لقد طورنا طريقة مباشرة لقياس الدهون من المركبات المحمومة باستخدام الفلور NMR وهو acrid بما فيه الكفاية لإعادة إنتاج نحن قياس الاختلافات الصغيرة في lipophilicity. يمكن استخدام هذه الطريقة لدراسة تأثير تكوين المركبات العضوية بشكل منهجي على التغيرات المتغيرة للليبوفيليا ، والتي تهم الكيمياء الطبية العامة. وتشمل مزايا هذا الأسلوب أن المركبات لا يجب أن يكون رد الفعل، وأنها لا يجب أن تكون نقية تماما.
ليست هناك حاجة لقياس الكتلة أو وحدات التخزين الدقيقة، وليست هناك حاجة لإنشاء منحنيات المعايرة. وينبغي اختيار مركب مرجعي مناسب، وينبغي تجنب التلوث المتبادل لـ aliquot أثناء مرحلة أخذ العينات. في هذا الفيديو سوف نظهر المهارات العملية المناسبة لأخذ العينات، وختم أنبوب NMR، والاستخدام الصحيح لبرامج NMR لمعالجة البيانات.
إضافة 6.0 ملليغرام من مركب X و 3.0 ملليغرام من المجمع المرجعي إلى قارورة 10 ملليلتر على شكل كمثرى. قم بحل المركبات في ما يقرب من مليلترين من HPLC-الصف ن-أوكتانول، وإضافة ملليلتر من المياه HPLC الصف. ضع القارورة داخل وعاء تحكم عليه درجة الحرارة فوق لوحة تحريك، واربط بمبرد إعادة تدوير.
يُحرّك الخليط ثنائي الطور عند درجة حرارة 25 درجة مئوية لمدة ساعتين، مع سرعة تحريك ية عند 600 لفة في الدقيقة. اكويتبرات الخليط في 25 درجة مئوية بين عشية وضحاها للسماح لفصل المرحلة الكاملة. إصلاح القارورة إلى موقف معوجة مع المشبك.
اتخاذ aliquot من حوالي 0.70 إلى 0.85 ملليلتر من كل من المياه وطبقات ن أوكتانول باستخدام حقن بلاستيكية قابلة للتخلص من المليلتر مع الإبر طويلة. لاتخاذ aliquot الماء، رسم ما يقرب من 0.02 ملليلتر من الهواء في حقنة قبل وضع الإبرة في الخليط. أثناء تحريك الإبرة من خلال طبقة n-Octanol العليا في طبقة الماء ، ادفع الهواء بلطف لمنع حل ن أوكتانول من دخول الإبرة.
إزالة إبرة طويلة من الخليط. تخلص من كمية صغيرة من عينة الماء، تاركة حوالي 0.6 ملليلتر من العينة متروكة في الحقنة. مسح الإبرة بعناية مع الأنسجة الجافة، وحقن ما يقرب من 0.5 ملليلتر من عينة المياه في أنبوب NMR نظيفة.
أغلق أنبوب NMR بسرعة بغطاء. بالنسبة لعينة ن-أوكتانول، قم بإزالة الإبرة الطويلة من طبقة n-Octanol. تخلص من كمية صغيرة من عينة n-Octanol، تاركةً حوالي 0.6 ملليلتر من العينة متروكة في الحقنة.
بعد مسح الإبرة بعناية مع الأنسجة الجافة، وحقن ما يقرب من 0.5 ملليلتر من عينة ن-أوكتانول في أنبوب NMR نظيفة. أغلق أنبوب NMR بسرعة بغطاء. فحص بصريا كل من عينات ن أوكتانول والمياه لأي تلوث من المرحلة الأخرى.
إلى كل أنبوب NMR، إضافة 0.1 ملليلتر من مذيب NMR deuterated التي هي غير قابلة للامتزاج مع كل من ن-أوكتانول والماء، لتمكين قفل إشارة أثناء اقتناء NMR. بالنسبة للمركبات ذات نقاط الغليان المنخفضة، قم بختم أنابيب NMR باستخدام موقد النفخ، وبعد التبريد عكس الأنبوب للتحقق من وجود أي تسرب. عكس بعناية أنابيب NMR مختومة أو غير مختومة 20 مرة للحصول على حل متجانس لتجارب F19 NMR.
تشغيل تجارب الفلور NMR المنفصلة لتحديد التحولات الكيميائية للمركب X والمركب المرجعي في كل من عينات N-Octanol و NMR المائية. استخدم إعدادات معلمة NMR القياسية كما هو موضح في بروتوكول النص. قياس وقت الاسترخاء spin-lattice، أو T1، لنوية الفلور التشخيصية باستخدام تسلسل استرداد عكس.
قياس مستوى الوقت المناسب تأخير النبض من القيم T1 التي تم الحصول عليها من أجل التكامل الدقيق NMR الكمية. تشغيل طيف F19 H1 سريع لإعداد المعلمات الأولية. قياس عرض النبض 90 درجة، ثم تعيين المعلمة لتجربة قياس T1، وتشغيل تجربة قياس T1 باستخدام تسلسل الانتعاش عكس.
