يمكن أن يوفر تطوير طريقة الكشف عن 15 قلويدات بيروليزيدين في الأعشاب الضارة والتربة وأوراق الشاي الطازجة وعينة الشاي الجاف الدعم الفني لاستكشاف مصدر تلوث قلويدات بيروليزيدين في الشاي. بالمقارنة مع استخراج الطور الصلب ، يمكن لطريقة الممتز لعينة التربة توفير الوقت وانخفاض التكلفة واسترداد أفضل لتحليل قلويدات بيروليزيدين. لبدء الاستخراج على منتجات الشاي المجففة المسخنة مسبقا أو أوراق الشاي الطازجة أو الأعشاب الضارة ، قم بوزن جرام واحد من عينة في أنبوب طرد مركزي سعة 50 ملليلتر ، وأضف 10 ملليلتر من 0.1 مول لكل لتر من محلول حمض الكبريتيك في الأنبوب.
بعد ذلك ، دوامة العينة لمدة دقيقتين إذا كان سيتم تحليلها باستخدام استخراج الطور الصلب ، بينما لمدة دقيقة واحدة إذا كان سيتم تحليلها باستخدام التنظيف الممتز. ثم قم بإخضاع العينة للاستخراج بالموجات فوق الصوتية لمدة 15 دقيقة ، تليها الطرد المركزي عند 9،390 جم لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. ثم باستخدام قطارة ذات رأس بلاستيكي ، انقل المحلول الطافي إلى أنبوب طرد مركزي سعة 50 ملليلتر.
بعد إجراء الاستخراج مرتين ، ادمج المواد الطافية في الأنبوب. لبدء الاستخراج على التربة المحضرة ، قم بوزن جرام واحد من عينة في أنبوب طرد مركزي سعة 50 ملليلتر. أضف 0.1 ملليلتر من 0.1 مول لكل لتر محلول سترات ثلاثي الصوديوم لضبط درجة حموضة التربة إلى 6.0 ، واترك العينة تقف لمدة دقيقتين.
ثم أضف 10 ملليلتر من 0.1 مول لكل لتر من محلول ميثانول حمض الكبريتيك في الأنبوب ، وقم بدوامة العينة لمدة دقيقتين ، تليها الهز لمدة 30 دقيقة. بعد ذلك ، قم بإجراء الاستخراج بالموجات فوق الصوتية لمدة 30 دقيقة كما هو موضح من قبل. ثم أجهزة الطرد المركزي العينة في 9،390 غرام لمدة 10 دقائق.
وباستخدام قطارة ذات رأس بلاستيكي ، انقل المادة الطافية إلى أنبوب طرد مركزي سعة 50 ملليلتر. بعد إجراء الاستخراج مرتين ، اجمع بين المواد الطافية. قم بتنشيط استخراج الطور الصلب أو خرطوشة SPE بخمسة ملليلتر من الميثانول متبوعة بخمسة ملليلتر من الماء منزوع الأيونات.
بعد التنشيط ، أضف 10 ملليلتر من المادة الطافية من استخراج العينة إلى الخرطوشة التي تم تنشيطها مسبقا. بعد أن يصل مستوى محلول العينة إلى الطبقة العليا من الخراطيش ، قم بإزالة مصفوفة العينة بخمسة ملليلتر من محلول حمض الفورميك بنسبة 1٪ ، متبوعا بخمسة ملليلتر من الميثانول ، وتخلص من المواد السائلة. بعد ذلك، استخل المواد المراد تحليلها بخمسة ملليلترات من الميثانول تحتوي على 0.5٪ من ماء الأمونيا.
قم بتصفية المحلول من خلال مرشح غشاء 0.22 ميكرون لتحليله بواسطة UPLC-MS / MS. لإجراء تنظيف العينة باستخدام الممتزات ، قم بإعداد أنبوب طرد مركزي سعة 10 ملليلتر مع مادة ماصة تعرض GCB و PSA و C18 نسبة 10 إلى 20 إلى 15 ملليغرام. ثم أضف ملليلتر من المادة الطافية التي تم الحصول عليها بعد معالجة العينة.
بعد ذلك ، دوامة العينة وخليط الممتزات لمدة دقيقة واحدة وأجهزة الطرد المركزي في 9،390 G لمدة ثماني دقائق في درجة حرارة الغرفة. قم بتصفية ملليلتر واحد من المادة الطافية الناتجة من خلال مرشح غشاء 0.22 ميكرون في قنينة عينة قبل تحليلها بواسطة UPLC-MS / MS. في الدراسة ، تم الحصول على نسبة استرداد أعلى من 15 قلويدات بيروليزيدين من أوراق الشاي الطازجة وعينات الشاي المجفف والأعشاب الضارة باستخدام تقنية تنقية الممتزات مقارنة بطريقة خرطوشة SPE.
كانت عمليات استرداد القلويدات في التربة باستخدام تنقية الممتزات 79 إلى 111٪ في أوراق الشاي الطازجة التي تم جمعها من مواقع أخذ العينات الخمسة ، تم الكشف عن محتوى أعلى من أكسيد N-oxide إنترميدين من سينيسيونين. لم يتم اكتشاف سينيسيونين في الأوراق الناضجة من مواقع أخذ العينات الأول والثاني. من بين 11 قلويدات بيروليزيدين ، تم اكتشاف أكسيد N-oxide فقط في التربة ، بينما تم اكتشاف senecionine و intermedine N-oxide في أجزاء مختلفة من نباتات الشاي.
بالإضافة إلى ذلك ، تم العثور على محتوى Intermedine N-oxide في برعم واحد مع ورقتين ليكون الأعلى. أثناء محاولة ذلك أولا ، فإن أهم شيء هو إضافة 0.1 ملليلتر من 0.1 مول لكل لتر محلول سترات ثلاثي الصوديوم لضبط درجة حموضة التربة إلى 6.0. يمكن تطبيق هذه الطريقة على تحليل قلويدات في النباتات الصالحة للأكل الأخرى ، كما أنها توفر تقنية طبيعية لاستكشاف مصدر قلويدات فيها.
