على مدى السنوات القليلة الماضية، أصبحت هندسة الكبد موضوعا ساخنا في جميع أنحاء العالم نظرا لإمكانات توليد زرع ترقيع الكبد قادرة. مهما قابل للتطبيق وظيفة طويلة الأجل وزرع الأعضاء المهندسة لا تزال رؤية للمستقبل. مؤخرا في vivo فص الكبد إسراف أصبح استراتيجية واعدة لبدء هندسة الكبد.
ميزة رئيسية من هذه التقنية هو أن في vivo إعادة ملء جزئية الكبد سقالة تعرض إسراف الدم scatological. هذا يوفر سقالة مع درجة الحرارة المناسبة، والأكسجين الكافي، والمواد المغذية وعوامل النمو على النقيض من وفرة السابقين vivo مع ثقافة اصطناعية المتوسطة. ميزة أخرى هي أن الكبد المتبقي يحافظ على وظيفة الكبد وبالتالي يسمح أساسا البقاء على قيد الحياة على المدى الطويل.
ومع ذلك فإن نموذج الفص الواحد في vivo هو تحدي تقنيًا ولم يتحقق بعد البقاء على قيد الحياة المنطوق. هنا نحن نذهب لتقديم نموذج آخر الجراحية مع البقاء على قيد الحياة على المدى الطويل كأساس لمزيد من في vivo واحد هندسة الفص الكبد. قبل أن نُظهر النموذج الجراحي، نود أن نعطي مقدمة موجزة عن تشريح كبد الفئران.
لإنشاء لدينا نموذج فص الكبد واحد وفرة اخترنا الفص الجانبي الأيسر. هذا هو الفص الكبدي الوحيد مع إمدادات الأوعية الدموية الصرفي واضح يسمح لإنشاء الالتفافية. هذا هو إعادة بناء ثلاثي الأبعاد للنظام الوريدي للبوابة في الفئران.
تركيزنا هنا هو على الوريد البوابة اليسرى التي سوف تكون في وقت لاحق بمثابة مدخل السوائل. هذا هو إعادة بناء ثلاثية الأبعاد للنظام الوريدي الكبدي في الفئران. هنا تركيزنا على الوريد الكبدي الجانبي الأيسر الذي سيكون في وقت لاحق بمثابة منفذ السوائل.
هذا التوضيح من تشريح الأوعية الدموية الكبد يسلط الضوء على نقاط الوصول إلى الأوعية الدموية المستخدمة لنموذج الضخ الجزئي. هذه الرسوم المتحركة يوضح مخطط توليد في vivo اليسار شكل الفص الكبد الجانبي. من أجل إنشاء النموذج الجراحي ونحن نذهب لتوليد التفاف الدائرة داخل الفص الجانبي الأيسر.
لهذا الغرض نحن بحاجة إلى سد الأوعية التالية الوريد البوابة اليسرى، والشريان الكبدي الأيسر، والقناة الصفراوية اليسرى، والوريد البرتال الوسيط الأيسر، والشريان الكبدي والقناة الصفراوية، والوريد الكبدي الجانبي الأيسر. ثم نحن بحاجة إلى cannulate الوريد البوابة اليسرى مع 24 الغاتة القسطرة. بعد ذلك يتم تزييته الوريد الكبدي الجانبي الأيسر باستخدام قسطرة 22 غيج.
ثم يتم توصيل القسطرة في الوريد الأيسر إلى مضخة الضخ. يتم وضع الشاش الجاف عند مقبِل القسطرة في الوريد الكبدي الجانبي الأيسر لامتصاص سائل النفايات. بهذه الطريقة يتم إنشاء تجاوز.
ثم الفص الجانبي الأيسر المُلَكِن بالملاط الملحي المُهَدِمِيِ المُسَلَّقِدِ بمعدل تدفق قدره 0.5 ملليلتر في الدقيقة. يتم استعادة الضخ الفسيولوجي إلى الفص الجانبي الأيسر بعد إعادة فتح السفن المحظورة. الآن يتم تأسيس نموذج التسريب الجراحي.