تشغيل تجارب الفلور NMR المنفصلة من البروتون مرة أخرى مع إعدادات المعلمة المعدلة. تعيين D1 ومركز نقطة إزاحة التردد بين اثنين من إشارات الفلور التشخيصية بحيث يمكن أن تكون متحمس على حد سواء على حد سواء النوى. أيضا، تعيين عرض الطيفية كـ 300 PPM، وتعيين عدد العابرين إلى 64.
اضبط هذه القيم إذا كانت نسبة الإشارة إلى الضوضاء أعلى. معالجة البيانات التي تم الحصول عليها باستخدام ACD NMR الإصدار الأكاديمي المعالج، أو غيرها من برامج معالجة NMR مخصصة. افتح ملف بيانات NMR.
ثم افتح المجلد pdata متبوعاً المجلد 1. حذف الملف 1r. العودة إلى ملف البيانات NMR ثم اسحب ملف FID في إطار معالج NMR ACD.
انقر فوق زر وظيفة النافذة، حدد أسي، تعيين قيمة توسيع الخط كاثنين، وانقر فوق الزر "موافق". الآن، انقر فوق زر ملء صفر، وزيادة عدد النقاط إلى أربع مرات من عدد النقاط الأصلي عن طريق النقر على زر صغير بجوار الرقم، وانقر على زر الموافقة. حدد الزر تحويل fourier.
بعد ذلك، انقر فوق زر المرحلة، ثم انقر فوق زر الماوس مراحل. انقر مع الاستمرار على زر الماوس الأيسر ، والمضي قدما لتحريك الماوس إلى الأمام أو إلى الوراء حتى يتم على مراحل بشكل صحيح ذروة الرئيسية من الطيف. الآن، انقر مع الاستمرار على زر الماوس الأيمن وتحريك الماوس إلى الأمام أو إلى الوراء حتى يتم مرحلياً على مراحل أخرى من الطيف.
ثم، قم بالنقر فوق زر الماوس على مراحل والتكبير في المنطقة الطيفية مع قمم الفلور. انقر فوق الضبط الدقيق، وقم بإجراء تصحيح المرحلة إذا لزم الأمر كما هو موضح سابقًا، ثم انقر فوق زر التجزئة. انقر فوق زر الأساس، ثم زر الخيارات.
حدد متوسط الطيف للنماذج التلقائية، واضبط عدد النقاط لعرض نصف المربع إذا لزم الأمر. انقر فوق "حسنا"، والسيارات، ثم انقر فوق زر علامة. بعد ذلك، انقر فوق التكامل، ودمج قمم الفلور التشخيصية، وانقر على زر التجزئة.
وأخيراً، الحصول على نسب التكامل من عينات N-Octanol و NMR المياه واستخدامها في معادلة حساب logP للحصول على قيمة logP من X.Using المركب، 2، 2-تريفلورويثانول كمركب مرجعي، تم الحصول على قيمة لوبيرب قدرها 0.75 لفلوروينول اثنين، ووجدت قيمة لوبيرب إيجابية 1.20 ل3، 3، 3، 2، 2-pentafluoropropanol. وبعد ذلك، تم تحديد ليبوفيليكية اثنين من الفلورويثانول مرة أخرى، ولكن مع 3، 3، 3، 2، 2-pentafluoropropanol كمرجع. وكانت قيمة اللوبير مقاسة 0.76، التي كان لها فرق قدره 0.01 وحدة لوبير في حالة مقارنتها بالقيمة المقيسة باستخدام 2-2-2-trifluoroethanol كمرجع.
وبالمثل، بالنسبة لـ CIS-2، 3-difluro-1، 4-البيوتان-ديول، فإن الفرق في قيم logP المقاسة باستخدام اثنين من الفلورويثانول والأيزومر العابر صغير جداً. وهذا يدل على قابلية التكرار الجيدة، وأن اختيار مركب المرجع ليس له تأثير على قياس logP. يتم هنا عرض أمثلة مختارة إضافية.
كل هذه المركبات غير UV النشطة الأليفاتية، من الكربوهيدرات المفلورة، إلى الفلوراهيدرين، يمكن قياسها بسهولة مع هذه الطريقة. يمكن استخدام طرق PROTO NMR الأخرى إذا لم يحتوي مركبك على الفلور ، وإذا كان المركب يحتوي على Chromofor فوق البنفسجية ، فيمكن إجراء قياس logP باستخدام القياس الكمي للأشعة فوق البنفسجية. تم قياس ليبوفيليكية مجموعة واسعة من الفلوريوهيددرينات النشطة غير UV والكربوهيدرات ديوكسيفلورونيد.
واستخدمت مكتبة البيانات التي تم الحصول عليها لتحديد الاتجاهات والقواعد المتعلقة بتأثير الفلور الليفاتيك على صبغة الدهون. أوكتانول والماء تشكل الحد الأدنى من المخاطر السلامة. وبطبيعة الحال، ينبغي دائما أن تؤخذ في الاعتبار المخاطر التي يتم قياسها والمجمع المرجعي.
