이 프로토콜은 히스토트립증 보조 혈전용 요법 또는 리소트립시, 중요한 심부 정맥 혈전증 치료에 대한 대체 비 침습적 접근 방식의 효능 및 작용 메커니즘을 평가하기위한 벤치탑 방법을 제공합니다. 이 기술은 향상된 용액 전달 및 혈전 내의 적혈구의 용혈성으로 인해 증가 된 세혈을 통해 양방향 효과를 가지기 위해 거품 활동을 사용합니다. 깊은 정맥 혈전증 치료에 이 벤치탑 접근은 혈전의 모델링을 용이하게, lysotripsy와 치료, 치료 중 동시 이미징.
버블 클라우드 생성, 치료 계획 및 이미지 지침은 신장 및 간 종양과 같은 다른 질병의 체외 히스토트립티 기반 치료법을 조사하는 데 더 사용될 수 있습니다. 히스토트립시 소스를 설정하려면 소스를 동력 포지셔닝 시스템에 장착합니다. 이미징 어레이를 프로브 커버로 덮고 히스토트립시 소스의 조리개에서 배열을 동축으로 수정합니다.
이미징 어레이를 초음파 스캐닝 시스템에 연결하고 탱크의 히스토트립시 소스 및 이미징 어레이를 완전히 침수합니다. 주사기를 사용하여 기포를 부드럽게 제거하고 이미징 어레이와 스캐너를 사용하여 초당 20 프레임에서 탈가스 B 모드 물 이미지를 얻습니다. 이미지를 획득하는 동안, 버블 구름이 이미지 창의 중앙에 대략 위치될 때까지 공초점 트랜스듀서 개구부 내부의 이미징 어레이의 위치를 조정하고 이미징 창에서 검출된 초점 위치를 기록한다.
그런 다음 인소네이션을 중단하고 히스토트립시 소스에 가해지는 전압을 0으로 설정합니다. 분석을 위해 응고를 준비하려면 펜치를 사용하여 응고가 들어있는 파이펫의 밀봉 된 끝을 자르고 응고와 혈청이 페트리 접시로 밀어 넣습니다. 메스를 사용하여 혈전을 1센티미터 길이로 자르고 클리닝 와이프를 사용하여 절단 섹션을 부드럽게 얼룩져 여분의 유체를 제거하십시오.
핀셋을 사용하여 응고 의 섹션을 스케일에 조심스럽게 배치하고 무게를 기록하십시오. 다음으로, 탈가스역 삼투압 물 탱크에서 유동 채널을 수동으로 올리고 채널에서 모델 용기를 제거한다. 핀셋을 사용하여 혈전을 손상시키지 않고 모형 용기에 응고를 조심스럽게 배치하고 선박을 유량 채널에 부착하십시오.
저수지에 비해 스테이지의 근접 끝이 하천측에 비해 낮은 탱크내의 유동 채널을 낮추고, 피펫을 사용하여 37°C의 30 마이크로리터를 저수지에 따뜻하게 하였다. 급하 36도 이상에 도달할 때까지 물 탱크의 온도를 모니터링하고 파이펫을 사용하여 플라즈마 저수지에 80.4 마이크로그램의 rt-PA를 추가합니다. 유동 채널을 프라임하려면 주사기 펌프를 사용하여 모델 용기가 채워지을 때까지 저수지에서 채널로 플라즈마를 끌어들입니다.
그런 다음 모델 용기를 수동으로 레벨화하여 이미징 창 내에서 볼 수 있듯이 모델 용기에 기포가 존재하지 않도록 합니다. 혈전 길이를 따라 균일한 히스토트립스 노출을 위한 히스토트립소스 및 이미징 어레이의 경로를 계획하려면 이미징 스크립트를 사용하여 전동 포지셔터를 사용하여 응고 길이와 평행한 이미징 어레이를 정렬하고 용기에 기포가 존재하지 않는지 확인합니다. 이미징 평면이 응고의 단면과 평행하도록 이미징 어레이를 정렬하기 위해 전동 포지셔터를 사용합니다.
