تجارب شريحة الدماغ تسمح بالاستجواب من وظيفة الخلايا العصبية مع ارتفاع القرار الكهربائية والزمانية، ولكن هذه الشرائح عادة قطع العديد من الاتصالات presynaptic. تحافظ شريحة على شكل إسفين على دوائر بريسينابتيك أكثر سليمة. هذه شريحة الدماغ المعدلة يحافظ على أكثر اكتمالا في دائرة الخلايا العصبية مثل الجسم الحي مع توفير فوائد التجريب في المختبر, مثل تسجيلات المشبك التصحيح الموجهة بصريا, علم الصيدلة, وتصوير النشاط.
يمكن تقدير دقة هندسة إسفين شرائح على أساس مواقع أطلس الخلايا العصبية داخل الدائرة ، ولكن يجب تحديد سلامة المخططات و المحاور الأولية باستخدام الأنسجة. ابدأ باستخدام شفرة حلاقة لقطع الجلد عند خط منتصف الجمجمة من الأنف إلى الجزء الخلفي من الرقبة. قشر مرة أخرى الجلد لفضح الجمجمة والبدء من قاعدة الجمجمة والاستمرار في اتجاه الأنف، واستخدام مقص صغير لجعل شق في الجمجمة من خلال خط الوسط.
في خياطة لامدا، جعل التخفيضات في الجمجمة من خط الوسط في الجانب نحو الأذن على كلا الجانبين لقشر الجمجمة مرة أخرى لفضح الدماغ. بدءا من نهاية الرسترال، واستخدام ملعقة مختبر صغير لرفع بلطف الدماغ من الجمجمة للسماح للأعصاب البصرية أن تكون مقطوعة. الاستمرار في العمل بلطف الدماغ إلى الوراء، وفضح السطح البطني واستخدام ملقط غرامة لقرصة بعناية الأعصاب ثلاثية التوائم بالقرب من السطح البطني من جذع الدماغ لقطعها.
وضع إعداد في طبق بيتري الزجاج مليئة حل تقطيع الباردة ووضع الطبق تحت مجهر تشريح. تقليم أعصاب الوجه على مقربة من جذع الدماغ لفضح الأعصاب التشنجية. استخدام ملقط غرامة لدفع النصائح في foramina حيث يخرج العصب الستريموزيج الجمجمة قدر الإمكان.
قرصة لقطع الأعصاب على كلا الجانبين، وترك جذر العصب تعلق على جذع الدماغ. إزالة السحايات والأوعية الدموية من السطح البطني للدم المدبر بالقرب من الجسم شبه المنحرف. ثم قرصة الأعصاب القحفية المتبقية والأنسجة الضامة لتحرير الدماغ تماما من الجمجمة، مع الحرص على الحفاظ على الحبل الشوكي المتبقي، إذا كان ذلك ممكنا.
لإعداد سطح الدماغ لاعبا اساسيا للمرحلة مكان الجانب الدماغ البطني حتى واستخدام أداة حادة لشل بلطف الحبل الشوكي لتحقيق الاستقرار في أنسجة الدماغ. إدراج ملقط مفتوحة في زاوية 20 درجة تقريبا من خلال الدماغ إلى الجزء السفلي من الطبق بحيث نصائح الخروج من سطح الظهر من الcaudal الدماغ إلى شيازم البصرية واستخدام شفرة حلاقة لقطع على طول ملقط. المقبل، وإعداد كتلة سنتيمتر مكعب واحد من 4٪ أجار ونشر قطرة صغيرة من الغراء في مستطيل على خشبة المسرح.
استخدام ملقط لرفع بعناية الدماغ وداب بلطف السائل الزائد مع حافة منشفة ورقية. ثم ضع السطح المحجوب على الغراء بحيث يكون السطح البطني يواجه اتجاه النصل أثناء التقطيع ودفع كتلة agar بلطف ضد سطح الظهر كدعم. للحصول على شرائح إسفين مع جذر العصب القوقعة على الجانب السميك والخلايا العصبية olivocochlear الوسيطة ونواة الوسط من الجسم شبه المنحرف على الجانب رقيقة، ووضع القرص المغناطيسي مع الدماغ المرفقة على حامل المرحلة ووضع حامل في غرفة تشريح من هزاز مع السطح البطني للدماغ الموجهة نحو النصل.
ملء الغرفة مع الجليد الباردة تقطيع الحل وخفض شفرة في حل فقاعة كاربوجين. قطع شرائح caudal إلى المنطقة ذات الأهمية للتأكد من أن الشرائح متناظرة. ثم تحول المرحلة ما يقرب من 15 درجة إلى جانب واحد.
