Primaquine هو معروف لمكافحة الملاريا المخدرات. غالباً ما يكون تحديد primaquine في السوائل البيولوجية مطلوبًا لتقييم العوامل الدوائية. حاليا، تعتمد التقنيات الرئيسية لتحديد Primaquine على HPLC.
إجراءات HPLC يمكن أن تكون معقدة جدا وتستغرق وقتا طويلا. لذلك هذا الأسلوب يوفر وسيلة بسيطة للكشف السريع عن Primaquine. هذه الطريقة Griess هو احتمال الطريقة الأكثر بسيطة وفعالة من حيث التكلفة لبريماكوف الكمي.
وعلاوة على ذلك، يمكن أن توفر هذه الطريقة إمكانيات للكشف عن بريكوين بالعين المجردة دون اشتراط أي معدات. وإلى جانب عينات المصل والبول، يمكن استخدام هذه الطريقة أيضًا لتحديد بريماكوين كمياً في التركيبات الصيدلانية، على سبيل المثال، تحديد Primaquine في أقراص لمراقبة الجودة التصنيعية. إظهار الإجراء سيكون الآنسة وو يالان وو شنغجون، وهما طالبان دراسات عليا من مختبري.
تبدأ عن طريق حل 0.1 ملليمول من النيولين وbiphosphate primaquine في 10 ملليلتر من حمض الفوسفوريك 5٪ حل في قارورة القاع البني 25 ملليلتر. ضعي القارورة على حمام جليدي، وأضيفي بار ًا مُثيرًا. ثم وضع حمام الثلج على لوحة ضجة.
تذوب 6.9 ملليغرام من نترات الصوديوم ومليلتر واحد من الماء المبرد وإضافته إلى قارورة قطرة الحكيمة. إزالة حمام الثلج والحفاظ على خليط التفاعل اثارة في درجة حرارة الغرفة. راقب التفاعل باستخدام طبقة كروماتوغرافية هلامية مطلية بالسيليكا أو طبق TLC باستخدام خليط ميثانول ثنائي كلورو الميثان مثل الوميض.
يعرض منتج azo بقعًا ملونة على لوحة TLC. إيقاف التفاعل عند اختفاء نقاط PMQ. ضبط درجة اله pH من خليط التفاعل إلى أكبر من 10 بإضافة محلول هيدروكسيد الصوديوم إلى حمام جليدي.
ثم، استخدم قمع فصل 50 ملليلتر لاستخراج الخليط ثلاث مرات مع 20 ملليلتر من خلات الإيثيل لكل استخراج. عند الانتهاء، والجمع بين وتركيز المرحلة العضوية تحت فراغ باستخدام المبخر الدوارة. تنقية المخلفات باستخدام الكروماتوغرافيا فلاش مع عكس مرحلة هلام السيليكا تحت الضغط العادي.
ثم، وتجفيف الحل عن طريق التجميل للحصول على المنتج azo المطلوب. لقياس الأشعة فوق البنفسجية في امتصاص الطيف، حل أزو نقية في الماء المقطر أو حمض الفوسفوريك 5٪، واستخدام الطيف لتسجيل أطياف الامتصاص في درجة حرارة الغرفة. لقياس امتصاص PMQ، ابدأ بحل 4-ميثوكسيانلين في كلوريد الهيدروجين المولر 0.2 لمحلول أنيلين 200 مليمولار.
ثم قم بحل نتريت الصوديوم في الماء المقطر للحصول على محلول خمسة ملليمولار. حافظ على الحلول عند أربع درجات مئوية. إضافة 100 ميكرولترات من حل النيلين إلى لوحة 96-جيدا.
ثم أضف 50 ميكرولترات من العينة التي تحتوي على PMQ، واخلطها مع الـ aniline. إضافة 50 ميكرولترات من محلول نيتريت الصوديوم إلى لوحة، وخلط محتويات عن طريق الأنابيب. حافظ على الطبق في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة، ثم قم بقياس امتصاص المحلل عند 504 نانومتر.
قم بتصدير البيانات كملف جدول بيانات لمزيد من التحليل. لبناء منحنى معايرة لقياسات PMQ في عينات البول، قم بإعداد حلول PMQ في البول الاصطناعي بتركيزات من صفر، واحد، اثنين، خمسة، 10، 20، 50، 100، 200، و 200 ميكرومولار. إعداد تفاعل الكشف PMQ، وقياس امتصاص كما هو موضح سابقا.
