ברצוננו להודות משתפי פעולה שלנו, פרנסואה Delori, תומס בורק, וטוביאס Duncker. לתשתיות למחקר: NIH / ניי R01 EY015520 (RTS, JPG), וקרנות בלתי מוגבל של מחקר כדי למנוע עיוורון (RTB).

משפט ואתיקה: כל החולים שהשתתפו במחקרים אלה נעשו זאת בהתאם פיקוח ועדת הבדיקה מוסדיים מאושרים בבית הספר לרפואה באוניברסיטת ניו יורק לרפואה. 1. בחירת חולים והכנה ראשונית הדמיה הערה: החומרים הבאים נדרשים: 0.5% פתרון עיניים tropicamide, 2.5% פתרון עיניים phenylephrine, cSLO מצויד טומוגרפיה קוהרנטיות אופטית תחום ספקטרלי (SD-OCT), והתייחסות הקרינה הפנימית. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני הדמיה, להגדיר cSLO כראוי לרכישת נתונים על פי הוראות היצרן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הר התייחסות ניאון פנימי cSLO. הערה: התייחסות הניאון הפנימית, כפי שנרכשה מהיצרן, שוכן טבעת מתכת ממוקמת ישירות מאחורי עדשת המצלמה. אם cSLO מיצרן אחר משמש, ייתכנו תצורה שונה מזו שבה מתוארתבפרוטוקול זה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על מנת להכניס את הפניה אל cSLO, לסובב את העדשה כדי להסיר אותו, להתיר את טבעת המתכת של המכונה, ולהחליף אותו עם טבעת מתכת חדשה המכילה את ההפניה. הערה: ההתייחסות ניאון פנימי חיוני הטכניקה qAF, שכן היא מאפשרת תיקון עבור וריאציה כוח לייזר ורווח / רגישות הגלאי. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש חולים שגויסו הדמיה לעבור בדיקת עיניים שיגרתית מורחבת ולקבל מידע רקע לגבי ההיסטוריה העינית בעבר ומצבים רפואיים בסיסיים שעשויות להתבטא עם ממצאים עיניים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מתרחבים תלמידים עם 0.5% tropicamide ו phenylephrine 2.5%. שלב קריטי: מתרחב תלמידי 6 מ&quot;מ לפחות. הערה: זה חיוני למעבר רצוף של אור, ובכך להדמיה ומדידה אופטימליות של הפונדוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסנטר לפני הדמיה, למקם את המטופל כראוי על cSLO, עם נח על chinrest, המצח העומדים כנגד foreheaשאר ד, ו canthi לרוחב מיושר כהלכה עם המדדים. </li></ol> 2. הדמיה Baseline של הפונדוס Ocular <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ראשית, תמונה הפונדוס עם החזרה האינפרה אדומה קרוב (IR) אור (אורך גל של 820 ננומטר) על מנת לרכז את המצלמה מעל המקולה ולקבל מוקד מחוספס. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עם חולה ממוקם כראוי, לשנות את הגדרת החומרה בלוח הבקרה למצב הדמית IR, מצלמת מיקום באופן ידני עד הפונדוס הוא בפוקוס מלא, ולקחת תמונה </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאם את ההגדרה בלוח הבקרה כדי &quot;IR-Oct&quot;, אשר משתמש טומוגרפיה קוהרנטיות אופטית רפאים-דומיין (SD-OCT) בשילוב עם הדמית IR להעריך את המקולה עבור מחלה בסיסית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במדריכים הנוכחיים בחלון ההדמיה כדי כראוי להתמצא ב- OCT לדימוי IR של הפונדוס. כדי להשיג איכות SD-Oct אופטימלי, למקם את המצלמה כך את תמונת אוקטובר היא בשליש העליון של חלון ההדמיה שלה. רוכש לפחות sc קו אופקי אחדדרך הגומה ו פורש בתחום ההדמיה כולה. </li></ol></li></ol> 3. הגדרת הדמיה qAF <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש רכישת תמונה &quot;מהירה&quot;. הערה: הגדרה זו מאפשרת לרכישת תמונה מהר, אשר מקטינה את הסיכון של אובדן אות בשל תנועת מטופל וסתימה וכתוצאה מכך אור על ידי הקשתית או עפעפיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש &quot;Mean של 9&quot; מסגרות. הערה: הגדרה זו מאפשרת צילום מהיר, רצוף של 9 מסגרות תמונה, אשר יכול להיות מאוחר &quot;ממוצעים&quot; כדי להפחית את הרעש חפץ (ראה להלן). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש &quot;30 x 30 מעלות&quot; שדה. הערה: זה מתייחס המעלות של האזור ברשתית שנתפס במהלך רכישת תמונה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני ההדמיה, להזהיר המטופל על האור הכחול, כמו זה יכול להיות מדאיג בהתחלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל את מצב AF וליישר ציר מצלמה כך המסך הוא מקסימאלי &quot;מלא&quot; עם AF הפונדוס (מחשיך מינימאלי של הצדדים ופינות של התמונה). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם h החולהקושי ave לסבול את האור הכחול הבהיר, להתחיל הדמיה עם המצלמה רחוקה מהעין ולאחר מכן להביא את המצלמה באיטיות כלפי המטופל עד הפונדוס הוא לעיני. שלב קריטי: אם אור הנכנס לתוך או לצאת מן העין חסומה, ירד האות תגרום. ירידה מרוכזת גלויה כמו המחשיך סימטרי של צד תמונה או בפינה. הפסד של האות כללית אפשר לראות כאשר תנועות עיניים לבד לחסום מעבר האור. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יישר את המצלמה כך את אות AF היא ברמה הגבוהה ביותר לאורך כל השדה. כוון אות מקסימלי ולא תמונה חדה, אולם הם פחות או לתאם. התאם את מיקוד המצלמה על ידי הזזת cSLO כדי לשנות את מיקום המצלמה באופן ידני או עם ג&#39;ויסטיק האופתלמוסקופ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאם את הרגישות / רווח כך AF הפונדוס גלוי בקלות, אך להימנע הצפת יתר. במהלך רכישת התמונה, בצבע הפיקסלים הנראים בשני ההתייחסות הפנימית (הממוקם בחלק העליון שלתמונה) או הפונדוס מצביע הצפת יתר ובכך פסד של אות. </li></ol> 4. Image Acquisition הערה: שלב קריטי: המטרה ברכישת תמונה צריכה להיות כדי להשיג 2 ערימות תמונה 9 מסגרת באיכות גבוהה בכל הפעלה לשלוט על השתנות בין תמונות בתוך מושב. לאחר למקם מחדש את החולה ואת המצלמה, לקבל מושב שני של שתי תמונות להעריך ובקרת השתנות. כל התמונות בסופו של דבר להיות מכוילות על ההתייחסות הפנימית (כמתואר להלן). