Çift Marker (MADM) ile Mozaik Analizi Kullanarak Serebral Korteks Geliştirilmesinde Soy İzleme ve Klonal Analizi

Çift Marker teknolojisi ile Mozaik Analizi bireylerin kök hücrelerinin çoğalma davranışı ve mahzen çıkışları hakkında son derece nicel bilgi sağlayabilen güçlü bir yöntemdir. Bu tekniğin eşsiz bir özelliği, tek hücre düzeyinde aday genlerin soy izleme ve fonksiyonel genetik analizizin izin verilmesidir.prosedüre demontrating, Carmen Streicher, teknisyen, Nicole Amberge, post-doc, Gisselle Cheung, post-doc ve Andy Hansen, benim laboratuvar bir doktora öğrencisi olacaktır. Deneysel Farelerde MADM rekombinasyon olaylarını indüklemek için, gebe barajına zamanlanmış bir tamoksifen intraperitoneal enjeksiyonu yapmak için 25 gauge iğne ile donatılmış 1ml'lik bir şırınga kullanın. MADM klonal analizinden doğum sonrası zaman noktalarına kadar. Embriyonik günlerde 18-19, supine pozisyonda hamile bir fare yerleştirin ve% 70 etanol ile kürk dezenfekte. Rahim üzerinde alt karın deride küçük bir kesi yapmak ve periton ortaya çıkarmak için kaslar ve karın kas duvarı ile ikinci bir kesi yapmak. Rahimi çevre dokulardan ayırmak için makas kullanın ve bozulmamış rahmi ılık suyla bir eldivene yerleştirin. Sonra dikkatle embriyolar serbest bırakmak için rahim duvarları açmak için ince ucu makası ve parmakkullanın. Doğum öncesi hayvanları koruyucu anneye aktarmadan önce nefes almaya başlamak için zaman zaman göğüslerine hafifçe basan yavruları temizleyin. Nöral MADM Klon Doku toplamak için bir perfüzyon ameliyat tepsisi üzerinde supine pozisyonda anestezi li bir hayvan yerleştirin ve% 70 etanol ile kürk dezenfekte. Kas tabakası ile deri ve bir kesi ile bir kesi yapmak için makas ve forceps kullanın. Torasik kavite görünür olduğunda, kalbi ortaya çıkarmak için diyaframı koklayın ve kaldırın ve göğüs kafesini dikkatlice kırpın ve cerrahi tepsiye sabitleyin.PBS ile dolu bir iğneyi kalbin sol alt ventrikülüne bağlayın ve sağ atriumun arka ucunda bir kesi yapmak için küçük İris makasları kullanın. Kardiyovasküler sistemi PBS ile perfüzyon ve hemen ardından pbs'de taze hazırlanmış buz soğuk %4 paraformaldehit ile perfüzyon yapın. Perfüzyon tamamlandığında, dikkatli diseksiyonu ile beyin çıkarın ve en az beş kez taze% 4 paraformaldehit beyin hacmi 4 gecede hasat organ yerleştirin