ثم توليد منحنى المعايرة على أساس امتصاص 504 نانومتر وتركيزات PMQ. طرح قيم الامتصاص للعينات بدون PMQ من قياسات الاختبار، وقم بإجراء تناسب خطي لتوليد معادلة خطية y يساوي x زائد b، حيث y هو الامتصاص و الشد، و x هو تركيز PMQ. لبناء منحنى المعايرة لقياس PMQ في عينات مصل الدم البشري، قم بإعداد حلول PMQ في مصل الدم البشري بتركيزات PMQ من صفر، واحد، اثنان، خمسة، 10، 20، 50، 100، و200 ميكرومولار.
تحضير رد فعل PMQ. قياس الامتصاص، وبناء منحنى المعايرة كما هو موضح سابقا. إضافة ستة ملليلترات من سبعة إلى واحد خلات الإيثيل الهيكسان في مليلترين من مصل يحتوي على PMQ في أنبوب الطرد المركزي 15 ملليلتر.
إضافة 100 ميكرولتردات من اثنين من محلول هيدروكسيد الصوديوم الضرس لنظام الاستخراج، ودوامة الأنبوب لمدة 30 ثانية. ثم، وجمع طبقة العضوية والتركيز عليه مع المبخر الدوارة تحت فراغ. قم بإذابة البقايا في 200 ميكرولتر من الماء المقطر، وتصفية من خلال غشاء بحجم 220 نانومتر على شكل قرص لإزالة مكونات الدهون غير القابلة للذوبان.
بناء منحنى المعايرة لPMQ في الماء المقطر، ثم إعداد تفاعل الكشف مع الحل المستخرج في لوحة 96-well كما هو موضح سابقا، وقياس الامتصاص. ثم، تحديد تركيز PMQ وفقا للمعادلة الخطية من منحنى المعايرة. تم تحسين ظروف رد الفعل باستخدام مختلف anilines لزوجين مع PMQ من خلال رد فعل Griess.
وأجريت الحسابات النظرية، وكانت النتائج متفقة بشكل جيد مع القياسات البصرية. وقد تقرر أن 4-ميثوكسيانلين كان الأمثل لتفاعل الكشف PMQ، نظراً لأدائها الجيد ومعدل التفاعل، ذوبان المنتج، والاستقرار. وعلاوة على ذلك، فإن المنتج azo ل4-ميثوكسيانلين أحمر اللون، والتي من السهل التمييز مع عيون عارية.
تم اختبار آثار حُكَس حَسَرَة على امتصاص الأشعة فوق البنفسجية في منتجات azo وحلول PMQ. في حين أن زيادة نسبة حِسّ الجسم من 1.0 إلى 7.0 لا تغيّر الامتصاص، فإنّه له تأثيرًا كبيرًا على مستوى الـ PH الأساسي. تم بناء منحنيات المعايرة للكشف عن PMQ في عينات البول والمصل.
تم العثور على علاقة خطية عندما يتراوح PMQ من صفر إلى 200 ميكرومولار في البول ، ومن 10 إلى 200 ميكرومولار في المصل. لمحاكاة مصل حقيقي يحتوي على PMQ، تمت إضافة PMQ في مصل الإنسان في 0، 0.2، 0.5، 1.0، 2.0 تركيزات ميكرومولار. وباستخدام هذا البروتوكول، وجد أن التركيزات المستعادة هي 0.02، و0.14، و0.44، و0.90، و1.78 ميكرومولار، مما أدى إلى استعادة 90٪ من التركيزات التي تزيد عن 0.5 ميكرومولار.
تجدر الإشارة إلى أن الوقت الذي يصل فيه التفاعل إلى شدته المشبعة يعتمد على درجة الحرارة. عادة، 10 إلى 20 دقيقة كافية لدرجة الحرارة بين 20 إلى 30 درجة مئوية. ومع ذلك ، لنختتم مثالنا من كيمياء Griess للكشف عن primaquine.
تصميم مماثل هو أيضا مناسبة للجزيئات الأخرى ذات الصلة التي لديها تفاعل كيميائي مماثل primaquine.
