والهدف العام من هذا المعالجة المسبقة هو توليد الفئران وأن قنوات TRPV1 غير متحسسة في المناطق فوق مستوى العالم. يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال الأدوية العصبية. والميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أن إزالة الحساسية من TRPV1 الانتقائية فوق اللبونية يمكن أن تُستحث بطريقة بسيطة للغاية.
لبدء هذا الإجراء، تخدير الماوس مع pentobarbital intraperitoneally الصوديوم والتحقق من فقدان رد الفعل الصحيح. لعلاج تحت الجلد، حقن RTX في 20 ميكروغرام في المليلتر في الجزء الخلفي من الرقبة في حجم 0.1 ملليلتر لكل 10 غرام من وزن الجسم. بالنسبة لمجموعة التحكم، قم بحقن السيارة بنفس الطريقة.
تمرير إبرة قياس 27 المتاح من خلال أنبوب معدني لفضح 3 إلى 3.5 ملليمتر طرف الإبرة. ثم عقد العظام squamosal من الفأرة بحزم مع الأصابع. نقل الإبرة بشكلٍ عرضي على فروة الرأس والعثور على خياطة القوس حيث يتم توصيل طرف الإبرة على الغرزة.
نقل طرف حوالي ملليمتر واحد إلى اليمين، ثم نقل طرف rostrally للعثور على خياطة التاجية. بعد ذلك، أدخل الإبرة ببطء وعموديا. حقن حل RTX على مدى 10 ثانية وعقد عليه لمدة 10 ثانية أخرى بعد ذلك.
في وقت لاحق، سحب الإبرة ببطء والعودة إلى قفصها الرئيسية. بعد أسبوع واحد من حقن RTX، قبل 60 دقيقة على الأقل من الاختبار، قم بنقل الماوس إلى غرفة الاختبار. قبل 30 دقيقة على الأقل من الاختبار، ضع الماوس في قفص زجاج شبكي للسماح لها بالتأقلم مع البيئة.
ثم قبل 20 دقيقة من الاختبار، وإدارة الأسيتامينوفين في 300 ملليغرام للكيلوغرام الواحد إلى intraperitoneally الماوس. عقد الماوس فضفاضة في كيس من القماش الصغيرة وإدراج إبرة قياس 30 في كعب مخلب الخلفي الأيمن. تقدم الإبرة تحت الجلد إلى قرب وسادة المشي وحقن 20 ميكرولتر من حل RTX في 0.05 ميكروغرام لكل ملليلتر.
في وقت لاحق، وقياس فترة لعق والعض السلوك في منطقة جلابرووس من مخلب المتضررة في كل كتلة لمدة خمس دقائق. بعد أسبوع واحد من حقن RTX، قم بنقل الماوس إلى غرفة الاختبار. ضع الماوس في قفص زجاج شبكي.
ضع علامة على البقع على 1.5 و 2.5 سنتيمتر من قاعدة الذيل. المقبل، عقد الماوس فضفاضة في كيس من القماش الصغيرة وتطبيق الضغط على البقع مع مسبار حادة. يرجى ملاحظة أن يتم فرض ضغط قطع من 250 غرام لتجنب تلف الأنسجة.
تحديد الضغط المطلوب لانتزاع سلوك الهروب وحساب عتبة nociceptive عن طريق متوسط الضغط المحدد في البقعتين. كرر الإجراءات كل 15 دقيقة. بعد الحصول على خط الأساس، وإدارة الأسيتامينوفين في 300 ميكروغرام لكل كيلوغرام إلى intraperitoneally الماوس، ثم كرر اختبار ضغط الذيل كل 15 دقيقة حتى تصل إلى 90 دقيقة.
هذان الرقمان تظهران استجابة فئران SC أو ICV المعالجة لحقن داخل الزرع RTX. كان سلوك اللعق والعض للفئران المعالجة بالمركبات رائعًا في الدقائق العشر الأولى. على الرغم من أن الفئران SC المعالجة مسبقًا لم تظهر سلوك اللعق والعض على الإطلاق ، إلا أن الفئران المعالجة المسبقة لـ ICV استجابت عادة لحقن البلونتار من RTX.
وعلاوة على ذلك، إدارة داخل الصفاون من الأسيتامينوفين خفض لعق والعض السلوك من الفئران ICV معالجة مركبة، ولكن ليس في RTX ICV فئران المعالجة. يُظهر هذا الرسم البياني التأثيرات المُهَسّنة لاسيتامينوفين عند 300 ميكروغرام لكل كيلوغرام في اختبار ضغط الذيل. قلل الأسيتامينوفين من الاستجابة الناظرية للفئران المعالجة مسبقًا للمركبة في كلا الاختبارين ، ولكن تم تثبيط الآثار مسكن الأسيتامينوفين في الفئران التي تم معالجة ICV مسبقًا مع RTX.
يتقن مرة واحدة, هذا الحقن ICV تقنية يمكن تطبيقها على أدوية أخرى. لا ننسى أن العمل مع Resiniferatoxin يمكن أن تكون خطرة للغاية وتأكد من استخدام قفازات مطاطية ونظارات للحماية عند التعامل معها.