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לרכוש תמונות רק אחרי לפחות 20 שניות של &quot;הלבנה&quot; (חשיפה מלאה של רשתית לאור AF) כדי למזער קליטת האור על ידי rhodopsin ברשתית החושית 9. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש את התקופה הזו כדי לייעל מצלמת יישור, מוקד ורגישות. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש הנושאים למצמץ לפני כל רכישת התמונה כסרט מדמיע טרי משפר את איכות האות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הימנע עפעפיים במישור של רכישה. הערה: זה עשוי להיות מועיל כדי עפעפיים לפתוח באופן ידני לחולים מאתגרים יותר. החוקרים ממליצים כעוזר מבצע משימה זו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מטב יישור לפני כל רכישת תמונה על מנת להבטיח כי האור אינו חסום על ידי איריס וכתוצאה מכך אות ירד. הערה: כפי התנועה לפחות קטין נפוצה מאוד, ממליצי מחברי התכנסות קנסה לפי צורך לפני כל רכישת תמונה. מנחים ועידוד המטופל תוך הדמית עזר תנועת ירידה. המחברים ממליצים גם להשתמש ברגל-הדוושה של המכונית כמו &quot;כפתור הרכישה&quot; על מנת להקטין הסחת דעת מפעיל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע בעיבוד תמונות פוסט על ידי חישוב &quot;שביל&quot; ערימת 9 המסגרת להגדיל את יחס אות לרעש. לחשב את הממוצע של ערימה באמצעות תוכנת cSLO ידי בחירת האפשרות לחשב את הממוצע. הערה: ייתכנו ערימות שבו מסגרות וחלקם לא באיכות אופטימלית (כלומר, לוקליזציה או להכליל ירד סיביחס gnal אל המסגרות האופטימלית), ולכן בזהירות לבדוק כל ערימה ולבטל את בחירת מסגרות לא טובות לפני החישוב של הממוצע. הערה: תמונות Mean עם יחס אות לרעש מקובל יכולות להיות מעובד מן 3 מסגרות לפחות. זה נורמלי הצדדים והפינות של כל תמונה יש אות נמוכה 20 מעלות המרכזיות בשל מגבלות בתוך cSLO עצם. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם התוכנה שואלת אם המפעיל רוצה לנרמל את הרמות האפורות (כלומר, למתוח את ההיסטוגרמה) בין 0 ל -255, בחר &quot;לא&quot;. זה שומר על רמות אפורות ללא שינוי לניתוח. </li></ol></li></ol> ניתוח תמונה 5. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניתוח תמונות AF כפי שתואר לעיל באמצעות תוכנת ניתוח תמונה שפותחה עבור טכניקת qAF (איגור; 9). להלן תיאור קצר של ניתוח תמונה אופייני באמצעות תוכנה זו כלול להלן. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טען את התוכנית qAF ב איגור לייבא תמונות (בפורמט bmp) מיוצא מןcSLO תוכנה עם יחס ממדים פיקסל 768 x 768 (פרמטר פלט ברירת מחדל). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר את התמונה בתפריט הנפתח וליזום ניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מיקום מחדש אינדיקטורים כיול על תמונה כזו כי &quot;הכוונת&quot; לשכב הגומה ואת &quot;סוגר&quot; הסמוכה לאתר בדיסק האופטי (אינדיקטורים אלה משמשים סולם ומקם את ROIs). כשהוא מוצב כראוי, להשתמש בתוכנת הנחיות אז לאכלס את התמונה עם ROIs ההיקפי סביב הגומה (ראה איורים 1, 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר באפשרות ב איגור לכייל את הרמות האפורות הכוללות של כל תמונה לרמות נוכחים בהפנית הניאון הפנימית. הערה: שלב זה מאפשר כיול של גורמים הקשורים המכונה, כוללים רמת האפס האלקטרונית של כל תמונה וסרטון הגורם כיול התייחסות הפנימי של כל מכונה, כמו גם גורמים הקשורים לחולה, כולל גיל, רפרקציה עקמומיות קרנית. הערה: תוכנת הניתוח ולאחר מכן מציגה את r הקבועegions על התמונה תוצאתי וסך ערך qAF מודגם בכל אזור. ערכי qAF גם מוזנים באופן אוטומטי לפורמט גיליון אלקטרוני בחלון נפרד. &quot; </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צור qAF &quot;מפות חום&quot; על ידי בחירה באפשרות בתוך ההנחיות הפקודות. כל תמונות הנתונים ניתן לייצא מתוכנת איגור בגיליון אלקטרוני של Excel על ידי בחירת האפשרויות המתאימות. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Strauss, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+retinal+pigment+epithelium+in+visual+function.">The retinal pigment epithelium in visual function.</a> Physiological reviews. 85, 845-881 (2005).</li><li>Ach, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+autofluorescence+and+cell+density+maps+of+the+human+retinal+pigment+epithelium.">Quantitative autofluorescence and cell density maps of the human retinal pigment epithelium.</a> Investigative ophthalmology &amp; visual science. 55, 4832-4841 (2014).</li><li>Ach, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipofuscin+redistribution+and+loss+accompanied+by+cytoskeletal+stress+in+retinal+pigment+epithelium+of+eyes+with+age-related+macular+degeneration.">Lipofuscin redistribution and loss accompanied by cytoskeletal stress in retinal pigment epithelium of eyes with age-related macular degeneration.</a> Investigative ophthalmology &amp; visual science. 