وقد قامت السلطات المحلية بتقييم جميع الإجراءات التي تم عرضها في هذا الفيديو والموافقة عليها. يتم تطهير حقل العملية من البطن مع ثلاث جولات من صبغة اليود تليها جولتين من 70٪ الكحول. يتم وضع الشاش العقيم على البطن وترك فقط حقل العملية يتعرض.
يتم إجراء شق عرضية على جدار البطن من الفئران. يتم استخدام خياطة برولين 4-0 لإصلاح عملية xiphoid وسحبه نحو الرأس. يتم سحب كلا الجانبين من جدران البطن العليا باستخدام اثنين من السنانير تحت المستوى للوصول إلى التعرض الكامل للجهاز.
ثم يمكننا رؤية فصوص الكبد هنا الفص الجانبي الأيسر الذي يستخدم للانكسار الانتقائي. نحن نغطي الاثني عشر والأمعاء الدقيقة في تجويف البطن مع الشاش الرطب إلى جفاف المبيض.
نكشف عن حلم الكبد عن طريق رفع الفصوص الوسيطة بالشاش المبلل. يتم وضع الجرذ تحت مجهر معقمة. نحن تشريح الوريد البوابة اليسرى.
ثم نلخت الوريد البرونتال الأيسر مع خياطة حريرية 6-0. يتم حظر الشريان الكبدي الأيسر، القناة الصفراوية اليسرى، وكذلك الوريد البولي الوسيط الأيسر، والشريان الكبدي الوسيط الأيسر، والقناة الصفراوية الوسيطة اليسرى باستخدام المشابك الدقيقة. نحن نمنع الوريد الكبدي الجانبي الأيسر مع المشابك الدقيقة في قاعدة الفص الجانبي الأيسر.
لإنشاء مدخل السائل ، يتم ثقب جذع الوريد المدخل مع قسطرة مسكن لإبرة 24 غيج. ولكن لم يتم إدخال القسطرة. ثم نقوم بإزالة الإبرة من القسطرة وتوصيل القسطرة بمضخة الضخ.
لطرد الهواء من الأنبوب والقسطرة، نُنْزعُ بالملحة الملحية المُهدَّرة لمدة دقيقة. ثم نقوم بتشغيل المضخة. بعد ذلك يتم إدخال القسطرة الحرة الإبرة، التي ترتبط الآن إلى مضخة الضخ، في الوريد البوابة اليسرى.
وبهذه الطريقة نحن تقليل التلاعب من السفينة معبّل. هنا منطقة مكشوفة من الوريد الكبدي الجانبي الأيسر نحن ذاهبون إلى cannulate بطريقة مماثلة. أولاً نخلق ثقباً في التصريف في الوريد الكبدي الجانبي الأيسر عن طريق ثقبه بـ 22 غيج أو 24 قسطرة إبرة غيج.
نوصي بأن تكون القسطرة أصغر قليلاً من الوعاء. ثم نبدأ في دس الفص الجانبي الأيسر مع المالحة المهترة بمعدل تدفق 0.5 ملليلتر في الدقيقة. يتم امتصاص السائل النفايات المتدفقة مع الشاش.
لتقليل التلوث داخل الأضصال مع سائل النفايات، نقوم بإعادة إدخال القسطرة المجانية للإبرة في الوريد الكبدي الجانبي الأيسر. وهكذا فإن الوريد الكبدي الجانبي الأيسر المُعلّم يعمل كمخرج سائل. نستمر في ضخ الفص الجانبي الأيسر مع المالحة المهجلة.
يمكن رؤية السائل الدموي يقطر من المنفذ. يشير السهم إلى أن الفص الجانبي الأيسر تحول إلى اللون الأصفر أثناء الضخ مع الملح الملحي المُهدَف. في نهاية التسريب يتم أخذ القسطرة من الأوعية.
