Das übergeordnete Ziel dieser Vorbehandlung ist es, Mäuse zu erzeugen und TRPV1-Kanäle in supraspinalen Regionen desensizipiert zu werden. Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen im neuropharmaologischen Bereich zu beantworten. Der Hauptvorteil dieser Technik ist, dass supraspinale selektive TRPV1-Desensibilisierung auf einfache Weise induziert werden kann.
Um dieses Verfahren zu beginnen, beanten Sie eine Maus mit Pentobarbital Natrium intraperitoneally und überprüfen Sie auf Verlust des Rechten Reflex. Zur subkutanen Behandlung, injizieren RTX mit 20 Mikrogramm pro Milliliter in den Nacken bei einem Volumen von 0,1 Milliliter pro 10 Gramm Körpergewicht. Für die Kontrollgruppe das Fahrzeug auf die gleiche Weise injizieren.
Passieren Sie eine Einwegnadel mit 27 Messgeräten durch ein Metallrohr, um 3 bis 3,5 Millimeter Spitze der Nadel freizulegen. Dann halten Sie die squamosalen Knochen der Maus fest mit den Fingern. Bewegen Sie die Nadel seitlich auf der Kopfhaut und finden Sie die sagittale Naht, da die Nadelspitze an der Naht eingehängt ist.
Bewegen Sie die Spitze um einen Millimeter nach rechts, dann bewegen Sie die Spitze rostral, um die koronare Naht zu finden. Legen Sie die Nadel anschließend langsam und vertikal ein. Injizieren Sie die RTX-Lösung über 10 Sekunden und halten Sie sie danach weitere 10 Sekunden.
Anschließend ziehen Sie die Nadel langsam zurück und bringen Sie die Maus in ihren Heimischenkäfig zurück. Eine Woche nach der RTX-Injektion, mindestens 60 Minuten vor dem Test, die Maus in den Testraum übertragen. Legen Sie die Maus mindestens 30 Minuten vor dem Test in einen Plexiglaskäfig, damit sie sich an die Umwelt akklimatisieren kann.
Dann 20 Minuten vor dem Test Acetaminophen mit 300 Milligramm pro Kilogramm an die Maus intraperitoneal verabreichen. Halten Sie die Maus locker in einem kleinen Stoffbeutel und legen Sie eine 30 Gauge Nadel in die Ferse der rechten Hinterpfote. Fördern Sie die Nadel subkutan in die Nähe des Gehpads und injizieren Sie 20 Mikroliter RTX-Lösung bei 0,05 Mikrogramm pro Milliliter.
Anschließend messen Sie die Zeit des Leck- und Beißverhaltens im glabrousen Bereich der betroffenen Pfote in jedem fünfminütigen Block. Eine Woche nach der RTX-Injektion die Maus in den Testraum überführen. Legen Sie die Maus in einen Plexiglaskäfig.
Markieren Sie die Flecken auf 1,5 und 2,5 Zentimeter von der Basis des Schwanzes. Halten Sie die Maus anschließend locker in einem kleinen Stoffbeutel und drücken Sie mit einer stumpfen Sonde auf die Stellen. Bitte beachten Sie, dass ein Grenzdruck von 250 Gramm auferlegt wird, um Gewebeschäden zu vermeiden.
Bestimmen Sie den Druck, der erforderlich ist, um das Fluchtverhalten auszulösen, und berechnen Sie die Nozizeptive Schwelle, indem Sie den an den beiden Stellen ermittelten Druck mittelisieren. Wiederholen Sie die Prozeduren alle 15 Minuten. Nach Erhalt der Ausgangsbasis acetaminophen mit 300 Mikrogramm pro Kilogramm an die Maus intraperitoneally, dann wiederholen Sie den Schwanzdrucktest alle 15 Minuten, bis es 90 Minuten erreicht.
Diese beiden Abbildungen zeigen die Reaktionsfähigkeit von SC- oder ICV-behandelten Mäusen auf die intraplantare Injektion von RTX. Das Leck- und Beißverhalten von mit Fahrzeugen behandelten Mäusen war in den ersten 10 Minuten bemerkenswert. Obwohl die SC vorbehandelten Mäuse überhaupt kein Leck- und Beißverhalten zeigten, reagierten die von der ICV vorbehandelten Mäuse normalerweise auf die Plantarinjektion von RTX.
Darüber hinaus reduzierte die intraperitoneale Verabreichung von Acetaminophen das Leck- und Beißverhalten von von ICV-behandelten Mäusen, aber nicht bei von RTX ICV behandelten Mäusen. Diese Grafik zeigt die schmerzstillenden Wirkungen von Acetaminophen bei 300 Mikrogramm pro Kilogramm im Enddrucktest. Acetaminophen reduzierte die nozizeptive Reaktion von vorbehandelten Mäusen in beiden Tests, aber die schmerzstillende Wirkung von Acetaminophen wurde bei Mäusen, die ICV mit RTX vorbehandelt wurden, gehemmt.
Einmal gemeistert, kann diese ICV-Injektionstechnik für andere Medikamente angewendet werden. Vergessen Sie nicht, dass die Arbeit mit Resiniferatoxin extrem gefährlich sein kann und stellen Sie sicher, Gummihandschuhe und Gläser zum Schutz bei der Handhabung zu verwenden.
