El objetivo general de este pretratamiento es generar ratones y que los canales TRPV1 se desensibilicen en regiones supraespinales. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo neurofarmacológico. La principal ventaja de esta técnica es que la desensibilización selectiva supraespinal TRPV1 puede ser inducida de una manera bastante simple.
Para comenzar este procedimiento, anestesia un ratón con sodio pentobarbital intraperitonealmente y comprueba la pérdida del reflejo corrector. Para el tratamiento subcutáneo, inyecte RTX a 20 microgramos por mililitro en la parte posterior del cuello a un volumen de 0,1 mililitros por 10 gramos de peso corporal. Para el grupo de control, inyecte el vehículo de la misma manera.
Pase una aguja desechable de calibre 27 a través de un tubo metálico para exponer la punta de 3 a 3,5 milímetros de la aguja. A continuación, sostenga los huesos escamosos del ratón firmemente con los dedos. Mueva la aguja lateralmente sobre el cuero cabelludo y encuentre la sutura sagital a medida que la punta de la aguja está enganchada en la sutura.
Mueva la punta alrededor de un milímetro hacia la derecha, luego mueva la punta rostralmente para encontrar la sutura coronal. Después, inserte la aguja lenta y verticalmente. Inyecte la solución RTX durante 10 segundos y sostén esta rueda durante otros 10 segundos después.
Posteriormente, retire la aguja lentamente y devuelva el ratón a su jaula de origen. Una semana después de la inyección RTX, al menos 60 minutos antes de la prueba, transfiera el ratón a la sala de pruebas. Al menos 30 minutos antes de la prueba, coloque el ratón en una jaula de plexiglás para permitir que se aclimate al medio ambiente.
Luego, 20 minutos antes de la prueba, administrar paracetamol a 300 miligramos por kilogramo al ratón intraperitonealmente. Sostenga el ratón libremente en una pequeña bolsa de tela e inserte una aguja de calibre 30 en el talón de la pata trasera derecha. Avance la aguja por vía subcutánea hasta cerca de la almohadilla para caminar e inyecte 20 microlitros de solución RTX a 0,05 microgramos por mililitro.
Posteriormente, mida el período de comportamiento de lamer y morder en la región glabra de la pata afectada en cada bloque de cinco minutos. Una semana después de la inyección RTX, transfiera el ratón a la sala de pruebas. Coloque el ratón en una jaula de plexiglás.
Marque las manchas a 1,5 y 2,5 centímetros de la base de la cola. A continuación, sostenga el ratón libremente en una pequeña bolsa de tela y aplique presión a los puntos con una sonda contundente. Tenga en cuenta que se impone una presión de corte de 250 gramos para evitar daños en los tejidos.
Determine la presión necesaria para provocar el comportamiento de escape y calcule el umbral nociceptivo promediando la presión determinada en los dos puntos. Repita los procedimientos cada 15 minutos. Después de obtener la línea de base, administrar paracetamol a 300 microgramos por kilogramo al ratón por vía intraperitoneal, luego repetir la prueba de presión de cola cada 15 minutos hasta que alcance los 90 minutos.
Estas dos cifras muestran la capacidad de respuesta de los ratones tratados con SC o ICV a la inyección intraplantar de RTX. El comportamiento de lamer y morder de los ratones tratados con vehículos fue notable en los primeros 10 minutos. Aunque los ratones pretratados SC no mostraron ningún comportamiento de lamer y morder, los ratones pretratados ICV normalmente respondieron a la inyección plantar de RTX.
Además, la administración intraperitoneal de paracetamol redujo el comportamiento de lamer y morder ratones tratados con ICV, pero no en ratones tratados con RTX ICV. Este gráfico muestra los efectos analgésicos del paracetamol a 300 microgramos por kilogramo en la prueba de presión de la cola. El paracetamol redujo la respuesta nociceptiva de los ratones pretratados del vehículo en ambas pruebas, pero los efectos analgésicos del paracetamol se inhibieron en ratones que fueron pretratados ICV con RTX.
Una vez masterización, esta técnica de inyección de ICV se puede aplicar para otros medicamentos. No olvide que trabajar con Resiniferatoxin puede ser extremadamente peligroso y asegúrese de usar guantes y gafas de goma para protegerse durante el manejo.
