Общая цель этой предварительной обработки заключается в создании мышей и что каналы TRPV1 десенсибилизированы в супраспинальных регионах. Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в нейрофармацевтической области. Основным преимуществом этого метода является то, что надспинаальная селективная десенсибилизация TRPV1 может быть вызвана довольно простым способом.
Чтобы начать эту процедуру, анестезировать мышь с пентобарбитальным натрием intraperitoneally и проверить на потерю правого рефлекса. Для подкожного лечения ввимит RTX по 20 микрограмм на миллилитр в заднюю часть шеи при объеме 0,1 миллилитра на 10 граммов массы тела. Для контрольной группы, вводить транспортное средство таким же образом.
Пройдите одноразовые 27 калибровочных игл через металлическую трубку, чтобы разоблачить от 3 до 3,5 миллиметра кончик иглы. Затем держите сквамосальные кости мыши крепко пальцами. Переместите иглу боковой на кожу головы и найти sagittal шов, как кончик иглы зацепили на шве.
Перемести кончик примерно на один миллиметр вправо, а затем перемести кончик ростральным, чтобы найти корональный шов. После этого вставьте иглу медленно и вертикально. Ввись решение RTX в течение 10 секунд и удерживайте его еще 10 секунд после этого.
Затем медленно свямите иглу и верните мышь в домашнюю клетку. Через неделю после инъекции RTX, по крайней мере за 60 минут до теста, перенесите мышь в испытательный зал. По крайней мере за 30 минут до теста поместите мышь в клетку из плексигласа, чтобы она акклиматизировалась к окружающей среде.
Затем за 20 минут до теста, управлять ацетаминофен на 300 миллиграммов на килограмм мыши intraperitoneally. Держите мышь свободно в небольшой мешок ткани и вставьте 30 калибровочных иглы в пятку правой задней лапы. Предварительно иглы подкожно вблизи пешеходной площадки и ввести 20 микролитров раствора RTX на 0,05 микрограмма на миллилитр.
Впоследствии, измерить период лизать и кусаться поведение в глабрузной области пораженной лапы в каждом пятиминутном блоке. Через неделю после инъекции RTX перенесите мышь в испытательный зал. Поместите мышь в клетку из плексигласа.
Отметь пятна на уровне 1,5 и 2,5 сантиметра от основания хвоста. Затем держите мышь свободно в небольшой мешок ткани и оказать давление на пятна с тупым зондом. Обратите внимание, что давление отсечения 250 грамм налагается, чтобы избежать повреждения тканей.
Определите давление, необходимое для получения поведения побега и вычислить ноцицептивный порог путем усреднения давления, определяемого в двух точках. Повторяйте процедуры каждые 15 минут. После получения базовой линии, управлять ацетаминофен на 300 микрограмм на килограмм мыши intraperitoneally, а затем повторить тест давления хвоста каждые 15 минут, пока не достигнет 90 минут.
Эти две цифры показывают отзывчивость SC или ICV лечение мышей к внутриплантационной инъекции RTX. Лизание и кусаться поведение транспортных средств обработанных мышей было замечательно в первые 10 минут. Хотя SC предварительно обработавших мышей не показывают лизать и кусаться поведение на всех, ICV предварительно обработанной мышей обычно ответил на подошвенной инъекции RTX.
Кроме того, внутриперитонеальной администрации ацетаминофена снижение лизать и кусаться поведение транспортного средства ICV лечение мышей, но не в RTX ICV лечение мышей. На этом графике показаны анальгетики эффекты ацетаминофена на 300 микрограмм на килограмм в тесте давления хвоста. Ацетаминофен снижение ноцицептивной реакции транспортного средства предварительной лечили мышей в обоих тестах, но анальгетики эффекты ацетаминофен были ингибированы у мышей, которые были предварительно обработанные ICV с RTX.
После освоения, этот метод инъекции ICV может быть применен для других препаратов. Не забывайте, что работа с Resiniferatoxin может быть чрезвычайно опасным и убедитесь, что использовать резиновые перчатки и очки для защиты при обработке.
