يوفر هذا البروتوكول طريقة على مقاعد البدلاء لتقييم فعالية وآليات عمل العلاج بالجلطات بمساعدة الهستوتريبسي أو التحلل ، وهو نهج بديل غير الغازية لعلاج تجلط الأوردة العميقة الحرجة. تستخدم هذه التقنية نشاط الفقاعة ليكون له تأثير في اتجاهين من خلال زيادة انحلال الفيبرينو بسبب الولادة الليكتيكية المعززة وانحلال الدم لخلايا الدم الحمراء داخل الجلطة. يسهل هذا النهج على مقاعد البدلاء لعلاج تجلط الأوردة العميقة نمذجة جلطات الدم ، والعلاج بالليسوتريبسي ، والتصوير المتزامن أثناء العلاج.
يمكن استخدام توليد سحابة الفقاعة وتخطيط العلاج وتوجيه الصور بشكل أكبر للتحقيق في العلاجات القائمة على الهستوتريبس المختبرية للأمراض الأخرى ، مثل أورام الكلى والكبد. لإعداد مصدر histotripsy، جبل المصدر على نظام تحديد المواقع الآلية. قم بتغطية صفيف التصوير بغطاء مسبار وأصلح الصفيف متحد المحور في فتحة مصدر الهستوتريب.
قم بتوصيل صفيف التصوير بنظام المسح بالموجات فوق الصوتية وغمر مصدر الهستوتريبس ومجموعة التصوير في الخزان بالكامل. استخدم حقنة لإزالة أي فقاعات هوائية بلطف واستخدم صفيف التصوير والماسح الضوئي للحصول على صور مياه من وضع B غير المغص بمعدل 20 إطارا في الثانية. أثناء الحصول على الصور، قم بضبط موضع صفيف التصوير داخل فتحة محول الكونفوجال حتى تقع سحابة الفقاعة تقريبا في وسط نافذة الصورة وسجل الموقع البؤري المكتشف في نافذة التصوير.
ثم وقف الرنانة وتعيين الجهد المطبق على مصدر histotripsy إلى الصفر. لإعداد جلطة للتحليل، استخدم كماشة لقطع الطرف المغلق من ماصة تحتوي على جلطة والسماح للجلطة والمصل الانزلاق إلى طبق بتري. استخدم مشرطا لقطع الجلطة بطول سنتيمتر واحد واستخدم مسح التنظيف لمسح مقطع القطع برفق لإزالة أي سائل زائد.
استخدام ملاقط لوضع بعناية قسم من جلطة على مقياس وتسجيل الوزن. بعد ذلك، رفع يدويا قناة تدفق من خزان مياه التناضح العكسي degassed وإزالة السفينة نموذج من القناة. استخدم الملاقط لوضع الجلطة بعناية في وعاء النموذج دون إتلاف الجلطة وإرفاق الوعاء بقناة التدفق.
خفض قناة التدفق إلى الخزان بحيث تكون النهاية القريبة للمرحلة بالنسبة للخزان منخفضة مقارنة بالجانب البعيدة ، واستخدام ماصة لإضافة 30 ميكرولتر من البلازما الدافئة 37 درجة مئوية إلى الخزان. مراقبة درجة حرارة خزان المياه حتى تصل إلى ما لا يقل عن 36 درجة مئوية، واستخدام ماصة لإضافة 80.4 ميكروغرام من RT-PA في خزان البلازما. لتهيئة قناة التدفق، استخدم مضخة حقنة لسحب البلازما من الخزان إلى القناة حتى يتم ملء السفينة النموذجية.
ثم يدويا مستوى السفينة نموذج لضمان عدم وجود فقاعات الهواء في السفينة نموذج، كما رأينا داخل إطار التصوير. للتخطيط لمسار لمصدر الهستوتريبزي ومجموعة التصوير للحصول على تعرض موحد للهستوتريب على طول الجلطة، استخدم سيناريو التصوير لاستخدام المواقع الآلية لمحاذاة صفيف التصوير الموازي لطول الجلطة والتأكد من عدم وجود فقاعات هوائية في السفينة. استخدم المواضع الآلية لمحاذاة صفيف التصوير بحيث تكون طائرة التصوير موازية للمقطع العرضي من الجلطة.
