تم تمويل هذه الدراسة من قبل مؤسسة العلوم الطبيعية لمقاطعة تشجيانغ في الصين (رقم المنحة: LY17H270016) ، والمؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (رقم المنحة: 81774331 و 81873049 و 81673997) ، ومشروع العلوم والتكنولوجيا في مقاطعة تشجيانغ للطب الصيني التقليدي في الصين (رقم المنحة: 2013ZQ007 و 2016ZZ011).

تمت الموافقة على الإجراءات المتعلقة بالحيوانات من قبل لجنة القواعد والأخلاقيات الطبية بجامعة تشجيانغ الطبية الصينية وهي متوافقة مع التشريعات الصينية بشأن استخدام ورعاية المختبر.
1. الحقن داخل المفصل من أحادي يودواسيتات في الركبة
<ol><li>بعد أسبوع واحد من التأقلم ، قسم عشوائيا ومتساويا 40 من ذكور فئران Sprague-Dawley التي تزن 180-200 جم (4-5 أسابيع) إلى أربع مجموعات (ن = 10 فئران / مجموعة). ملاحظة: سيتم حقن الفئران في المجموعة الضابطة داخل المفصل ب 50 ميكرولتر من المحلول الملحي ، بينما سيتم التعامل مع الفئران في المجموعات التجريبية ب 0.5 أو 1.5 أو 3 ملغ من MIA المذاب في 50 ميكرولتر من المحلول الملحي ، على التوالي.</li>
	<li>في يوم الحقن ، قم بإعداد محلول MIA حديثا في محلول ملحي معقم (0.9٪ كلوريد الصوديوم) بتركيز 15 و 30 و 60 مجم / مل و 10٪ محلول بنتوباربيتال في محلول ملحي معقم (0.9٪ كلوريد الصوديوم). تنبيه: MIA له تأثير مدمر للغاية على الغشاء المخاطي والجهاز التنفسي العلوي والعين والجلد والأنسجة الأخرى. لذلك ، يوصى باستخدام القناع والقفازات عند إعداد الحل.</li>
	<li>تخدير الفئران عن طريق حقن الكيتامين داخل الصفاق بمعدل 60 ملغم/كغ والزيلازين عند 5 مغ/كغ (كلاهما محضر في محلول ملحي). المشبك بلطف أصابع الفئران مع ملقط لتأكيد التخدير.</li>
	<li>ضع الجرذ مع ظهره متجها لأسفل. احلق الركبة وامسح المنطقة المحيطة بمفصل الركبة بالكحول.</li>
	<li>حافظ على الركبة بزاوية 90 درجة واكشف عن الوتر الرضفي الأبيض أسفل الرضفة. اضغط على الوتر الرضفي بطرف الإصبع لإيجاد الفجوة أسفل الرضفة.</li>
	<li>اختر تقاطع الفجوة والوتر الرضفي الجانبي كموقع للحقن. ثم أدخل إبرة 26 G عموديا في الموقع حوالي 5 مم. لا ينبغي الشعور بأي مقاومة عندما تكون الإبرة في الفضاء المفصلي. ملاحظة: من المهم إبقاء الإبرة متعامدة مع موقع الحقن.</li>
	<li>حقن 50 ميكرولتر من محلول ملحي أو MIA في تجويف المفصل. اسحب الإبرة ببطء ولف قطعة من الشاش حول موقع الحقن لتقليل الارتجاع والتسرب. بعد الشفاء التخدير ، قم بإزالة الشاش.</li>
	<li>اختبر السلوك المرتبط بالألم في 1 و 7 و 14 و 21 و 28 و 35 يوما بعد الحقن كما هو موضح في القسم 2.</li>
</ol>2. التقييمات السلوكية
<ol><li>عتبة السحب الميكانيكي (MWT) ملاحظة: تم قياس MWT بواسطة اختبار von Frey13 وكان المراقب أعمى عن الحقن التي تلقتها الحيوانات.<ol><li>ضع فأرا في قفص بلاستيكي مرتفع (17 سم × 11 سم × 13 سم) مع قاعدة شبكة سلكية معلقة 50 سم فوق طاولة. تأكد من أن بيئة الاختبار هادئة وامنح الجرذ 30 دقيقة للتكيف مع البيئة.</li>
		<li>اضغط على إبرة فون فراي بشكل عمودي على السطح الأخمصي لكل مخلب خلفي لكل فئران. قم بزيادة الضغط تدريجيا (حوالي 20 جم / ثانية) وخطيا حتى يحدث رفع المخلب أو لعق المخلب.</li>
		<li>استخدم قوة أقل من العتبة السابقة للتأكد من أن العتبة هي الحد الأدنى لقوة الانسحاب. اختبر كل فأر أكثر من ثلاث مرات ، على الأقل 3-5 دقائق.</li>
		<li>سجل الحد الأدنى من القوة التي تثير منعكس سحب المخلب. متوسط البيانات مثل MWT من الفئران.</li>
	</ol></li>
	<li>زمن انتقال السحب الحراري (TWL) ملاحظة: تم قياس TWL باستخدام جهاز الاختبار الأخمصي (جدول المواد) وكان المراقب أعمى عن الحقن التي تلقتها الحيوانات.<ol><li>ضع صندوقا زجاجيا شبكيا (60 سم × 20 سم × 14 سم ، مقسم إلى 6 مقصورات) على صفيحة زجاجية بسمك 3 مم ، وضع الفئران في الصندوق (واحد في كل حجرة). تأكد من أن البيئة هادئة ودرجة حرارة الغرفة ثابتة.</li>
		<li>امنح الفئران 30 دقيقة للتكيف مع بيئة الاختبار.</li>
		<li>معايرة التحفيز الحراري عبر مقياس الإشعاع بالأشعة تحت الحمراء. اضبط شدة الأشعة تحت الحمراء المطلوبة على 70 وحدة.</li>
		<li>ضع باعث / كاشف الأشعة تحت الحمراء على الحاوية مباشرة تحت مركز المخلب الذي يتم اختباره.</li>
		<li>الضغط على زر START . سيبدأ المؤقت تلقائيا. ستقوم وحدة التحكم تلقائيا بإيقاف تشغيل ضوء الأشعة تحت الحمراء وإيقاف المؤقت تماما بمجرد حدوث حركة المخلب.</li>
		<li>سجل وقت رد الفعل عند ظهور انسحاب مخلب ولعق مخلب. ملاحظة: تعتبر الاستجابة الإيجابية للاختبار بمثابة انسحاب مخلب ولعق مخلب. إذا حدث انسحاب مخلب فقط ، فيجب اعتباره حركة طوعية للفأر وليس استجابة إيجابية.</li>
		<li>كرر الاختبار أكثر من ثلاث مرات. متوسط البيانات مثل TWL من الفئران. ملاحظة: يجب ألا يتجاوز كل تعرض للحرارة المشعة 20 ثانية. يجب أن تكون محفزات الأشعة تحت الحمراء على نفس المخلب الخلفي على بعد 3-5 دقائق على الأقل.</li>
	</ol></li>
	<li>تحليلات نمط المشي ملاحظة: تم قياس تحليلات نمط المشي باستخدام نظام التصوير (جدول المواد) وكان المراقب أعمى عن الحقن التي تلقتها الحيوانات.<ol><li>اضبط طول حجرة المشي باستخدام المقابض الموجودة على طرفي حجرة المشي بطول مناسب للفئران (على سبيل المثال ، 61 سم).</li>
		<li>ضع فأرا في حجرة المشي وقم بتدريب الفئران للقيام بجولات متواصلة لمدة 5 دورات على الأقل بسرعة 18 سم / ثانية قبل التجربة الرسمية. ملاحظة: عندما يتم وضع الجرذ لأول مرة في حجرة المشي ، يمكن ضبط السرعة على حوالي 20 سم / ثانية وإغلاقها عند الجري حوالي 2 ثانية. ثم اضبط السرعة على 18 سم / ثانية. اضغط برفق على الجزء الخلفي من الجرذ مع القسم ، إذا توقف الجرذ مؤقتا أو تراجع أثناء المشي. حاول تقليل السرعة تدريجيا من 18 سم / ثانية إلى 10 سم / ثانية. إذا فشل الجرذ في النهاية في إجراء الاختبار ، فمن المقبول اختيار فأر آخر للاختبار.</li>
