Biz lipophilicity küçük farklılıkları ölçmek çoğaltmak için yeterince acrid flor NMR kullanarak frenetic bileşiklerin lipophilicity ölçümü için basit bir yöntem geliştirdik. Bu yöntem, genel tıbbi kimyada ilgi çekici olan, çözülmüş değişen lipophilicity değişiklikleri üzerinde organik bileşiklerin oluşumunun etkisini sistematik olarak incelemek için kullanılabilir. Bu yöntemin avantajları bileşiklerin reaktif olması gerekmez ve tamamen saf olmak zorunda değildir.
Tam kütle veya hacimleri ölçmeye gerek yoktur ve kalibrasyon eğrileri oluşturmaya gerek yoktur. Uygun bir Referans Bileşimi seçilmeli ve örnekleme aşamasında aliquotun çapraz kontaminasyonundan kaçınılmalıdır. Bu videoda örnekleme, NMR tüp sızdırmazlığı ve veri işleme için NMR yazılımının doğru kullanımı için uygun pratik becerileri göstereceğiz.
10 mililitrelik armut şeklindeki bir şişeye 6,0 miligram Bileşik X ve 3,0 miligram Referans Bileşiğek ekleyin. HPLC dereceli n-Otonol yaklaşık iki mililitre bileşikleri çözün ve HPLC dereceli su iki mililitre ekleyin. Şişeleri bir karıştırma plakasının üzerinde sıcaklık kontrollü bir haznenin içine yerleştirin ve yeniden dolaşan bir soğutucuya bağlanın.
Biphasik karışımı 25 derecede iki saat boyunca karıştırın ve karıştırma hızı 600 RPM olarak ayarlayın. Tam faz ayrımı için izin vermek için karışımı bir gecede 25 santigrat derecede dengeleyin. Şişeyi bir kelepçeyle retort standına sabitle.
Uzun iğneler ile bir mililitre tek kullanımlık plastik şırınga kullanarak su ve n-Oktanol katmanları yaklaşık 0,70 ila 0,85 mililitre bir aliquot alın. Su aliquot almak için, karışımı içine iğne koymadan önce şırınga içine hava yaklaşık 0,02 mililitre çekin. İğneyi üst n-Oktanol tabakasından su tabakasına doğru hareket ettirirken, n-Oktanol çözeltisinin iğneye girmesini önlemek için yavaşça havayı dışarı itin.
Karışımdan uzun iğne çıkarın. Şırıngada yaklaşık 0,6 mililitre numune bırakarak az miktarda su numunesi atın. İğneyi kuru dokuyla dikkatlice silin ve temiz bir NMR tüpüne yaklaşık 0,5 mililitre su numunesi enjekte edin.
NMR tüpünü bir kapakla hızla kapatın. n-Oktanol örneği için, n-Oktanol tabakasından uzun iğne çıkarın. Az miktarda n-Oktanol numunesini atın ve şırıngada yaklaşık 0,6 mililitre numune bırakarak.
İğneyi kuru dokuyla dikkatlice sildikten sonra, temiz bir NMR tüpüne yaklaşık 0,5 mililitre n-Oktanol numunesi enjekte edin. NMR tüpünü bir kapakla hızla kapatın. N-Oktanol ve su örneklerini diğer fazdan kaynaklanan kirlenmeler için görsel olarak inceleyin.
Her NMR tüpüne, NMR alımı sırasında sinyal kilidini etkinleştirmek için hem n-Oksanol hem de su ile yanlış çıkarılabilen, 0,1 mililitre deuterated NMR çözücü ekleyin. Düşük kaynama noktaları olan bileşikler için, bir blowtorch kullanarak NMR tüpleri mühür, ve herhangi bir sızıntı ları kontrol etmek için tüp ters soğutma sonra. F19 NMR deneyleri için homojen bir çözüm elde etmek için mühürlü veya mühürlü olmayan NMR tüplerini 20 kez dikkatlice ters çevirin.
N-Otokanol ve su NMR örneklerinde X bileşik ve Referans Bileşiğin kimyasal kaymalarını belirlemek için proton ayrılmış flor NMR deneylerini çalıştırın. Metin protokolünde listelenen standart NMR parametre ayarlarını kullanın. Bir ters kurtarma dizisi kullanarak tanısal flor çekirdekleri için spin-kafes gevşeme süresini veya T1'i ölçün.
Doğru nicel NMR entegrasyonu için elde edilen T1 değerlerinden uygun darbe gecikme süresini ölçün. İlk parametreleri ayarlamak için hızlı bir F19 H1 spektrumu çalıştırın. 90 derece darbe genişliğini ölçün, ardından T1 ölçüm deneyi için parametreyi ayarlayın ve t1 ölçüm denemesini ters kurtarma sırasını kullanarak çalıştırın.
