في هذا الفيديو، نقدم كيفية استخدام الاسطوانة واختبار المجال المفتوح لتضييق وظيفة المحرك في نموذج MPTP لمرض باركنسون. الميزة الأساسية هي أن الفئران لا تحتاج إلى تدريب قبل الاختبار السلوكي. بالإضافة إلى ذلك، هذه الطريقة فعالة وتكلفة المعدات منخفضة.
الأفراد الذين هم جديدة لاختبارات السلوك قد يقلل من تأثير التدخل البيئي. إن الحفاظ على الهدوء وتجنب التغييرات في البطانة سيساعد. هنا، يتم إجراء الاختبار السلوكي بعد 24 ساعة من الحقن النهائي لنظام لمدة سبعة أيام من حقن MPTP أو المالحة و 40 دقيقة بعد الإدارة داخل المعدة من L-DOPA لمجموعة فرعية من الحيوانات.
إذا لم يتم إجراء الاختبارات السلوكية في نفس الغرفة التي يتم فيها إيواء الحيوانات ، قم بتأقلم الفئران إلى الغرفة الجديدة لمدة 30 إلى 60 دقيقة قبل الاختبار. تبدأ بوضع اسطوانة زجاجية شفافة في وسط طاولة. احيط الأسطوانة على ثلاثة جوانب من الورق المقوى الأسود، وضعت أربعة إلى ثمانية سنتيمترات بعيدا عن الاسطوانة للحد من تأثير الإضاءة البيئية.
اترك جانبًا واحدًا من الاسطوانة في مواجهة الكاميرا لتسجيل الفيديو. إرفاق كاميرا قادرة على ما لا يقل عن مليون بكسل القرار 40 إلى 60 سنتيمترا بعيدا عن الاسطوانة لضمان احتواء الأسطوانة كلها في مجال الرؤية. ضع فأرًا واحدًا في الأسطوانة في وقت واحد وابدأ التصوير في وقت واحد.
أثناء هذه العملية محاولة لتجنب الضوضاء أو تغييرات الضوء من أجل تجنب التأثير على سلوك الماوس. مصاعد مخلب تحدث عندما الماوس المؤخرة على انها أطرافه الخلفية، ويثير كل من forelimbs فوق مستوى الكتف، والأراضي. توقف عن التصوير بعد ثلاث دقائق ووضع الفأر مرة أخرى في القفص المنزلي.
تنظيف الاسطوانة بالماء ثم رش 70٪ ethnol على الجدار الداخلي لتطقيمه وإزالة رائحة الماوس. امسح الأسطوانة الجافة قبل اختبار الماوس التالي. بمجرد الانتهاء من الاختبار، تشغيل الفيديو مرة أخرى بمعدل 0.5 مرة السرعة العادية، وعدد من المصاعد مخلب ضد جدار كل فأرة.
إذا كان الماوس يثير forelimbs لها فوق مستوى الكتف عدة مرات بشكل مستمر دون الهبوط، وينبغي أن تحسب مرة واحدة فقط. إجراء اختبار حقل مفتوح أثناء جلسة العمل نفسها كاختبار اسطوانة. إعداد مربع رد فعل حقل مفتوح شفاف مع لوحة خشبية، مغطاة بقطعة قماش سوداء أو بيضاء متناقضة اعتمادا على لون الماوس.
إصلاح كاميرا فوق الحقل على ارتفاع متر واحد. اضبط الكاميرا للتأكد من أن مربع رد الفعل المفتوح في قلب الفيديو. وضع ماوس اختبار واحد في المربع والسماح للماوس التعرف على البيئة لمدة دقيقة واحدة تقريبا.
تسجيل فيديو لمدة خمس دقائق باستخدام الكاميرا المتصلة بالكمبيوتر. وأخيرا، تنظيف أي البراز في مربع رد فعل حقل مفتوح، رش 70٪ الإيثانول على مربع، ومسحه. في اختبار الاسطوانة ، لوحظ انخفاض في عدد المؤخرات ضد الجدار في الفئران المعالجة مع MPTP مقارنة مع الفئران المعالجة المالحة.
لوحظت زيادة في المؤخرات في الفئران المعالجة MTPT نظرا ل الدوبامين في يوم الاختبار مقارنة مع الفئران MPTP المعالجة تلقي المالحة. هذه الصورة تظهر تتبع الحركة التمثيلية وتوزيع الوقت الساكن، وقت المشي، و وقت التشغيل في أجهزة الماوس التحكم لا تعامل مع MPTP. أظهرت الفئران المعالجة بـ MTPT سرعة حركة أقل ، ومسافة حركة أقصر ، ووقت ثابت أطول ، ووقت تشغيل أقصر ثم فئران معالجة محلولة ، مما يدل على وجود عجز في المحرك تسببه MTPT.
MPTP تعامل الفئران تلقي L-الدوبامين أظهرت سرعة حركة أعلى, مسافة حركة أطول, وقت ثابت أقصر, ووقت تشغيل أطول من الفئران تعامل مع MPTP فقط, مشيرا إلى أن L-الدوبامين يخفف من العجز الحركي الناجم عن MPTP. عند تغيير الفئران التي يجري اختبارها مسح المنطقة تماما ورذاذ الإيثانول للقضاء على تأثير رائحة الفئران السابقة. بعد هذا الإجراء، يمكن إجراء تدابير أخرى مثل اختبار المشي شعاع، اختبار القطب.
ويمكن الحصول على البيانات المتعلقة بالقدرة على التوازن والقدرة الحركية من خلال هذه الطرق. MPTP هو السم العصبي لكل من الفئران والبشر، ويجب اتخاذ احتياطات صارمة لتجنب التعرض. يجب ارتداء معدات الوقاية الشخصية الإضافية، مثل قناع أو جهاز تنفس.
