disease. ...

Oxygen-Induced Retinopathy Model for Ischemic Retinal Diseases in Rodents

One of the commonly used models for ischemic retinopathies is the oxygen-induced retinopathy (OIR) model. Here we describe detailed protocols for the OIR model induction and its readouts in both mice and rats. Retinal neovascularization is induced in OIR by exposing rodent pups either to hyperoxia (mice) or alternating levels of hyperoxia and hypoxia (rats). The primary readouts of these models are the size of neovascular (NV) and avascular (AVA) areas in the retina. This preclinical in vivo model can be used to evaluate the efficacy of potential anti-angiogenic drugs or to address the role of specific genes in the retinal angiogenesis by using genetically manipulated animals. The model has some strain and vendor specific variation in the OIR induction which should be taken into consideration when designing the experiments.

Oxygen-induced retinopathy (OIR) can be used to model ischemic retinal diseases such as retinopathy of prematurity and proliferative diabetic retinopathy and to serve as a model for proof-of-concept studies in evaluating antiangiogenic drugs for neovascular diseases. OIR induces robust and reproducible neovascularization in the retina that can be quantified.

Kemirgenlerde İskemik Retina Hastalıkları için Oksijen Kaynaklı Retinopati Modeli

One of the commonly used models for ischemic retinopathies is the oxygen-induced retinopathy (OIR) model. Here we describe detailed protocols for the OIR ...

Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases

Retinal pigment epithelial (RPE) transplantation holds great promise for the treatment of inherited and acquired retinal degenerative diseases. These conditions include retinitis pigmentosa (RP) and advanced forms of age-related macular degeneration (AMD), such as geographic atrophy (GA). Together, these disorders represent a significant proportion of currently untreatable blindness globally. These unmet medical needs have generated heightened academic interest in developing methods of RPE replacement. Among the animal models commonly utilized for preclinical testing of therapeutics, the non-human primate (NHP) is the only animal model that has a macula. As it shares this anatomical similarity with the human eye, the NHP eye is an important and appropriate preclinical animal model for the development of advanced therapy medicinal products (ATMPs) such as RPE cell therapy.
This manuscript describes a method for the submacular transplantation of an RPE monolayer, cultured on a polyethylene terephthalate (PET) cell carrier, underneath the macula onto a surgically created RPE wound in immunosuppressed NHPs. The fovea-the central avascular portion of the macula-is the site of the greatest mechanical weakness during the transplantation. Foveal trauma will occur if the initial subretinal fluid injection generates an excessive force on the retina. Hence, slow injection under perfluorocarbon liquid (PFCL) vitreous tamponade is recommended with a dual-bore subretinal injection cannula at low intraocular pressure (IOP) settings to create a retinal bleb. 
Pretreatment with an intravitreal plasminogen injection to release parafoveal RPE-photoreceptor adhesions is also advised. These combined strategies can reduce the likelihood of foveal tears when compared to conventional techniques. The NHP is a key animal model in the preclinical phase of RPE cell therapy development. This protocol addresses the technical challenges associated with the delivery of RPE cellular therapy in the NHP eye.

The non-human primate (NHP) is an ideal model for studying human retinal cellular therapeutics due to the anatomical and genetic similarities. This manuscript describes a method for submacular transplantation of retinal pigment epithelial cells in the NHP eye and strategies to prevent intraoperative complications associated with macular manipulation.

Dejeneratif Retina Hastalıkları için İnsan Dışı Primat Modelinde Retina Pigment Epitel Transplantasyonu

Retinal pigment epithelial (RPE) transplantation holds great promise for the treatment of inherited and acquired retinal degenerative diseases. These ...

Retinal Pathophysiological Evaluation in a Rat Model

A posterior segment eye disease like diabetic retinopathy alters the physiology of the retina. Diabetic retinopathy is characterized by a retinal detachment, breakdown of the blood-retinal barrier (BRB), and retinal angiogenesis. An in vivo rat model is a valuable experimental tool to examine the changes in the structure and function of the retina. We propose three different experimental techniques in the rat model to identify morphological changes of retinal cells, retinal vasculature, and compromised BRB. Retinal histology is used to study the morphology of various retinal cells. Also, quantitative measurement is performed by retinal cell count and thickness measurement of different retinal layers. A BRB breakdown assay is used to determine the leakage of extraocular proteins from the plasma to vitreous tissue due to the breakdown of BRB. Fluorescence angiography is used to study angiogenesis and leakage of blood vessels by visualizing retinal vasculature using FITC-dextran dye.

Diabetic retinopathy is one of the leading causes of blindness. Histology, blood-retinal barrier breakdown assay, and fluorescence angiography are valuable techniques to understand the pathophysiology of the retina, which could further enhance the efficient drug screening against diabetic retinopathy.

Sıçan Modelinde Retinal Patofizyolojik Değerlendirme

A posterior segment eye disease like diabetic retinopathy alters the physiology of the retina. Diabetic retinopathy is characterized by a retinal ...

Repetitive Blood Sampling from the Subclavian Vein of Conscious Rat

Rats are widely used in pharmacokinetics (PK) and toxicokinetic (TK) studies that need to collect a certain amount of blood at specific time points to detect drug exposure. The rat blood sampling method determines the quality of the plasma and further affects the precision of the test results. The subclavian vein blood collection method described in this protocol collects blood samples repeatedly in the conscious state of animals to meet the needs of PK and TK tests. The skills of restraint handling and appropriate procedure of needle incision ensure the success rate of blood collection. It is easy to operate while ensuring the quality of plasma and at the same time catering to animal welfare. However, this method requires skilled operation, and an improper one may cause animal weakness, pain, lameness, and even mortality. The current method has been used in the testing facility for a 4-week oral toxicity study in Sprague Dawley (SD) rats with TK. The maximum amount of blood collected within 24 h did not exceed 20% of the animal's total blood. The animals' body weight was more than 200 g for males and females. The data showed that the animals' bodyweight increased steadily every week, and the clinical observation was normal after repetitive sample collection.

The present protocol describes a simple and efficient method for collecting blood from the subclavian vein in rats. It enables rapid, timely, and easily identifiable sampling without anesthesia and obtains high-quality blood through repetitive sample collection.

Bilinçli Sıçan Subklaviyen Veninden Tekrarlayan Kan Örneklemesi

Rats are widely used in pharmacokinetics (PK) and toxicokinetic (TK) studies that need to collect a certain amount of blood at specific time points to ...