إصابة الإقفار-reperfusion الجهاز عن طريق محاكاة التغيرات الديناميكية الدموية في نموذج زرع كبد الفئران. إصابة الإقفاري بالوريد هو تطبيق شائع بعد زراعة الكبد. المرضى الذين يعانون من مشاركة الجهاز خارج الكبد تميل إلى البقاء لفترة أطول في المستشفى، وقضاء المزيد ويكون أسوأ التكهن.
يرتبط تطور المضاعفات ارتباطًا وثيقًا بطول المرحلة الوهنية لزراعة الكبد. ومع ذلك، أظهرت الأبحاث الأساسية في إصابة الإقفار- reperfusion بعد زرع الكبد أن معدل البقاء على قيد الحياة بعد زرع الكبد يرتبط عكسيا لدرجة إصابة الأعضاء خارج الشهية. استنادا إلى تعريف المرحلة anhaptic، قمنا محاكاة تغيير ديناميكا الدم في زرع الكبد مما أدى إلى إصابة الإقفاريات- reperfusion من الأجهزة خارج الجسم.
من هذه الورقة هو تقديم وصف مفصل لكيفية بناء نموذج حيواني للمرحلة anhaptic في الفئران ، والبحوث الأساسية في إصابة نقص التروية - reperfusion بعد زرع الكبد. الدكتور يوان يوان هو المسؤول عن جميع العمليات الحيوانية الفيديو. اثنين من ملقط العيون، مستقيم والانحناء، وعدسة بينوية، ملقط IOL، مقص العيون، واحد إلى اثنين من الداخرات، مسحات القطن، 3-0 الغرز الجراحية، الشاش الودودفورم، الإبر خياطة، النظم الحيوية عند الضرورة، والعدسة بينات، وتستخدم لمصاصات IOL لفصل الأوعية الدموية بسبب الرؤوس المستديرة.
آلة تخدير الحيوان، آلة دي سقي، آلة تضمين، تقطيع اللحمة المرضية ، آلة متجمدة ، تقطيع الأنسجة ، فرن تجفيف الهواء ، المجهر البصري العصبي ، الماسح الضوئي ، enflurane للتخدير العام ، محلول 4٪ paraformaldehyde ، الإيثانول الأنهيدروس ، الزيلين ، شمع البارافين عالي الكفاءة ، محلول صبغ الهماوكسيلين - إيوسين ، حمض الهيدروكلوريك ، الأمونيا ، الشريحة ، الزجاج المغطى ، العلكة المحايدة والكواشف المُحتَضرة . الميصات، الطرد المركزي، محلل الكيمياء الحيوية التلقائي، ألانين نقل أميني، عدة ALT، الأسبارتات، نقل الأمينية، مجموعة AST، طقم الكرياتينين. بعد وزنها ، يتم تخدير الفئران مع isoflurane بواسطة آلة تخدير الحيوان.
بعد تطهير البطن، وجعل شق متوسط من ثلاثة سنتيمترات تحت عملية xiphoid باستخدام ملقط ومقص. فتح تجويف البطن، وفضح الكبد باستخدام الداخر وتعبئة الرباط الكبدي. استخدام مسحات القطن لقلب الفص الأوسط للكبد بلطف وتحويلها إلى أعلى لفضح الـ porta habitis.
تحديد القناة الصفراوية، الوريد المدخل، والشريان الكبدي. دفع الأمعاء الدقيقة نحو تجويف البطن السفلي الأيسر باستخدام مبادلات القطن ونقل الوريد السفلي cava إلى الوريد الكلوي الأيمن، وعزل الوريد المدخل، الشريان الكبدي والكافا السفلي فوق الوريد الكلوي الأيمن مع عدسة داخل العين، IOL، ملقط ملحوظ مع 3-0 خيط حرير كل عقدة زلة. قطع فتح الجلد من الطرفين السفلي الأيسر والأيمن وفضح الوريد الفخذي باستخدام ملقط العيون.
حقن ببطء منخفض الوزن الجزيئي الهيبارين 625 وحدة دولية / كغ من خلال الوريد الفخذي ل heparinize الجسم كله. Ligate الوريد المدخل، الشريان الكبدي، والكافا السفلية فوق الوريد الكلوي الأيمن مع عدد 3-0 الغرز، وتستمر لمدة 45 دقيقة. استبدل الأمعاء الدقيقة في تجويف البطن واغطيها بالشاش.