باستخدام نافذة التصوير كدليل، نقل مصدر الهستوتريبس إلى الطرف القريب من الجلطة، بالنسبة للخزان. لتحديد مسار التكسير على طول الجلطة، حدد نقاط الطريق على طول الجلطة بزيادات قدرها خمسة ملليمترات. قبل وضع اللمسات الأخيرة على كل نقطة طريق، نبضات اختبار النار من مصدر الهستوتريبسي مع نفس معلمات التسجم كما هو موضح، ولكن مع انخفاض التعرض الكلي إلى 10 نبضات إجمالية.
عند كل نقطة اتجاه، احفظ مواقع المحرك باستخدام الأوامر المعينة من قبل الشركة المصنعة. لعلاج الجلطة على طولها وفقا للمسار المحدد في خطوة ما قبل العلاج ، قم بتعيين مضخة الحقنة إلى 0.65 ملليلتر في الدقيقة ، وانتظر تحرك الغضروف المفصلي للبلازما. ياستكمال مسار المعالجة بخطوات متوسطة بين نقاط الطريق الثابتة بحجم خطوة ثابتة، واستخدم المواضع لنقل مصدر الهستوتريبوسي في كل موقع مسار، باستخدام معلمات التسنت المحددة أصلا.
بعد ذلك، قم بإنشاء برنامج نصي لتعيين صفيف التصوير للحصول على صورة وضع B للجلطة ووعاء النموذج قبل بضع ثوان من تطبيق نبض الهستوتريبسي في كل موقع. ثم تطبيق نبض histotripsy في كل نقطة الطريق، والحصول على الانبعاثات الصوتية في السيناريو لتشكيل صور التجويف السلبي بعد التحليل. استخدم إطار التصوير لتصوير نشاط الفقاعة أثناء تطبيق النبض الهستوتريبسي في كل موقع مسار.
بعد التحليل، رفع يدويا السفينة نموذج للخروج من خزان المياه لاستنزاف perfusate عن طريق الجاذبية، واستخدام مضخة حقنة لرسم محلول البلازما من قناة تدفق للسماح لجمع perfusate كامل في كوب صغير. قطع السفينة نموذج وإزالة الجلطة. ثم امسح الجلطة بأنسجة المختبر ووزن الجلطة لتقييم فقدان كتلة الجلطة.
عند تطبيق الجهد الكافي على مصدر الهستوتريبس ، يتم إنشاء سحابة فقاعة في المنطقة المحورية للمحول وتصورها عن طريق التصوير بالموجات فوق الصوتية. يتم تعريف الموضع البؤري على أنه مركز سحابة الفقاعة. تم استخدام هذا التخثر السيطرة على جلطة تتعرض للبلازما وحدها، وهذا perfusate من جلطة المعالجة lysotripsy لتقييم محتوى الهيموغلوبين وD-dimer كما هو موضح.
ويمكن قياس التغير في تركيز الهيموغلوبين كميا عن طريق الامتصاص البصري. هنا، يمكن تصور جلطة داخل وعاء نموذجي عن طريق التصوير ب الوضع قبل التعرض histotripsy لتحديد موقف جلطة لتجزئة صورة التجويف السلبي. كما تؤكد هذه الصورة التجويف السلبي المسجلة مع صورة وضع B للجلطة ، يتم احتواء الطاقة الصوتية في المقام الأول داخل الجلطة أثناء التعرض للهستوتريب.
في العينات المعرضة للتجويف الهستوتريب، يقتصر التعطيل في المقام الأول على مركز الجلطة، بما يتفق مع المواقع الملاحظة لنشاط الفقاعة التي يتم تعقبها عن طريق التصوير التجويف السلبي. مع إضافة الليك، يحدث فقدان الكتلة أيضا في المناطق الأقرب إلى محيط الجلطة. بدلا من ذلك، يمكن استخدام الليبوسومات الإيكولوجية التي تحتوي على RT-PA بدلا من تسليم RT-PA الجهازية للسماح بتقييم تسليم الأدوية المستهدفة إلى الجلطة.
يوفر Lysotripsy نهجا بديلا غير جراحي لعلاج العديد من الأمراض. هذا البروتوكول في المختبر يتيح تقييم فعالية العلاج ونجاحه المحتمل في تطبيق الجسم الحي.
