يجمع البروتوكول بين نموذج الفأر لتمدد الأوعية الدموية الأبهري البطني الذي يشبه المرض البشري الراسخ والعلاج المتكرر عن طريق القسطرة الوريدية. لتلبية الحاجة السريرية لمنع تطور تمدد الأوعية الدموية. يوفر البروتوكول سير عمل كامل لاختبار الأدوية للحد من تطور تمدد الأوعية الدموية في الفئران بما في ذلك معلومات شاملة عن توسع حجم قطر الأبهر ومورفولوجيته.
بالإضافة إلى الموجات فوق الصوتية 3D. يمكن تكييف الموجات فوق الصوتية 3D لقياس الشريان الأورطي التحتكسي حيث تتطور تمدد الأوعية الدموية في نماذج الفئران الأقل اعتمادا على الذوق. يمكن استخدام قسطرة الوريد الوداجي لأي مجموعة من الحقن الوريدي المطلوبة.
بعد تخدير ماوس البريد الناقص APOE من 12 إلى 14 أسبوعا ، حلق المنطقة الصغيرة على الجانب الأيسر العلوي من الظهر ، فوق شفرة الكتف ، ضع محلول اليود povidone 10٪ لتطهير المنطقة المحلوقة. قم بعمل شق عرضي سنتيمتر واحد في جلد الجزء العلوي من الظهر باستخدام مشرط بين منتصف العمود الفقري وخط الكتف الأيسر. تثبيت الجلد باستخدام ملقط واستخدام مقص منحني حاد.
اصنع جيبا تحت الجلد عن طريق الدفع نحو الطرف الخلفي الأيسر. افتح المقص واسحب المقص المفتوح من القطع لتوسيع الجيب. أدخل المضخة برفق في الجيب مع وسيط التدفق نحو الذيل لتقليل التداخل المحتمل للأنجيوتنسين الثاني الذي يطلقه موقع الشق.
ثم أغلق الجرح ب 4.0 خيوط متقطعة قابلة للامتصاص. باستخدام نظام الوصول إلى الأوعية الدموية. قم بإعداد القسطرة عن طريق قطع الجانب الفرنسي الثلاثة إلى الطول المطلوب ودفع القسطرة فوق الموصل المعدني بمقياس 22 لنظام الوصول إلى الأوعية الدموية أو VAS مع تداخل لا يقل عن ثلاثة ملليمترات.
ضع غطاء الألومنيوم على الزر لحماية المنفذ. حلق الفراء من الجانب الأيمن من الرقبة على الجانب البطني والجانب الأيمن من الجزء العلوي الخلفي من الماوس المخدر. ثم ضع محلول اليود البوفيدون لتطهير المنطقة المحلوقة.
لإعداد الوريد الوداجي ، قم بعمل شق جلدي عرضي فائق الترقوة بطول 0.5 سم في الجانب الأيمن من الرقبة فوق الترقوة اليمنى. استخدم ملاقط الجراحة المجهرية الحادة لفصل النسيج الضام والدهون التي تعرض الوريد الوداجي الخارجي. تجنب تمزيق الأوعية الدموية الصغيرة في الدهون.
عزل خمسة ملليمترات من الوعاء بالقرب من العضلات الصدرية. ثم تشريح الأنسجة تحت الوريد باستخدام ملاقط دقيقة عازمة وتمر عبر اثنين إلى ثلاثة من 6.0 من الأربطة الحريرية 6.0. ثني في الأربطة وإضافة قطرة من المياه المالحة إلى الموقع.
لزرع الزر ، اقلب الماوس وضعه في وضع الانبطاح. ضع محلول اليود البوفيدون لتطهير المنطقة المحلوقة. قم بعمل شق سهمي سنتيمتر واحد في الجزء العلوي من الظهر باستخدام مشرط بين منتصف العمود الفقري وخطوط الكتف اليمنى.
بعد ذلك ، استخدم مقص منحني حاد لجعل جيب دائري أكبر قليلا من حجم VAS حول موقع الشق عن طريق تشريح حاد. استخدم المقص المنحني الحاد للنفق القحفي فوق الكتف الأيمن نحو الشق البطني عند الرقبة عن طريق فتح المقص قليلا. ثم سحب المقص المفتوح للخارج وتكرار الإجراء أثناء دفعه إلى الداخل.
بمجرد وصول النفق إلى الشق البطني يمر عبر المشابك الجراحية من البطني إلى الشق الظهري. قم بتوصيل ثلاثة أطراف فرنسية للقسطرة بالمشبك واسحب القسطرة عبر النفق بحيث تكون خارج شق الرقبة البطني ويكون VAS في مكانه عند الشق الظهري. ثم أدخل القرص اللباد الجراحي VAS تحت الجلد في الشق الموجود على الظهر.
قم بفك فحص القسطرة للتأكد من المباح باستخدام نهاية الشوكة لأداة المناولة لإزالة غطاء الألومنيوم الواقي واستخدام الطرف المغناطيسي للاحتفاظ بالزر وحقن محلول ملحي أو PBS باستخدام حقنة ملليلتر واحدة متصلة بالحاقن المقابل حتى يتسرب السائل من الطرف الفرنسي الواحد. اضغط على الزر بشكل سببي في الجيب وأغلق الجلد فوق القرص اللباد الخاص ب VAs تحت شفة VAS باستخدام غرزتين متقطعتين من أربعة أوه في الجمجمة. بالنسبة لقسطرة الوريد ، اقلب الماوس مرة أخرى إلى وضع الاستلقاء وأضف قطرة من المياه المالحة إلى الجانب المقطوع.
