血管紧张素II诱导的腹主动脉瘤小鼠模型中中心静脉导管的药物治疗及3D超声监测

该方案结合了类似于已建立的人类疾病的腹主动脉瘤小鼠模型和通过静脉导管重复治疗。为了满足阻断动脉瘤进展的临床需求。该协议为测试药物以减少小鼠动脉瘤进展提供了完整的工作流程，包括有关主动脉直径体积和形态扩张的全面信息。

加上3D超声波。3D超声可能适用于测量肾下主动脉，在基于较少味觉的小鼠模型中，动脉瘤的发展。颈静脉导管插入术可用于任何需要静脉注射的组。

麻醉12至14周龄APOE缺陷邮件小鼠剃掉背部左上角的小区域，在肩胛骨上方，涂抹10%聚维酮碘溶液对剃须区域进行消毒。在中脊柱和左肩胛线之间用手术刀在上背部皮肤上做一个一厘米的横向切口。用镊子固定皮肤，用钝弯曲的剪刀。

通过向左后肢推动来制作皮下口袋。打开剪刀，将打开的剪刀从切口中拉出以扩大口袋。将泵轻轻插入口袋中，将流量调节器朝向尾部，以尽量减少切口部位释放的血管紧张素 2 的潜在干扰。

然后用4.0可吸收的断续缝合线缝合伤口。使用血管通路系统。通过将三个法国面切割成所需长度并将导管推过血管通路系统或 VAS 的 22 号金属连接器以至少 3 毫米重叠来准备导管。

将铝盖放在按钮上以保护端口。从麻醉小鼠腹侧颈部右侧和上背部右侧剃掉皮毛。然后涂抹聚维酮碘溶液对剃须区域进行消毒。

对于颈静脉准备，在颈部右侧右侧锁骨上方做一个 0.5 厘米的横向锁骨超级皮肤切口。使用钝的显微外科镊子分离结缔组织和脂肪，露出颈外静脉。避免撕裂脂肪中的小血管。

隔离靠近胸肌的血管 5 毫米。然后使用弯曲的微镊钝地解剖静脉下组织，并通过 6.0 丝结扎中的两到三个。塞入结扎，并在该部位添加一滴盐水。

对于按钮植入，将鼠标翻转过来并将其置于俯卧位置。使用聚维酮碘溶液对剃须区域进行消毒。在上背部用手术刀在脊柱中部和右肩胛骨线之间做一个一厘米的矢状切口。

接下来，使用钝弯曲的剪刀通过钝性解剖在切口部位周围制作一个略大于VAS尺寸的圆形口袋。使用钝弯曲的剪刀，通过稍微打开剪刀，在右肩上向颈部的腹侧切口开颅骨隧道。然后拉出打开的剪刀，在进一步推入时重复该动作。

一旦隧道到达腹侧切口，就通过手术夹从腹侧到背侧切口。将导管的三个法国端连接到夹子上，并将导管拉过隧道，使其脱离腹颈切口，并且VAS在背切口处就位。然后将VAS手术毡盘皮下插入背部切口处。

使用处理工具的叉端松开导管检查通畅性，取下保护性铝盖，并使用磁性端握住按钮并用连接到相应注射器的一毫升注射器注射盐水或PBS，直到液体从一个法国端泄漏。按下口袋中的尾部按钮，用两条四哦中断的缝合线在VAS法兰下方的VA毡盘上关闭皮肤。对于静脉导管插入术，将鼠标翻转回仰卧位，并在切口侧添加一滴盐水。

分离结扎，并将第一根结扎在导管和颈静脉周围，尽可能用两到三个结来结扎静脉并将导管固定在外部。将第二个结扎线尽可能靠近胸肌。使用微型剪刀切割对角线角度以形成尖锐的末端，以便三到五毫米的导管将在静脉中。

然后使用连接到装满盐水的一毫升注射器的 27 号针头在静脉上刺穿一个孔，方法是拉动固定的颅骨结扎并将针头平行于静脉。接下来，以相同的方式将导管插入静脉，方法是拉动固定的颅骨结扎并使用弯曲的镊子将导管滑入静脉。推动导管，直到它与静脉对齐。

用两到三个结将第二个结扎扎在导管插入区域，并检查是否有血液泄漏。用微型剪刀剪掉两个结扎的多余端，加入一滴盐水。然后用4.0可吸收的断续缝合线闭合皮肤。

如前所述，向小鼠注射所需体积的抑制剂或PBS盐水。在柱塞上保持正压，同时断开注射器与VAS的连接。恢复后监测小鼠。

使用超声波软件将设置调整为将30 DB图像深度增益为9.0毫米，宽度为8.08毫米。接下来，在载物台上的四个心电图或ECG电极中的每一个中加入一滴电凝胶，并将小鼠四肢粘在上面。将温热的超声凝胶涂抹在小鼠的腹部，并降低发射器使其与腹部接触。

将主动脉识别为圆形快速脉动血管。定位左肾动脉并手动测量该区域，最长可达 12 毫米颅骨，以确保对感兴趣区域没有干扰。返回左肾动脉。

然后将探头放在距动脉六毫米处。对于3D超声采集，将呼吸门控设置为25%延迟，窗口设置为50%，心电图触发设置为50毫秒。从3D选项中，将扫描距离设置为11.96毫米，步长为0.076毫米。

获取 157 帧后，滚动以检查图像质量，然后再保存图像。对于 2D 直径采集，请关闭呼吸门控和心电图触发器，并手动定位超级肾主动脉 12 毫米拉伸中直径最大的区域。按屏幕上的B模式并获取B模式图像。

此外，对于不移动换能器的EKV图像，在同一站点获取具有系统标准设置的EKV图像。在基线第8天和第27天通过超声监测超级肾动脉瘤的发展和进展。第 27 天主动脉的三色染色说明了形成的动脉瘤的形态，伴有壁夹层和壁内血栓。

第八天腹主动脉瘤或AAA的发生率和前9天内的主动脉破裂表明，9%的小鼠未能形成AAA。然而，35%的小鼠在导管植入前经历了主动脉破裂，因此导致总共56%的剩余已确诊AAA疾病的小鼠最小到分层到治疗组。在PBS对照治疗小鼠中，观察到最初快速形成与中度生长的动脉瘤的初始扩张和进一步疾病进展之间的反比关系。

示例性超声结果显示，GSK 4 84治疗抑制AAA进展，而动脉瘤继续扩大并控制小鼠。导管通畅性至关重要，因为导管与静脉或血管通路按钮断开会导致药物输送到动脉瘤部位药物浓度未知的皮下间隙。当在实验结束时处死小鼠时，可以对水和其他组织进行组织学研究并进行血液分析以表征靶上和脱靶药物的作用。