		<li>قم بزيادة سرعة جهاز المشي ببطء حتى تصل إلى السرعة المستهدفة (18 سم / ثانية). التقط ما لا يقل عن 5 ثوان من الفيديو للحركة المستمرة للفأر باستخدام كاميرا الفيديو الرقمية عالية السرعة المثبتة أسفل حزام جهاز المشي الشفاف.</li>
		<li>اختبر كل فأر على بعد 5 دقائق على الأقل للحصول على ثلاثة أشواط متواصلة على الأقل.</li>
		<li>ارسم "مربعا محيطا" لتحديد حدود صورة مشي الحيوان في برنامج التصوير وأدخل سرعة التشغيل لكل فيديو. حدد مقاطع الفيديو كمجموعة وقم بمعالجة مقاطع الفيديو تلقائيا بواسطة البرنامج. بعد معالجة مقاطع الفيديو ، سيقوم البرنامج بإخراج العديد من جداول البيانات للإبلاغ عن مؤشرات المشي ، بما في ذلك الموقف ، والتأرجح ، والكبح ، والدفع ، والإيقاع ، وتسلسل الخطوات ، وما إلى ذلك.</li>
		<li>احسب إجمالي مساحة المخلب (سم2) ، ومتوسط طول الخطوة (سم) ، وتوحيد طول الخطوة. ملاحظة: إجمالي مساحة المخلب هو متوسط المساحة الإجمالية لأربعة مخالب لكل مجموعة من الفئران ويتم تعريف منطقة المخلب على أنها أقصى مساحة مخلب ملامسة لجهاز المشي خلال مرحلة الوقوف من دورة الخطوة. طول الخطوة هو المسافة بين جهات الاتصال الأولية لنفس المخلب في خطوة واحدة كاملة. طول الخطوة = متوسط طول الخطوة (سم) / طول الجسم (سم).</li>
	</ol></li>
</ol>3. التحاليل النسيجية والكيميائية المناعية
<ol><li>القتل الرحيم للفئران عن طريق حقن الصوديوم الخماسي داخل الصفاق بمعدل 150 مغ/كغ (محضر في محلول ملحي). استئصال مفاصل الركبة على الفور لإجراء التحليلات النسيجية.</li>
	<li>ثبت المفاصل في 10٪ فورمالين لمدة 24 ساعة ، وقم بإزالة الكلس بنسبة 10٪ EDTA في محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) لمدة 8 أسابيع ، ثم قم بتضمين المفاصل في البارافين. تنبيه: يمكن أن يسبب الفورمالين تهيج العين والجلد والجهاز التنفسي. يجب التعامل معها في غطاء محرك السيارة.</li>
	<li>قسم وصلات البارافين المدمجة بسمك 3 مم مع ميكروتوم وتطفو في حمام مائي 40 درجة مئوية يحتوي على الماء المقطر.</li>
	<li>نقل الأقسام على شرائح زجاجية. جفف الشرائح طوال الليل وقم بتخزين الشرائح في درجة حرارة الغرفة (RT) لمواصلة التلوين التالي.</li>
	<li>توضع الشرائح في فرن على حرارة 60 درجة مئوية لمدة 4 ساعات لإزالة البارافين.</li>
	<li>اغمر الشرائح على التوالي في الزيلين والزيلين والإيثانول 100٪ والإيثانول 100٪ والإيثانول 95٪ والإيثانول 80٪ والإيثانول 75٪ لمدة 5 دقائق على التوالي في RT.</li>
	<li>أقسام البقع مع الهيماتوكسيلين ويوزين (H&E) ، سافرانين-O (SO) والهيماتوكسيلين الأزرق Alcian (ABH) وكذلك الأجسام المضادة ضد كولاجين الفئران من النوع الثاني (Col2) ، الكولاجين من النوع X (Col10) ومصفوفة ميتالوبروتيناز 13 (MMP13) ، كما هو موضح في الخطوات 3.8-3.12.</li>
	<li>تلطيخ H&E<ol><li>اشطف الشرائح باستخدام H2 O منزوع الأيونات لمدة 3 دقائق. وصمة عار الشرائح مع الهيماتوكسيلين لمدة 3-5 دقائق.</li>
		<li>شطف الشرائح مع H2O 3x منزوع الأيونات ، 1 دقيقة لكل منهما ، حتى لا يبقى الهيماتوكسيلين على السطح.</li>
		<li>وصمة عار الشرائح مع eosin لمدة 30 ثانية. بعد ذلك ، اشطف الشرائح باستخدام H2O 3x منزوع الأيونات ، 1 دقيقة لكل منهما ، حتى لا يبقى أي يوزين على السطح.</li>
		<li>اغمر الشرائح في 0.1٪ أمونيا لمدة 10-20 ثانية. ثم ، شطف الشرائح مع H2O 3x منزوع الأيونات ، 1 دقيقة لكل منهما.</li>
		<li>اغمر الشرائح على التوالي في 95٪ إيثانول ، 100٪ إيثانول ، زيلين ، زيلين وزيلين لمدة 1 دقيقة ، على التوالي.</li>
		<li>قم بتغطية الشرائح بواسطة راتنج محايد.</li>
	</ol></li>
	<li>تلطيخ جدا<ol><li>اشطف الشرائح باستخدام H2 O منزوع الأيونات لمدة 3 دقائق. وصمة عار الشرائح مع الهيماتوكسيلين لمدة 3-5 دقائق.</li>
		<li>التفريق بسرعة في 1 ٪ من الكحول الحمضي (حوالي 3 ثوان). بعد ذلك ، اشطف الشرائح باستخدام H2O 3x منزوع الأيونات ، 1 دقيقة لكل منهما ، حتى لا يبقى الهيماتوكسيلين على السطح.</li>
		<li>شرائح البقع بمحلول Fast Green (FCF) لمدة 5 دقائق. ثم ، شطف الشرائح مع H2O 3x منزوع الأيونات ، 1 دقيقة لكل منهما.</li>
		<li>شرائح وصمة عار مع SO لمدة 1-2 دقيقة. ثم ، شطف الشرائح مع H2O 3x منزوع الأيونات ، 1 دقيقة لكل منهما.</li>
		<li>شطف الشرائح مع 1 ٪ حمض الخليك لمدة 1-2 دقيقة لإزالة FCF المتبقية. شطف الشرائح مع H2O منزوع الأيونات لمدة 1 دقيقة.</li>
		<li>اغمر الشرائح على التوالي في 95٪ إيثانول ، 100٪ إيثانول ، زيلين ، زيلين وزيلين لمدة 1 دقيقة ، على التوالي.</li>
		<li>قم بتغطية الشرائح بواسطة راتنج محايد.</li>
	</ol></li>
	<li>تلطيخ ABH<ol><li>اشطف الشرائح باستخدام H2 O منزوع الأيونات لمدة 3 دقائق. اغمر الشرائح في 1٪ كحول حمضي لمدة 30 ثانية وصفيها لفترة وجيزة على منشفة ورقية (لا تشطف).</li>
		<li>اغمر الشرائح في ABH لمدة 1 ساعة. بعد ذلك ، اشطف الشرائح باستخدام H2O 3x منزوع الأيونات ، 1 دقيقة لكل منهما ، حتى لا يبقى ABH على السطح.</li>
		<li>التفريق بسرعة في 1 ٪ من الكحول الحمضي (حوالي 3 ثوان). شطف الشرائح مع منزوع الأيونات H2O 3x ، 1 دقيقة لكل منهما.</li>
		<li>اغمر الشرائح في 0.5٪ ماء الأمونيوم لمدة 15 ثانية. ثم ، شطف الشرائح مع H2O 3x منزوع الأيونات ، 1 دقيقة لكل منهما.</li>
		<li>اغمر الشرائح في 95٪ إيثانول لمدة 1 دقيقة. اغمر الشرائح في محلول eosin / orange G لمدة 1.5 دقيقة.</li>
		<li>اغمر الشرائح على التوالي في 95٪ إيثانول ، 100٪ إيثانول ، زيلين ، زيلين وزيلين لمدة 1 دقيقة ، على التوالي.</li>
		<li>قم بتغطية الشرائح بواسطة راتنج محايد.</li>
	</ol></li>
	<li>افحص جميع الشرائح تحت المجهر وصنفها إحصائيا على مقياس من 0 إلى 13 عن طريق الملاحظة مزدوجة التعمية ، وفقا لنظام تسجيل مانكين14.</li>
	<li>الكيمياء الهيستولوجية المناعية<ol><li>اشطف الشرائح باستخدام H2 O منزوع الأيونات لمدة 3 دقائق.</li>
		<li>اغمر الشرائح في سترات الصوديوم 0.1 متر وضع الشرائح في فرن 60 درجة مئوية لمدة 4 ساعات لاسترداد المستضد.</li>
		<li>اغمر الشرائح في 0.3٪ Triton X-100 في PBS لمدة 10 دقائق. ثم ، شطف الشرائح مع PBS 2x ، 3 دقائق لكل منهما.</li>