56, 3242-3252 (2015).</li><li>Schmitz-Valckenberg, S., Jorzik, J., Unnebrink, K., Holz, F. G., Group, F. A. M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+digital+scanning+laser+ophthalmoscopy+fundus+autofluorescence+images+of+geographic+atrophy+in+advanced+age-related+macular+degeneration.">Analysis of digital scanning laser ophthalmoscopy fundus autofluorescence images of geographic atrophy in advanced age-related macular degeneration.</a> Graefe's archive for clinical and experimental ophthalmology = Albrecht von Graefes Archiv fur klinische und experimentelle Ophthalmologie. 240, 73-78 (2002).</li><li>Weng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insights+into+the+function+of+Rim+protein+in+photoreceptors+and+etiology+of+Stargardt's+disease+from+the+phenotype+in+abcr+knockout+mice.">Insights into the function of Rim protein in photoreceptors and etiology of Stargardt's disease from the phenotype in abcr knockout mice.</a> Cell. 98, 13-23 (1999).</li><li>Holz, F. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+lysosomal+degradative+functions+in+RPE+cells+by+a+retinoid+component+of+lipofuscin.">Inhibition of lysosomal degradative functions in RPE cells by a retinoid component of lipofuscin.</a> Investigative ophthalmology &amp; visual science. 40, 737-743 (1999).</li><li>Sparrow, J. R., Nakanishi, K., Parish, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+lipofuscin+fluorophore+A2E+mediates+blue+light-induced+damage+to+retinal+pigmented+epithelial+cells.">The lipofuscin fluorophore A2E mediates blue light-induced damage to retinal pigmented epithelial cells.</a> Investigative ophthalmology &amp; visual science. 41, 1981-1989 (2000).</li><li>Smith, R. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipofuscin+and+autofluorescence+metrics+in+progressive+STGD.">Lipofuscin and autofluorescence metrics in progressive STGD.</a> Investigative ophthalmology &amp; visual science. 50, 3907-3914 (2009).</li><li>Delori, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+measurements+of+autofluorescence+with+the+scanning+laser+ophthalmoscope.">Quantitative measurements of autofluorescence with the scanning laser ophthalmoscope.</a> Investigative ophthalmology &amp; visual science. 52, 9379-9390 (2011).</li><li>Burke, T. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+fundus+autofluorescence+in+recessive+Stargardt+disease.">Quantitative fundus autofluorescence in recessive Stargardt disease.</a> Investigative ophthalmology &amp; visual science. 55, 2841-2852 (2014).</li><li>Duncker, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+fundus+autofluorescence+and+optical+coherence+tomography+in+best+vitelliform+macular+dystrophy.">Quantitative fundus autofluorescence and optical coherence tomography in best vitelliform macular dystrophy.</a> Investigative ophthalmology &amp; visual science. 55, 1471-1482 (2014).</li><li>Duncker, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+fundus+autofluorescence+distinguishes+ABCA4-associated+and+non-ABCA4-associated+bull's-eye+maculopathy.">Quantitative fundus autofluorescence distinguishes ABCA4-associated and non-ABCA4-associated bull's-eye maculopathy.</a> Ophthalmology. 122, 345-355 (2015).</li><li>Greenberg, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+fundus+autofluorescence+in+healthy+eyes.">Quantitative fundus autofluorescence in healthy eyes.</a> Investigative ophthalmology &amp; visual science. 54, 5684-5693 (2013).</li><li>Delori, F. C., Goger, D. G., Dorey, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-related+accumulation+and+spatial+distribution+of+lipofuscin+in+RPE+of+normal+subjects.">Age-related accumulation and spatial distribution of lipofuscin in RPE of normal subjects.</a> Investigative ophthalmology &amp; visual science. 42, 1855-1866 (2001).</li><li>Sparrow, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+fundus+autofluorescence+in+mice:+correlation+with+HPLC+quantitation+of+RPE+lipofuscin+and+measurement+of+retina+outer+nuclear+layer+thickness.">Quantitative fundus autofluorescence in mice: correlation with HPLC quantitation of RPE lipofuscin and measurement of retina outer nuclear layer thickness.</a> Investigative ophthalmology &amp; visual science. 54, 2812-2820 (2013).</li><li>Delori, F. C., Webb, R. H., Sliney, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maximum+permissible+exposures+for+ocular+safety+(ANSI+2000),+with+emphasis+on+ophthalmic+devices.">Maximum permissible exposures for ocular safety (ANSI 2000), with emphasis on ophthalmic devices.</a> Journal of the Optical Society of America. A, Optics, image science, and vision. 24, 1250-1265 (2007).</li></ol>