افصل الأربطة واربط الرباط الأول حول القسطرة والوريد الوداجي بعقدتين إلى ثلاث عقد قدر الإمكان لربط الوريد وتثبيت القسطرة إلى الخارج. حرك الرباط الثاني أقرب ما يمكن إلى العضلات الصدرية. باستخدام مقص دقيق قطع زاوية قطرية لإنشاء نهاية حادة بحيث ثلاثة إلى خمسة ملليمترات من القسطرة ستكون في الوريد.
ثم اخترق ثقبا في الوريد باستخدام إبرة قياس 27 متصلة بحقنة ملليلتر واحدة مملوءة بمحلول ملحي عن طريق سحب الرباط القحفي الآمن ودفع الإبرة بالتوازي مع الوريد. بعد ذلك ، أدخل القسطرة في الوريد بنفس الطريقة عن طريق سحب الرباط القحفي الآمن وتحريك القسطرة إلى الوريد باستخدام الملقط المنحني. ادفع القسطرة حتى تتماشى مع الوريد.
اربط الرباط الثاني فوق المنطقة التي تم إدخالها بالقسطرة بعقدتين إلى ثلاث عقد وتحقق من عدم وجود تسرب للدم. قطع الطرف الزائد من كل من الأربطة مع مقص صغير وإضافة قطرة من المياه المالحة. ثم أغلق الجلد ب 4.0 خيوط متقطعة قابلة للامتصاص.
حقن الماوس مع الحجم المطلوب من المثبطات أو PBS المالحة كما هو موضح سابقا. حافظ على الضغط الإيجابي على المكبس أثناء فصل المحقنة عن VAS. راقب الفئران بعد التعافي.
باستخدام برنامج الموجات فوق الصوتية ، اضبط الإعدادات للحصول على عمق صورة 30 DB إلى 9.0 ملم والعرض إلى 8.08 ملم. بعد ذلك ، أضف قطرة من الجل الكهربائي إلى كل من أقطاب تخطيط القلب الكهربائي الأربعة أو ECG على المسرح وقم بربط أطراف الماوس بها. انشر جل الموجات فوق الصوتية الدافئ على بطن الفأر واخفض جهاز الإرسال لوضعه على اتصال مع البطن.
حدد الشريان الأورطي كوعاء دائري سريع النبض. حدد موقع الشريان الكلوي الأيسر وقم بمسح المنطقة يدويا حتى 12 ملم من الجمجمة لضمان عدم وجود تداخل في المنطقة محل الاهتمام. العودة إلى الشريان الكلوي الأيسر.
ثم اضبط المسبار على ستة ملليمترات قحفيا من الشريان. للحصول على الموجات فوق الصوتية 3D تعيين بوابة الجهاز التنفسي إلى تأخير 25٪ ونافذة من 50٪ وتشغيل ECG إلى 50 مللي ثانية. من خيارات 3D تعيين مسافة المسح الضوئي إلى 11.96 ملم مع حجم خطوة من 0.076 ملم.
بعد الحصول على 157 إطارا، قم بالتمرير للتحقق من جودة الصورة قبل حفظ الصورة. للحصول على قطر 2D ، قم بإيقاف تشغيل بوابة الجهاز التنفسي وزناد ECG وتحديد موقع المنطقة بأكبر قطر يدويا في امتداد 12 ملم من الشريان الأورطي الكلوي الفائق. اضغط على الوضع B على الشاشة واحصل على صورة الوضع B.
بالإضافة إلى ذلك ، بالنسبة لصورة EKV دون تحريك محول الطاقة ، احصل على صورة EKV باستخدام الإعدادات القياسية للنظام في نفس الموقع. تمت مراقبة تطور وتطور تمدد الأوعية الدموية الكلوي الفائق بواسطة الموجات فوق الصوتية في اليوم الثامن الأساسي واليوم 27. توضح بقعة ثلاثية الألوان من الشريان الأورطي 27 اليوم مورفولوجيا تمدد الأوعية الدموية المتشكل مع تشريح الجدار والجلطة الداخلية.
أظهر معدل الإصابة بتمدد الأوعية الدموية الأبهري البطني أو AAA في اليوم الثامن وتمزق الأبهر خلال الأيام التسعة الأولى أن 9٪ من الفئران فشلت في تكوين AAA. ومع ذلك ، عانى 35٪ من الفئران من تمزق الأبهر قبل زرع القسطرة ، مما أدى إلى ما مجموعه 56٪ من الفئران المتبقية مع مرض AAA الراسخ كونها الحد الأدنى من التقسيم الطبقي إلى مجموعات العلاج. لوحظت علاقة عكسية بين التوسع الأولي والمزيد من تطور المرض في البداية السريع التشكل مقابل تمدد الأوعية الدموية المعتدل النمو في الفئران المعالجة بالتحكم في PBS.
كشفت نتائج الموجات فوق الصوتية المثالية أن علاج GSK 4 84 منع تطور AAA بينما استمرت تمدد الأوعية الدموية في توسيع الفئران والتحكم فيها. المباح القسطرة ضروري لأن فصل القسطرة عن الوريد أو زر الوصول إلى الأوعية الدموية يؤدي إلى توصيل الدواء إلى الفضاء تحت الجلد مع تركيزات دوائية غير معروفة في موقع تمدد الأوعية الدموية. عندما يتم التضحية بالفئران في نهاية التجربة ، يمكن التحقيق في الماء والأنسجة الأخرى من الناحية النسيجية وإجراء تحليل الدم لتوصيف آثار الدواء المستهدفة وخارجها.