يتم إغلاق فتحة الصرف الصحي على الوريد الكبدي الجانبي الأيسر مع خياطة واحدة من 11-0 pollumite. يتم إغلاق فتحة مدخل على الوريد البوابة اليسرى مع خياطة pollumite 11-0 كذلك. يبدأ الانسياب من الوريد فوق الوهنية بعد إزالة المشبك على الوريد الكبدي الجانبي الأيسر.
يتم استعادة الانفعال الفسيولوجي بعد إزالة المشبك من الشريان الكبدي الأيسر والقناة الصفراوية ، وكذلك الهياكل الوعائية الوسيطة اليسرى. ويتحقق اكتمال إعادة ضخ بعد إعادة فتح الوريد بوابة اليسار كما هو مبين من قبل تغيير اللون إلى اللون الأحمر الداكن. ينور من يسار فص فيما بعد.
السهم الأبيض في هذه الصورة يشير إلى أن الفص الكبد الهدف كان في الواقع perfused بشكل انتقائي. هنا تظهر الأسهم البيضاء أن الفصوص المتبقية، والتي تمثل حوالي 70٪ من الكبد يحتفظ الضخ الفسيولوجي طوال العملية بأكملها. إعادة ضخ الفص الجانبي الأيسر.
هنا يشير السهم الأحمر إلى أن الفص الجانبي الأيسر يتم إعادة دمجه من الناحية الفسيولوجية بعد إعادة فتح السفن المحظورة. السهم الأزرق يظهر أن الفص المتوسط الأيسر قد اُرد إلى نقص التروية. تم فحص الفص الجانبي الأيسر المُركّب بشكل انتقائي باستخدام تلطيخ H E.
ويبين الشكل ألف أنه في الفص الجانبي الأيسر المُخلوق لا يمكن اكتشاف أي خلايا دم في فرع الوريد البوّاب والجيوب الأنفية. كما هو متوقع الخلايا الحمراء مرئية في فرع من الشريان الكبدي. في الشكل B الفص caudate السفلية بمثابة السيطرة.
خلايا الدم واضحة للعيان وفروع الوريد بروتال والشريان الكبدي وكذلك الجيوب الأنفية. يوضح الشكل C أنه في الفص الجانبي الأيسر المُخلوق لا توجد خلايا دم مرئية في الوريد المركزي. في المقابل، يوضح الشكل D أن خلايا الدم الفص السفلية في الوريد المركزي تظهر في الوريد المركزي في التحكم.
حققنا معدل بقاء 100٪ في الأسبوع الواحد في 12 إجراء متتالي. قارنا لدينا في vivo الكبد الفص نموذج الوربي مع نموذج بان والزملاء. الاختلافات الرئيسية في المنهجية والنتائج بين بان ومجموعتنا هي: اختاروا الفص السفلي الأيمن بينما اخترنا الفص الجانبي الأيسر كفص كبد مستهدف ؛ لقد حظروا vena cava والوريد الرئيسي المؤدي إلى ارتفاع ضغط الدم في البوابة.
في المقابل حافظنا على وجود بوابة 70٪ من الكبد؛ ضحوا بالجرذان بين العمليات في حين أن معدل البقاء على قيد الحياة لمدة أسبوع واحد هو 100٪، مزايا نموذجنا الجراحي الجديد: أنه صعب تقنيًا ولكنه ممكن؛ وأنه جيد التحمل كما يتضح من معدل البقاء على قيد الحياة بنسبة 100٪. ومع ذلك، فإن أحد القيود هو أن الفص المتوسط الأيسر قد اُرد إلى نقص التروية بسبب انسداد الوريد المدخلي. التطبيقات المحتملة لتقنيتنا تشمل: التي يمكن استخدامها لعلاج الجهاز الجزئي في vivo عن طريق perfusion مع المخدرات؛ في vivo إزالة الخلايا الجزئية كما استئصال الكيميائية؛ في vivo خلية نظام الثقافة بالمقارنة مع السابقين vivo؛ وفي vivo هندسة الكبد.