STA: no disclosures, JPG: no disclosures, RTS: consultant, Ocata Therapeutics.

הפצת lipofuscin רשתית חריגה, אם רמות גבוהות או נמוך, הוא סמן רגיש של מחלת רשתית והיא קשורה בדרך כלל עם אובדן תפקוד רשתית חושי. כאן אנו מתארים יישום של qAF להערכת lipofuscin רשתית. התאגדות של התייחסות ניאון פנימית לתקן רגישות כוח גלאי ליזר משתנית 9 לצד טכניקת דימות הסטנדרטית ?...

אפיתל הפיגמנט ברשתית (RPE) תומך בפונקציה של הרשתית החושית באמצעות תהליכים רבים 1. גיל ניוון מקולרי הקשור (AMD) היא הסיבה החשובה ביותר של עיוורון חשוכת במדינות המתועשות ומאופיין שינויים הרשתית, כולל הפסד של פיגמנט, אובדן תפקוד וניוון. ב AMD וב הזדקנות נורמלית, הרשתית מצטברת פלורסנט, אברונים הנגזרים ליזוזום המכיל שברי קולטי אור phagocytosed, המכונים גרגרי lipofuscin. הצטברות של lipofuscin הרשתית כבר חשבתי להצביע חמצוני בתפקוד 1, אך מחקרים שנעשו לאחרונה הראו כי המורפולוגיה הרשתית נותר תקין בעיני בני עם רמות lipofuscin גבוהה 2. עם זאת, דפוסים חריגים של הפצת lipofuscin, לאובדן מסוים של lipofuscin, הם סמנים מתועדים להתקדמות AMD ו- AMD, הוא היסטולוגית וקליני 3,4 למחזור פגוםלשיר של lipofuscin הרשתית גם הוכח להתרחש מחלות רשתית תורשתיות מסוימות. חולים שסובלים ממחלות Stargardt (STGD) לצבור lipofuscin ב הרשתית בגיל צעיר, בסופו של דבר לפתח אובדן חזון דומה לזה לראות AMD 5. ממצאים אלה הציעו הצטברות lipofuscin עצמו עשוי להיות רעיל ולנסוע רשתית תפקוד 6,7. עם זאת, מחקר הדמיה מפורט של נושאים עם STGD לאורך זמן לא לאשר מוקדים כי הצטברות lipofuscin הובילה לאובדן רשתית לאחר 8. לפיכך, למרות חריגות lipofuscin הם סמנים עבור מחלות רשתית, תפקיד לרעילות ישירה של lipofuscin לא הוכח. הרשתית היא השכבה אחורית התא ביותר של הרשתית, אבל מייצרת את רוב אות ניאון מן הפונדוס העיני. הדור וזיהוי של autofluorescence (AF) נגזר הרשתית יכול להתבצע באמצעות אופטלמוסקופיה לייזר סריקה confocal (cSLO), המאפשר visualization של הפריסה המרחבית של AF הפונדוס. מחלות רשתית מסוימים להפגין דפוסים ייחודיים של הפונדוס AF, ועזרי הדמיה AF באבחון וניטור של תנאים אלה. למרות הדמית AF הסטנדרטית היא חשיבות קלינית, AF כמותית (qAF) הפך אמצעי חשוב בהערכת בריאות רשתית. אנחנו ואחרים פתחנו גישה סטנדרטית שיכול לקבוע qAF רמות מהימנות במקומות ספציפיים ברשתית 9. יש qAF יישומים פוטנציאליים באבחנה ובמעקב של תנאי רשתית, וייתכן שיש גם שירות ריבוד הפרוגנוזה והסיכון. בנוסף, יכול האבחון של qAF גם תואר הפרעות ברשתית מסוימות 10-12. כאן, אנו מספקים פרטים מבחינת צעד לביצוע הטכניקה שלנו מלווה בהדגמה ויזואלית של היישום שלה בהערכת עיני בריאות וחולות.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="671">
	<tbody>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:243px;">Spectralis HRA + OCT</td>
			<td style="width:143px;">Heidelberg Engineering</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">0.5% tropicamide ophthalmic solution</td>
			<td style="width:143px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td>Any brand can be used</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">2.5% phenylephrine ophthalmic solution</td>
			<td style="width:143px;">n/a</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td>Any brand can be used</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:243px;">Internal fluorescent reference</td>
			<td style="width:143px;">Heidelberg Engineering</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">IGOR Pro software</td>
			<td style="width:143px;">WaveMetrics</td>
			<td style="width:119px;">n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantitative fundus autofluorescence for the evaluation of retinal diseases

