تلطيخ الفلورسنت المناعي متعدد الخلايا المناعية من أربعة أنواع من الخلايا المناعية بطانة الرحم في الإجهاض المتكرر

التكنولوجيا الحالية تسمح باستخدام الأجسام المضادة التي أثيرت في نفس النوع للكشف عن ما يصل إلى سبع علامات. إثبات الإجراء سيكون لوسيا تشان، فني من المختبر. تبدأ بإعداد شرائح زجاجية ثابتة البارافين ثابتة المضمنة التي شنت مع عينة الأنسجة، عن طريق وضع الشرائح شقة في الفرن، لخبز في 60 درجة مئوية مع الأنسجة التي تواجه صعودا.

بعد ساعة واحدة، إزالة الشمع وإعادة ترطيب الشرائح في كل 10 دقائق مع سلسلة من المواد الكيميائية، كما هو موضح في المخطوطة. غمر الشرائح في المالحة ثلاثية المخزنة مؤقتا، ومن ثم في مربع الشريحة البلاستيكية مليئة خليط من الفورمالديهايد المخفف في الميثانول، لإصلاح العينات. بعد ذلك، اغسل الشرائح مرتين في ماء مأين لمدة دقيقتين.

انتقل إلى استرجاع epitope، عن طريق وضع رف الشرائح في مربع مقاومة للحرارة مليئة عازلة حمض الستريك في درجة الحموضة 6.0. ثم وضع الصندوق في الميكروويف، لتسخين الشرائح أولا بقوة 100٪ لمدة 50 ثانية، تليها 20 دقيقة بقوة 20٪، للحفاظ على نفس درجة الحرارة. بعد شطف الشرائح في الماء المقطر، والغسيل مع TBST، تزج الشريحة في جرة تحتوي على محلول حجب البيروكسيد لمدة 10 دقائق.

بعد الحضانة، شطف الشرائح في الماء المقطر وغسل مع TBST، ثم استخدام قلم حاجز مسعور لوضع علامة على الحدود حول قسم الأنسجة على الشريحة. ثم شطف الشريحة في TBST، وتغطية أقسام الأنسجة مع العازلة حجب واحتضان الشرائح في غرفة رطبة لمدة 15 دقيقة. لإزالة الكواشف الحجب، أولا احتضان الشرائح مع الأجسام المضادة الأولية ذات الفائدة، ومن ثم إزالة الأجسام المضادة الأولية عن طريق غسل الشرائح ثلاث مرات مع TBST، قبل الحضانة مع البوليمر الفجل peroxidase المسمى، الأجسام المضادة الثانوية.

بعد الحضانة ، اغسل الشرائح قبل تطبيق نباتات Opal على حل عمل TSA ، ثم شطف الشريحة بحاجز استرداد المستضد. قم بإجراء التجريد القائم على الميكروويف عن طريق تسخين الشرائح في مخزن استرجاع المستضد في ميكروويف بقوة 100٪، لمدة 50 ثانية، يليه 20٪ طاقة لمدة 20 دقيقة في حاويات الميكروويف الآمنة. بعد تبريد العينات في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة، شطف الشرائح في الماء المقطر وTBST واحتضان في وقت لاحق مع محلول دابي لمدة خمس دقائق.

ثم الهواء الجاف الشريحة قبل تصاعد مع المتوسطة تركيب المناسبة. قبل تصوير الشرائح مسبقا، يتم ضبط عوامل التصفية المناسبة في محطة العمل. التقاط ما لا يقل عن 10 حقول للتحليل تحت التكبير 200 مرة.

لحساب الخلايا، انقر فوق زر عدد الكائنات في شريط الخطوة، لعرض لوحة إعدادات عد الكائنات. إذا تم تقسيم الأنسجة، حدد فئة الأنسجة التي يمكن العثور على الكائنات فيها. ثم حدد الإشارة المطلوبة من مقياس تلقائي أو مقياس ثابت.

لتقسيم الكائن، حدد المكون الأساسي من القائمة المنسدلة. للكشف عن الكائنات التي تلمس كائنات أخرى ككائنات فردية وغير مجمعة، تحقق من الحد الأقصى لحجم مربع وبكسل ثم اختر تقسيم المكرر. بعد ذلك، عد جميع الخلايا اللحمية في الخلايا المناعية بشكل منفصل، للتعبير عن البيانات كنسب مئوية من الخلايا المناعية بالنسبة إلى العدد الإجمالي للخلايا سترومال لكل صورة القبض.

في وقت لاحق، تقرير عدد الخلايا النهائي كمتوسط لكافة الحقول. باستخدام محرر طريقة العرض، قم بفحص جداول البيانات الناتجة بعد المعالجة ثم قم بتصدير جدول بيانات العد. في التحليل التمثيلي، أربعة أنواع من الخلايا المناعية في عينة بطانة الرحم نحن متمايزون.

تظهر الصورة المعالجة تقسيم الأنسجة كمقصورات ظهارية وسترومية. تم إجراء الإصابة بأمراض مناعة متعددة على خزعات بطانة الرحم من امرأة مراقبة خصبة وامرأة مع إجهاض متكرر غير مبرر ، تم الكشف عن طابق واحد بالنسبة لنا يمثل CD3 و CD56 و CD68 و CD20 في التخميد المناعي. بمجرد تحديد الصوت المناعي ، يمكن أن يساعد المزيد من التلطيخ تحت السيتوكين في معالجة تفاعلهم وآلية نجاح الزرع.