تتبع النسب وتحليل التخفي في تطوير قشرة الدماغ باستخدام تحليل الفسيفساء مع علامات مزدوجة (MADM)

تحليل الفسيفساء مع التكنولوجيا علامات مزدوجة هو وسيلة قوية التي يمكن أن توفر معلومات كمية للغاية حول سلوك الانتشار والمخرجات قبو من الخلايا الجذعية الأفراد. وهناك سمة فريدة من هذه التقنية، هو أنه يسمح تتبع النسب والتحليل الوراثي الوظيفي للجينات المرشحة في الخلية الموحدة level.demontrating إلى الإجراء سيكون، كارمن Streicher، فني الخاص بك، نيكول Amberge، ما بعد doc، Gisselle تشيونغ، ما بعد وثيقة وأندي هانسن، وهو طالب دكتوراه من مختبري. للحث على أحداث إعادة الدمج MADM في الفئران التجريبية، استخدم حقنة 1 مل مجهزة بإبرة قياس 25 لتقديم حقنة واحدة من تاموكسيفين Intraperitoneal في سد موقوت إلى سد الحوامل. من تحليل MADM التخفي إلى نقاط وقت ما بعد الولادة. في الأيام الجنينية 18 إلى 19، ضع فأرة حامل في موضع الوبين وطهر الفراء بنسبة 70٪ الإيثانول. إجراء شق صغير في الجلد في أسفل البطن فوق الرحم وإجراء شق ثان من خلال العضلات وجدار العضلات البطن للكشف عن الصفاق. استخدم المقص لفصل الرحم عن الأنسجة المحيطة ووضع الرحم السليم في قفاز مع الماء الدافئ. ثم استخدم مقص التلميح والأصابع الجميلة لفتح جدران الرحم بعناية لإطلاق الأجنة. تنظيف الجراء بلطف الضغط على الصدور من وقت لآخر لبدء التنفس قبل نقل الحيوانات قبل الولادة إلى الأم بالتبني. لجمع الأنسجة المستنسخة العصبية MADM مكان تخدير في موقف supine على علبة جراحة الضخ وتطهير الفراء مع 70٪ الإيثانول. استخدم المقص والملقط لإجراء شق واحد من خلال الجلد وشق واحد من خلال طبقة العضلات. عندما يكون تجويف الصدر مرئيًا ، شم ورفع الحجاب الحاجز للكشف عن القلب وتقليم القفص الصدري بعناية ودبابيسه إلى tray.insert الجراحية إبرة متصلة بمواسير مضخة مُطَدَّقة بـ PBS في البطين الأيسر السفلي من القلب واستخدام مقص قزحية صغيرة لإجراء شق في الطرف الخلفي من الأذين الأيمن. Perfuse نظام القلب والأوعية الدموية مع برنامج تلفزيوني تليها مباشرة من قبل perfusion مع الجليد الباردة الطازجة أعدت 4٪ paraformaldehyde في برنامج تلفزيوني. عندما يكون الضخ كاملًا ، قم بإزالة الدماغ من خلال تشريح دقيق ووضع العضو المقطوع في ما لا يقل عن خمسة أضعاف حجم الدماغ من 4٪ paraformaldehyde الطازجة بين عشية وضحاها في 4