The retinal pigment epithelium (RPE) is juxtaposed to the overlying sensory retina, and supports the function of the visual system. Among the tasks performed by the RPE are phagocytosis and processing of outer photoreceptor segments through lysosome-derived organelles. These degradation products, stored and referred to as lipofuscin granules, are composed partially of bisretinoids, which have broad fluorescence absorption and emission spectra that can be detected clinically as fundus autofluorescence with confocal scanning laser ophthalmoscopy (cSLO). Lipofuscin accumulation is associated with increasing age, but is also found in various patterns in both acquired and inherited degenerative diseases of the retina. Thus, studying its pattern of accumulation and correlating such patterns with changes in the overlying sensory retina are essential to understanding the pathophysiology and progression of retinal disease. Here, we describe a technique employed by our lab and others that uses cSLO in order to quantify the level of RPE lipofuscin in both healthy and diseased eyes.

טכניקה זו שמשה ללמוד qAF בשני 13 ומחלות בריאות מדינות 10-12. בעיני בריא (איור 1), AF נפלט הרשתית מופץ יחסית אחיד לאורך כל (איור 1 א) הפונדוס. עוצמת מופחתת נתפסת באזור המקולה המרכזית בשל חסימת האור על ידי פיגמנט מקולרי, ועל הצדדים ...

Watch this Scientific Journal Video about Quantitative Fundus Autofluorescence for the Evaluation of Retinal Diseases at JoVE.com

Quantitative Fundus Autofluorescence for the Evaluation of Retinal Diseases

כמותי הפונדוס autofluorescence עבור הערכת מחלות רשתית

The retinal pigment epithelium (RPE) supports the sensory retina through recycling visual cycle byproducts, which accumulate as lipofuscin. These products are autofluorescent and can be qualitatively imaged in vivo. Here, we describe a method to quantitatively image RPE lipofuscin using confocal scanning laser ophthalmoscopy.

The retinal pigment epithelium (RPE) is juxtaposed to the overlying sensory retina, and supports the function of the visual system. Among the tasks ...

quantitative-fundus-autofluorescence-for-evaluation-retinal

Research

JoVE Journal

Medicine

11.3K Views.  NYU School of Medicine. The retinal pigment epithelium (RPE) supports the sensory retina through recycling visual cycle byproducts, which accumulate as lipofuscin. These products are autofluorescent and can be qualitatively imaged in vivo. Here, we describe a method to quantitatively image RPE lipofuscin using confocal scanning laser ophthalmoscopy. 

Video: Quantitative Fundus Autofluorescence for the Evaluation of Retinal Diseases

The Use of Primary Human Fibroblasts for Monitoring Mitochondrial Phenotypes in the Field of Parkinson's Disease

Parkinson's disease (PD) is the second most common movement disorder and affects 1% of people over the age of 60 1. Because ageing is the most important risk factor, cases of PD will increase during the next decades 2. Next to pathological protein folding and impaired protein degradation pathways, alterations of mitochondrial function and morphology were pointed out as further hallmark of neurodegeneration in PD 3-11.
After years of research in murine and human cancer cells as in vitro models to dissect molecular pathways of Parkinsonism, the use of human fibroblasts from patients and appropriate controls as ex vivo models has become a valuable research tool, if potential caveats are considered. Other than immortalized, rather artificial cell models, primary fibroblasts from patients carrying disease-associated mutations apparently reflect important pathological features of the human disease.
Here we delineate the procedure of taking skin biopsies, culturing human fibroblasts and using detailed protocols for essential microscopic techniques to define mitochondrial phenotypes. These were used to investigate different features associated with PD that are relevant to mitochondrial function and dynamics. Ex vivo, mitochondria can be analyzed in terms of their function, morphology, colocalization with lysosomes (the organelles degrading dysfunctional mitochondria) and degradation via the lysosomal pathway. These phenotypes are highly relevant for the identification of early signs of PD and may precede clinical motor symptoms in human disease-gene carriers. Hence, the assays presented here can be utilized as valuable tools to identify pathological features of neurodegeneration and help to define new therapeutic strategies in PD.

