二重マーカーを用いたモザイク解析を用いた大脳皮質の開発における系統トレースとクローン解析(MADM)

二重マーカー技術によるモザイク解析は、個人幹細胞の増殖行動やセラー出力に関する定量的な情報を提供できる強力な方法です。この技術のユニークな特徴は、単一細胞レベルでの候補遺伝子の系統追跡と機能的遺伝子解析を可能にすることです。プロシージャにカルメン・シュトライヒャー、あなたの技術者、ニコール・アンバージ、ポストドック、ギゼル・チョン、ポストドクターとアンディ・ハンセン、私の研究室の博士課程の学生です。実験マウスでMADM再結合イベントを誘導するには、25ゲージ針を装着した1mlシリンジを使用して、タモキシフェン内腹腔内を妊娠ダムに1回注射します。MADMクローン解析から出生後の時点まで。胚の日に 18 から 19, 妊娠マウスを supine 位置に置き、70%エタノールで毛皮を消毒します。子宮の上の下腹部の皮膚に小さな切開を行い、腹膜を明らかにするために筋肉と腹筋壁を通して2回目の切開を行います。はさみを使用して周囲の組織から子宮を分離し、無傷の子宮を温水で手袋に入れます。その後、細かい先端のはさみと指を使用して子宮壁を慎重に開き、胚を放出します。出生前の動物を里親に移す前に、時々胸を静かに押して呼吸を開始する子犬をきれいにしてください。神経MADMクローン組織を収集するには、麻酔手術トレイ上のスペシン位置に麻酔動物を配置し、70%エタノールで毛皮を消毒します。はさみと鉗子を使用して、皮膚を通して1つの切開を行い、筋肉層を通して1つの切開を行います。胸腔が見える場合は、横隔膜を嗅いで心臓を明らかにし、リブケージを慎重に整頓して手術トレイに固定します。PBSで心血管系を穿ファズし、その後すぐに新たに調製した氷冷4%パラホルムアルデヒドをPBSで灌流する。灌流が完了したら、慎重な解剖を通して脳を取り除き、収穫した器官を新鮮な4%パラホルムアルデヒドの脳容積の少なくとも5倍に4%で一晩置く