雑草、土壌、新鮮な茶葉、乾燥茶サンプル中の15種類のピロリジジンアルカロイドの検出方法の開発は、茶中のピロリジジンアルカロイド汚染の原因を調査するための技術サポートを提供できます。固相抽出と比較して、土壌サンプルの吸着剤法は、ピロリジジンアルカロイド分析の時間を節約し、コストを削減し、回収率を向上させることができます。予熱された乾燥茶製品、新鮮な茶葉または雑草の抽出を開始するには、50ミリリットルの遠沈管に1グラムのサンプルを量り、1リットルの硫酸溶液10ミリリットルを1リットルの硫酸溶液に加える。

次に、固相抽出を使用して分析する場合はサンプルを2分間渦流し、吸着剤クリーンアップを使用して分析する場合は1分間渦流します。次いで、サンプルを15分間超音波抽出にかけ、続いて室温で10分間9、390Gで遠心分離を行った。次に、先端がプラスチック製のスポイトを使用して、上清溶液を50ミリリットルの遠沈管に移します。

抽出を2回行った後、チューブ内の上清を合わせる。準備した土壌で抽出を開始するには、50ミリリットルの遠沈管で1グラムのサンプルを計量します。0.1ミリリットルのクエン酸三ナトリウム溶液1リットルあたり0.1モルを加えて土壌pHを6.0に調整し、サンプルを2分間放置します。

次に、10ミリリットルの硫酸メタノール溶液10ミリリットルを1リットルあたり0.1モルチューブに加え、サンプルを2分間ボルテックスし、続いて30分間振とうします。次に、前に示したように30分間超音波抽出を実行します。次に、サンプルを9, 390 Gで10分間遠心分離します。

そして、先端がプラスチック製のスポイトを使用して、上清を50ミリリットルの遠沈管に移します。抽出を2回行った後、上清を合わせる。固相抽出またはSPEカートリッジを5ミリリットルのメタノールで作動させ、続いて5ミリリットルの脱イオン水で作動させます。

活性化後、サンプル抽出から10ミリリットルの上清を事前に活性化されたカートリッジに追加します。サンプル溶液レベルがカートリッジの上層に達したら、5ミリリットルの1%ギ酸溶液、続いて5ミリリットルのメタノールでサンプルマトリックスを溶出し、溶離液を廃棄します。次に、0.5%アンモニア水を含む5ミリリットルのメタノールで分析種を溶出します。

溶離液を0.22ミクロンのメンブレンフィルターでろ過し、UPLC-MS/MSで分析します。吸着剤を使用してサンプルクリーンアップを実行するには、GCB、PSA、およびC18を10〜20〜15ミリグラムの比率で妥協する吸着剤を含む10ミリリットルの遠沈管を準備します。次に、サンプル処理後に得られた上清2ミリリットルを加えます。

次に、サンプルと吸着剤の混合物を1分間ボルテックスし、室温で8分間9, 390 Gで遠心分離します。得られた上清1ミリリットルを0.22ミクロンのメンブレンフィルターでサンプルバイアルにろ過してから、UPLC-MS/MSで分析します。この研究では、SPEカートリッジ法と比較して、吸着剤精製技術を使用して、新鮮な茶葉、乾燥茶サンプル、および雑草からの15ピロリジジンアルカロイドの回収率が高くなりました。

吸着剤精製による土壌中のアルカロイドの回収率は79〜111%であり、5つのサンプリングサイトから収集された新鮮な茶葉では、セネシオニンよりも高いインターメジンN-オキシドの含有量が検出された。セネシオニンは、サンプリングサイト1および2からの成熟葉では検出されませんでした。11種類のピロリジジンアルカロイドのうち、土壌ではインターメジンN-オキシドのみが検出され、茶樹の異なる部分ではセネシオニンとインターメジンN-オキシドが検出されました。

さらに、2枚の葉を持つ1つの芽におけるインターメダインN-オキシドの含有量が最も多いことがわかりました。これを最初に試みるとき、最も重要なことは、土壌のpHを6.0に調整するために、1リットルあたり0.1モルの0.1モルのクエン酸塩溶液を追加することです。この方法は、他の食用植物のアルカロイドの分析に適用することができ、また、それらの中のアルカロイドの供給源を探索するための自然な技術を提供します。