الميزة الرئيسية لهذه التكنولوجيا هي أنها تسمح للتصوير السريع لأي قلب الماوس. ويمكن استخدامه لمراقبة وجود قنوات الهواء بعد العلاج الجيني. على الرغم من أن هذه الطريقة يمكن أن توفر نظرة ثاقبة في أمراض القلب التنمية، فإنه يمكن أيضا أن تطبق على أنظمة أخرى، مثل علم الأعصاب والبولون.
عموما، سوف الأفراد النضال مع هذه التقنية لأن تركيب التصوير لقلب الماوس الكبار يمكن أن يكون صعبا، وانها مختلفة عن غيرها من التقنيات التقليدية، مثل المجهر confocal والمقلوب. ضع ليزر الموجة المستمرة مع ثلاثة أطوال موجية من 405 نانومتر و 473 نانومتر و 532 نانومتر. ثم، الصق مرآة واحدة ومحاذاتها مع مستوى المرآة عند 45 درجة إلى الشعاع.
هذا سيوجه الليزر نحو الفاصل شعاع، الذي يشكل الإعداد الإضاءة مزدوجة الجانب. بعد ذلك، تمرير شعاع من خلال مرشح كثافة محايدة قطرها 50 ملليمتر، وموسع شعاع، وثقب دبوس قطرها 25 ملليمتر، وكلها متمركزة 150 ملليمتر من بعضها البعض. مرر الشعاع من خلال مقسم شعاع 50-50، وضعت 150 ملليمتر من الثقب.
بعد ذلك، ضع مرآة 150 ملليمتر من مقسّم الشعاع، عند 90 درجة إلى الشعاع الأمامي، ومحاذاته بحيث يكون مستوى المرآة عند زاوية 45 درجة للشعاع. ثم، ضع مرآة ثلاثة 100 ملليمتر من المرآة الثانية، ومحاذاة بحيث انها مرآة الطائرة هو في زاوية 45 درجة إلى شعاع ينعكس من مرآة اثنين. استخدم هذا الشعاع المنعك لتشكيل جانب واحد من ورقة الإضاءة المزدوجة.
على الجانب البعيد من الفاصل شعاع، مكان مرآة خمسة بحيث انها مرآة الطائرة هو في 45 درجة إلى شعاع الذي ينبعث في اتجاه أمامي. استخدام شعاع المنبعث من مرآة خمسة لتشكيل الجانب الثاني من ورقة الإضاءة المزدوجة الخفيفة. بعد ذلك، قم بإعداد نظام الإضاءة المزدوجة الجانب بطريقة نظامية.
ضع العدسة الأسطوانية اثنين 150 ملليمتر بعيدا عن المرآة ثلاثة، وآخر عدسة أسطوانية متطابقة 150 ملليمتر بعيدا عن مرآة خمسة، على الجانب الآخر من الإعداد الإضاءة المزدوجة. بعد ذلك، ضع مرآتين، كل منها متماشياً مع العدسات الأسطوانية، على مسافات 50 ملليمتراً لتعكس الشعاع عند 90 درجة. على جانبي ورقة الضوء، تشكل مزدوجة اللونية من زوج من العدسات، مع العدسة الأولى يجري وضع 100 ملليمتر من المرآة السابقة، وبعد أن قطر بوصة واحدة و طول بؤري من 100 ملليمتر.
يجب وضع العدسة الثانية 160 ملليمتر من العدسة واحدة ، مع قطر بوصة واحدة ، وطول بؤري من 60 ملليمترا. ثم، ضع أهداف الإضاءة واحد واثنين 150 ملليمتر من المضاعفة اللونية السابقة، بحيث تكون في خط مع شعاع. يشكل الشعاع المنبعث من الأهداف ورقة الضوء لتصوير العينات.
أولاً، إعداد عينة حبة الفلورسنت عن طريق تمييع محلول حبة ميكرومتر 0.53، من واحد إلى 150،000، في محلول مطابقة معامل الانكسار قبل تسخينها، مع واحد في المئة منخفضة تذوب مشيرا agarose. بعد ذلك، استخدم قطعة من أنابيب الزجاج البورسليكات مع قطر داخلي من 12 ملليمتر، وقطر خارجي من 18 ملليمتر، إلى طول 30 ملليمتر. الميبت الحل agarose حبة في أنابيب البورسليكات والسماح لأغاروز لترسيخ في درجة حرارة الغرفة.