استمر في التقطيع بعناية حتى يكون جذر العصب السمعي قريبًا من السطح على جانب واحد ويمكن رؤية عصب الوجه على سطح الجانب الآخر من الشريحة. تحويل المرحلة 15 درجة إلى الوضع الأصلي ونقل النصل بعيدا عن الأنسجة. تدور قاعدة المرحلة 90 درجة بحيث الحافة الجانبية للجانب رقيقة تواجه شفرة وخفض شفرة عدة مئات من ميكرون قبل جلب ببطء شفرة قريبة من حافة الأنسجة.
مع شفرة تراجع قليلا انخفاض شفرة إلى سمك المطلوب من حافة رقيقة من شريحة. نقل شفرة مرة أخرى من الأنسجة وتدور قاعدة المرحلة مرة أخرى بحيث يواجه السطح البطني قاعدة المرحلة. جعل قطع لتعيين السطح الرسترالي لشريحة إسفين ونقل شريحة إلى قطعة سنتيمتر مربع واحد من سطح caudle ورقة واجهة أسفل.
يجب أن يكون العصب الوجهي مرئيًا على كلا نصفي الكرة الأرضية من الشريحة على السطح التاجي. ثم حرك الشريحة إلى غرفة حضانة 35 درجة مئوية للتعافي لمدة 30 دقيقة. لإعداد شريحة إسفين لتحليل الفيزيولوجيا الكهربائية ضع العينة في غرفة تسجيل يتم غرسها باستمرار مع ACSF 35 درجة مئوية وتثبيت الشريحة.
باستخدام البصريات DIC، والتركيز على جذر العصب السمعي على الجانب السميك من شريحة واستخدام micromanipulator لتحريك القطب القطبين التنغستن تحفيز إلى جذر العصب السمعي وبلطف في سطح الأنسجة. نقل مجال الرؤية إلى نواة البطن من الجسم شبه المنحرف على الجانب رقيقة واختيار الخلايا العصبية olivocochlear المتوسطة كهدف للتجميل المشبك electrophysiology تحت epifluorescence باستخدام مرشح انبعاث نانومتر 561. ملء ماصة تسجيل مع الحل الداخلي المناسب للتجربة المقترحة وتحت التصحيح البصريات DIC وسجل من الخلايا العصبية olivocochlear المتوسطة في تكوين الخلية بأكملها.
ضبط سعة التحفيز الكهربائي من جذر العصب السمعي للحصول على أحداث ما بعد الطمث متسقة في الخلايا العصبية olivocochlear الوسط. ثم تشغيل بروتوكولات التحفيز المناسبة لمراقبة التيارات متشابك أثار في الخلايا العصبية olivocochlear الوسط. تم تصميم هذا إعداد شريحة إسفين لاحتواء جذر العصب السمعي ونواة قوقعة contralateralral إلى الخلايا العصبية olivocochlear الوسط المستهدف للتسجيلات.
في هذا الكرسيل البنفسجي الملون شريحة إسفين ية 1100 نواة القوقعة موجودة في ما يقرب من كامل نطاق السدية. ويلاحظ جذر العصب السمعي دخول نواة القوقعة. بالإضافة إلى ذلك، شريحة إسفين يحتوي على الخلايا العصبية من نواة وسيطة من ipsilateral الجسم شبه المنحرف إلى الخلايا العصبية olivocochlear الوسيط الذي يتم تنفيذ التسجيلات.
لتأكيد الاتصال العصبي داخل شريحة إسفين المدخلات presynaptic يتم تحفيز بطريقتين. أولاً، يتم تحفيز stria الصوتية البطنية في خط الوسط كهربائيًا، مما ينشط المحاور T-ممتاز مباشرة والنواة المتوسطة للخلايا العصبية في الجسم شبه المنحرف عبر تحفيز محور عصبي الخلايا البطيخية الناتجة عن التيارات التي يتم قياسها في الخلايا العصبية الوسيطة olivocochlear. ثم يتم تحفيز جذر العصب السمعي لتنشيط الدوائر كامل جذع الدماغ الصاعد مونوريوم واستحضار الاستجابات بعد البينات.
المقارنة بين مقاييس الكمون بداية من تيار ما بعد التشنج الأول التي أثارت مع التحفيز المباشر للstria الصوتية البطنية مع تلك التي أثارت مع تحفيز العصب السمعي يكشف عن زمن أطول بكثير في الحدث تحفيز العصب السمعي، مما يدل على التأخير متشابك الناتجة عن نقاط الاشتباك العصبي نواة قوقعة إضافية تنشيط أثناء تحفيز العصب السمعي. استخدام المعالم التشريحية والمناورة الدقيقة من مرحلة القرص المغناطيسي حاسمة لخلق شرائح إسفين مع الدوائر العصبية سليمة وموثوق بها أثار ردود الاشتباك العصبي. هذه تقنية تشريح يوفر منصة لاستخدام إضافية في علم الفيزيولوجيا الكهربائية في المختبر بما في ذلك الكالسيوم أو الجهد التصوير، optogenetics، غير اللافتة العصبية، وكلاهما الصيدلية داخل الخلايا وخارج الخلية.