		<li>احتضان أقسام في محلول 3٪ H 2 O2في الميثانولفي RT لمدة 10 دقائق لمنع نشاط البيروكسيديز الداخلي. شطف الشرائح مع PBS 2x ، 3 دقائق لكل منهما.</li>
		<li>احتضان أقسام تحتوي على 5٪ مصل ماعز في PBS لمدة 30 دقيقة في RT لمنع أي ارتباط غير محدد. شطف الشرائح مع PBS 2x ، 3 دقائق لكل منهما.</li>
		<li>احتضان الأقسام طوال الليل عند 4 درجات مئوية مع 100 ميكرولتر من الأجسام المضادة الأولية المخففة من PBS (1: 1000) ضد كولاجين الفئران من النوع الثاني (Col2) والكولاجين من النوع X (Col10) ومصفوفة ميتالوبروتيناز 13 (MMP13). شطف الشرائح مع PBS 2x ، 3 دقائق لكل منهما.</li>
		<li>احتضان أقسام تحتوي على 100 ميكرولتر من الجسم المضاد الثانوي المخفف من PBS (1: 1000) (ثانوي مضاد للفأر أو ثانوي مضاد للفأر من الماعز) لمدة 20 دقيقة في RT. شطف الشرائح مع PBS 2x ، 3 دقائق لكل منهما.</li>
		<li>احتضان الأقسام مع 100 ميكرولتر من حل العمل 3،3′-ديامينوبنزيدين (DAB). راقب التفاعل لأن التفاعل الكروموجيني يحول مواقع الخاتمة إلى اللون البني. تحذير: DAB مادة مسرطنة. دائما ارتداء القفازات والعمل في غطاء محرك السيارة عند العمل مع DAB. ملاحظة: قد يختلف وقت تطوير اللون من بضع ثوان إلى 10 دقائق.</li>
		<li>بمجرد أن يتطور اللون البني على الأقسام ، اشطف الشرائح باستخدام H2O 2x منزوع الأيونات ، 3 دقائق لكل منهما.</li>
		<li>اغمر الشرائح في الهيماتوكسيلين لمدة 1-2 دقيقة لمواجهة الشرائح. ثم ، شطف الشرائح مع H2O 3x منزوع الأيونات ، 1 دقيقة لكل منهما.</li>
		<li>اغمر الشرائح على التوالي في 95٪ إيثانول ، 100٪ إيثانول ، زيلين ، زيلين وزيلين لمدة 1 دقيقة ، على التوالي.</li>
		<li>قم بتغطية الشرائح بواسطة راتنج محايد.</li>
		<li>راقب لون تلطيخ الأجسام المضادة في الأقسام الموجودة تحت المجهر.</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol>
	<li>Hunter, D. J., Schofield, D., Callander, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+individual+and+socioeconomic+impact+of+osteoarthritis.">The individual and socioeconomic impact of osteoarthritis.</a> Nature Reviews Rheumatology. 10 (7), 437-441 (2014).</li><li>Neogi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+epidemiology+and+impact+of+pain+in+osteoarthritis.">The epidemiology and impact of pain in osteoarthritis.</a> Osteoarthritis and Cartilage. 21 (9), 1145-1153 (2013).</li><li>Teeple, E., Jay, G. D., Elsaid, K. A., Fleming, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+osteoarthritis:+challenges+of+model+selection+and+analysis.">Animal models of osteoarthritis: challenges of model selection and analysis.</a> AAPS Journal. 15 (2), 438-446 (2013).</li><li>Woolf, A. D., Pfleger, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Burden+of+major+musculoskeletal+conditions.">Burden of major musculoskeletal conditions.</a> Bulletin of the World Health Organization. 81 (9), 646-656 (2003).</li><li>Bijlsma, J. W., Berenbaum, F., Lafeber, F. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteoarthritis:+an+update+with+relevance+for+clinical+practice.">Osteoarthritis: an update with relevance for clinical practice.</a> Lancet. 377 (9783), 2115-2126 (2011).</li><li>McCoy, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+Models+of+Osteoarthritis:+Comparisons+and+Key+Considerations.">Animal Models of Osteoarthritis: Comparisons and Key Considerations.</a> Veterinary Pathology. 52 (5), 803-818 (2015).</li><li>O'Neill, T. W., Felson, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+Osteoarthritis+(OA)+Pain.">Mechanisms of Osteoarthritis (OA) Pain.</a> Current Osteoporosis Reports. 16 (5), 611-616 (2018).</li><li>Kuyinu, E. L., Narayanan, G., Nair, L. S., Laurencin, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+osteoarthritis:+classification,+update,+and+measurement+of+outcomes.">Animal models of osteoarthritis: classification, update, and measurement of outcomes.</a> Journal of Orthopaedic Surgery and Research. 11, 19 (2016).</li><li>Takahashi, I., Matsuzaki, T., Hoso, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+histopathological+developments+in+knee-joint+components+in+a+rat+model+of+osteoarthritis+induced+by+monosodium+iodoacetate.">Long-term histopathological developments in knee-joint components in a rat model of osteoarthritis induced by monosodium iodoacetate.</a> Journal of Physical Therapy Science. 29 (4), 590-597 (2017).</li><li>Liu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ongoing+pain+in+the+MIA+model+of+osteoarthritis.">Ongoing pain in the MIA model of osteoarthritis.</a> Neuroscience Letters. 493 (3), 72-75 (2011).</li><li>Combe, R., Bramwell, S., Field, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+monosodium+iodoacetate+model+of+osteoarthritis:+a+model+of+chronic+nociceptive+pain+in+rats.">The monosodium iodoacetate model of osteoarthritis: a model of chronic nociceptive pain in rats.</a> Neuroscience Letters. 370 (2-3), 236-240 (2004).</li><li>Pomonis, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+pharmacological+characterization+of+a+rat+model+of+osteoarthritis+pain.">Development and pharmacological characterization of a rat model of osteoarthritis pain.</a> Pain. 114 (3), 339-346 (2005).</li><li>Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+assessment+of+tactile+allodynia+in+the+rat+paw.">Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw.</a> Journal of Neuroscience Methods. 53 (1), 55-63 (1994).</li><li>Mankin, H. J., Dorfman, H., Lippiello, L., Zarins, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemical+and+metabolic+abnormalities+in+articular+cartilage+from+osteo-arthritic+human+hips.+II.+Correlation+of+morphology+with+biochemical+and+metabolic+data.">Biochemical and metabolic abnormalities in articular cartilage from osteo-arthritic human hips. II. Correlation of morphology with biochemical and metabolic data.</a> Journal of Bone and Joint Surgery. 53 (3), 523-537 (1971).</li><li>Yan, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chondroprotective+effects+of+platelet+lysate+towards+monoiodoacetate-induced+arthritis+by+suppression+of+TNF-&#945;-induced+activation+of+NF-&#312;B+pathway+in+chondrocytes.">Chondroprotective effects of platelet lysate towards monoiodoacetate-induced arthritis by suppression of TNF-&#945;-induced activation of NF-&#312;B pathway in chondrocytes.</a> Aging. 11 (9), 2797-2811 (2019).</li><li>Yan, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intra-Articular+Injection+of+Extract+Attenuates+Pain+Behavior+and+Cartilage+Degeneration+in+Mono-Iodoacetate+Induced+Osteoarthritic+Rats.">Intra-Articular Injection of Extract Attenuates Pain Behavior and Cartilage Degeneration in Mono-Iodoacetate Induced Osteoarthritic Rats.</a> Frontiers in Pharmacology. 9, 1360 (2018).</li><li>Wang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Agkistrodon+ameliorates+pain+response+and+prevents+cartilage+degradation+in+monosodium+iodoacetate-induced+osteoarthritic+rats+by+inhibiting+chondrocyte+hypertrophy+and+apoptosis.">Agkistrodon ameliorates pain response and prevents cartilage degradation in monosodium iodoacetate-induced osteoarthritic rats by inhibiting chondrocyte hypertrophy and apoptosis.</a> Journal of Ethnopharmacology. 231, 545-554 (2019).</li><li>Yamada, E. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+monosodium+iodoacetate+dosage+to+induce+knee+osteoarthritis:+Relation+with+oxidative+stress+and+pain.">Evaluation of monosodium iodoacetate dosage to induce knee osteoarthritis: Relation with oxidative stress and pain.</a> International Journal of Rheumatic Diseases. 22 (3), 399-410 (2019).</li><li>Schuelert, N., McDougall, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+evidence+that+the+vasoactive+intestinal+peptide+receptor+antagonist+VIP6-28+reduces+nociception+in+an+animal+model+of+osteoarthritis.">Electrophysiological evidence that the vasoactive intestinal peptide receptor antagonist VIP6-28 reduces nociception in an animal model of osteoarthritis.</a> Osteoarthritis and Cartilage. 14 (11), 1155-1162 (2006).</li><li>Lee, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Choline,+an+alpha7+nicotinic+acetylcholine+receptor+agonist,+alleviates+hyperalgesia+in+a+rat+osteoarthritis+model.">Choline, an alpha7 nicotinic acetylcholine receptor agonist, alleviates hyperalgesia in a rat osteoarthritis model.</a> Neuroscience Letters. 548, 291-295 (2013).</li><li>Piesla, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abnormal+gait,+due+to+inflammation+but+not+nerve+injury,+reflects+enhanced+nociception+in+preclinical+pain+models.">Abnormal gait, due to inflammation but not nerve injury, reflects enhanced nociception in preclinical pain models.</a> Brain Research. 1295, 89-98 (2009).</li><li>Udo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monoiodoacetic+acid+induces+arthritis+and+synovitis+in+rats+in+a+dose-+and+time-dependent+manner:+proposed+model-specific+scoring+systems.">Monoiodoacetic acid induces arthritis and synovitis in rats in a dose- and time-dependent manner: proposed model-specific scoring systems.</a> Osteoarthritis and Cartilage. 24 (7), 1284-1291 (2016).</li><li>Guingamp, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mono-iodoacetate-induced+experimental+osteoarthritis:+a+dose-response+study+of+loss+of+mobility,+morphology,+and+biochemistry.">Mono-iodoacetate-induced experimental osteoarthritis: a dose-response study of loss of mobility, morphology, and biochemistry.</a> Arthritis &amp; Rheumatism. 40 (9), 1670-1679 (1997).</li><li>Jeong, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eupatilin+Exerts+Antinociceptive+and+Chondroprotective+Properties+in+a+Rat+Model+of+Osteoarthritis+by+Downregulating+Oxidative+Damage+and+Catabolic+Activity+in+Chondrocytes.">Eupatilin Exerts Antinociceptive and Chondroprotective Properties in a Rat Model of Osteoarthritis by Downregulating Oxidative Damage and Catabolic Activity in Chondrocytes.</a> PLoS ONE. 10 (6), 0130882 (2015).</li><li>Cook, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+cartilage+repair.">Animal models of cartilage repair.</a> Bone &amp; Joint Research. 3 (4), 89-94 (2014).</li><li>Little, C. B., Zaki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+constitutes+an+"animal+model+of+osteoarthritis"--the+need+for+consensus.">What constitutes an "animal model of osteoarthritis"--the need for consensus.</a> Osteoarthritis and Cartilage. 20 (4), 261-267 (2012).</li></ol>

