在过去的几年中,肝脏工程已成为全世界的热门话题,因为它具有产生移植能力肝移植的潜力。然而,可行的长期功能和工程器官的移植仍然是未来的愿景。最近,体内肝叶大量移植已成为一个有希望的策略,开始肝脏工程。
该技术的一个主要优点是,体内重新填充的部分肝脏支架受到血液分血。这为脚手架提供了适当的温度、足够的氧气、营养和生长因子,与人工培养基的外体富量形成鲜明对比。另一个优点是,剩余的肝脏保持肝功能,因此主要允许长期生存。
然而,体内单叶灌注模型在技术上具有挑战性,术后生存尚未实现。在这里,我们将提出另一个手术模型与长期生存作为基础,进一步体内单肝叶工程。在我们演示手术模型之前,我们想简单介绍一下大鼠肝脏解剖。
为了建立我们的单肝叶丰富的模型,我们选择了左边叶。这是唯一的肝叶与一个独特的血管供应和排水允许创建一个旁路。这是大鼠门户静脉系统的三维重建。
我们在这里的重点是左入口静脉,稍后将作为流体入口。这是大鼠肝静脉系统的三维重建。在这里,我们的重点是左横向肝静脉,稍后将作为流体出口。
此肝脏血管解剖图突出了用于部分灌注模型的血管接入点。此动画演示了生成体内左左肝叶灌注模型的方案。为了建立手术模型,我们将在左侧叶内生成一个电路旁路。
为此,我们需要阻断以下血管左入口静脉、左肝动脉、左胆管、左中位前静脉、肝动脉和胆管,以及左横向肝静脉。然后,我们需要用24个计具导管来调节左门静脉。之后,使用22个计具导管对左横向肝静脉进行导管。
然后,左入口静脉中的导管连接到灌注泵。干纱布被放置在导管出口左侧肝静脉,以吸收废液。这样,将创建旁路。
然后左侧叶以每分钟0.5毫升的流速充满肝素盐水。在重新打开堵塞的血管后,左叶的生理灌注恢复。现在建立了手术灌注模型。
本视频中演示的所有程序都经过地方当局的评估和批准。腹部的手术场用三轮碘药消毒,然后进行两轮70%酒精的消毒。无菌纱布被放置在腹部,只留下手术场暴露。
在老鼠的腹壁上做了一个横向切口。4-0 丙烯缝合线用于修复西腓过程,并将其拉向头部。上腹壁的两侧使用两个亚海岸钩缩回,以达到器官的完全暴露。
然后我们可以看到肝叶。这里是用于选择性灌注的左向叶。我们用湿润的纱布覆盖腹腔中的十二指肠和小肠,使卵巢干燥。
我们用湿润的纱布抬起中叶,露出肝脏的隆隆。老鼠被放置在无菌显微镜下。我们剖析了左门脉。
然后,我们用6-0的丝线缝合将左原静脉缝合。使用微夹,左肝动脉、左胆管以及左中位入口静脉、左中位肝动脉和左中位胆管被阻塞。我们在左横向叶底部用微夹阻断左横向肝静脉。
为了创建液体入口,入口静脉的茎被用24个量具针刺破。但是导管没有插入。然后,我们将针头从导管上取出,然后将导管连接到灌注泵。
为了将空气从管子和导管中排出,我们用肝素盐水来呼吸一分钟。然后,我们打开泵。接下来,针头无导管,现在连接到灌注泵,插入到左入口静脉。
这样,我们最大限度地减少了对可调容器的操纵。这里是左横向肝静脉的暴露区域, 我们将以类似的方式可以。首先,我们用22个量具或24个量具针来打穿左横向肝静脉的排水孔。
我们建议导管比容器稍小。然后,我们开始以每分钟 0.5 毫升的流速将左侧叶与肝素盐水进行细足。流出的废液被纱布吸收。
为了尽量减少废物液的腹内污染,我们将无针导管插入左侧肝静脉。因此,可曲化的左横向肝静脉作为流体出口。我们继续用肝素盐水来细读左边叶。
可以看到血液从出口滴落。箭头表示左向叶在灌注过程中与肝素盐水一起变黄。灌注结束时,导管从容器中取出来。
左向肝静脉的排水开口用一个单一的11-0波花石缝合关闭。左入口静脉的入口开口也以 11 - 0 的波杜米特缝合关闭。再灌注从从超前静脉卡瓦的回流开始,去除左横向肝静脉上的夹子。
从左肝动脉和胆管以及左中位血管结构中去除夹子后,生理灌注得到进一步恢复。重新打开左入口静脉后实现完全再灌注,颜色更改为深红色表示。左叶的灌注。
此图像中的白色箭头表示目标肝叶确实选择性地被注入。这里的白箭显示,剩余的叶,其中代表约70%的肝脏保留生理灌注整个程序。左边叶的再灌注。
在这里,红色箭头表示左叶在重新打开堵塞的容器后在生理上重新注入。蓝色箭头显示左中叶持续缺血。选择性地向左叶的注入是使用H E染色进行组织学检查的。
图 A 显示,在左边叶中,在入口静脉和正弦的分支中检测出没有血细胞。正如预期的那样,红细胞在肝动脉的分支中可见。在图B中,劣质的考达特叶用作控制。
血细胞清晰可见,前静脉和肝动脉的分支以及正弦。图C表明,在左左叶中,中央静脉中看不到血细胞。相比之下,图D表明,在控制中,劣质的卡达特叶血细胞在中央静脉中可见。
我们连续12次手术实现了100%一周的存活率。我们比较了我们的体内肝叶灌注模型与潘和同事的模型。潘群和我们组在方法和结果上的主要区别在于:他们选择了右低叶,而我们选择了左边叶作为靶向肝叶;他们阻断了静脉和主门户静脉,导致门户高血压。
相比之下,我们维持了70%的肝脏的门户灌注;他们牺牲了大鼠间手术,而我们一周的存活率是100%。我们新颖的手术模型的优点是:它在技术上具有挑战性,但可行;100%的存活率证明了这一点。然而,一个限制是,左中叶持续缺血由于门户静脉堵塞。我国技术的潜在应用包括:利用药物灌注可用于体内部分器官治疗;体内部分器官脱细胞化为化学切除;体内细胞培养系统与体内外细胞培养系统相比;体内肝脏工程。