الهدف العام لهذا الإجراء هو فصل الخلايا الجريبية والبويضات في الجريبات المبيضية من Zebrafish. الجريبي هو الوحدة الأساسية للمبيض ، والتي تتكون من البويضات والخلايا الجريبية المحيطة بها. وهي الأداة الواسعة لفصل كل من الخلية الجريبية والمقصورات الخارجية لسياسات البحث الجيد بما في ذلك الالتقاط الأولي للخلايا الجريبية وارتفاع التعبير الجيني ، وجميع التشبع والإخصاب في المختبر.
في الآونة الأخيرة، أصبح زيبرافيش نموذجا قويا من نيسان، الذي يدرس السيطرة على التنمية بالفعل. هنا، ونحن نقدم طريقة بسيطة، لذلك يفصل الخلايا الجريبية والبويضات من زيبرافيش الجريبي الذي سيسهل التحقيقات من التنمية بالفعل في زيبرافيش التجارية، لا كتلة أو اثنين يفصل حول الخلايا الجريبية وجميع جوانب يدور تستخدم آخر الذي لديه متاهة، تستغرق وقتا طويلا وكان ضرر كبير في الخارج. هنا، أنشأنا طريقة بسيطة لاثنين من مقصورات منفصلة باستخدام أو جزء من النظارات معدل تاميلا تحت الشعاب المرجانية النقية.
يمكن تصنيع نطاق المترو الخاص بنا ، سواء في الخارج أو الخلايا الجريبية بسهولة عن طريق كتابة الشعيرات الدموية الزجاجية المنسحبة. أولا، إعداد الشعرية الزجاجية الشاعر. ضرب رأس الشعيرات الدموية الزجاجية على الموقد الكحول.
استخدام أربعة جوانب لتمتد الشعرية الزجاجية إلى قطر بطاقة الهذيان. ثانيا، إزالة تلك الإفراط من الأسماك الإناث الكبار، وعزل بصيلات المبيض من المبيض. وأخيرا استخدام الشعيرات الدموية الزجاجية التي تم استطلاعها لفصل الخلية الجريبية وOocyte من بصيلات المبيض.
إعداد الشعيرات الدموية الزجاجية، حاوية حادة، قاطع وافرة، الموقد الكحول، والملقط. تكمن الموقد الكحول، واتخاذ المنزل كوب من الشعرية والحرارة نهاية واحدة من الشعيرات الدموية الزجاج على النار من الموقد الكحول. استخدام ملقط لعقد نهاية أخرى من الشعيرات الدموية الزجاجية، والتأكيد على الشعيرات الدموية الزجاج بسرعة وبلطف.
وضع النفايات الزجاجية إلى حاوية حادة. استخدام القاطع وافرة Gretch على حمام السباحة مع الزجاج. ثم قطع من قبل ملقط بلطف لجعل افتتاح سلس لللمحة الميناء حرق بسرعة نهاية الشعرية الزجاج على الموقد الكحول عدة مرات وفرك نهاية مفتوحة عن طريق قطع وافرة بعناية.
خذ كيف خزان السمك من نظام المياه المزروعة. والآن تربط الإناث البالغات عن طريق وضع الأسماك على الماء المثلج لمدة دقيقتين إلى خمس دقائق على الأقل حتى توقف الأسماك حركة جيل. إخراج الأسماك من مربع الجليد وإزالة الجسم الأسماك المياه المتبقية عن طريق منشفة، وضعت سمكة على لوحة القسم D مع أربع مجموعات.
وقطعت رؤوس الأسماك عن طريق تقديم وتر سبانغ باستخدام مقص حاد لضمان الموت. استخدام مقص تشريح لقطع على النحو التالي. تشريح من قطع كلوي إلى الخياشيم على طول خط الوسط من البطن، وقطع من ضفة كلوي، وقطع من الطرف الأمامي إلى الجانب الظهري.
إزالة بلطف الجلد والعضلات على جانب واحد من الجسم، وفضح الأعضاء الداخلية واتخاذ المبيض كامل صحية مع أربع خطوات. تم وضع المبيضين بلطف على الفور في 100 ملليمتر في الثقافة، وعاء طبق 60٪ L 50 المتوسط. أرسلت مجهر تشريح مع البصريات الضوئية المنقولة على أساس حجم ومورفولوجيا بصيلات المبيض من مراحل مختلفة.
عزل هذه بصيلات المبيض يدويا باستخدام البيرة من تتنافس أربع مجموعات. جمع بصيلات المبيض معزولة ووضعها في طبق آخر مثقف يحتوي على 60٪ L 50 المتوسطة، وسوف تستخدم بصيلات المبيض معزولة لطيفة لفصل الخلايا الجريبية والبويضات. ثم قم بتعيين جهاز للفصل.
استخدم أنبوب بلاستيكي طوله 30 سنتيمترا. يتم توصيل نهاية واحدة مع تلميح ماصة ملليلتر واحد مع عنصر التصفية. يتم توصيل نهاية أخرى مع تلميح ماصة 200 ميكرولتر.