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

نموذج الفئران من الزراعة العضوية التي يسببها MIA هو نموذج راسخ ومستخدم على نطاق واسع. يسبب الحقن داخل المفصل من MIA في البداية التهابا حادا وحادا ، مما يؤدي إلى المرحلة الأطول والتنكسية من OA17,18. في هذا البحث ، قمنا بقياس حساسية مسبب للألم بواسطة MWT و TWL ، وقمنا بت...

هشاشة العظام (OA) هو مرض المفاصل الأكثر شيوعا في العالم ، حيث يؤثر على ما يقدر بنحو 10-12٪ من السكان لدى البالغين1. المفصل الأكثر مشاركة بشكل عام هو الركبة ، و OA لديه نسبة أعلى في كبار السن ، وخاصة النساء2. كمرض مزمن ، يتطور التهاب المفاصل تدريجيا على مدى عقود إلى فشل المفاصل مع أعراض مثل فقدان الغضروف ، والالتهاب الزليلي ، وهشاشة العظام ، وانخفاض الوظيفة ، والألم المزمن3. وفقا لمنظمة الصحة العالمية (WHO) ، فإن الزراعة العضوية هي رابع أكثر الأمراض انتشارا بين الإناث وثامن أكثر الأمراض انتشارا عند الذكور. بحلول عام 2020 ، قد يصبح OA رابع أكثر الأمراض إعاقة لدى البشر4. ومع ذلك ، فإن العلاجات المتاحة حاليا من الزراعة العضوية تعالج الأعراض فقط وتمدد الوقت حتى جراحة استبدال المفاصل5.
غالبا ما يستغرق OA التلقائي في المرضى من البشر وقتا طويلا لإنتاج أعراض سريرية مثل الألم المرتبط بالمفاصل6. في المراحل المبكرة من هشاشة العظام ، عادة ما يكون الألم متقطعا ويصبح أكثر تواترا وشدة مع تقدم المرض ، مما يجعله الشكوى السائدة للمرضى7. لذلك ، تم تطوير نماذج حيوانية واسعة النطاق لألم هشاشة العظام على مدى نصف القرن الماضي لتعزيز علاج تخفيف الآلام. تم تقسيم نماذج الزراعة العضوية بشكل كلاسيكي إلى نماذج عفوية ومستحثة. تشمل النماذج التلقائية النماذج التي تحدث بشكل طبيعي والنماذج المعدلة وراثيا ، والتي يمكن أن تحاكي عن كثب مسار الزراعة العضوية الأولية في البشر8. يمكن تقسيم النماذج المستحثة بشكل عام إلى فئتين: 1) الزراعة العضوية بعد الصدمة الناجمة عن الجراحة أو غيرها من الصدمات. أو 2) الحقن داخل المفصل للمواد السامة للغضروف أو المؤيدة للالتهابات3. تضع هذه النماذج أساسا للدراسة الفيزيولوجية المرضية ل OA وتساهم بشكل كبير في تطوير الأدوية لتقليل الألم وزيادة الوظيفة.
في الآونة الأخيرة ، كان المحفز الأكثر استخداما لنمذجة الزراعة العضوية هو أحادي يودواسيتات (MIA). MIA ، مثبط لهيدروجيناز الجلسرينالدهيد -3 فوسفات ، يمكن أن يسبب تغيرات في مصفوفة الغضروف ، والتدهور ، وفقدان الغضروف ، والتهاب الغشاء المفصلي وغيرها من التغييرات ، والتي تشبه التغيرات المرضية لالتهاب المفاصل البشري9. وقد لوحظ أن الحقن داخل المفصل من MIA تسبب في ألم مستمر في 28 يوما بعد إعطاء MIA ، مما يشير إلى أن نموذج MIA قد يكون مفيدا للتحقيق في ألم مسبب للألم المزمن10،11،12. في هذه الدراسة ، تلقى ذكور فئران Sprague-Dawley حقنا داخل المفصل مع 0.5 أو 1.5 أو 3 ملغ من MIA في مفاصل الركبة. تم قياس شدة آلام المفاصل التي يسببها MIA من خلال تقييم الحساسية الميكانيكية والحرارية في 1 و 7 و 14 و 21 و 28 و 35 يوما بعد الحقن. على هذا الأساس ، تم اختيار 1.5 ملغ من MIA كتركيز نهائي لتقييم أنماط المشي والتغيرات النسيجية في 28 يوما بعد الحقن.

<table><tbody><tr><td>Anti-Collagen II antibody</td><td>Abcam(UK)</td><td>34712</td><td>Primary antibody for immunohistochemistry (IHC)</td></tr><tr><td>Anti-Collagen X (Col10) antibody</td><td>Abcam(UK)</td><td>49945</td><td>Primary antibody for IHC</td></tr><tr><td>DigiGait Imaging System</td><td>Mouse Specifics (Boston, MA, USA)</td><td></td><td>Equipment for gait patterns analyses</td></tr><tr><td>Eosin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>861006</td><td>The dye for HE staining</td></tr><tr><td>Fast Green FCF</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F7252</td><td>The dye for SO staining</td></tr><tr><td>Goat anti-mouse antibody</td><td>ZSGQ-BIO (Beijing, China)</td><td>PV-9002</td><td>Secondary antibody for IHC</td></tr><tr><td>Goat anti-rabbit antibody</td><td>ZSGQ-BIO (Beijing, China)</td><td>PV-9001</td><td>Secondary antibody for IHC</td></tr><tr><td>Hematoxylin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3163</td><td>The dye for HE staining</td></tr><tr><td>MIA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I4386-10G</td><td>powder</td></tr><tr><td>MMP13</td><td>Cell Signaling Technology, Inc. (Danvers, MA, USA)</td><td>69926</td><td>Primary antibody for IHC</td></tr><tr><td>Modular tissue embedding center</td><td>Thermo Fisher Scientific (USA)</td><td>EC 350</td><td>Produce paraffin blocks.</td></tr><tr><td>Plantar Test apparatus</td><td>UgoBasile (Italy)</td><td>37370</td><td>Equipment for TWL assay</td></tr><tr><td>PrimeScript RT reagent Kit (Perfect Real Time)</td><td>TaKaRa Biotechnology Co. Ltd. (Dalian, China)</td><td>RR037A</td><td>Extracte total RNA from cultured cells</td></tr><tr><td>Rotary and Sliding Microtomes</td><td>Thermo Fisher Scientific (USA)</td><td>HM325</td><td>Precise paraffin sections.</td></tr><tr><td>Safranin-O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S2255</td><td>The dye for SO staining</td></tr><tr><td>Tissue-Tek VIP 5 Jr</td><td>Sakura (Japan)</td><td></td><td>Vacuum Infiltration Processor</td></tr></tbody></table>

osteoarthritis pain model induced by intra-articular injection of mono-iodoacetate in rats

