الكبد هو موقع أساسي للزرع في البيئة السريرية للجزيرة البشرية. تعتبر عملية زرع الجزر داخل الكبد تحديا تقنيا ، ويمكن أن تموت نسبة عالية من الفئران بسبب المضاعفات الجراحية ، وخاصة النزيف. في هذه الدراسة ، يمكن للطريقتين اللتين أظهرناهما أن تمنعا بشكل فعال موت الفئران الناجم عن النزيف.
يمكن تطبيق طريقتنا على الأبحاث في سرطان الكبد وأمراض الكبد الأخرى عن طريق السماح بحقن الخلايا السرطانية والخلايا الجذعية الوسيطة وخلايا الكبد مباشرة إلى الكبد. للبدء ، افصل ثقافة جزيرة بشرية مع خدش لطيف. استخدم حقنة 1 سنتيمتر مكعب لاختيار 300 إلى 350 جزيرة في أنابيب طرد مركزي دقيقة معقمة 1.5 ملليلتر على الجليد.
عندما يتم اختيار جميع الجزر ، قم بطرد الأنابيب لمدة 10 ثوان لترسيب الخلايا. تخلص من جميع المواد الفائقة باستثناء حجم صغير منها لمنع فقدان الكريات وإعادة تعليق الجزر في 200 ميكرولتر HBSS تحتوي على 5٪ BSA. قم بتحميل الجزر المعاد تعليقها في حقنة أنسولين سعة 5 ملليلتر وقم بتحويل إبرة المحقنة لمدة 1 دقيقة للسماح للجزر بالاستقرار في المكبس.
اخفض المكبس لإزالة أي فقاعات ، مع الاحتفاظ بحوالي 100 إلى 150 ميكرولتر من المحلول في المحقنة وعكس المحقنة بنقر لطيف لتوزيع الجزر بالتساوي. بعد التأكد من عدم الاستجابة لمنعكس الدواسة ، ضع مرهما على العينين لمنع التجفيف. حلق بطن الفأر المخدر لإزالة الفراء وتطهير المنطقة الجراحية بثلاثة مناديل متناوبة من 2٪ من اليود و 75٪ من الكحول.
بعد ذلك ، قم بعمل شق من 1 إلى 1.5 سم في البطن وافتح التجويف البريتوني. ضع قطعة معقمة من الشاش حول الشق واستخدم الملقط أو أطراف القطن لنقل الأمعاء بلطف إلى الشاش. ثم قم بتغطية الأمعاء بقطعة من الشاش المنقوع بمحلول ملحي وكشف الوريد البابي.
لوقف النزيف الناجم عن نقل الجزيرة باستخدام رغوة الجل ، أمسك الإبرة مع توجيه الشطبة لأسفل ووضع طرف الإبرة مع الفتحة الموازية لجدار الوريد البابي قبل إدخال الإبرة في الوريد البابي. اسحب المكبس لسحب 20 إلى 50 ميكرولتر من الدم إلى المحقنة لخلطها مع الجزر قبل غرس الجزر في الوريد البابي مع الضغط وسحب المكبس بشكل متكرر. عندما يتم تسليم جميع الجزر ، ضع قطعة من رغوة الجل بطول 5 × 5 سنتيمترات تقريبا فوق موقع الحقن.
استخدم طرف قطني للضغط على رغوة الجل لأسفل أثناء إزالة الإبرة من الوريد البابي. امسك الجل في مكانه لمدة 2 دقيقة تقريبا ، مع لف رغوة الجل للتأكد من أنه يغطي الوريد البابي. بمجرد إيقاف النزيف ، أعد الأمعاء بلطف إلى التجويف البريتوني في الموضع الأصلي وحقن 500 ميكرولتر من المياه المالحة الدافئة في تجويف البطن.
استخدم الغرز لإغلاق طبقات العضلات والجلد. ثم ضع الماوس في قفص نظيف على وسادة تدفئة مع المراقبة حتى الشفاء التام من التخدير ، وإدارة التسكين كل 12 ساعة والحرارة لمدة 48 ساعة. لوقف النزيف الناجم عن نقل الجزيرة باستخدام وسادة دهنية ، بعد تعريض الوريد البابي كما هو موضح ، استخدم طرفين قطنيين لتثبيت الوريد المكشوف على الجانبين الأيسر والأيمن وتحديد موقع وسادة الأنسجة الدهنية بين الاثني عشر والوريد البابي.
اخترق وسادة الدهون بطرف الإبرة قبل إدخالها في الوريد البابي. غرس الجزر في الوريد البابي كما هو موضح. عندما يتم تسليم جميع الجزر ، اضغط على الأنسجة الدهنية بطرف قطني لمدة 1 دقيقة تقريبا أثناء إزالة الإبرة من الوريد.
ثم أعد الأمعاء إلى تجويف البطن وقم بإجراء بقية إجراءات الرعاية بعد الجراحة كما هو موضح. تعتمد آثار زرع الجزر على الجرعة ، حيث لوحظ نسبة السكر في الدم الطبيعية بعد 30 يوما من زرع الجزر المتزامن عندما يتم نقل 500 جزيرة ، ولكن يتم ملاحظة ارتفاع السكر في الدم الانتقالي فقط عند تسليم 250 جزيرة ، مع عودة الفئران إلى ارتفاع السكر في الدم قبل 10 أيام بعد الزرع. لوحظ زيادة في وزن الجسم في كلتا المجموعتين ولوحظت استجابات متطابقة عند زرع الجزر البشرية في فئران NOD-SCID المصابة بالسكري ، مع ملاحظة ارتفاع نسبة السكر في الدم عند زرع أعداد أكبر من مكافئات الجزر ولكن ليس بأعداد أقل.
غالبية الفئران التي تنزف بعد النقل تموت بعد الجراحة ، في حين أن الفئران دون نزيف البقاء على قيد الحياة. في 28 يوما بعد الزرع ، يكشف تلطيخ الأنسولين عن توزيع متساو للجزيرة البشرية في جميع أنحاء الكبد ، معظمها بالقرب من الأوعية الدموية. بالإضافة إلى الأنسولين ، لوحظ أيضا ترشيح الخلايا الفيبرين والخلايا النووية متعددة الأشكال داخل الجزر البشرية المزروعة.
ستولد زراعة الجزر داخل الكبد ثقبا كبيرا في الوريد البابي قد يسبب نزيفا. يمكن أن يؤدي استخدام إجراءين محسنين إلى منع النزيف وتقليل الوفيات بعد زرع الجزر. يمكن لنموذج زرع الجزر داخل البوابة أن يحاكي زراعة الجزر البشرية السريرية.
يمكن أن تؤدي إجراءاتنا المكررة إلى ارتفاع معدلات البقاء على قيد الحياة للمتلقين ، مما يسمح بإجراء مزيد من الدراسة لوظيفة الجزيرة بعد الزرع.