Fibroblasts from patients carrying mutations in Parkinson's disease-causing genes represent an easily accessible ex vivo model to study disease-associated phenotypes. Live cell imaging gives the opportunity to study morphological and functional parameters in living cells. Here we describe the preparation of human fibroblasts and subsequent monitoring of mitochondrial phenotypes.

השימוש בפיברובלסטים אנושיים ראשוניים לניטור פנוטיפים מיטוכונדריאלי בתחום מחלת פרקינסון

Parkinson's disease (PD) is the second most  common movement disorder and affects 1% of people over the age of 60 1. Because ageing is  the most important ...

Techniques for Processing Eyes Implanted with a Retinal Prosthesis for Localized Histopathological Analysis: Part 2 Epiretinal Implants with Retinal Tacks

Retinal prostheses for the treatment of certain forms of blindness are gaining traction in clinical trials around the world with commercial devices currently entering the market. In order to evaluate the safety of these devices, in preclinical studies, reliable techniques are needed. However, the hard metal components utilised in some retinal implants are not compatible with traditional histological processes, particularly in consideration for the delicate nature of the surrounding tissue. Here we describe techniques for assessing the health of the eye directly adjacent to a retinal implant secured epiretinally with a metal tack.
Retinal prostheses feature electrode arrays in contact with eye tissue. The most commonly used location for implantation is the epiretinal location (posterior chamber of the eye), where the implant is secured to the retina with a metal tack that penetrates all the layers of the eye. Previous methods have not been able to assess the proximal ocular tissue with the tack in situ, due to the inability of traditional histological techniques to cut metal objects. Consequently, it has been difficult to assess localized damage, if present, caused by tack insertion.
Therefore, we developed a technique for visualizing the tissue around a retinal tack and implant. We have modified an established technique, used for processing and visualizing hard bony tissue around a cochlear implant, for the soft delicate tissues of the eye. We orientated and embedded the fixed eye tissue, including the implant and retinal tack, in epoxy resin, to stabilise and protect the structure of the sample. Embedded samples were then ground, polished, stained, and imaged under various magnifications at incremental depths through the sample. This technique allowed the reliable assessment of eye tissue integrity and cytoarchitecture adjacent to the metal tack.

Here we describe histological techniques for visualising ocular tissue directly adjacent to a metal epiretinal tack and retinal prosthesis.

טכניקות לעיני עיבוד מושתלים בתותב רשתית למותאם למקום Histopathological ניתוח: חלק 2 Epiretinal שתלים עם נעצי רשתית

Retinal prostheses for the treatment of certain forms of blindness are gaining traction in clinical trials around the world with commercial devices ...

Automated Radiochemical Synthesis of [18F]3F4AP: A Novel PET Tracer for Imaging Demyelinating Diseases

3-[18F]fluoro-4-aminopyridine, [18F]3F4AP, is a radiofluorinated analog of the FDA-approved drug for multiple sclerosis 4-aminopyridine (4AP). This compound is currently under investigation as a PET tracer for demyelination. We recently described a novel chemical reaction to produce metafluorinated pyridines consisting of direct fluorination of a pyridine N-oxide and the utilization of this reaction for the radiochemical synthesis of [18F]3F4AP. In this article, we demonstrate how to produce this tracer using an automated synthesizer and an in-house made flow hydrogenation reactor. We also show the standard quality control procedures performed before releasing the radiotracer for preclinical animal imaging studies. This semi-automated procedure may serve as the basis for future production of [18F]3F4AP for clinical studies.

Automated Radiochemical Synthesis of [18F]3F4AP: A Novel PET Tracer for Imaging Demyelinating Diseases

We demonstrate the semi-automated radiochemical synthesis of [18F]3F4AP and quality control procedures.

אוטומטי סינתזה Radiochemical של [<sup22</sup&gt; F] 3F4AP: עוקב PET חדשנית עבור הדמיה מחלות Demyelinating

3-[18F]fluoro-4-aminopyridine, [18F]3F4AP, is a radiofluorinated analog of the FDA-approved drug for multiple sclerosis 4-aminopyridine (4AP). This ...

