איתור השושלת וניתוח שבטים בפיתוח קליפת המוח באמצעות ניתוח פסיפס עם סמנים כפולים (MADM)

ניתוח פסיפס עם טכנולוגיית סמנים כפולים היא שיטה רבת עוצמה שיכולה לספק מידע כמותי מאוד על התנהגות התפשטות ותפוקות מרתף של תאי גזע בודדים. תכונה ייחודית של טכניקה זו, היא שהיא מאפשרת מעקב שושלת וניתוח גנטי תפקודי של גנים מועמדים ברמה תא יחיד.demontrating לפרוצדורה יהיה, כרמן שטרייכר, הטכנאי שלך, ניקול אמברג', פוסט דוק, ג'יזל Cheung, פוסט דוק ואנדי הנסן, דוקטורנט מהמעבדה שלי. כדי לגרום לאירועי קומבינציה של MADM בעכברים ניסיוניים, השתמש במזרק 1 מ"ל המצויד במחט 25 מד כדי לספק זריקה אחת של טמוקסיפן אינטרפריטונאלי לסכר מתוזמן להריון. מניתוח שיבוט MADM לנקודות זמן לאחר הלידה. בימים עובריים 18 עד 19, מניחים עכבר בהריון בתנור supine ולחטא את הפרווה עם 70% אתנול. בצע חתך קטן בעור בבטן התחתונה מעל הרחם ולעשות חתך שני דרך השרירים ואת דופן שרירי הבטן כדי לחשוף את peritoneum. השתמש במספריים כדי להפריד את הרחם מן הרקמות שמסביב ולמקום את הרחם שלם לתוך כפפה עם מים חמים. לאחר מכן השתמש מספריים קצה עדין ואצבעות כדי לפתוח בזהירות את קירות הרחם כדי לשחרר את העוברים. נקה את הגורים בעדינות לחיצה על החזה מעת לעת כדי ליזום נשימה לפני העברת בעלי החיים טרום לידתי לאם מאמצת. כדי לאסוף רקמת שיבוט MADM עצבית למקם חיה הרדמה בתמורת סופין על מגש ניתוח קיפוב ולחטא את הפרווה עם 70% אתנול. השתמש מספריים ומדפים כדי להפוך חתך אחד דרך העור חתך אחד דרך שכבת השריר. כאשר חלל בית החזה נראה לעין, לרחרח ולהרים את הסרעפת כדי לחשוף את הלב בזהירות לקצץ ולהצמיד את כלוב הצלעות למגש כירורגי.הכנס מחט המחוברת צינור משאבה פריסטלטית מלא PBS לתוך החדר השמאלי התחתון של הלב ולהשתמש מספריים איריס קטנה לעשות חתך בקצה האחורי של ההתנפחות הימנית. התבגר במערכת הלב וכלי הדם עם PBS ואחריו מיד על ידי זלוף עם קר קרח מוכן טרי 4% paraformaldehyde ב PBS. כאשר הזליבה הושלמה, להסיר את המוח באמצעות ניתוח זהיר ולמקום את האיבר שנקטף לפחות חמש פעמים את נפח המוח של טרי 4% paraformaldehyde לילה ב 4