يمكن استخدام بروتوكولنا على نطاق واسع في الفرز السريع والتفاعلات بين الإنيدوبيوتيك وميكروبات الأمعاء البشرية. منخفضة التكلفة وتجنب آثار التدخل من التمثيل الغذائي للمضيف. هذا الإجراء لديه القدرة على استخدامها في التشخيص.
أولاً، حل BIF EPS والنشا بشكل فردي في الماء الساخن على محرض مغناطيسي لجعل كل من تركيز ثمانية غرامات لكل لتر. في المتوسط الثقافة الأساسية المعدة، سادسا، إضافة 100 ملليلتر من حل BIF EPS لجعل الثقافة VI BIF الحل. إضافة 100 ملليلتر من محلول النشا لجعل الثقافة السادسة حل النشا.
اضبط الوسائط مع مصدر الكربون، ووسيط دون مصدر الكربون كتحكم، في 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. السماح لهم لتبرد إلى درجة حرارة الغرفة وإضافة هايمين والسيستيين. نقل عينة فرعية من خمسة ملليلترات من كل المتوسطة إلى أنابيب الثقافة.
وتخزينها في حاضنة لاهوائية. تخزين وسائل الإعلام المتبقية في أربع درجات مئوية. لإعداد عينة البراز البشري، نقل غرام واحد من عينة البراز الطازجة إلى 10 ملليلتر من 0.1 PBS اللاهوائية الضرس في رقم 7 في كوب زجاجي.
ثم استخدم قضيب زجاجي لتحريكه لتحقيق الطين. في غرفة اللاهوائية، إضافة 500 ميكرولترات من الطين البراز المصفاة في وسائل الإعلام التخمير الثلاثة المعدة، بشكل فردي. ثم، احتضان في 37 درجة مئوية.
بعد 24 ساعة و 48 ساعة ، جمع ميليلترين من العينات المخمرة في الغرفة اللاهوائية. وبعد ذلك الطرد المركزي خارج الغرفة في 6000 مرة G، لمدة ثلاث دقائق. نقل بعناية المواد العملاقة إلى أنابيب جديدة للطرد المركزي التي سيتم استخدامها لتحليل تدهور السكريات المتعددة وقياسات الأحماض الدهنية قصيرة السلسلة.
تخزين الكريات الطرد المركزي في 80 درجة مئوية. تحميل 0.2 ميكرولترات من المخمرة عظمى على كل هلام السيليكا المغلفة مسبقا 60 TLC لوحة الألومنيوم ودوامة لانتشار. ثم استخدام مجفف الشعر مع الهواء الساخن لتجف.
تزج واحدة من نهاية لوحات العينات في 20 ملليلتر من حمض الفورميك: ن-بوتانول:محلول المياه لعدة دقائق، حتى الكهرباء يمتد تقريبا إلى الطرف الآخر. ثم أخرج الألواح بالملاط، وجففها بمجفف شعر. ثم نقع لوحات في كاشف orcinol لمدة دقيقتين لصبغ.
وتجف مرة أخرى. نقل لوحات إلى فرن الخبز في 120 درجة مئوية لتسخين لمدة ثلاث دقائق. ثم التقاط صور من لوحة لتقييم تدهور EPS عن طريق قياس نطاقات TLC.
لدراسة آثار EPS على إنتاج SCFA، إضافة ملليلتر واحد من المخمرة لأجهزة الطرد المركزي أنابيب ملليلتر 2 ملليلتر وإضافة 0.2 ملليلتر من 25 الوزن / حجم في المئة من حمض ميتافوسفوريك لكل عينة. دوامة لخلط شامل الحلول. الطرد المركزي الخلائط في 13،000 مرات G لمدة 20 دقيقة.
في غضون ذلك، وإعداد حلول من 120 ملليمولار الخليك، بروبيونيك، بوتيريك، الأيزوبوتريك، فالريك، والأحماض الايسفالية في الأنابيب. ثم إضافة ملليلتر واحد من كل حمض المعدة إلى أنبوب يحتوي على 1.2 ملليلتر من 25 وزن / حجم في المئة حمض ميتافوسفوريك. وتحميلها في زجاجة عينة من صك الغاز الكروماتوغرافيا والكوكتيلات القياسية.
أخرج الأنابيب من جهاز الطرد المركزي، ونقل المنابتات إلى أنابيب جديدة. استخدم حقنة مجهزة بفلاتر 0.22 ميكرون لتصفية المواد الخارقة إلى أنابيب جديدة لتحليل الكروماتوغرافيا الغازية. في هذه الدراسة، لوحظ إنتاج EPS mucoid في الثقافات bifidobacterium longum على لوحات PYG، بعد حضانة لاهوائية لمدة 72 ساعة.
أدى الطرد المركزي لخدوش الثقافة، تليها ترسيب الإيثانول والتجفيف، إلى جمع EPS مثل السليلوز. وكشف تحليل TLC أن معدل تحلل النشا من قبل الميكروبات البرازية البشرية كان أسرع من ذلك في BIF EPS. يظهر التحليل التنسيقي الرئيسي الثقافة VI BIF، والثقافة VI مجموعات النشا، تتجمع بشكل منفصل عن بعضها البعض، مشيرا إلى أن EPS والنشا توافر تشكيل تفاضلي المجتمعات البكتيرية البراز الإنسان.
تحليل Discriminant الخطي على حجم تأثير يظهر جينيرا كولينسيلا، coprococcus، parabacteroides، و rhodopseudomonas كانت أكثر وفرة بشكل ملحوظ في عينات BIF السادس الثقافة مما كانت عليه في عينات النشا الثقافة VI. وعلاوة على ذلك، فإن قياسات GC تظهر SCFAs التي تم قياسها من ثقافات التخمير شملت الخل، البرروبيونيك، الأيزوبوتريك، البوتريك، البويضة، والأحماض الفريكة. وبعد التخمير لمدة 24 ساعة و48 ساعة، كانت خمسة من تركيزات SCFA الستة متشابهة ولا تختلف إحصائياً بين ثقافة VI BIF، والنشا في الثقافة VI، ومجموعات الثقافة السادسة.
ومع ذلك، كانت تركيزات حمض proprionic أعلى بكثير في مجموعة VI BIF الثقافة مما كانت عليه في مجموعة النشا في الثقافة VI، بعد 48 ساعة من التخمير. قم بهذه التجربة في ظل ظروف لاهوائية، ثم قم بنقل العينات الثابتة إلى حاضنة لاهوائية في أقرب وقت ممكن. بعض الكواشف TLC خطرة.
يجب أن تكون حذراً لاستخدامها.