تحت المجهر، استخدم الفم للسيطرة على تدفق الهواء للسماح للخلل يذهب الانتقال إلى حمام السباحة مع الشعيرات الدموية الزجاج ثم ضربة حماقة يخرج من الشعيرات الدموية الزجاجية. خلال هذه العملية، يمكن فصل الخلايا الجريبية والبويضات من بصيلات المبيض. هذه هي عملية فصل لبصيلات مرحلة ناضجة.
أثناء عملية الاستنشاق ، يتم فصل طبقة الخلية الجريبية عن Oocyte ، بعد تفجير الخلية الجريبية ويمكن فصل Oocyte. هذا هو بصيلات مرحلة الأرض الكاملة. يمكننا أن نرى أن طبقة الخلية الجريبية منفصلة عن البويضات.
ويمكن أيضا تطبيق هذه الطريقة في مرحلة مبكرة بصيلات المبيض. هذا هو بصيلات في مرحلة سفر التكوين لاتيلا الأوسط. هذا هو بصيلات في مرحلة مبكرة من سفر التكوين فاتيلا.
هذا هو بصيلات في مرحلة ما قبل سفر التكوين فاتالا. من هذه الصورة، يمكنك أن ترى عملية الانفصال. لوحة واحدة يظهر بصيلات سليمة في لوحة مرحلة نمت بالكامل.
لوحة اثنين يظهر الذبحة الصدرية من هذه المسام في الشعرية الزجاجية سحبت. اللوحة الثالثة تظهر أن الجريبي قد انفجر من الشعيرات الزجاجية المنسحبة لوحة أربعة يشير إلى فصل ناجح F كريات الدم البيضاء وخلية الجريبي.
حتى هذه الطريقة ، يمكن إجراء فصل الخلية الجريبية في Oocyte في بصيلات مرحلة مختلفة. التحقيق في ما إذا كانت الخلايا الجريبية فصلت عن بصيلات سليمة. سليمة بصيلات ويتم فصل Oocyte من مراحل مختلفة من بصيلات من مرحلة BV إلى مرحلة FG كانت ملطخة DAPI.
يمكن أن تكون نواة الخلايا الجريبية ملطخة من قبل DAPI. لوحظت الإشارة الزرقاء ل DAPI في بصيلات سليمة ولكن لم تنضح البويضات في هذه الجريبات المرحلة المختلفة. لمزيد من التأكيد على الانفصال الواضح ، كانت الجريبات السليمة والبويضات المنفصلة تتعفن إلى أقسام النسيج.
DAPI تفيد النتائج أظهرت أن الخلايا الجريبية تمت إزالتها بوضوح وdenuded Oocytes. باستخدام هذه الطريقة ، تم العثور على البويضات الناضحة المنفصلة عن بصيلات المرحلة المكتملة النمو للخضوع لنضوج البويضات التلقائي. دون أي علاج بعد أربع ساعات حضانة.
بعد التنشيط عن طريق الماء ، يمكن أن تخضع هذه البويضات الناضجة لتوسيع المشيمة الكامل. تشير هذه النتيجة إلى الضرر المنخفض الذي لحق بالبويضة باستخدام هذه الطريقة. وهكذا، يمكن استخدام هذا الخردل للحصول على Oocyte دنود لدراسة الحصة نضجت Oocyte من الأسماك حمار وحشي.
يمكن إزالة الطبقة الجريبية من المواد إلى بصيلات بواسطة أنبوب زجاجي شعري. ويمكن تخصيب هذه وتتحول إلى مرحلة الفقس. وتشير النتائج إلى أن هذه الطريقة يمكن استخدامها في للإخصاب في المختبر في الأسماك حمار وحشي.
نحن نصف هنا طريقة جديدة للفصل السريع والسهل للخلية الجريبية والبويضات من بصيلات المبيض السمك حمار وحشي. هذا الأسلوب له العديد من المزايا الهامة، والمنهجيات انقلبت. ومن أهم هذه العوامل زيادة سهولة الفصل إلى حد كبير لأن الأمر لا يتطلب سوى معالجة واحدة وخارجية.
زيادة سهولة الانفصال يزيد من توافر هذه الطريقة لأولئك الباحثين غير المهرة في التشتت الدقيق. ثانيا، يمكن استخدام هذه الطريقة لفصل الخلايا الجريبية وOocyte من بصيلات المبيض والمراحل التنموية المبكرة، بما في ذلك PV، EBV MV المرحلة، لا يمكن إجراء هذا الفصل في مرحلة مبكرة بصيلات باستخدام المنهجيات الحالية. ثالثا، تؤدي هذه الطريقة الجديدة إلى ضرر أقل للبويضات.
يمكن أن تخضع البويضات المبتورة التي تفصلها هذه الطريقة لنضوج البويضات ويمكن إخصابها. وبالإضافة إلى ذلك، يمكن أيضا تطبيق هذه الطريقة في الأسماك الأخرى.