이미징 창을 가이드로 사용하여, 히스토트립시 소스를 저수지에 비해 혈전의 근접 끝으로 이동합니다. 응고 길이를 따라 인네이션 경로를 결정하려면 응고 길이를 따라 웨이점을 5밀리미터 단위로 설정합니다. 각 웨이포인트를 마무리하기 전에, 소화소트립시 소스에서 발사 테스트 펄스는 입증된 것과 동일한 인소네이션 파라미터를 가지고 있지만, 전체 노출은 총 10펄스로 감소합니다.
각 웨이포인트에서 제조업체에서 지정한 명령을 사용하여 모터 위치를 저장합니다. 전처리 단계에 정의된 경로에 따라 응고를 처리하려면 주사기 펌프를 분당 0.65 밀리리터로 설정하고 플라즈마의 반월상연연증이 움직일 때까지 기다립니다. 설정된 웨이포인트 사이의 중간 단계로 처리 경로를 고정된 스텝 크기로 보간하고, 포지셔너를 사용하여 원래 설정된 인음매개변수를 사용하여 각 경로 위치에서 히스토트립시 소스를 이동한다.
다음으로 각 위치에서 히스토트립시 펄스를 적용하기 몇 초 전에 응고 및 모델 용기의 B 모드 이미지를 획득하도록 이미징 배열을 설정하는 스크립트를 만듭니다. 그런 다음 각 웨이포인트에 히스토트립시 펄스를 적용하여 스크립트의 음향 방출을 획득하여 분석 후 수동 캐비테이션 이미지를 형성합니다. 각 경로 위치에서 히스토트립시 펄스를 적용하는 동안 이미징 창을 사용하여 거품 활성을 이미지화합니다.
분석 후, 수동으로 물 탱크에서 모델 용기를 올려 중력을 통해 배설물을 배출하고, 주사기 펌프를 사용하여 유동 채널에서 플라즈마 용액을 끌어서 작은 비커에서 전체 난투질의 수집을 허용합니다. 모델 용기를 분리하고 응고를 제거합니다. 그런 다음 실험실 조직으로 응고를 닦고 응고를 계량하여 응고 질량 손실을 평가합니다.
히스토트립시 소스에 충분한 전압을 적용하면 트랜스듀서의 초점 영역에서 버블 구름이 생성되고 초음파 이미징을 통해 시각화됩니다. 초점 위치는 버블 클라우드의 중심으로 정의됩니다. 이러한 제어는 플라즈마에만 노출된 응고의 난투를 하고, 리소트립시 처리 된 응고의 이러한 난투는 입증된 바와 같이 헤모글로빈 및 D-dimer 함량을 평가하는 데 사용되었다.
헤모글로빈 농도의 가변성은 광학 흡광도에 의해 정량화될 수 있다. 여기서, 응고는 수동 캐비테이션 영상의 분할을 위한 응고 위치를 결정하기 전에 B 모드 이미징을 통해 모델 용기 내에서 시각화될 수 있다. 응고의 B 모드 이미지와 공동 등록된 이 수동 캐비테이션 이미지가 확인됨에 따라, 음향 에너지는 히스토트립시 노출 시 주로 응고 내에 포함된다.
히스토트립시에 노출된 샘플에서, 중단은 수동 캐비테이션 이미징을 통해 추적되는 거품 활동의 관찰된 위치와 일치하는 응고 센터로 주로 제한됩니다. lytic의 첨가와 함께, 질량 손실은 또한 혈전의 주변에 가까운 지역에서 발생합니다. 대안적으로, rt-PA를 함유하는 에코제닉 리포솜은 혈전으로 표적 약물 전달의 평가를 허용하기 위해 전신 rt-PA 전달 대신 사용될 수 있다.
Lysotripsy는 많은 질병의 치료에 대한 대체 비 침습적 인 접근 방식을 제공합니다. 이 시험관 내 프로토콜은 치료의 효능과 생체 내 응용 분야에서의 잠재적 성공의 평가를 가능하게합니다.
