使用双标记 （MADM） 的马赛克分析开发脑皮质的血统跟踪和克隆分析

使用双标记技术的马赛克分析是一种强大的方法，可以提供有关个体干细胞的增殖行为和地窖输出的定量信息。这项技术的一个独特特点是，它允许在单细胞水平上对候选基因进行血统追踪和功能性基因分析。为了在实验鼠体内诱导 MADM 重组事件，请使用装有 25 量表针的 1ml 注射器将塔莫西芬内丙酮的单注注射到怀孕大坝的定时大坝中。从 MADM 克隆分析到产后时间点。在胚胎日18至19日，将怀孕小鼠放在苏皮位置，用70%乙醇对毛皮进行消毒。在子宫上方的下腹部皮肤上做一个小切口，并通过肌肉和腹部肌肉壁进行第二个切口，以揭示腹膜。用剪刀将子宫与周围组织分开，用温水将完整的子宫放入手套中。然后用细尖剪刀和手指小心地打开子宫壁释放胚胎。清洁幼崽时不时轻轻按压胸部，开始呼吸，然后再将产前动物转移到养母身上。为了收集神经 MADM 克隆组织，将麻醉动物放在灌注手术托盘上的上部位置，用 70% 乙醇对毛皮进行消毒。使用剪刀和钳子通过皮肤做一个切口，通过肌肉层切口。当胸腔可见时，嗅探并抬起隔膜以露出心脏，并小心地修剪和固定肋骨笼到手术托盘上。 将一根针插入连接到充满PBS的腹腔泵管，插入心脏左下心室，并使用小虹膜剪刀在右中庭的后端进行切口。将心血管系统与 PBS 一起灌注，然后立即灌注新准备的 4%半成甲醛在 PBS 中。灌注完成后，通过仔细解剖去除大脑，将收获的器官放在至少五倍的新鲜4%半甲醛的脑容量过夜4