يمكن تقسيم النماذج الحيوانية الحالية لالتهاب المفاصل العظمي (OA) إلى نماذج عفوية ونماذج مستحثة ، وكلاهما يهدف إلى محاكاة التغيرات الفيزيولوجية المرضية لالتهاب المفاصل البشري. ومع ذلك ، كعرض رئيسي في المرحلة المتأخرة من هشاشة العظام ، يؤثر الألم على الحياة اليومية للمرضى ، ولا توجد العديد من النماذج المتاحة. النموذج الناجم عن أحادي يودواسيتات (MIA) هو نموذج ألم الزراعة العضوية الأكثر استخداما ، ويستخدم بشكل رئيسي في القوارض. MIA هو مثبط لهيدروجيناز الجلسرينالديهيد -3 فوسفات ، والذي يسبب موت الخلايا الغضروفية ، تنكس الغضروف ، هشاشة العظام ، والتغيرات القابلة للقياس في سلوك الحيوان. إلى جانب ذلك ، يمكن اكتشاف تغيرات التعبير عن مصفوفة ميتالوبروتيناز (MMP) والسيتوكينات المؤيدة للالتهابات (IL1 β و TNF α) في النموذج الذي يسببه MIA. تتوافق هذه التغييرات مع الظروف الفيزيولوجية المرضية OA في البشر ، مما يشير إلى أن MIA يمكن أن يحفز نموذج ألم OA قابل للقياس وناجح. تهدف هذه الدراسة إلى وصف منهجية الحقن داخل المفصل ل MIA في الفئران ومناقشة السلوكيات الناتجة المرتبطة بالألم والتغيرات النسيجية المرضية.

باستخدام هذه المنهجية ، أنشأنا نموذجا لألم الزراعة العضوية في الفئران واكتشفنا التغييرات الناتجة. يعكس MWT و TWL الألم الخيفي الميكانيكي وفرط التألم الحراري ، على التوالي. كما هو موضح في الشكل 1 ، فإن MIA الناجم عن ألم خيفي ميكانيكي وفرط التألم الحراري موجود بطريقة تعتمد على ال...

Watch this Scientific Journal Video about Osteoarthritis Pain Model Induced by Intra-Articular Injection of Mono-Iodoacetate in Rats at JoVE.com

Osteoarthritis Pain Model Induced by Intra-Articular Injection of Mono-Iodoacetate in Rats

تصف هذه الدراسة طريقة الحقن داخل المفصل لأحادي يودواسيتات في الفئران وتناقش السلوكيات الناتجة المرتبطة بالألم والتغيرات النسيجية المرضية ، والتي توفر مراجع للتطبيقات المستقبلية.

نموذج ألم هشاشة العظام الناجم عن الحقن داخل المفصل من أحادي يودواسيتات في الفئران

The current animal models of osteoarthritis (OA) can be divided into spontaneous models and induced models, both of which aim to simulate the ...

osteoarthritis-pain-model-induced-intra-articular-injection-mono

Research

JoVE Journal

Medicine

8.0K Views.  Zhejiang Chinese Medical University. تصف هذه الدراسة طريقة الحقن داخل المفصل لأحادي يودواسيتات في الفئران وتناقش السلوكيات الناتجة المرتبطة بالألم والتغيرات النسيجية المرضية ، والتي توفر مراجع للتطبيقات المستقبلية.

Video: Osteoarthritis Pain Model Induced by Intra-Articular Injection of Mono-Iodoacetate in Rats

Chronic Constriction of the Sciatic Nerve and Pain Hypersensitivity Testing in Rats

Chronic neuropathic pain, resulting from damage to the central or peripheral nervous system, is a prevalent and debilitating condition, affecting 7-18% of the population1,2. Symptoms include spontaneous (tingling, burning, electric-shock like) pain, dysaesthesia, paraesthesia, allodynia (pain resulting from normally non-painful stimuli) and hyperalgesia (an increased response to painful stimuli). The sensory symptoms are co-morbid with behavioural disabilities, such as insomnia and depression. To study chronic neuropathic pain several animal models mimicking peripheral nerve injury have been developed, one of the most widely used is Bennett and Xie's (1988) unilateral sciatic nerve chronic constriction injury (CCI)3 (Figure 1). Here we present a method for performing CCI and testing pain hypersensitivity.
CCI is performed under anaesthesia, with the sciatic nerve on one side exposed by making a skin incision, and cutting through the connective tissue between the gluteus superficialis and biceps femoris muscles. Four chromic gut ligatures are tied loosely around the sciatic nerve at 1 mm intervals, to just occlude but not arrest epineural blood flow. The wound is closed with sutures in the muscle and staples in the skin. The animal is then allowed to recover from surgery for 24 hrs before pain hypersensitivity testing begins.
For behavioural testing, rats are placed into the testing apparatus and are allowed to habituate to the testing procedure. The area tested is the mid-plantar surface of the hindpaw (Figure 2), which falls within the sciatic nerve distribution. Mechanical withdrawal threshold is assessed by mechanically stimulating both injured and uninjured hindpaws using an electronic dynamic plantar von Frey aesthesiometer or manual von Frey hairs4. The mechanical withdrawal threshold is the maximum pressure exerted (in grams) that triggers paw withdrawal. For measurement of thermal withdrawal latency, first described by Hargreaves et al (1988), the hindpaw is exposed to a beam of radiant heat through a transparent glass surface using a plantar analgesia meter5,6. The withdrawal latency to the heat stimulus is recorded as the time for paw withdrawal in both injured and uninjured hindpaws. Following CCI, mechanical withdrawal threshold, as well as thermal withdrawal latency in the injured paw are both significantly reduced, compared to baseline measurements and the uninjured paw (Figure 3). The CCI model of peripheral nerve injury combined with pain hypersensitivity testing provides a model system to investigate the effectiveness of potential therapeutic agents to modify chronic neuropathic pain. In our laboratory, we utilise CCI alongside thermal and mechanical sensitivity of the hindpaws to investigate the role of neuro-immune interactions in the pathogenesis and treatment of neuropathic pain.

Due to the simplicity of surgery and the robust behavioural outcome, chronic constriction of the sciatic nerve is one of the pre-eminent animal models of neuropathic pain. Within 24 hrs following surgery, pain hypersensitivity is established and can be quantitatively measured using a von Frey aesthesiometer (mechanical test) and plantar analgesia meter (thermal test).

