يحسن بروتوكول إزالة الأنسجة الجديد هذا التكنولوجيا الحالية للسماح بالنظر بشكل أكثر دقة في الجسم الحي إلى أنواع خلايا محددة في القلب وسلوكها في ظل ظروف الإصابة. هذا البروتوكول سريع وبسيط إلى حد ما. فإنه يسمح للحفاظ على مضان ماركا مع الحد الأدنى من التدخل من الفلورسينس السيارات الأنسجة الخلفية دون الحاجة إلى تلطيخ الخلايا أو الأنسجة.
ابدأ باستخدام وسادة شاش غارقة في الإيثانول بنسبة 70٪ لتنظيف السطح البطني للفأر التجريبي. استخدام مقص الجراحية لجعل شق عرضية ثلاثة سنتيمترات، ما يقرب من ثلاثة أمتار تحت عملية xiphoid و deglove الماوس من البطن إلى عملية xiphoid لفصل الجلد من أنسجة جدار البطن الكامنة. إجراء شق عرضي سنتيمترين في نسيج جدار البطن تحت الجلد، ثلاثة سنتيمترات تحت عملية xiphoid وجعل قطع عمودي من هذا الشق حتى خط الوسط من خلال القفص الصدري.
ثبت القفص الصدري مرة أخرى لفضح القلب. واستخدام حقنة 10 ملليلتر مجهزة إبرة قياس 27 لحقن برنامج تلفزيوني الباردة في كافا فينا متفوقة وorta. عندما يتم مسح كل من الدم من القلب، وتقديم 10 ملليلتر من البرد 4٪ PFA في الكافا فينا متفوقة والهرطية لبدء عملية التثبيت.
عندما تومض كل من المثبتة، استئصال القلب واستخدام مشرط شفرة مستقيمة لفصل الأذين والبطين الأيمن والحاجز والبطين الأيسر. ضع القلب في أنبوب مخروطي 15 ملليلتر من PFA الباردة 4٪ لاحتضان بين عشية وضحاها في أربع درجات مئوية على نوتاتور. في صباح اليوم التالي، إضافة 0.25٪ حل البادئ الصورة إلى حل الهيدروجيلات أعدت حديثا ونقل القلب إلى هلام المائية.
التفاف أنبوب مخروطي في احباط لاحتضان بين عشية وضحاها في أربع درجات مئوية دون اضطراب جسدي. في صباح اليوم التالي دافئة الأنبوب في حمام حبة 37 درجة مئوية لمدة 2.5 ساعة قبل استخدام ملقط لنقل القلب بعناية إلى أنبوب 15 ملليلتر من برنامج تلفزيوني. غسل القلب ثلاث مرات في برنامج تلفزيوني لمدة ساعة واحدة لكل غسل في 37 درجة مئوية على نوتاتور ونقل القلب إلى سلة من آلة الكهربائي النشط.
تأمين الغطاء في مكان وملء خزان غرفة الكهربائي النشط مع محلول إزالة الكهربائي. بمجرد أن تمتلئ الغرفة ، اغمر السلة في المحلول وشد الغطاء على آلة الكهربائي في مكانه. ثم تشغيل آلة الكهربائي في 1.5 أمبير و 37 درجة مئوية لمدة 1.5 ساعة.
بعد الإلكتورفوريز، تحقق من القلب بصريا للتأكد من عدم وجود أنسجة مبهمة. غسل القلب مسح ثلاث مرات في 15 ملليلتر اثنين لمدة ساعة واحدة في برنامج تلفزيوني جديد في 37 درجة مئوية لكل غسل على نوتاتور. قبل غمر القلب في عامل إزالة اللون للحد من مضان السيارات هيم.
بعد 48 ساعة، اغسل القلب ثلاث مرات في برنامج تلفزيوني كما هو موضح وتوازن القلب في RIMS المعدة حديثا لمدة 48 ساعة قبل التصوير. للتصوير ثلاثي الأبعاد للقلب المطهي، أولا، ضع طبقة رقيقة من الشحوم الفراغية على الجزء السفلي من خزان قاع مطبوع ثلاثي الأبعاد، وهو نفس ارتفاع العينة التي يتم تصويرها. ملء الخزان مع RIMS واستخدام تلميح ماصة لإزالة أي فقاعات.
ضع القلب بعناية في RIMS مع الجدار البطيني الأيسر المواجه لأعلى ، مع الحرص على عدم إدخال أي فقاعات في الحل. استخدام الشحوم فراغ لإرفاق زلة غطاء زجاجي إلى السطح السفلي من قطعة خزان أعلى المطبوعة 3D ووضع غطاء الخزان العلوي أسفل على الخزانات السفلية، مع الحرص على تجنب فقاعات. ثم ملء الخزانات الأعلى مع الجلسرين.
استخدام المجهر confocal لتصوير قلوب مسح. الجمع بين تطهير الأنسجة القلبية المكررة مع التصوير ثلاثي الأبعاد يسمح بتصور مفصل متقدم للخلايا الليفية القلبية. باستخدام تقنية التصوير هذه ، لوحظ أن الخلايا الليفية معبأة بكثافة وأن يكون لها مورفولوجيا مغزلية في قلوب غير مصابة.
بعد إصابة إعادة التروية ، يتم رؤية فقدان الخلايا الليفية القلبية في المنطقة الإقفارية في الأيام الثلاثة الأولى بعد الإصابة. وبحلول اليوم السابع وال14، هاجرت الخلايا الليفية أو انتشرت لإعادة إسكان منطقة الأنسجة المصابة. بحلول اليوم 28 ، يكون عدد الخلايا الليفية القلبية المحيطة بالمناطق المصابة في القلب في أكبر كثافة لها.
بعد يوم ونصف من إصابة احتشاء عضلة القلب، لا تزال الخلايا الليفية قليلة داخل البطين الأيسر المصاب. بحلول اليوم الثالث ومع ذلك ، فإن الخلايا الليفية توسيع ومتواجدة في معظم البطين الأيسر. على النقيض من الجراحة الإقفارية ، فإن ضخ أنجيوتنسين اثنين وفينولفرين على مدى عدة أسابيع لا يؤدي إلى فقدان أنسجة القلب وترقق الجدار.
بدلا من ذلك، محاذاة الخلايا الليفية على طول محور اليد اليمنى نمط انكماش الحلزون كما رأينا عند استخدام المكرر إلى بروتوكول إزالة الأنسجة. وبالإضافة إلى ذلك، بعد علاج أنجيوتنسين اثنين وفينولفيرين، تظهر الخلايا الليفية صغيرة وتقريبها بدلا من شكل المغزل لوحظ في نماذج من إعادة التروية وإصابات احتشاء عضلة القلب. يجب إجراء المقاصة الكهربائية بعناية خاصة عند العمل مع القلوب التي خضعت لبروتوكولات الإصابة.
يمكن استخدام هذا البروتوكول لتقييم كيفية تفاعل الخلايا الليفية القلبية مع الإصابة في الجسم الحي. يمكن أيضا استخدام علامات فلورية مختلفة لفهم كيفية استجابة القلب للإصابة على المستوى الخلوي.