الآن، ملء غرفة ABS المطبوعة ثلاثية الأبعاد مع حل gylcerol بنسبة 99.5 في المائة. وضع أنابيب الزجاج borosilicate، التي تحتوي على الخرز، داخل الغرفة. إرفاق مرحلة تحويلية ثلاثية الأبعاد بمحركات إلى أنابيب زجاج البورسليكات للتحكم في حركة واتجاه العينة داخل غرفة ABS.
ثم، استخدم برامج مصممة خصيصا للحصول على الصور باستخدام كاميرا sCMOS، بمعدل 30 لقطة في الثانية. باستخدام وحدة تحكم المحرك، حرك العينة ملليمتر واحد في الاتجاه الجانبي، والحصول على الصور في كل زيادة ملليمتر واحد، حتى تم تصوير العينة بأكملها. كومة الصور المكتسبة باستخدام برنامج مرئي، وقياس وظيفة انتشار نقطة من النظام باستخدام هذه الصور حبة.
استخدم محلول مطابقة لمؤشر الانكسار، مع الرقم الـ 7.5، واذاب واحد بالمائة من الأكروز في محلول المطابقة. ضع عينة قلب فأرة بالغة واضحة في محلول مطابقة مؤشر الانكسار ، مع واحد في المئة agarose حل. ثم، أدخل العينة في أنابيب الزجاج البورسليكات، والسماح لأاغروز لترسيخ في درجة حرارة الغرفة.
إرفاق مرحلة تحويلية ثلاثية الأبعاد بمحركات إلى أنابيب زجاج البورسليكات للتحكم في حركة واتجاه العينة داخل غرفة ABS مطبوعة ثلاثية الأبعاد. ضع العينة بحيث تكون في وسط الشعاع الغاوسي ، الذي تم إنشاؤه بواسطة نظام الإضاءة المزدوج. ثم، تعيين معدل اقتناء الكاميرا sCMOS إلى 30 لقطة في الثانية.
الآن، باستخدام وحدة تحكم المحرك، حرك عينة ملليمتر واحد في الاتجاه المحوري والحصول على الصور في كل زيادة ملليمتر واحد. استمر حتى يتم تصوير النموذج بأكمله. قم بتكديس الصور المكتسبة باستخدام برنامج مرئي.
قم بتطوير الصور ثلاثية الأبعاد باستخدام رصة الصور هذه. لتحقيق ذلك ، deconvolve وظيفة انتشار نقطة محددة مسبقا ، واستخدامها للحصول على كومة الصورة المكتسبة. وأخيراً، قم بتعيين قيمة كثافة عتبة البكسل لمراقبة ملامح القلب، وإضافة لون زائف إلى الصور، استنادًا إلى هذه الكثافة الرمادية.
في اليوم واحد بعد الولادة، يمكن للمرء أن تصور الصمامات، الأذين، البطين، العضلات البكتين، وtrabeculation، من بين ميزات أخرى. في اليوم السابع بعد الولادة، تكون الميزات أكثر تحديدًا. الأذين، البطين، أبعاد تجويف البطين، وسمك جدار البطين كلها واضحة.
لدراسة تمايز cardiomyocyte داخل القلب ، تم تسمية الفئران heterozygous في وضع العلامات لإظهار cardiomyocytes. تظهر الخلايا المسماة هنا، في كل اتجاه من اتجاه الطائرة. تم دمج الطائرات الثلاث، لخلق تقديم 3-D من القلب.
المنطقة الحمراء الدائرة داخل inset يظهر اثنين من قلوب الماوس شفافة بعد خضوعه تقنية وضوح ويجري إدراجها في أنابيب الزجاج borosilicate. بالإضافة إلى دراسة الفئران بعد الولادة، يمكن استخدام نظام التصوير أيضًا لدراسة قلب الفأر البالغ. هنا، يتم عرض قنوات ROMK الموسومة من GFP في 7.5 أشهر.
وُجدت هذه الذّات بشكل رئيسي في جدار البطين. مرة واحدة يتقن، يمكن أن يتم هذا الأسلوب في دقيقة إلى دقيقتين. عند محاولة هذا الإجراء، من المهم إزالة جميع الفقاعات حول العينة في الأنبوب.
يمكن تنفيذ طرق أخرى، مثل تجزئة تكدس الصور تلقائيًا، للإجابة على أسئلة إضافية تتعلق بإصابة القلب والأوعية الدموية والتجدد. بعد تطورها ، استخدم الباحثون هذه التقنية لدراسة هندسة القلب في مراحل النمو بعد الولادة والبالغين في الفئران.