مزمن انقباض في العصب الوركي والألم اختبار فرط الحساسية في الفئران

Chronic neuropathic pain, resulting from damage to the central or peripheral nervous system, is a prevalent and debilitating condition, affecting 7-18% of ...

Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the occurrence of subretinal hemorrhage can affect photoreceptor cell death in the detached retina. Hence, it is advantageous to create reproducible RDs without subretinal hemorrhage for evaluating photoreceptor cell death. We modified a previously reported method to create bullous and persistent RDs in a reproducible location with rare occurrence of subretinal hemorrhage. The critical step of this modified method is the creation of a self-sealing scleral incision, which can prevent leakage of sodium hyaluronate after injection into the subretinal space. To make the self-sealing scleral incision, a scleral tunnel is created, followed by scleral penetration into the choroid with a 30 G needle. Although choroidal hemorrhage may occur during this step, astriction with a surgical spear reduces the rate of choroidal hemorrhage. This method allows a more reproducible and reliable model of photoreceptor death in diseases that involve RD such as rhegmatogenous RD, retinopathy of prematurity, diabetic retinopathy, central serous chorioretinopathy, and age-related macular degeneration (AMD).

Creating experimental retinal detachments with a reproducible and sustained height of detachment, and without subretinal hemorrhage, is important for studying the pathophysiology of photoreceptor cell loss in retinal disease and evaluating potential therapeutic interventions. Here, we report such a method in detail.

شبكية العين مفرزة النموذجي في القوارض بواسطة حقن تحت الشبكية من هيالورونات الصوديوم

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the ...

Experimental Glaucoma Induced by Ocular Injection of Magnetic Microspheres

Progress in understanding the pathophysiology, and providing novel treatments for glaucoma is dependent on good animal models of the disease. We present here a protocol for elevating intraocular pressure (IOP) in the rat, by injecting magnetic microspheres into the anterior chamber of the eye. The use of magnetic particles allows the user to manipulate the beads into the iridocorneal angle, thus providing a very effective blockade of fluid outflow from the trabecular meshwork. This leads to long-lasting IOP rises, and eventually neuronal death in the ganglion cell layer (GCL) as well as optic nerve pathology, as seen in patients with the disease. This method is simple to perform, as it does not require machinery, specialist surgical skills, or many hours of practice to perfect. Furthermore, the pressure elevations are very robust, and reinjection of the magnetic microspheres is not usually required unlike in some other models using plastic beads. Additionally, we believe this method is suitable for adaptation for the mouse eye.

We present a method for inducing elevated intraocular pressure (IOP), by injecting magnetic microspheres into the rat eye, to model glaucoma. This leads to strong pressure rises, and extensive neuronal death. This protocol is easy to perform, does not require repeat injections, and produces stable long-lasting IOP rises.

التجريبية الزرق المستحث بواسطة حقن العيني من المجهرية المغناطيسي

Progress in understanding the pathophysiology, and providing novel treatments for glaucoma is dependent on good animal models of the disease. We present ...

Inflammatory TMJ Pain Mouse Model: Bite Force and Von Frey Filament Assessments

Temporomandibular Joint Pain Measurement by Bite Force and Von Frey Filament Assays in Mice

Temporomandibular joint (TMJ) pain and osteoarthritis (OA) are common and debilitating disorders that impair patients' quality of life. The mechanisms driving diseases-related pain are poorly understood, and current treatments fail to provide effective and long-term therapeutic effects. Additionally, pain assessment in research, particularly orofacial pain, poses several challenges that complicate studies in both clinical and basic science settings. Therefore, we have established an inflammatory TMJ pain mouse model via intra-articular injection of CFA (Complete Freund's Adjuvant) and evaluated pain behaviors by bite force measurement and the von Frey filament test. Mice with CFA injection exhibited orofacial pain behaviors compared to PBS injection, including reduced bite force and head withdrawal threshold in the von Frey filament test. These methods are relatively easy to execute to have reproducible results and can be potentially extended to pain studies for other disease models related to TMJ disorders. Together, bite force, and the von Frey filament tests are reliable in measuring orofacial pain, as demonstrated in CFA injection-induced painful TMJOA mouse models.

This protocol describes how measuring bite force and head withdrawal threshold can capture pain behavior in Complete Freund's Adjuvant (CFA)-induced inflammatory temporomandibular joint (TMJ) pain.

Temporomandibular joint (TMJ) pain and osteoarthritis (OA) are common and debilitating disorders that impair patients' quality of life. The mechanisms ...

Behavior

The Monoiodoacetate Model of Osteoarthritis Pain in the Mouse

A major symptom of patients with osteoarthritis (OA) is pain that&#160;is triggered by peripheral as well as central changes within the pain pathways. The current treatments for OA pain such as NSAIDS or opiates are neither sufficiently effective nor devoid of detrimental side effects. Animal models of OA are being developed to improve our understanding of OA-related pain mechanisms and define novel pharmacological targets for therapy. Currently available models of OA in rodents include surgical and chemical interventions into one knee joint. The monoiodoacetate (MIA) model has become a standard for modelling joint disruption in OA in both rats and mice. The model, which is easier to perform in the rat, involves injection of MIA into a knee joint that induces rapid pain-like responses in the ipsilateral limb, the level of which can be controlled by injection of different doses. Intra-articular injection of MIA disrupts chondrocyte glycolysis by inhibiting glyceraldehyde-3-phosphatase dehydrogenase and results in chondrocyte death, neovascularization, subchondral bone necrosis and collapse, as well as inflammation. The morphological changes of the articular cartilage and bone disruption are reflective of some aspects of patient pathology. Along with joint damage, MIA injection induces referred mechanical sensitivity in the ipsilateral hind paw and weight bearing deficits that are measurable and quantifiable. These behavioral changes resemble some of the symptoms reported by the patient population, thereby validating the MIA injection in the knee as a useful and relevant pre-clinical model of OA pain.
The aim of this article is to describe the methodology of intra-articular injections of MIA and the behavioral recordings of the associated development of hypersensitivity with a mind to highlight the necessary steps to give consistent and reliable recordings.

Osteoarthritis (OA), or degenerative joint disease, is a debilitating condition associated with pain that remains only partially controlled by available analgesics. Animal models are being developed to improve our understanding of OA-related pain mechanisms. Here we describe the methodology for the monoiodoacetate model of OA pain in the mouse.

نموذج Monoiodoacetate الألم في التهاب المفاصل في الماوس

A major symptom of patients with osteoarthritis (OA) is pain that&#160;is triggered by peripheral as well as central changes within the pain pathways. The ...

