Karaciğer, insan adacığı klinik ortamında transplantasyon için birincil bölgedir. Fare intrahepatik adacık transplantasyonu teknik olarak zordur ve farelerin yüksek bir yüzdesi cerrahi komplikasyonlardan, özellikle kanamadan ölebilir. Bu çalışmada, her ikisini de gösterdiğimiz iki yöntem, kanamaya bağlı fare ölümünü etkili bir şekilde önleyebilir.
Yöntemimiz, kanser hücrelerinin, mezenkimal kök hücrelerin ve hepatositin doğrudan karaciğere enjekte edilmesine izin vererek karaciğer kanseri ve diğer karaciğer hastalıklarında araştırmalara uygulanabilir. Başlamak için, bir insan adacık kültürünü nazik tırmalama ile ayırın. Buz üzerinde steril 1,5 mililitrelik mikrosantrifüj tüplerine 300 ila 350 adacık seçmek için 1 santimetreküp şırınga kullanın.
Tüm adacıklar toplandığında, hücreleri çökeltmek için tüpleri 10 saniye boyunca santrifüj yapın. Pelet kaybını önlemek için küçük bir süpernatant hacmi dışında hepsini atın ve% 5 BSA içeren 200 mikrolitre HBSS'de adacıkları yeniden askıya alın. Yeniden askıya alınan adacıkları 5 mililitrelik bir insülin şırıngasına yükleyin ve adacıkların pistona yerleşmesine izin vermek için şırınga iğnesini 1 dakika boyunca çevirin.
Herhangi bir kabarcığı çıkarmak için pistonu bastırın, şırıngada yaklaşık 100 ila 150 mikrolitre çözelti tutun ve adacıkları eşit şekilde dağıtmak için şırıngayı hafifçe dokunarak ters çevirin. Pedal refleksine yanıt eksikliğini doğruladıktan sonra, kurumayı önlemek için gözlere merhem sürün. Kürkü çıkarmak için anestezi uygulanan farenin karnını tıraş edin ve cerrahi bölgeyi üç alternatif 2% iyot ve% 75 alkol mendili ile dezenfekte edin.
Daha sonra, karın içinde 1 ila 1,5 santimetrelik bir kesi yapın ve periton boşluğunu açın. Kesinin etrafına steril bir gazlı bez parçası yerleştirin ve bağırsağı nazikçe gazlı bez üzerine aktarmak için forseps veya pamuklu uçlar kullanın. Daha sonra bağırsağı bir parça tuzlu suyla ıslatılmış gazlı bezle örtün ve portal damarı açığa çıkarın.
Jel köpük kullanarak adacık transferine bağlı kanamayı durdurmak için, iğneyi eğim aşağı bakacak şekilde tutun ve iğneyi portal damara sokmadan önce iğne ucunu portal damar duvarına paralel olarak açıklıkla konumlandırın. Pistonu tekrar tekrar bastırıp geri çekerken adacıkları portal damara damlatmadan önce adacıklarla karıştırmak üzere şırıngaya 20 ila 50 mikrolitre kan çekmek için pistonu geri çekin. Tüm adacıklar teslim edildiğinde, enjeksiyon bölgesine yaklaşık 5 x 5 santimetrelik bir jel köpük parçası yerleştirin.
İğneyi portal damardan çıkarırken jel köpüğü bastırmak için pamuklu bir uç kullanın. Jeli yaklaşık 2 dakika yerinde tutun, portal damarı kapladığından emin olmak için jel köpüğü yuvarlayın. Kanama durdurulduktan sonra, bağırsağı yavaşça orijinal pozisyonda periton boşluğuna geri döndürün ve karın boşluğuna 500 mikrolitre ılık salin enjekte edin.
Kas ve cilt katmanlarını kapatmak için dikişler kullanın. Daha sonra fareyi, anesteziden tamamen iyileşene kadar izleyen, her 12 saatte bir analjezi uygulayan ve 48 saat boyunca ısıtan bir ısıtma yastığı üzerinde temiz bir kafese yerleştirin. Bir yağ yastığı kullanarak adacık transferine bağlı kanamayı durdurmak için, portal damarı gösterildiği gibi açığa çıkardıktan sonra, maruz kalan damarı sol ve sağ taraflarda tutmak için iki pamuklu uç kullanın ve duodenum ve portal ven arasındaki yağ dokusu pedinin yerini belirleyin.
Portal damara yerleştirmeden önce yağ yastığına iğne ucu ile nüfuz edin. Adacıkları gösterildiği gibi portal damarına aşılayın. Tüm adacıklar teslim edildiğinde, iğneyi damardan çıkarırken yağ dokusunu pamuk ucu ile yaklaşık 1 dakika bastırın.
Daha sonra bağırsağı karın boşluğuna geri döndürün ve gösterildiği gibi cerrahi sonrası bakım prosedürlerinin geri kalanını gerçekleştirin. Adacık transplantasyonunun etkileri doza bağımlıdır, çünkü 500 adacık transfer edildiğinde sinjenik adacık transplantasyonundan 30 gün sonra normal glisemi gözlenir, ancak 250 adacık teslim edildiğinde sadece geçici normoglikemi gözlenir, fareler nakil sonrası 10 gün sonra hiperglisemiye geri döner. Her iki grupta da artan bir vücut ağırlığı gözlenir ve insan adacıkları diyabetik NOD-SCID farelere nakledildiğinde aynı tepkiler gözlenir, daha fazla sayıda adacık eşdeğeri nakledildiğinde normoglisemi gözlenir, ancak daha az sayıda değil.
Transfer sonrası kanaması olan farelerin çoğunluğu ameliyattan sonra ölürken, kanaması olmayan fareler hayatta kalır. Transplantasyondan sonraki 28 günde, insülin boyaması, insan adacığının karaciğer boyunca, çoğunlukla kan damarlarına yakın eşit bir dağılımını ortaya koymaktadır. İnsüline ek olarak, nakledilen insan adacıklarında fibrin ve polimorfonükleer hücre filtrasyonu da gözlenir.
İntrahepatik adacık transplantasyonu, portal vende kanamaya neden olabilecek büyük bir delik oluşturacaktır. İki gelişmiş prosedürümüzü kullanmak kanamayı önleyebilir ve adacık nakli sonrası mortaliteyi azaltabilir. İntraportal adacık transplantasyonu modeli klinik insan adacık transplantasyonunu taklit edebilir.
Rafine edilmiş prosedürlerimiz, alıcılar için daha yüksek sağkalım oranlarına yol açabilir ve bu da transplantasyondan sonra daha fazla adacık fonksiyonu çalışmasına izin verir.