يتم تقليل التخدير الاستنشاقي خلال هذه الفترات. بعد 45 دقيقة، حرر الوريد المدخل، الشريان الكبدي، والكافا السفلية فوق الوريد الكلوي الأيمن. خياطة العضلات والجلد طبقة من طبقة وإنهاء التخدير الاستنشاقي.
توفير مسكن بعد العملية الجراحية باستخدام المورفين تحت الجلد من 5 ملغ / كغ كل أربع ساعات مراقبة الفئران حتى مستيقظا والحفاظ على تغذية تحت درجة حرارة 25 زائد أو ناقص درجتين مئويتين والرطوبة من 50 زائد أو ناقص 10 ٪ مصابيح التدفئة الحيوانية ضروري. في هذا النموذج الحيواني، تم تقسيم الجرذان بشكل عشوائي إلى خمس مجموعات وفقا لاقفوية لمدة 15 دقيقة، وأنا 15 مجموعة، 30 دقيقة، أنا 30 مجموعة، 45 دقيقة، أنا 45 مجموعة، 60 دقيقة، أنا 60، ومجموعة صورية مع 10 فئران في كل مجموعة. ولوحظ معدل بقائهم على قيد الحياة لكل مجموعة بعد 14 يوما من العملية.
جميع الفئران نجت في I 15، أنا 30 والجماعات الصورية. نجا ثمانية لمدة 14 يوما في المجموعة I 45 واثنين فقط على قيد الحياة في المجموعة I 60. وتشير النتائج إلى أن الفئران يمكن أن تتسامح مع المرحلة anhepatic لمدة 45 دقيقة على الأكثر.
خلال التجربة، تم استخدام النظم الحيوية لتسجيل التغيرات في معدل ضربات القلب وضغط الدم، والحق الداخلي الشريان النوب قبل وبعد المرحلة anhepatic. وجدنا أن معدل ضربات القلب ويعني ضغط الشرايين، خطة الفئران، تغيرت بشكل كبير بعد ربط الأوعية الدموية. بعد الربط، نقص التروية الكبدي، والاحتقان، وذمة في الأمعاء، وسبوالي المعدة وsplenomegaly كانت واضحة.
تم تقسيم 80 الفئران عشوائيا إلى ثماني مجموعات بما في ذلك نقص التروية لمدة 45 دقيقة، T0، reperfusion لمدة ست ساعات، T6، 12 ساعة، T12، 24 ساعة، T24، 48 ساعة، T48، 72 ساعة، T72، سبعة أيام، T7، في 14 يوما، T14، على التوالي. تم أخذ الكلى والبنكرياس والأمعاء الدقيقة وأنسجة القلب والرئة وملطخة بـ HE بعد التضحية بالجرذان. باستثناء القلب ، تم إعطاء درجات مرضية وفقًا للإشارات ، على التوالي.
وأظهرت النتائج أن وقت الإصابة القصوى للأعضاء خارج الكبد تختلف. كانت ست إلى 24 ساعة بعد العملية في البنكرياس و 24 إلى 48 ساعة للرئتين. أصيب الجهاز المعوي والكلى بجروح بالغة بعد 45 دقيقة من نقص التروية.
لم يكن هناك أي شذوذ واضح في الغشاء المخاطي المعوي بعد 24 ساعة من العملية وتم شفاء الكلى بعد 48 ساعة. أما بالنسبة للقلب ، مع مرور الوقت بعد إعادة ضخ ، تم العثور على مخدار الخلايا عضلة القلب المحلية ، وتفتيت الخلايا وانحلالها ، وتسلل الخلايا الالتهابية ، والامتدنة والازدحام الموضعي في الأنسجة من 24 إلى 48 ساعة بعد العملية. تم جمع المصل وتم الكشف عن مستويات ALT و AST والكرينينين والأميليز بواسطة محلل كيميائي حيوي تلقائي.
بلغت جميع المؤشرات ذروتها في 24 إلى 48 ساعة ، على عكس التغيرات المرضية. على الرغم من أن المستويات كانت طبيعية بشكل أساسي بعد 48 ساعة من العملية ، فإن الضرر المرضي كان لا يزال مستمرًا. لتلخيص, النموذج في الفئران بسيطة وأسهل للاستخدام دون microsurgery ويوفر أساسا للبحوث الأساسية للإصابة الإقفاريات-reperfusion من الأجهزة خارج الكبد بعد نقص التروية الكبدي.