A Model of Glaucoma Induced by Circumlimbal Suture in Rats and Mice

The circumlimbal suture is a technique for inducing experimental glaucoma in rodents by chronically elevating intraocular pressure (IOP), a well-known risk factor for glaucoma. This protocol demonstrates a step-by-step guide on this technique in Long Evans rats and C57BL/6 mice. Under general anesthesia, a "purse-string" suture is applied on the conjunctiva, around the equator and behind the limbus of the eye. The fellow eye serves as an untreated control. Over the duration of our study, which was a period of 8 weeks for rats and 12 weeks for mice, IOP remained elevated, as measured regularly by rebound tonometry in conscious animals without topical anesthesia. In both species, the sutured eyes showed electroretinogram features consistent with preferential inner retinal dysfunction. Optical coherence tomography showed selective thinning of the retinal nerve fiber layer. Histology of the rat retina in cross-section found reduced cell density in the ganglion cell layer, but no change in other cellular layers. Staining of flat-mounted mouse retinae with a ganglion cell specific marker (RBPMS) confirmed ganglion cell loss. The circumlimbal suture is a simple, minimally invasive and cost-effective way to induce ocular hypertension that leads to ganglion cell injury in both rats and mice.

Chronic ocular hypertension is induced by applying a circumlimbal suture in rats and mice, leading to functional and structural deterioration of the retinal ganglion cells consistent with glaucoma.

نموذج زرق المستحث بخياطة سيركومليمبال في الجرذان والفئران

The circumlimbal suture is a technique for inducing experimental glaucoma in rodents by chronically elevating intraocular pressure (IOP), a well-known ...

Spontaneous and Evoked Measures of Pain in Murine Models of Monoarticular Knee Pain

Pain is the main cause of disability from arthritis. There is currently an unmet need for adequate treatments for arthritis pain. Pre-clinical models are necessary and useful for studying the mechanisms of pain and for evaluating efficacy of arthritis therapies. Measuring pain in animal models of arthritis is challenging. We have developed methods for measuring evoked and spontaneous pain in three models of murine arthritis. We quantitate the evoked pain responses of mice subjected to firm palpation of a painful knee. We also evaluate spontaneous pain by the proportion of weight and the amount of time placed on each of their 4 limbs after induction of arthritis pain in one knee. Joint pain in these mouse models produces a significant increase in evoked pain responses and an alteration in weight bearing. Since mice are quadrupeds, they offload the painful limb to the contralateral limb, to the forelimbs, or some combination. These methods are simple, require minimal equipment, and are reproducible and sensitive for detecting pain. They are useful for studying both disease-modifying arthritis treatments and analgesics in mice.

We have developed an evoked measure of arthritis pain and coupled it with a standardized method for measuring spontaneous pain in different murine models of chemically induced arthritis. These measures are sensitive and reproducible for different types of joint pain.

التدابير العفوية ومقولة الألم في نماذج مورين من الأم في الركبة مونوارتيكولار

Pain is the main cause of disability from arthritis. There is currently an unmet need for adequate treatments for arthritis pain. Pre-clinical models are ...

The Lower Body Positive Pressure Treadmill for Knee Osteoarthritis Rehabilitation

Here, based on a clinician&rsquo;s point-of-view, we propose a two-model lower body positive pressure (LBPP) protocol (walking and squatting models) in addition to a clinical, functional assessment methodology, including details for further encouragement of the development of non-drug surgical intervention strategies in knee osteoarthritis patients. However, we only present the effect of LBPP training in improvement of pain and knee function in one patient through three-dimensional gait analysis. The exact, long-term effects of this approach should be explored in future studies.

Here, based on a clinician&#8217;s point-of-view, we propose a two-model lower body positive pressure (LBPP) protocol (walking and squatting models) in addition to a clinical, functional assessment methodology, including details for further encouragement of the development of non-drug surgical intervention strategies in knee osteoarthritis patients. However, we only present the effect of LBPP training in improvement of pain and knee function in one patient through three-dimensional gait analysis. The exact, long-term effects of this approach should be explored in future studies.

المطحنة الضغط الإيجابي السفلي للجسم لإعادة التأهيل هشاشة العظام الركبة

Here, based on a clinician&rsquo;s point-of-view, we propose a two-model lower body positive pressure (LBPP) protocol (walking and squatting models) in ...

إنشاء نموذج KOA في الأرانب باستخدام طريقة فيدمان المعدلة

Application of Acupotomy in a Knee Osteoarthritis Model in Rabbit

Knee osteoarthritis (KOA) is one of the most frequently encountered diseases in the orthopedic department, which seriously reduces the quality of life of people with KOA. Among several pathogenic factors, the biomechanical imbalance of the knee joint is one of the main causes of KOA. Acupotomology believes that restoring the mechanical balance of the knee joint is the key to treating KOA. Clinical studies have shown that acupotomy can effectively reduce pain and improve knee mobility by reducing adhesion, contracture of soft tissues, and stress concentration points in muscles and tendons around the knee joint. 
In this protocol, we used the modified Videman method to establish a KOA model by immobilizing the left hindlimb in a straight position. We have outlined the method of operation and the precautions related to acupotomy in detail and evaluated the efficacy of acupotomy in conjunction with the theory of "Modulating Muscles and Tendons to Treat Bone Disorders" through the detection of the mechanical properties of quadriceps femoris and tendon, as well as cartilage mechanics and morphology. The results show that acupotomy has a protective effect on cartilage by adjusting the mechanical properties of the soft tissues around the knee joint, improving the cartilage stress environment, and delaying cartilage degeneration.

تسليط الضوء على المؤلف: التحقيق في آلية عمل بضع الوخز بالإبر في علاج هشاشة العظام في الركبة

In this protocol, a knee osteoarthritis model was prepared using the modified Videman method, and the operation procedures and precautions of acupotomy are detailed. The effectiveness of acupotomy has been demonstrated by testing the mechanical properties of quadriceps femoris and tendon and the mechanical and morphological properties of cartilage.

تطبيق بضع الوخز بالإبر في نموذج هشاشة العظام في الركبة في الأرانب

Knee osteoarthritis (KOA) is one of the most frequently encountered diseases in the orthopedic department, which seriously reduces the quality of life of ...

نموذج ألم هشاشة العظام الناجم عن الحقن داخل المفصل من أحادي يودواسيتات في الفئران

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

مزمن انقباض في العصب الوركي والألم اختبار فرط الحساسية في الفئران

شبكية العين مفرزة النموذجي في القوارض بواسطة حقن تحت الشبكية من هيالورونات الصوديوم

التجريبية الزرق المستحث بواسطة حقن العيني من المجهرية المغناطيسي

Temporomandibular Joint Pain Measurement by Bite Force and Von Frey Filament Assays in Mice

نموذج Monoiodoacetate الألم في التهاب المفاصل في الماوس

نموذج زرق المستحث بخياطة سيركومليمبال في الجرذان والفئران

التدابير العفوية ومقولة الألم في نماذج مورين من الأم في الركبة مونوارتيكولار

المطحنة الضغط الإيجابي السفلي للجسم لإعادة التأهيل هشاشة العظام الركبة

تطبيق بضع الوخز بالإبر في نموذج هشاشة العظام في الركبة في الأرانب

تطبيق بضع الوخز بالإبر في نموذج هشاشة العظام في الركبة في الأرانب