Ayarlanmış parametre ayarlarıyla proton ayrılmış flor NMR deneylerini tekrar çalıştırın. D1'i ayarlayın ve her iki çekirdeğin de eşit derecede heyecanlı olabilmesi için iki tanısal flor sinyali arasındaki frekans dengeleme noktasını ortala. Ayrıca, spektral genişlik 300 PPM olarak ayarlayın ve geçici sayısını 64 olarak ayarlayın.
Daha yüksek bir sinyal-gürültü oranı gerekiyorsa bu değerleri ayarlayın. Elde edilen verileri ACD NMR İşlemci Akademik Sürümü veya diğer özel NMR işleme yazılımını kullanarak işleyin. NMR veri dosyasını açın.
Ardından pdata klasörünü açın ve ardından klasör 1'i takip edin. 1r dosyasını silin. NMR veri dosyasına dönün ve FID dosyasını ACD NMR İşlemci penceresine sürükleyin.
Pencere işlevi düğmesini tıklatın, üstel seçin, satırı iki olarak genişletin ve tamam düğmesini tıklatın. Şimdi, sıfır dolum düğmesini tıklatın, sayının yanındaki küçük bir düğmeyi tıklatarak puan sayısını orijinal puan sayısının dört katına yükseltin ve tamam düğmesini tıklatın. Fourier dönüşümü düğmesini seçin.
Ardından, aşama düğmesini tıklatın ve sonra fare phasing düğmesini tıklatın. Sol fare düğmesini tıklatın ve fareyi ileri veya geri hareket ettirin, ta ki spektrumun ana zirvesi düzgün bir şekilde aşamalı olana kadar. Şimdi, sağ fare düğmesini tıklatın ve fareyi ileri veya geri hareket ettirin, ta ki spektrumun diğer zirveleri düzgün bir şekilde aşamalı olana kadar.
Ardından, fare nin phasing düğmesini un-click ve flor zirveleri ile spektral alana yakınlaştırmak. İnce ayar'ı tıklatın, daha önce açıklandığı gibi gerekirse faz düzeltmesini gerçekleştirin ve ardından onay düğmesini tıklatın. Taban çizgisi düğmesini ve ardından seçenekler düğmesini tıklatın.
Otomatik modeller için spektrum ortalamasını seçin, gerekirse kutu yarım genişlik için puan sayısını ayarlayın. Tamam'ı, otomatik'i ve ardından onay düğmesini tıklatın. Ardından, tümleştirmeyi tıklatın, tanılama flor zirvelerini tümleştirin ve onay düğmesini tıklatın.
Son olarak, n-Oktanol ve su NMR örneklerinden entegrasyon oranlarını elde etmek ve logP hesaplama denkleminde kullanarak Bileşik X.Using 2, 2, 2-Trifloroetanol'ün referans bileşimi olarak logP değerini elde etmek için, iki floroetanol için 0,75 logP değeri elde edildi ve 3, 3, 3, 3, 2, 2-pentaproporiçin 0,75 logP değeri elde edildi ve logP değeri 1.20 bulundu. Daha sonra, iki floroetanol lipophililisite tekrar tespit edildi, ancak referans olarak 3, 3, 3, 2, 2-pentafluoropropanol ile. Ölçülen logP değeri 0.76 idi ve referans olarak 2-2-2-trifloroetanol kullanılarak ölçülen değerle karşılaştırıldığında sadece 0,01 logP birimi farkı vardı.
Aynı şekilde, cis-2, 3-difluro-1, 4-bütan-diol için, iki floroetanol ve trans-izomer kullanılarak ölçülen logP değerleri arasındaki fark çok küçüktür. Bu iyi tekrarlanabilirlik gösterir ve Referans Bileşik seçimi logP ölçümü üzerinde etkisi yoktur. Seçilen ek örnekler burada gösterilmiştir.
Florlu karbonhidratlardan florohidrinlere kadar tüm bu UV dışı aktif allophatic bileşikler bu yöntemle kolayca ölçülebilir. Diğer proto NMR tabanlı yöntemler, eğer bileşiğiniz flor içermiyorsa ve bileşik UV Kromofor içeriyorsa, logP ölçümü UV ölçümü kullanılarak yapılabilir. UV olmayan aktif florohidrinler ve deoksifluonated karbonhidratlar geniş bir yelpazede lipophilicity ölçüldü.
Elde edilen veri kitaplığı, alifatik florun lipophilisite üzerindeki etkisine ilişkin eğilimleri ve kuralları belirlemek için kullanılmıştır. Otonol ve su minimum güvenlik tehlikesi oluşturur. Tabii ki, ölçülen tehlikeler ve Referans Bileşik her zaman dikkate alınmalıdır.