Smartphone Fundus Photography

Smartphone fundus photography is a simple technique to obtain ocular fundus pictures using a smartphone camera and a conventional handheld indirect ophthalmoscopy lens. This technique is indispensable when picture documentation of optic nerve, retina, and retinal vessels is necessary but a fundus camera is not available. The main advantage of this technique is the widespread&#160;availability of smartphones that allows documentation of macula and optic nerve changes in many settings that was not previously possible. Following the well-defined steps detailed here, such as proper alignment of the phone camera, handheld lens, and the patient&#39;s pupil, is the key for obtaining a clear retina picture with no interfering light reflections and aberrations. In this paper, the optical principles of indirect ophthalmoscopy and fundus photography will be reviewed first. Then, the step-by-step method to record a good quality retinal image using a smartphone will be explained.

Fundus photography normally requires specialized fundus cameras that are not always available in all clinical settings.&#160;Here, a simple method to record ocular fundus images using a smartphone camera and a conventional high-plus handheld indirect ophthalmoscopy lens is described.

צילומי פונדוס

Smartphone fundus photography is a simple technique to obtain ocular fundus pictures using a smartphone camera and a conventional handheld indirect ...

Using Retinal Imaging to Study Dementia

The retina offers a unique &#8220;window&#8221; to study pathophysiological processes of dementia in the brain, as it is an extension of the central nervous system (CNS) and shares prominent similarities with the brain in terms of embryological origin, anatomical features and physiological properties.&#160; The vascular and neuronal structure in the retina can now be visualized easily and non-invasively using retinal imaging techniques, including fundus photography and optical coherence tomography (OCT), and quantified semi-automatically using computer-assisted analysis programs. Studying the associations between vascular and neuronal changes in the retina and dementia could improve our understanding of dementia and, potentially, aid in diagnosis and risk assessment.&#160; This protocol aims to describe a method of quantifying and analyzing retinal vasculature and neuronal structure, which are potentially associated with dementia. This protocol also provides examples of retinal changes in subjects with dementia, and discusses technical issues and current limitations of retinal imaging.

The retina shares prominent similarities with the brain and thus represents a unique window to study vasculature and neuronal structure in the brain non-invasively. This protocol describes a method to study dementia using retinal imaging techniques. This method can potentially aid in diagnosis and risk assessment of dementia.

באמצעות הדמיה ברשתית ללמוד דמנציה

The retina offers a unique &#8220;window&#8221; to study pathophysiological processes of dementia in the brain, as it is an extension of the central ...

Invasive Hemodynamic Assessment for the Right Ventricular System and Hypoxia-Induced Pulmonary Arterial Hypertension in Mice

Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a chronic and severe cardiopulmonary disorder. Mice are a popular animal model used to mimic this disease. However, the evaluation of right ventricular pressure (RVP) and pulmonary artery pressure (PAP) remains technically challenging in mice. RVP and PAP are more difficult to measure than left ventricular pressure because of the anatomical differences between the left and right heart systems. In this paper, we describe a stable right heart hemodynamic measurement method and its validation using healthy and PAH mice. This method is based on open-chest surgery and mechanical ventilation support. It is a complicated procedure compared to closed chest procedures. While a well-trained surgeon is required for this surgery, the advantage of this procedure is that it can generate both RVP and PAP parameters at the same time, so it is a preferable procedure for the evaluation of PAH models.

Here, we present a protocol to perform an invasive hemodynamic assessment of the right ventricle and pulmonary artery in mice using an open-chest surgery approach.

פולשנית הערכה היפודינמית עבור מערכת המוח הימני ואת ההיפוקסיה המושרה לחץ דם ריאתי בעכברים

Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a chronic and severe cardiopulmonary disorder. Mice are a popular animal model used to mimic this disease. ...

Oxygen-Induced Retinopathy Model for Ischemic Retinal Diseases in Rodents

One of the commonly used models for ischemic retinopathies is the oxygen-induced retinopathy (OIR) model. Here we describe detailed protocols for the OIR model induction and its readouts in both mice and rats. Retinal neovascularization is induced in OIR by exposing rodent pups either to hyperoxia (mice) or alternating levels of hyperoxia and hypoxia (rats). The primary readouts of these models are the size of neovascular (NV) and avascular (AVA) areas in the retina. This preclinical in vivo model can be used to evaluate the efficacy of potential anti-angiogenic drugs or to address the role of specific genes in the retinal angiogenesis by using genetically manipulated animals. The model has some strain and vendor specific variation in the OIR induction which should be taken into consideration when designing the experiments.

Oxygen-induced retinopathy (OIR) can be used to model ischemic retinal diseases such as retinopathy of prematurity and proliferative diabetic retinopathy and to serve as a model for proof-of-concept studies in evaluating antiangiogenic drugs for neovascular diseases. OIR induces robust and reproducible neovascularization in the retina that can be quantified.

מודל רטינופתיה הנגרמת על ידי חמצן למחלות רשתית איסכמיות במכרסמים

One of the commonly used models for ischemic retinopathies is the oxygen-induced retinopathy (OIR) model. Here we describe detailed protocols for the OIR ...

Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases

Retinal pigment epithelial (RPE) transplantation holds great promise for the treatment of inherited and acquired retinal degenerative diseases. These conditions include retinitis pigmentosa (RP) and advanced forms of age-related macular degeneration (AMD), such as geographic atrophy (GA). Together, these disorders represent a significant proportion of currently untreatable blindness globally. These unmet medical needs have generated heightened academic interest in developing methods of RPE replacement. Among the animal models commonly utilized for preclinical testing of therapeutics, the non-human primate (NHP) is the only animal model that has a macula. As it shares this anatomical similarity with the human eye, the NHP eye is an important and appropriate preclinical animal model for the development of advanced therapy medicinal products (ATMPs) such as RPE cell therapy.
This manuscript describes a method for the submacular transplantation of an RPE monolayer, cultured on a polyethylene terephthalate (PET) cell carrier, underneath the macula onto a surgically created RPE wound in immunosuppressed NHPs. The fovea-the central avascular portion of the macula-is the site of the greatest mechanical weakness during the transplantation. Foveal trauma will occur if the initial subretinal fluid injection generates an excessive force on the retina. Hence, slow injection under perfluorocarbon liquid (PFCL) vitreous tamponade is recommended with a dual-bore subretinal injection cannula at low intraocular pressure (IOP) settings to create a retinal bleb. 
Pretreatment with an intravitreal plasminogen injection to release parafoveal RPE-photoreceptor adhesions is also advised. These combined strategies can reduce the likelihood of foveal tears when compared to conventional techniques. The NHP is a key animal model in the preclinical phase of RPE cell therapy development. This protocol addresses the technical challenges associated with the delivery of RPE cellular therapy in the NHP eye.

The non-human primate (NHP) is an ideal model for studying human retinal cellular therapeutics due to the anatomical and genetic similarities. This manuscript describes a method for submacular transplantation of retinal pigment epithelial cells in the NHP eye and strategies to prevent intraoperative complications associated with macular manipulation.

השתלת אפיתל פיגמנט רשתית במודל פרימטים לא אנושי למחלות רשתית ניוונית

Retinal pigment epithelial (RPE) transplantation holds great promise for the treatment of inherited and acquired retinal degenerative diseases. These ...

Retinal Pathophysiological Evaluation in a Rat Model

A posterior segment eye disease like diabetic retinopathy alters the physiology of the retina. Diabetic retinopathy is characterized by a retinal detachment, breakdown of the blood-retinal barrier (BRB), and retinal angiogenesis. An in vivo rat model is a valuable experimental tool to examine the changes in the structure and function of the retina. We propose three different experimental techniques in the rat model to identify morphological changes of retinal cells, retinal vasculature, and compromised BRB. Retinal histology is used to study the morphology of various retinal cells. Also, quantitative measurement is performed by retinal cell count and thickness measurement of different retinal layers. A BRB breakdown assay is used to determine the leakage of extraocular proteins from the plasma to vitreous tissue due to the breakdown of BRB. Fluorescence angiography is used to study angiogenesis and leakage of blood vessels by visualizing retinal vasculature using FITC-dextran dye.

Diabetic retinopathy is one of the leading causes of blindness. Histology, blood-retinal barrier breakdown assay, and fluorescence angiography are valuable techniques to understand the pathophysiology of the retina, which could further enhance the efficient drug screening against diabetic retinopathy.

הערכה פתופיפיזיולוגית של רשתית במודל חולדה

A posterior segment eye disease like diabetic retinopathy alters the physiology of the retina. Diabetic retinopathy is characterized by a retinal ...

Repetitive Blood Sampling from the Subclavian Vein of Conscious Rat

Rats are widely used in pharmacokinetics (PK) and toxicokinetic (TK) studies that need to collect a certain amount of blood at specific time points to detect drug exposure. The rat blood sampling method determines the quality of the plasma and further affects the precision of the test results. The subclavian vein blood collection method described in this protocol collects blood samples repeatedly in the conscious state of animals to meet the needs of PK and TK tests. The skills of restraint handling and appropriate procedure of needle incision ensure the success rate of blood collection. It is easy to operate while ensuring the quality of plasma and at the same time catering to animal welfare. However, this method requires skilled operation, and an improper one may cause animal weakness, pain, lameness, and even mortality. The current method has been used in the testing facility for a 4-week oral toxicity study in Sprague Dawley (SD) rats with TK. The maximum amount of blood collected within 24 h did not exceed 20% of the animal's total blood. The animals' body weight was more than 200 g for males and females. The data showed that the animals' bodyweight increased steadily every week, and the clinical observation was normal after repetitive sample collection.

The present protocol describes a simple and efficient method for collecting blood from the subclavian vein in rats. It enables rapid, timely, and easily identifiable sampling without anesthesia and obtains high-quality blood through repetitive sample collection.

דגימת דם חוזרת מהווריד הסובקלבי של חולדה מודעת

Rats are widely used in pharmacokinetics (PK) and toxicokinetic (TK) studies that need to collect a certain amount of blood at specific time points to ...